薄层扫描法测定虎杖中白藜芦醇含量
薄层色谱法详解
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf值)对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。 仪器与材料 编辑 ⑴载板 变色硅胶 用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求是：需要有一定的机械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格，但最大不得超过20×20，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用5cm ×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 ⑵固定相(吸附剂)或载体 薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用
薄层色谱法测定标准操作规程
薄层色谱法测定标准操作规程 目的：建立薄层色谱法测定标准操作规程。（《中华人民共和国药典》2010版附录） 范围：适用于薄层色谱法的测定。 职责：检验员，QC主管。 内容： 1 简述： 薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 薄层板： 2.1.1市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，按固定相种类又可分为硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素、硅藻土、氧化铝、聚酰胺薄膜等薄层板。 2.1.2 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，自制薄层板系指手工（或借助涂布器）将固定相涂布于玻璃板或其他适宜载板上使成为有一定厚度的均匀薄层。常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶 H、微晶纤维素等，其粒径一般为10~40um。 2.2 点样器：采用手动、半自动或全自动点样器材，手动点样时一般采用微量毛细管。 2.3 展开容器：应使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖子。水平展时使用专用水平展开缸。 2.4 显色与显色装置按各品种项下规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或蒸气熏蒸显色，喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用玻璃容器或适宜的展开缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 2.5 检视装置为装有可见光或紫外光（254nm及365nm）光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备： 3.1.1 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30min，聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷与甲醇的混合溶剂在展开容器中上行展开预洗，取出，晾干，活化后使用。 3.1.2自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水或0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素钠适量，加水适量，放置使溶胀，加热煮沸至完全溶解，放置，取上清液，即得），在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（涂层厚度为0.25、0.3或0.5mm）。取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上
薄层扫描操作规程
Standard Operating Procedure 1、目的：建立薄层扫描操作规程，规范薄层扫描法的操作。 2、范围：本公司产品、原料、辅料、中间体的检验。 3、责任人：QC检验员。 4、正文： 简述：薄层扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别，杂质检查或含量测定。 仪器与用具 4.2.1玻板。除另有规定外，用10cm×10cm，10cm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 4.2.2吸附剂或载体。最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。薄层涂布,除另有规定外，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小时),混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液％～％)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。
4.2.3涂布器。应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 4.2.4点样器。一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 子须密闭。 4.2.6薄层扫描仪。 试药与试液：蒸馏水、羧甲基纤维素钠水溶液％～％)。 操作方法。 4.4.1薄层板制备。除另有规定外,将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为～0.5mm）,取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。或用商品预制板于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。 4.4.2点样。除另有规定外,用点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边～1.5cm，样点直径一般不大于3mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 4.4.3展开。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为8～15cm，取出薄层板，晾干，按质量标准项下的规定检测。 注意事项。 4.5.1展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡或按质量标准规定操作。 4.5.2除另有规定外，薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采用吸收法，或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与对照品同板点样，展开，扫描，积分和计算。
双波长薄层色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量(精)
【摘要】目的：建立蒲公英中总黄酮的含量测定方法。方法：应用双波长薄层色谱扫描法，以芦丁为对照品，测定波长λs=278nm，参比波长 λR=356nm，测定蒲公英中总黄酮的含量。结果：回归方程为 Y=873851X+80.593，r=0.999，RSD=2.6％，蒲公英总黄酮含量为4.236%。结论：用该方法测定蒲公英中总黄酮的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。【关键词】双波长薄层色谱扫描法总黄酮芦丁 蒲公英属菊科类为植物蒲公英，是常用的中药类抗菌、抗真菌的药物，具有清热解毒、利胆保肝、医治乳痈疔疮等药理作用。主要成分含有蒲公英甾醇、绿原酸、总黄酮等成份，现已制成注射剂、片剂、糖浆等不同剂型，广泛应用于人与畜各科多种感染性炎症，均有良好疗效。这种中草药价廉物美，药源丰富，应当进一步开发，做到物尽其用。针对其总黄酮的含量，我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；高硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂生产）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。 1.2 试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；蒲公英（产地为内蒙，由内蒙古成大方圆有限公司饮片分装）；其它试剂均为分析纯。 2 薄层分析与鉴定 2.1 对照品溶液的配置［1］ 精密称取芦丁对照品25mg，置50ml容量瓶中，以85%乙醇溶解并加至刻度，精密吸取10ml置20ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。 2.2 供试品溶液的制备 精密称取内蒙蒲公英（提前粉碎研磨成细粉）10g，用13倍量药材的85%乙醇加热回流2次，每次1小时［2］，回收蒸发乙醇至干（旋转蒸发仪），残渣加入50ml热水溶解，先用石油醚（50，50，30ml）萃取3次，要下层液（除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素），再用正丁醇（50，50，30ml）萃取3次，要上层液（除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质），合并正丁醇提取液用85%乙醇30ml溶解，过滤至50ml容量瓶中，再用85%乙醇洗涤滤纸至刻度，摇匀。精密量取10ml置20ml容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，备用。 2.3 分离与鉴定 分别取供试品溶液和对照品溶液各6ul，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲酸水（体积比8：1：1）为展开剂展开［3］，取出，晾干。 3 含量测定 3.1 扫描条件［4］ 反射锯齿扫描，测定波长为λs=278nm，参比波长λR=356nm，背景校正ON，灵敏度中，狭缝1.2mmⅹ1.2mm，SX=3。 3.2 标准曲线制备 取芦丁对照品溶液，以不同点样量（2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ul）点于同一硅胶G板上，相同展开剂展开，取出，晾干后进行扫描，以峰面积积分
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
反相高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量 白祖海，文刚，张艳 （长沙市疾病预防控制中心，长沙410001） 摘要：采用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量。以聚酰胺柱对样品进行 预处理，排除其它成分的干扰，获得较好分离度和高回收率。选用自填 装ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)，以乙醇-水(2：3,v/v)作流 动相，流速为0.6 ml/min，紫外光检测波长304nm，柱温为25℃。白藜 芦酵在0.05-0.40μg/mL 范围内具有良好的线性关系。r=0.9996，平均回 收率为98.51%(n=5)。结论：该方法简便、准确可靠，适合于中药材虎 杖中白藜芦醇含量的测定。 关键词：白藜芦醇；虎杖；反相高效液相色谱法 Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum by Reversed-Phase HPLC BAI Zu-hai, WEN Gang, ZHANG Yan (Changsha Municipal Center for Prevention and Control of Diseases, Changsha 410001, China) Abstract：A simple and sensitive Reversed-Phase HPLC method for the determination of resveratrol in the roots of Polygonum cuspidatum was described，including the pretreatment of samples by poamide colutah. The separation was performed on an ODS column(200 mm×4.6 mm，5μm)，with the mobile phase of
HPLC法测定藜芦中虎杖苷和白藜芦醇的含量
a a b B 图３ ＨＰＬＣ色谱图 Ａ． 虎杖苷 Ｂ． 白藜芦醇 Ｃ．样品ａ－虎杖苷色谱峰 ｂ－白藜芦醇色谱峰 ＨＰＬＣ法测定藜芦中虎杖苷和白藜芦醇的含量 丛悦，王金辉，李铣 （沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 １１００１６） [摘要] 目的：建立HPLC 法测定由甲醇加热回流和甲醇超声两种方法提取的藜芦中虎杖苷和白藜芦醇的含量的方法。方法：采用Spherigel C 18 色谱柱（150mm ×4.6mm ，5μm ），流动相为四氢呋喃－乙腈－水（40∶40∶220），流速1.0 mL·min -1，检测波长303nm 。结果：虎杖苷在0~50mg·L -1内成良好线性关系，平均回收率甲醇加热回流提取102.4%，RSD1.1%；甲醇超声提取97.2%，RSD1.1%。白藜芦醇在0~100mg·L -1内成良好线性关系，平均回收率甲醇加热回流提取96.6%，RSD1.5%；甲醇超声提取96.6%，RSD1.2%。结论：本法可作为藜芦质量控制的手段之一。 [关键词] 藜芦；虎杖苷；白藜芦醇 藜芦为百合科藜芦属植物Veratrum nigrum L.的根及根茎部分，入药历史可追溯到《神农本草经》，通常认为藜芦有涌吐风痰、杀虫疗疮的功效，治疗中风痰壅、喉痹不通、癫痫等［１］。虎杖苷和白藜芦醇是其有效成分之一，具有保护心血管和保肝等作用。目前认为藜芦的有效成分是生物碱，所以质量控制主要集中在生物碱，对虎杖苷和白藜芦醇的含量测定少见报道，作者利用HPLC 法首次对由甲醇加热回流和甲醇超声两种制备方法提取的藜芦中虎杖苷和白藜芦醇进行了测定，为藜芦的质量控制提供了一种方法。１ 仪器与药品 色谱仪：HITACHI Pump L －7110，HITACHI UV －VIS Detector L －7420，Anastar 色谱工作站，FA1004N 型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司），乙腈（色谱纯，天津市康科德科技有限公司），四氢呋喃（色谱纯，天津市康科德科技有限公司），水（纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司）。 藜芦购于河北安国药材市场，经沈阳药科大学孙启时教授鉴定，虎杖苷对照品（批号：0407056，含量：９８％）和白藜芦醇对照品（批号：0407057，含量：９８％）为西安宇源生物工程有限责任公司产品。虎杖苷和白藜芦醇的结构式分别见图1、2。２ 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：瑞士Spher igel C 18柱(150mm×4.6 mm ，5μm)，流动相：四氢呋喃－乙腈－水（40∶40∶220），检测波长：303n m ，流速：1.0 mL·min -1，柱温为室温。 2.2 系统适应性试验 在上述色谱条件下，虎杖苷和白藜芦醇达到基线分离(R>>1.0)，保留时间分别为14.78、54.64min ，理论塔板数均不低于2300。色谱图见图3。 HO CH CH OH O O HO CH 2OH OH OH HO CH CH OH OH 图１ 虎杖苷结构式 图２ 白藜芦醇结构式
薄层色谱扫描仪标准操作规程
XXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的：建立KH-2100型薄层色谱扫描仪仪使用标准操作规程。 2 范围：KH-2100型薄层色谱扫描仪操作程序。 3 责任：化验室操作员。 4 使用说明： 4.1 开机 4.1.1 将KH-2100 型薄层色谱扫描仪电源接通，插好连接KH-2100型薄层色谱扫描仪和计算机USB连接线。 4.1.2 打开KH-2100型薄层色谱扫描系统（点击计算机桌面上“KH-2100 型薄层色谱扫描系统”图标）。 4.1.3 打开KH-2100型薄层色谱扫描仪的电源开关。 4.1.4 仪器自检，KH-2100 型薄层色谱扫描系统的工作站软件已打开，将显示仪器自检结果（X、Y复位检测、单色仪检测、氘灯光源检测、卤钨灯光源检测）。 4.1.5 进行光源寿命检查，检测光源的光强是否符合检测标准。 注：以上操作在薄层板扫描前30min左右完成，目的是预热仪器。 4.2 薄层板扫描 4.2.1 填写用户管理数据：点击“样品扫描”窗口工具栏中的【用户管理】
按钮，输入报告人、测试时间、测试地点、设备名称、设备编号、薄层板类型、样品、标准品、湿度、温度、展开剂、显色剂、备注，点击【确定】按钮; 4.2.2 数据测量将已显色的薄层板上的斑点位置进行测量（测量斑点距起点边缘的距离）； 4.2.3 放置薄层板将薄层板放入扫描仪的载物台，薄层板边缘尽量靠近载物台内侧（薄层板前沿接近舱门方向）； 4.2.4 设置扫描参数：在【参数设定】菜单中根据测试类型选择样品，样品数目（薄层板上斑点数目），起点位置（第一个斑点距薄层板最近边缘的距离），纵向扫描范围（根据斑点的位置确定范围），再根据斑点之间的距离确定等间距扫描或不等间距扫描（如果是等间距扫描，只需单击【等间距扫描】，填写等间距距离和起点位置即可，如果是不等间距扫描，单击【不等间距扫描】，依次填写斑点距离数值）。 4.3 开始扫描：点击样品扫描窗口工具栏中的【开始测试】按钮，等待测试完毕。 4.4 处理扫描数据：如果扫描出的样品峰形为倒峰，点击【荧光处理】；察看自动分峰的结果，对分峰有误的地方采用手动修改方式：添加峰、删除峰、修改峰、分开峰、合并峰和设定基线。 4.5 保存扫描结果：点击样品扫描窗口工具栏中的【保存】按钮。 4.6 计算含量：选中主窗口工具栏中的【含量计算】按钮，进入含量计算窗口，输入标准品浓度，然后依次点击峰图，填写样品量，点击【样品】（标准品）按钮，再接着重复上一操作选择下一个样本，所有的标准品（样品）选择完毕后，点击【计算含量】。 4.7 点击含量计算窗口的【保存】按钮，保存所有数据。
薄层色谱扫描仪
KH-2100A法定型双波长薄层色谱扫描仪 文章类别：法定型薄层色谱扫描仪发表日期：2007-5-16 21:16:44 KH-2100A法定型双波长薄层色谱扫描仪 ----中药GMP控制专用机型 上海科哲生化科技有限公司是国内最大最专业的薄层色谱仪器公司，受到上海科委的重点扶持，是国内唯一的法定型薄层色谱扫描仪生产商。针对基层用户方法相对固定，分析任务较为繁重，对易用性、稳定性要求较高，我公司将原来的KH-2000升级为KH-2100，性能更为优越，将2000版、2005、2010版药典所有薄层定量品种、方法预置在机器内，形成药厂专用薄层色谱扫描仪，使用者只需动手，不需动脑即可完成操作；产品与日本岛津CS-9301PC薄层色谱扫描仪处于同一档次，是中药企业质控的最优选择。 友情提示： 所谓法定薄层色谱扫描仪是指符合2005版药典一部薄层色谱扫描法、《中国药品检验标准操作规范》中的《薄层色谱扫描法》、《药品检验仪器检定规程》中的《薄层色谱扫描仪检定规程》的详细规定，由氘灯-钨灯组合光源、单色仪、X-Y移动平台组成，波长准确度：≤±5nm；背景漂移：≤±0.5Abs；基线噪声：≤±0.02Abs；重复性误差：RSD≤2.0%；扫描方向为沿展开方向自下而上扫描的非成像型薄层色谱扫描仪。 主要优点： 1、拥有国家计量认证，完全符合有关要求，使用无风险； 2、符合国家《薄层色谱扫描仪检定规程》所有要求，方法合法； 3、拥有ISO9001：2000质量保证体系，性能稳定，故障少； 4、药典所有薄层定量品种、方法预置在机器内，随时调用，非常方便； 5、定量准确，价格合理，性价比高； 6、自动化程度高，操作简单，适合成批分析； 仪器组成：
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量 摘要:采用高效液相色谱法测定了虎杖不同生长条件及不同部位的白藜芦醇含量?建立了以色谱柱为Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(35∶65,V/V),流速为0.8 mL/min,检测波长为306 nm,柱温为室温,进样量为80 μL 的高效液相色谱方法?结果表明,白藜芦醇浓度在2~100 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为99.1%,RSD=1.2%(n=6)?野生虎杖和组织培养虎杖白藜芦醇含量存在较大差异,虎杖不同部位白藜芦醇含量也存在较大差异,其中以野生虎杖根中白藜芦醇含量最高?虽然在不同培养条件下,虎杖的不同部位都含有白藜芦醇,但与野生虎杖根相比含量差距较大,不能代替野生虎杖根的药用价值? 关键词:虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法 Determination of Resveratrol in Polygonum cuspidatum by HPLC Abstract: The contents of resveratrol in different growing condition and different part of Polygonum cuspidatum were detected by HPLC. The separation was performed on Zorbax CB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) in methanol-water (V/V=35/65)with the flow rate of 0.8 mL/min and detected at 306 nm in room temper ature after injecting 80 μL sample. The linear range of resveratrol was 2~100 μg/mL with an average recovery of 99.1% (RSD=1.2%,n=6). The content of resveratrol in wild and tissue culture of Polygonum cuspidatum were different, and the contents of resveratrol in different parts of Polygonum cuspidatum also varied. The highest resveratrol in Polygonum cuspidatum was observed in wild plants. Though resveratrol of Polygonum cuspidatum differed in different culture conditions, the highest resveratrol content was detected in the roots of wild Polygonum cuspidatum, which indicated that the medical value of wild Polygonum cuspidatum was irreplaceable. Key words: Polygonum cuspidatum; resveratrol; HPLC 白藜芦醇(Resveratrol)又称芪三酚,现代药理研究证明:白藜芦醇具有抗肿瘤?抗氧化?抗菌?抗炎?抗自由基?保护肝脏?保护心血管和抗心肌缺血?免疫调节?降血糖?降血脂等作用[1,2]?另外白藜芦醇还有抗衰老?皮肤保健和美容功效[3,4]?朱鸿津采用HPLC法测定虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)中白藜芦醇含量,测定结果表明,虎杖根中白藜芦醇含量可高达千分之一,可作为白藜芦醇的提取原料[5]?然而,由于虎杖根的野生资源有限,大量采挖使野生资源日趋减少,近年来有一些利用组织培养快速繁殖虎杖的报道?文涛等[6]测定发现虎杖愈伤组织中也含有白藜芦醇,并对虎杖不同部位白藜芦醇含量进行分析,结果发现虎杖根?茎?叶中均含有白藜芦醇,其中多年生根中含量最高[7]?综上所述,虎杖不同生长条件?不同部位均含有白藜芦醇?准确测定虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量,将
定量核磁共振波谱法同时测定中药虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的含量
DOI :10.11895/j.issn.0253_3820.140654 定量核磁共振波谱法同时测定 中药虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的含量 禹珊1 郭强胜1 王会琳2 高建平2 许旭*1,3 1(上海应用技术学院化学与环境工程学院,上海201418)2 (上海中医药大学中药学院,上海201203) 3(中国科学院天然产物有机合成化学重点实验室,上海200032)摘 要 建立了定量核磁共振波谱法同时测定虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的方法三样品用80%乙醇和丙酮两次超声提取净化,再用定量核磁共振波谱法测定三考察了样品预处理和核磁共振实验条件对测定结果的影响,选择氘代二甲亚砜_重水(10?1,V /V )为溶剂,用基准物质邻苯二甲酸氢钾标定的2,3,5_三碘苯甲酸为内 标,选择脉冲延迟时间为5s,采样次数为32次三定量峰为6.388~6.391(白藜芦醇:H_2,6,d,2H)和 6.322~6.330(虎杖苷:H_4,t,1H)三结果表明,NMR 测定的精密度均小于0.6%,线性相关系数(r )均大于0.999,白藜芦醇和虎杖苷的检出限分别为0.23和0.24g /L,定量限分别为0.69和1.57g /L,包括样品提取过程的回收率分别为9 7.7%~103.5%(RSD =2.4%)和94.5%~99.2%(RSD =1.6%),显示出定量核磁共振法在中药定量时的可靠性三实际测定4种虎杖饮片及配方颗粒样品中白藜芦醇和虎杖苷含量分别为3.57~5.69mg /g 和12.73~24.07mg /g三关键词 定量核磁共振;虎杖;白藜芦醇;虎杖苷 2014_08_20收稿;2014_10_05接受本文系中国科学院天然产物有机合成化学重点实验室研究基金资助项目(2013_2014)*E_mail:xuxu3426@https://www.wendangku.net/doc/6517444575.html, 1 引 言 虎杖为蓼科植物虎杖(Poilgonum cuspidatum Sieb.et Zucc )的干燥根茎及根,主要功效为利湿退黄, 清热解毒,散瘀止痛,具有抗菌抗病毒二扩张血管二抗肿瘤二调节代谢等药理作用[1]三虎杖作为常用中药已收入中国药典[2],不久也会被收入欧洲药典[3]三虎杖含有大黄素和大黄素甲醚等蒽醌类化合物二白藜芦醇和虎杖苷(白藜芦醇苷)等二苯乙烯类化合物二鞣质和多糖等成分三其中,白藜芦醇和虎杖苷是虎杖中两种主要药效成分[1,2](化学结构见图1),这两种成分测定主要以高效液相色谱[2,4]和液相色谱_ 图1 白藜芦醇和虎杖苷的结构式Fig.1 Chemical structure of resveratrol and polydatin 质谱联用[5]为主三定量核磁共振波谱(Quantitative nuclear magnetic resonance spectroscopy,qNMR)方法简单二快捷,实际样品测定时可以不使用待测 组分的对照品[6]三已先后被美国药典二英国药 典[7]二欧洲药典收录,中国药典2010版也已收录[8]三近几年来,qNMR 方法已被广泛用于化学药物[9~13]二中药与植物提取物[14~19]二体液样品[20,21]二异构体[22]二食品[23,24]等的定量分析三本研究在对虎杖样品进行有效提取的基础上,建立了qNMR 定量测定其中白藜芦醇和虎杖苷两种药效成分的方法,考察了实验条件的影响,对所建立的方法进行了验证,并用于实际样品分析三2 实验部分 2.1 仪器与试剂Bruker AVANCE III 500MHz 核磁共振谱仪(德国Bruker 公司);M2P 精密天平(精度0.001mg,德第43卷 2015年1月 分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry 第1期69~74
薄层扫描、气相标准加入法
标准溶液加入法 精密称(量)取某个杂质或测成分的对照品适量,配成适当浓度的对照品溶液,取一定量,精密加入到供试品溶液中,根据外标法或内标法测定杂质或主成分量,再扣除加入对照品溶液含量,即得供试品溶液中某个杂质和主成分含量. 也可以按下述公式进行计算,加入对照品溶液前后校正因子应相同,即: Cx Cx Cx A ?+=Ax is 则待测组分的浓度Cx 可通过如下公式进行计算: 式中: 1)/(-?=Ax Ais Cx Cx Cx 为供试品中组分的浓度 Ax 为供试品中组分的色谱峰面积 △Cx 为所加入已知浓度的待测组分对照品的浓度 Ais 为加入对照品后组分的色谱峰面积 薄层色谱扫描法 系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于鉴别、检查或含量测定。测定时可根据不同薄层扫描仪的结构特点，按照测定方式扫描测定，一般选用反射方式，采用吸收法或荧光法，除另有规定外，含量测定应使用市售薄层板。 扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描。如采用双波长扫描，应选用待测斑点无吸收或最小吸收的波长为参比波长，供试品色谱中待测斑点的比移值和光谱扫描得到的吸收光谱或测得的光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。薄层扫描定量测定应保证供试品斑点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量，供试品与对照品同板点样、展开、扫描、测定和计算。 薄层色谱扫描用于含量测定时，通常采用线性回归二点法计算，如线性范围很窄时，可用多点法校正多项式回归计算。供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板。供试品点样不得少于2个，对照品每一浓度不得少于2个.扫描时，应沿展开方向扫描，不可横向扫描。
药品薄层色谱扫描法
德信诚培训网 更多免费资料下载请进：https://www.wendangku.net/doc/6517444575.html, 好好学习社区 药品薄层色谱扫描法 一 目 的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。 二 适用范围：适用于薄层扫描法的测定。 三 责 任 者：品控部。 四 正 文： 1.简述 薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。 2.仪器 2.1 仪器构成 薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。 光源：色括氘灯（200～370nm ）、钨灯（370～700nm ）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。 单色器：包括光栅与夹缝。入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。 薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X 轴和Y 轴方向的移动。 检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。 反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。 数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。 2.2 仪器性能检定 2.2.1 仪器波长准确度的检查 用低压汞灯在200～700nm 波长范围内以荧光方式对
HPLC法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究
HP LC 法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究 Ξ C AO Y 曹 庸1,2,于华忠2,张 敏2,李国章2,萧浪涛1 (1.湖南农业大学省教委植物激素重点实验室,湖南长沙410128;2.吉首大学湖南省林产化工工程重点实验室,湖南张家界427000) 摘 要: 白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一。由于白藜芦醇对光、热不稳定,本研究建立了一套简单而提取率高的从虎杖中提取白藜芦醇的样品处理方法,研究了高效液相色谱法测定虎杖白藜 芦醇的条件。采用色谱柱:岛津Shim 2park C LC 2ODS (150mm ×6.0mm ,i.d.5μm ),以乙腈∶水(体积比为41∶59 )溶液为流动相,流速1.0m L/min ,检测波长306nm 。在此条件下,样品溶液进样质量浓度范围在500～1000μg/ m L 时,白藜芦醇含量与峰面积呈良好的线性关系。检出限为10ng/m L ,且回收率高。 关键词: 虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法 中图分类号:T Q91;S789 文献标识码:A 文章编号:0253-2417(2004)02-0061-04 HP LC DETERMINATION OF RESVERATRO L CONTENT IN PO L YG ONUM CUS PIDATUM AND THE ST ABI LITY OF RESVERATRO L C AO Y ong 1,2,Y U Hua 2zhong 2,ZH ANG Min 2,LI G uo 2zhang 2,XI AO Lang 2tao 1 (1.Hunan Provincial K ey Laboratory o f Phytohormones ,Hunan Agriculture Univer sity ,Changsha 410128,China ;2.K ey laboratory o f Hunan Forest Product &Chemical Industry Engineering ,Jishou Univer sity ,Zhangjiajie 427000,China ) Abstract :Resveratrol is one of the m ost feasible medicine for preventing human cancer.It is unstable against light and heat.An extracting method was established in this study ,which is simple ,and of high yield.S tudy on theconditions of high perfor 2mance liquid chromatography for the determination of resveratrol content was investigated to be as follow :Shim 2park C LC 2ODS column (150mm ×6.0mm ,i.d.5μm ),m obil phase CH 3CH 2C N ∶H 2O (14∶59),flow rate 1.0m L/min ,wavelength 306nm.The lineal correlation between content of resveratrol and peak area is g ood.The lower detection limit was 10ng/m L.K ey w ords :Polygonum cuspidatum ;resveratrol ;HP LC 虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc )为蓼科蓼属小灌木,为传统中药。其根茎有祛风利湿,散痰定痛,止咳化痰的作用[1]。白藜芦醇的化学名称为反-3,4′,5-三羟基二苯乙烯,分子式C 14H 12O 3,分子质量228.25[2]。存在于虎杖、葡萄等植物中,虎杖中白藜芦醇含量远远高于葡萄等其他植物[3]。现代药理学试验表明白藜芦醇对人体具有许多医药保健作用。主要包括降低血脂[4],抑制血小板活性[5],对动脉粥样硬化、冠心病具有保护作用[6],对癌症具有预防作用[7～8],实验证明它对5种人体肿瘤细胞模型均有抑制作用[9],并具有雌激素样作用[10]。20世纪90年代以来,国外对葡萄酒中白藜芦醇的保健作 Ξ 收稿日期:2003-09-28 基金项目:湖南省科技厅重点科技攻关资助项目(03J ZY 3020) 作者简介:曹庸(1966-),男,湖南泸溪人,副教授,博士生,从事天然产物开发及生物化学的研究。 第24卷第2期2004年6月 林 产 化 学 与 工 业Chemistry and Industry of F orest Products V ol.24N o.2June 2004
虎杖中虎杖苷的微生物发酵转化研究
虎杖中虎杖苷的微生物发酵转化研究 摘要:从中药材虎杖中筛选到一株具有转化虎杖苷能力的根霉菌株T-34,利用该菌株产生 的B-葡萄糖苷酶能将虎杖苷转化为白藜芦醇.虎杖的液体发酵动力学研究结果显示:根霉菌 T-34能够直接利用虎杖煮提液中的碳源、氮源等作为其生长所需的营养,并且产生的B-葡萄糖苷酶与底物虎杖苷的转化具有相对应的关系,用HPLC测得虎杖苷的转化率达98%. 关键词:微生物转化;虎杖;虎杖苷;白藜芦醇;B-葡萄糖苷酶 Biotransformation of polydatin fromPolygonum cuspidatum byRhizopussp. T-34 Abstract:, isolated by strain-screening test, could transform polydatin into resveratrol during fermentation ofPolygonum cuspidatumin this experiment. Kinetics of fermentation was studied to follow the transformation process, and the results suggested could utilize carbon re- source, nitrogen resource and etc directly as its nutrition, furthermore,B-glucosidase produced by the strain was correspondingly related to the transformation of polydatin, and the transformation rate of polydatin could reach 98%. Key words:microbial transformation,Polygonum cuspidatum,polydatin, resveratrol,B-glucosidase 1 引言 虎杖始载于5名医别录6,为蓼科植物虎杖的干 燥根茎,主要有效成分为二苯乙烯类和蒽醌类化合 物,前者包括白藜芦醇及其糖苷[1].据报道白藜芦 醇具有抑制肿瘤、抗氧化、抗自由基、抗血栓、抗过 敏、抗动脉粥样硬化和具有冠心病、缺血性心脏病、 高血脂症的防治作用,白藜芦醇已被列为抗心血 管、抗癌最有前途的药物之一[2].干燥虎杖根茎中 白藜芦醇含量仅为%~% ,而虎杖苷含量 约为2%左右[3],虎杖苷可在肠道中被糖苷酶分解 释放出白藜芦醇,发挥其药理作用[4].目前有研究 用酸水解法对虎杖苷进行分解[5],但是酸碱会造 成环境污染,降低产量,因此不宜用化学法进行水 解.也有用改性纤维素酶直接对虎杖苷进行分 解[6],但成本较高、工艺较为复杂,不利于推广应 用.本项研究采用微生物发酵法转化虎杖苷,即没 有强烈的酸碱反应发生,又无需粗提苷,有效的避 免了上述两种方法存在的缺陷.因此利用专一微 生物进行发酵是提高虎杖中白藜芦醇含量的有效 2008年4月
紫外分光光度法测定虎杖中白藜芦醇的含量
紫外分光光度法测定虎杖中白藜芦醇的含量作者：郑湘娟余淑娴徐晓芳万南红李玉琳张小强 【摘要】目的建立虎杖提取物中口藜芦醇含量的测定方法。 方法采用紫外分光光度法，测定波长为305 nmo结果检测浓度在3?16 Ug/ml范围内与吸光度线性关系良好(r=0. 999 0)。结论该方法 简便.快速、准确，可作为提取过程中的实时监测。 【关键词】虎杖口藜芦醇紫外分光光度法 Abstract:ObjectiveTo establish the determination method for resveratrol in extract of Polygonum cuspidatum . MethodsUV spectrophotometry was adopted with a detection wavelength of 305 nra. ResultsThere was good linear relation ship with in the range of 3?16 U g (r=0. 999 0). ConclusionThe method is simple, rapid, accurate. Key words:Polygonum cuspidatum ； Resveratrol ； UV spectrophotometry 虎杖Polygonum cuspidatum Sied. et Zucc,又名斑根紫金龙、活血龙、阴阳莲［1］,其根茎具有活血定痛、清热利湿、止咳化痰作 用。主要用于关节麻痹.湿热黄疸、经闭、咳嗽痰多.水火烫伤、跌打损伤 等症的治疗［2］。现代药理研究表明其主要有效活性成分口藜芦醇具有抗癌、抗氧化、抗血小板凝聚、抗菌、调节脂类代谢等多种功能。目前定暈 检测口藜芦醇的方法主要有高效液相色谱法(HPLC) E3L气相色谱/质谱法(GC/MS) ［4］以及气相色谱法(GC) ［5］等。 国内还未见有关用紫外分光光度法测定虎杖中口藜芦醇含量的报道。 木实验应用紫外分光光度法测定了虎杖提取液中口藜芦醇含量。现报道如下。