发光底物

辣根过氧化物酶底物

化学发光底物（Western Blotting）

用于辣根过氧化物酶在Western Blotting 过程SI-CPS160 KIT 2846 中的化学发光检测。SI-CPS1120 KIT 5340

SI-CPS1300 KIT 11874

化学发光底物（ELISA）

用于辣根过氧化物酶在ELISA 过程中的化学SI-CPS260 KIT 2760 发光检测。SI-CPS2120 KIT 5139

SI-CPS2300 KIT 11428

AEC 底物试剂盒（免疫组化）

该产品利用3-氨基-9-乙基-咔唑（AEC ）作为辣根过氧化物酶在免疫组化过程中的底物，在反应位SI-AEC101 KIT 895 点产生红色沉淀。该试剂盒含缓冲液、色原质和双氧水。

AEC 可用于手动或自动免疫组化系统，可以用苏木精复染。该产品染色后不能使用有机封片剂，需要水相的封片剂如Crystal/MountTM（B-M02，B-M03 ）。

每个试剂盒可使用至少1000 次。

AEC 片

每片含20mg 底物。5 片195 SI-A6926 50 片1090 100 片1696

加强型DAB 试剂盒

每片DAB 可以配制5ml 的工作液。浓缩缓冲液中含有镍离子，强化了DAB 的显色。DAB 沉淀是黑BI-S14 20 片1495 褐色的，可以用苏木精、甲基绿等复染。

DAB 试剂盒（膜）

该试剂盒可以配制500ml 的工作液，用于膜的免SI-D6815 1KIT 2394 疫染色。

DAB 试剂盒（免疫组化）

该试剂盒可以配制100ml 的工作液，用于免疫组化。SI-D3939 1KIT 1208

该产品用于辣根过氧化物酶在免疫组化、免疫细产品号规格

胞化学和原位杂交过程中的显色。每片可以配制BI-S16 100 片

5-10ml 的工作液。可以用有机或者水相的封片剂封片。

DAB 底物液（ELISA ，低动力学形式）

该产品是一种即用型的溶液，用于ELISA 显色。产品号规格

动力学比常规低25%。SI-T4319 4X100ml

DAB 底物液（ELISA ，超低动力学形式）

该产品是一种即用型的溶液，用于ELISA 显色。产品号规格

动力学比常规低60%。SI-T5569 4X100ml

TMB 试剂盒（ELISA）

用于辣根过氧化物酶在ELISA 过程中的免疫显产品号规格

色。SI-T8665 100ml 1L

TMB 试剂盒（膜）

用于辣根过氧化物酶在Western Blotting 过程中的免疫显色。产品号SI-T0565 规格100ml TMB 片

每片1MG ，用于辣根过氧化物酶在ELISA 过程产品号规格

中的免疫显色。SI-T5525 50 片100 片

碱性磷酸酶底物

BCIP/NBT 底物液

该产品是一种即用型的溶液，用于碱性磷酸酶在产品号规格

Western Blotting 和免疫组化过程中的免疫显色。SI-B1911 100ml

SIGMA FASTTM BCIP/NBT 片每片可配制10ml 溶液，用于碱性磷酸酶在产品号规格Western Blotting 和免疫组化过程中的免疫显色。SI-B5655 5 片25 片

BCIP/INT 试剂盒用于碱性磷酸酶在免疫组化、免疫细胞化学和原产品号规格

位杂交过程中的免疫显色。可以用苏木精复染，用水BI-S03 500TEST

相的封片剂如Crystal/MountTM（B-M02，B-M03 ）封片，而不能使用有机封片剂。

Fast Red 试剂盒

每片可配制约5ml 工作液，可以用苏木精复染，用水相的封片剂如Crystal/MountTM（B-M02，B-M03）封片，而不能使用有机封片剂。

PNPP 试剂盒（ELISA）

该产品是一种即用型的溶液，用于碱性磷酸酶在ELISA 过程中的显色。

4-MUP 荧光底物液

该产品是一种即用型的溶液，在碱性磷酸酶的作用下产生荧光。激发波长360nm，发射波长440nm。

产品号规格价格

BI-S11 20 片1378

产品号SI-A3469 规格100ml

产品号SI-M3168 规格100ml

来源：阿仪网https://www.wendangku.net/doc/6817045811.html,/supply/offerdetail/317122.html

地高辛标记与检测DNA试剂盒说明书

地高辛标记与检测DNA试剂盒DIG DNA Labeling and Detection Kit 采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记，利用NBT/BCIP 酶联免疫，随时即用。 此试剂盒可对10ng-3μgDNA进行25次标记反应， 可检测10×10cm2面积的杂交膜50张 指导手册 1 前言 1.1 内容表 1 前言 1.1 内容表 1.2 试剂盒成分 2.介绍 2.1 产品简介 3. 操作步骤和所需材料 3.1 在你开始前 3.2 流程图 3.3 地高辛标记DNA 3.4 标记效率的确定 3.5 DNA的转移和固定 3.6 杂交 3.7 免疫检测

3.8 DNA印记的洗脱和再杂交1.2 试剂盒的成分 瓶号标记 内容包括功能 1 无标记对照DNA1 2 无标记对照DNA2 3 DNA稀释缓冲液2管1mL 50μg/mL鱼精DNA,10mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH8.0 在25℃ 澄清溶液 4 DIG标记的对照 DNA 20μL 5μg/mL 质粒pBR328 DNA （用Bam HI线性 化） 澄清溶液 用于确定标记效率 5 六聚核苷酸混合物 6 标记用混合物 7 DNA聚合酶1大片 段 标记级 8 抗地高辛的碱性磷 酸酶结合物 200μL 750U/mL 从羊中获取的，Fab段，结合碱性磷酸酶 澄清溶液 9 NBT/BCIP 10 封阻试剂附加仪器与所需试剂

除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。在下表中，你可以找到不同操作程序需要准备的设备概要。 在每个操作程序的前面提供了详细的信息。 操作程序仪器设备试剂 3.3 DIG-DNA标记水浴灭菌的双蒸水 0.2M pH8.0 灭菌的 EDTA 3.4 标记效率的半定量带正电荷的尼龙膜* 地高辛洗涤和封阻缓冲 组合* TE缓冲液 或者 洗涤缓冲液 马来酸缓冲液 检测缓冲液 3.5 DNA转移和固定紫外光盒或者商业化可用 于紫外交联的其他设备2×SSC 或者10×SSC 3.6 杂交尼龙膜，带正电荷* 杂交袋*，或者耐热的塑料 袋或者滚筒瓶（分子杂交 炉） 注意：当用地高辛杂交缓冲 液工作时，不要用开口的托 盘。DIG Easy Hyb （杂交缓冲液，需单独购买） 3.7 免疫检测耐热的塑料袋或者滚筒瓶 杂交袋* 地高辛洗涤和封阻缓冲组合* TE缓冲液 或者 洗涤缓冲液 马来酸缓冲液 检测缓冲液 3.8 DNA 斑点的脱色和大的托盘DMF

酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较

酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较 发表时间：2013-05-09T17:14:22.000Z 来源：《中外健康文摘》2013年第8期供稿作者：黄海深陈志通唐光定江伟河[导读] 化学发光免疫法检测结果的稳定性，灵敏度，精密度均优于酶联免疫法 黄海深陈志通唐光定江伟河（广东省阳山县人民医院检验科 513100）【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）08-0125-02 【摘要】目的对甲胎蛋白(AFP)试验进行方法学探讨。方法①对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时测定88例临床送检血清标本甲胎蛋白(AFP)的含量。②线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验。③精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。结果①结果表明，两法无显著差异(P＞0.05)，相关系数r＝0.995，提示两法呈良好相关性。②线性实验显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400 ng/ml和2～900 ng/ml范围内呈良好的线性关系。③精密度实验表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。结论化学发光免疫法的精密度和准确性均优于酶联免疫法。【关键词】酶联免疫法化学发光免疫法甲胎蛋白比较【Abstract】 Object: The methodology investigate of Alpha-fetoprotein (AFP) test. Methods: ①Comparative experiments: The simultaneous determination of the serum samples of 88 patients censorship alpha-fetoprotein (AFP) levels by ELISA and chemiluminescent immunoassay. ②Linear experiments: the standard solution is diluted at different concentrations,then doing linear experiments.③Precision experiments: Doing precision experiments on low, medium and high-value quality control materials with the two methods. Results: ①The results show that no significant difference in the two methods(P＞0.05). The correlation coefficient of r = 0.995, these two methods showed a good correlation. ②The linear experiments show that the enzyme linked immunosorbent assay and chemiluminescence immunoassay showed a good linear relationship between the range in 5～400ng/ml and 2～900ng/ml.③Precision experiments show that the repeatability of chemiluminescent immunoassay is better than the enzyme-linked immunosorbent assay, specifically at the pathological high value. Conclusion: The precision and accuracy of the chemiluminescent immunoassay are better than enzyme linked immunosorbent assay. 【Key words】 ELISA Chemiluminescent immunoassay Alpha-fetoprotein Comparison 甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标。临床上检测AFP的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(ECLIA)等，而近年发展起来的化学发光免疫法因其快速、精确、重现性好及试剂安全无毒的特点，显示出很好的应用前景［1］。酶联免疫法定性检测AFP以其快速、简便、实效的优势在各级医院应用较广。这两种方法临床常用，为进一步了解化学发光免疫法的特点，本文报告用酶联免疫法和化学发光免疫法对比检测88例临床血清标本中AFP的含量，并对结果进行统计分析和比较。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1研究对象：随机抽取88例临床送检血清标本。 1.1.2仪器: 深圳雷杜生命科学股份有限公司RT6100酶标仪，郑州安图生物工程有限公司生产的LUMO化学发光仪。 1.1.3试剂: ①郑州安图生物工程有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒（酶联免疫法） ②郑州安图生物工程有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒（化学发光免疫法） 1.2方法 1.2.1酶联免疫法测定甲胎蛋白(AFP)的操作方法见试剂说明书。 1.2.2化学发光免疫法测定甲胎蛋白(AFP)的操作方法见试剂说明书。 2 结果 2.1 线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验，结果显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400ng/mL和2～900ng/mL 范围内呈良好线性关系。 2.2 对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时对受检血清标本进行定量分析。结果表明，两法差异无统计学意义（p＞0.05），相关系数(r=0.995)。 表1 两种方法变异系数比较 CV% 酶联免疫法化学发光免疫法 受检血清标本 14.27 14.20 2.3 精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。表2表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。 表2 两种方法的精密度对比 批内CV% 批间CV% 酶联免疫法化学发光免疫法酶联免疫法化学发光免疫法低值 5.38 3.30 5.68 4.55 中值 6.40 4.95 6.15 5.82 高值 12.49 6.50 13.50 6.88

化学发光技术综述

化学发光技术综述 化学发光免疫测定（）是将抗原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检测技术。 （一）原理 化学发光免疫测定（）属于标记抗体技术的一种，它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原，当标记抗体或标记抗原与相应抗原或抗体结合后，发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用，发生氧化还原反应，反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光，最后用发光光度计进行检测。 （二）特点 特异性高、敏感性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。 （三）分类 1、从反应原理上，化学发光免疫技术主要分为直接化学发光和酶促反应化学发光。 1.1直接化学发光

化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。直接化学发光速度快、试剂稳定性好，但灵敏度略低于酶促发光。 代表性的发光剂有：吖啶酯、三联吡啶钌。 1.1.1 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470的光，具有很高的发光效率，其激发态产物甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 这类化合物的发光为闪光型，加入发光启动试剂后0. 4s 左右发射光强度达到最大，半衰期为0.9s左右。 特点： ①发光反应中在形成电子激发态中间体之前，联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来，即未发光部分与发光部分分离，因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。 ②吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂，在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。因此应用于化学发光检测具有许多优越性。

自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品： 除上表所列试剂外，还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览：

产品概述： 特异性：TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻， 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性：在坏死晚期，可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式，应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式，因此，对于可以结果进行解释时， 细胞形态评估是一项重要的参数 样本：细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间：2-3小时，除外培养、固定和渗透 检测次数：一个试剂盒50T

步骤和所需材料： 1 流程图： 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂：Washing buffer：磷酸盐缓冲液（PBS） Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph ，新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液：%Triton1）X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中，新鲜配制 步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理：可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K，不含核酸酶，浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶K，因其经检测不含核酸酶， 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述（step 2） 需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度：95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水中）

化学发光免疫分析法与酶联免疫法检测艾滋病抗体结果比较

化学发光免疫分析法与酶联免疫法检测艾滋病抗体结果比较摘要】目的：分别通过化学发光免疫分析法（CLIA）和酶联免疫法（ELISA）对 艾滋病抗体情况进行检测，对两种方法的检测结果进行比较，从而分析两种方法 的检测价值。方法：2017—2018年在我院进行HIV抗原抗体筛查的人员，包括有 创性诊疗操作前、输血前、孕产妇、门诊、体检等自愿筛查的288名艾滋病高危 患者的血清进行检查。结果：CLIA检测阳性率为95.83%，ELISA检测阳性率为 89.93%，两组检测方法阳性率比较，差异显著（P＜0.05）。结论：CLIA检测阳性率高于ELISA，但两方法各有优缺点，因此，临床中可以将两种方法进行结合检测。 【关键词】化学分光免疫分析法；酶联免疫法；艾滋病抗体 【中图分类号】R512.91 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）12-0038-02 A contrast study of chemiluminescence immunoassay and enzyme-linked immunoassay for detecting HIV antibody He Hua1,Sun Hongmei2(Corresponding author). 1 Department of Blood Transfusion,No.1 Affiliated Southwest Hospital of Military Medical University,Chongqing 400038,China; 2 Chongqing Angel's Obstetrics and Gynecology Hospital,Chongqing 401120,China 【Abstract】Objective To compare the results of chemiluminescence immunoassay (CLIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for HIV antibody detection, and to analyze the value of the two methods. Methods From 2017 to 2018, serum of 288 HIV high-risk patients who underwent HIV antigen antibody screening in our hospital, including those who were screened voluntarily before invasive diagnosis and treatment, before blood transfusion, maternal, outpatient and physical examination, were examined.Results The positive rate of CLIA and ELISA was 95.83% and 89.93%, respectively.Conclusion CLIA has a higher positive rate than ELISA, but both methods have their own advantages and disadvantages. Therefore, the two methods can be combined for clinical detection. 【Key words】Chemical spectroscopic immunoassay;Enzyme-linked immunosorbent assay;AIDS antibody 艾滋病是一种对人类生命安全造成严重威胁的传染性疾病，该病属于一种免 疫系统缺陷疾病，艾滋病是由HIV病毒（人类免疫缺陷病毒）所引起的疾病，临 床中通过对患者血清中的HIV抗体的检测诊断艾滋病。但是，检测方法的准确度 也不尽相同，酶联免疫法（ELISA）是一种传统的艾滋病抗体的检测方法，化学发 光免疫分析法（CLIA）是一种新兴的检测方法，本次研究，笔者分别通过两种方 法对艾滋病抗体进行检测，分析阳性情况，从而对两种方法的检测价值进行评价，现报道如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 对2017年1月—2018年12月到我院进行自查的288名艾滋病高危患者进行 检查，患者中男性205例，女性83例，最小年龄16岁，最大年龄78岁，平均 年龄（46.21±2.0）岁，所有患者均在保证书上签署姓名，实验之前上报我院伦理 委员会，并得到批准。 1.2 方法

肌红蛋白测定试剂盒(直接化学发光法)产品技术要求ja

肌红蛋白测定试剂盒（直接化学发光法） 组成： 适用范围：本试剂用于体外定量检测人血清、血浆中的肌红蛋白（MYO）的含量。

批特异性：每批校准品的值、质控品的质控范围具有特异性，详见瓶签。 以上校准品（选配1）、校准品（选配2）须选择一项获取校准信息。 2.1 物理性状 2.1.1外观 本试剂盒中的组分齐全、完整，液体试剂澄清，无异物、沉淀物、絮状物和无渗漏。各组分标签字迹清晰、无破损。质控品、校准品为淡黄色冻干品，用蒸馏水复溶后应为淡黄色液体。 2.1.2 装量 液体装量不少于标示值。 2.2线性 在[2，3000]ng/mL范围内，用线性拟合公式拟合，相关系数应不低于0.9900。 2.3准确度 将已知浓度的肌红蛋白（MYO）加入到低值样本中，其回收率应在85%-115%。 2.4空白限

本试剂盒的空白限不大于2ng/mL。 2.5重复性 分别用高、低2个浓度的样本，各重复检测10次，其变异系数（CV）不大于8.0%。 2.6 批间差 用3个批号试剂盒分别检测高、低2个浓度的样本，则3个批号试剂盒之间的批间变异系数（CV）不大于15%。 2.7 质控品、校准品批内瓶间差 质控品、校准品批内瓶间差CV（%）应不高于10%。 2.8特异性 检测表2中相应浓度的交叉反应物，检测结果应小于2ng/mL。 表2 被测物常见的交叉反应物 2.9 质控品赋值有效性 质控品测定结果应在本试剂盒规定的范围内。 2.10 校准品溯源性 应根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所用校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准信息可溯源至本公司工作校准品，工作校准品与已上市肌红蛋白检测系统比对赋值。 2.11 稳定性 2.11.1效期稳定性 将试剂盒在2℃～8℃的环境中放置12个月后，分别检测2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.9项，结果应符合各项目的要求。 2.11.2复溶稳定性 质控品复溶后在2℃～8℃条件下储存28天后，产品性能应符合2.7、2.9规定的要求。校准品复溶后在2℃～8℃条件下储存28天后，产品性能应符合2.7规定的要求。

Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS ）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI ）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注：1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃，避免反复冻融； 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ，Propidium Iodide （PI ）避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份，建议您在收到产品之后，分装为小份避光保存于-20℃，即用即取。 3. Propidium Iodide （PI ）有毒，操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心（2000rpm 离心5min ）收集；贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不 易过长，否则容易引起假阳性）； -20℃避光 4℃避光 4℃

乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比 闫桂敏

乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比闫桂敏 发表时间：2018-11-21T09:53:06.807Z 来源：《世界复合医学》2018年第09期作者：闫桂敏 [导读] 乙肝病毒血清学检验，采用化学发光法检验结果阳性率高，提高临床对乙肝患者确诊率，能够准确地对乙肝患者进行定性与定量检测，值得在临床上进行推广应用。 哈尔滨市传染病院黑龙江哈尔滨 150030 摘要：目的：研究应用乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比。方法：选取2018年1月-2018年5月我院门诊以及住院患者中疑似乙肝患者64例作为研究对象。采集空腹静脉血，分别进行化学发光检测法和酶联免疫检测法，观察并对比两种检测方法阳性检出率。结果：采用化学发光法检测的32例疑似乙肝患者中，阳性乙肝患者为17例，阴性患者为15例，化学发光法阳性检出率为51%，显著高于酶联免疫法的36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：乙肝病毒血清学检验，采用化学发光法检验结果阳性率高，提高临床对乙肝患者确诊率，能够准确地对乙肝患者进行定性与定量检测，值得在临床上进行推广应用。 关键词：乙肝病毒血清学检验；化学发光法；酶联免疫法 Comparison of the effects of chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay on hepatitis B virus serological test OBJECTIVE: To compare the effects of chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on the serological test of hepatitis B virus. METHODS: Sixty-four patients with suspected hepatitis B in our outpatient clinic and inpatients from January 20 to 2018 were selected as subjects. Fasting venous blood was collected, and chemiluminescence detection and enzyme-linked immunosorbent assay were performed respectively. The positive detection rates of the two detection methods were observed and compared. RESULTS: Of the 32 suspected hepatitis B patients detected by chemiluminescence, 17 were positive for hepatitis B and 15 were negative. The positive rate of chemiluminescence was 51%, which was significantly higher than 36% of enzyme-linked immunosorbent assay. The difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: Hepatitis B virus serological test, using chemiluminescence test results, high positive rate, improve the clinical diagnosis of hepatitis B patients, can accurately and qualitatively and quantitatively detect hepatitis B patients, it is worthy of clinical application. Key words: hepatitis B virus serological test; chemiluminescence method; enzyme-linked immunosorbent assay 乙型肝炎是慢性传染性疾病之一，是肝癌等肝脏疾病的危险因素之一。我国是乙型肝炎感染人数较多的国家之一，对于我国居民的正常生活有着一定的恶劣影响，因此对其进行及早的治疗有着一定的重要意义。乙型肝炎病毒感染后，无特效药物和治疗方法彻底清除病毒，患者患病后为终身带有病毒。所以，要及时控制乙肝感染率。临床检验应用酶联免疫法和化学发光法检测血清中的乙肝病毒，本文对两种方法检出率进行比较，现报道如： 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取2018年1月-2018年5月我院门诊以及住院患者中疑似乙肝患者64例作为研究对象。其中男性患者为34例，女性患者为30例；年龄为20-56岁，平均年龄43岁。将64例患者随机地分为两组，每组均含有32例患者，其中一组选择化学发光法进行乙肝病毒血清学检验，另一组患者选择酶联免疫法进行分析，得出两组患者的阳性检出率，以此作为对比分析两种治疗方法的效果。 1.2方法 所有患者清晨空腹，两只真空管分别采集静脉血 4 mL，高速离心分离血清备用。其中化学发光法使用罗氏Cobas601全自动电化学发光免疫分析系统，检测患者血清，检测结果由检验医师核对后汇报分析；酶联免疫法则使用双抗体夹心法手动操作，使用乙肝表面抗原检测试剂盒，取出试剂盒常温放置30 min，设置空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔各1个，加入阳性对照、阴性对照标准液或待测样本50μL，加入特异性酶50 μL，封膜，振荡器混匀30 s，37℃水浴箱孵育60 min，洗反应板，加入底物A、B液各1滴，37℃避光孵育15 min，加入终止液1滴。 1.3 统计学方法 本次研究所涉及的相关数据均采用SPSS 19.0统计学软件进行分析，计数资料以百分数（%）表示，采用x2 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2.结果 化学发光法阳性检出率为51%，显著高于酶联免疫法的36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。化学发光法检测乙肝病毒的准确性为90%，相较于酶联免疫法75%的准确性更加具有可行度，因而在乙肝病毒的检测中使用化学发光法可以得出更加准确的结果，使乙肝病毒患者能够拥有更加具体的检查，在治疗过程中能够及时地开展相关工作，加快乙肝患者的痊愈速度。 3.讨论 目前，乙型肝炎无根治药物和方案。我国乙肝病毒表面抗原携带者占9%，部分患者感染该病毒后，可产生针对乙肝表面抗原的特异性抗体。临床诊断乙肝病毒感染主要是检测乙肝表面抗原、乙肝表面抗原抗体、乙肝病毒核心抗原、乙肝病毒核心抗原抗体等，通常称为“乙肝两对半检测”。本次研究中，化学发光法阳性检出率为51%，显著高于酶联免疫法的36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。临床常用酶联免疫法进行定性试验，价格低、操作简便、容易推广和开展。但是酶联免疫法不能进行定量分析，而且操作水平的差异使得假阳性发生率较高。化学发光法能够定性检测的同时进行定量分析，由仪器统一加试剂，降低系统误差，假阳性和假阴性发生率低。本次研究中未发生假阳性和假阴性结果，结果可信。综上所述，乙肝病毒血清学检测使用化学发光法和酶联免疫法均具有一定可行性。其中，化学发光

常见化学发光免疫分析技术比较

常见化学发光免疫分析技术比较 1、化学发光免疫分析 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，英音：[,kemi,lju:mi'nes?ns] [,imju:n?u?'sei] 是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 1.1、化学发光免疫分析原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 1.2、化学发光免疫分析类型

化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种: (1)化学发光标记免疫分析法; (2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法 1.2.1化学发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) , 是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 1.2.2化学发光酶免疫分析 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。 12.2.1HRP 标记的CLEIA

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号：T2190 规格：20次 保存：-20oC保存，荧光标记液需避光保存。 产品简介： 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。产品内容： 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl

UltraECL底物化学发光检测试剂盒说明书

◆UltraECL底物化学发光检测试剂盒◆目录号1924 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外

UltraECL底物化学发光检测试剂盒目录号：1924 目录编号包装单位 192401 50ml （A液B液各25ml） 192402 100ml （A液B液各50ml） 192403 500ml （A液B液各250ml） 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50ml 100ml 500ml 溶液A 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 溶液B 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 本产品收到后按照上面指示温度存放，至少6个月内有效。

产品介绍： Western blot底物发光检测试剂可由标记于二抗上的辣根过氧化酶催化，产生化学发光反应，可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。UltraECL底物化学发光检测试剂盒基于新一代增强型化学发光底物研制而成，并对成份做了优化。产品背景低，稳定性好，比普通ECL试剂敏感度高数十倍。它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应，发出荧光，可对X光胶片曝光，也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。 操作步骤： 1.按常规Western blot操作，二抗孵育后，进行最后一次洗涤时，根据膜的大小，按 每10cm2膜混合0.5ml溶液A和0.5ml溶液B，混匀，配制成发光检测工作液。 2.用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的 蛋白面朝上，置于洁净保鲜膜（某些市售保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜）上。用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2分钟。 3.用平头镊夹持蛋白膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的 蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡，固定在X片暗盒内。 4.在暗室中取一张X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。立即显影定 影，根据其曝光强度，缩短或延长下一张X片的曝光时间（对微弱信号，曝光时间可延长至数小时）,或者曝光0.5，1，2，4，6分钟一系列后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。 注意：如果储存使用时间过长，溶液B中过氧化氢可能随时间分解降低曝光敏感度，可取普通纯水按照每10ml纯水加入40μl 30％H202（商品化的H202一般为30％）比例配成新鲜H202溶液替代溶液B使用，可以完全恢复发光工作液最大发光敏感度，效果和新鲜的溶液B完全一样。

化学发光方法学比较

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。 发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。 1、化学发光 化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。其主要特点为消耗发光剂。同时量子效率相对较低。 1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过

最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。所以重复性较差。为降低检测成本并实现重复测量，目前普遍采用原位进样加流动池的时间积分测量方式。因此仪器成本及维护费用较高，而且反复使用的流动池可能导致交叉污染；并目冲洗或进样中产生的气泡也会干扰测定；同时繁琐冗长的冲洗过程也会成为提高检测效率的瓶颈。另外，使用磁性或非磁性微粒时，强烈的散射吸收作用也会降低灵敏度。 1.2 按发光持续时间分类：可分为闪光和辉光两类，闪光型发光时间在数秒内，如吖啶酯系统。其检测方式一般采用原位进样和时间积分法测量，即在检测器部位加装进样器，并保证加入发光剂和检测2个过程同步进行；同时以整个发光信号峰的面积为发光强度。而辉光型发光时间在数分钟至数十分钟以上，如HRP一鲁米诺系统、ALP—AMPPD 系统、黄嘌呤氧化酶-鲁米诺系统等。其信号检测无需原位进样，一般以速率法测量，即在发光信号相对稳定的区域任意点测量单位时间的发光强度。 测量化学发光反应的光强度，求得某些化学物质和生物物质的

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本） 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作：整体操作约需3小时。 ●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性

使用注意事项 1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。 2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。 3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂