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石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

乔清亮1,刘利林2、3

(1.吉木萨尔县泉子街镇畜牧兽医站,新疆吉木萨尔831700;

2.塔里木大学动物科学学院,新疆阿拉尔843300;

3.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室,新疆阿拉尔843300)

摘要:黄酮类化合物是自然界广泛分布于植物中的一大类天然产物,其结构类型的多样性和生物活性的光谱性,已成为国内外研究开发的热点。目前多以芦丁、槲皮素为标准品,进行植物中黄酮含量的测定。本试验以芦丁为标准品,采用分光光度法,对南疆石榴皮、石榴渣中总黄酮的含量进行了测定。结果表明,石榴皮中总黄酮含量为6.65%,石榴渣中总黄酮含量为2.04%。这对南疆石榴资源的合理利用提供了参考依据。

关键词:石榴皮;石榴渣;总黄酮;分光光度法;测定

中图分类号:S816.11文献标识码:B

文章编号:1003-4889(2015)05-0018-03

石榴(Punica granatum L.)属安石榴科(Punicace?ae)植物,我国各地均有分布[1,2]。该属植物具有涩肠、清热燥湿等功效,民间常用于治疗多种疾病,对流感病毒也有抑制作用[1]。石榴果实具有各种医疗保健作用[3]。近来研究还发现,石榴叶水浸剂具有较强的调血脂和抗氧化能力[4],石榴籽油对苹果具有良好的保鲜效果[5]。另据以色列最新研究发现,石榴及其产品中含有延缓衰老、预防心脏病及减缓癌变进程的高水平抗氧化剂[6]。石榴果皮、石榴渣除有药用功能外,近来研究发现其还有一定的抗氧化性。其内含有多种化学成分,黄酮(Flavonoids)是其中一类较为重要的化合物。

黄酮类物质广泛存在于植物界,几乎分布于所有的绿色植物中[7]。它可分为多种类型,其化合物是有效活性成分之一,它是一类具有C-C-C基本母核的天然产物,可分为黄酮类、异黄酮类、黄酮醇类、查尔酮类等[8]。近年来发现黄酮类化合物(Hlavonoe

compound)的生理活性较为广泛,具有抗癌防癌作用;有很强的抗氧化效果,可防止或延缓食品发生氧化反应、饲料出现酸败变质等,能防止机体脂质过氧化反应;还有抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂等药用保健功能[7,9,10]。已经研究证明,黄酮类化合物是一类安全可靠、成本低、来源广、具有强抗氧化活性的抗氧化剂,因此,是一种具有广阔开发前景的新型饲料添加剂,将逐步取代人工合成的抗氧化剂[11,12]。

新疆典型的大陆气候不仅造就了丰富多彩的自然资源,而且形成了具有区域特色的植物种类。尤其是南疆植物资源蕴藏量大。黄酮类化合物是一类低分子天然植物成分,多应用于制药、保健食品和化妆品等行业。目前,国内外对黄酮类化合物的研究是一大热点。石榴是南疆特色植物之一,石榴皮、石榴渣大多被人们丢弃不用,浪费了很多资源。通过大量试验得知,石榴皮、石榴渣中含有丰富的黄酮类化合物,而对其中黄酮含量未见报道[13]。为合理利用这部分废弃资源,更好地开发利用石榴皮及渣中的黄酮[14],采用分光光度法(Spectrophotometry),以芦丁(Rutin)为标准品,对石榴皮及石榴渣中的黄酮类化合物进行了含量测定[14,15]。

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

芦丁分子式如下:

收稿日期:2015-03-18

作者简介:乔清亮(1979-),男,汉族,大学本科,兽医师,主要从事畜牧业生产、技术推广服务、疾病防治等工

作。

通讯作者:刘利林(1977-),男,汉族,硕士研究生,副教授,主要从事动物营养与饲料科学方面的教学和科研

工作。

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

1材料、仪器与试剂

1.1材料

石榴皮:2012年3月购于阿拉尔药店,粉碎后过40目筛,贮于棕色瓶中,避光保存,备用。

石榴渣:2012年3月购新鲜石榴于阿拉尔市场,除去果汁后,将其渣置于电热恒温干燥箱内50℃烘干,粉碎,过40目筛后,贮于棕色瓶中,避光保存,备用。

1.2仪器

752紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂),上皿电子天平(FA2004型上海精科天平),电热鼓风干燥箱(202-3型上海市上海县第二五金厂),电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司),多用粉碎机(9FZ-15B型国营简阳机械厂),电动吸引器(B70-30型上海医院设备厂)。

1.3试剂及其配制

1.3.1试剂

标准品芦丁(080-9303中国药品生物制品检定所);

乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯。

1.3.2试剂的配制

70%乙醇溶液:准确量取70ml无水乙醇,加双蒸水30ml,混匀。

5%亚硝酸钠溶液:精确称取2.500g亚硝酸钠溶于双蒸水中,在50ml容量瓶中定容。

10%硝酸铝溶液:精确称取5.000g硝酸铝溶于双蒸水中,在50ml容量瓶中定容。

4%氢氧化钠溶液:精确称取10.000g氢氧化钠溶于双蒸水中,在250ml容量瓶中定容。

2试验方法

2.1标准溶液的制备

用电子天平精密称取在120℃恒温干燥至恒重的芦丁标准品5mg置50ml容量瓶中,加70%乙醇35ml置水浴锅上微热使其溶解,冷却,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀。精密吸取25~50ml容量瓶中,加双蒸水定容,摇匀即得(0.05mg/ml)。

2.2样品溶液的制备

用电子天平精密称量已粉碎的石榴皮、石榴渣各2.500g置于锥形瓶中,各加35ml且70%的乙醇后,回流提取6h,抽滤,用少量70%的乙醇洗涤锥形瓶,对所得滤液进行二次抽滤,后将所有滤液移置50ml容量瓶中,用70%乙醇少量洗涤容器,洗涤液并入容量瓶中,用70%乙醇定容,摇匀。精密吸取10ml 置50ml容量瓶中,用双蒸水定容,摇匀即得10mg/ml。再精密吸取石榴皮样品液5ml置于50ml容量瓶中,定容,摇匀即得其浓度为1mg/ml。

2.3测定波长的选择

取标准溶液各2.0ml置于10ml容量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液0.4ml,摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液0.4ml,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液4ml,加双蒸水定容,摇匀,放置15min,以加0.00ml标准品为空白对照,进行分光扫描,结果表明,芦丁在

380nm处有最大吸收峰。

2.4样品测定波长的选择

取样品溶液2.0ml照“2.3”项下方法操作,然后进行分光扫描,结果表明:样品在370~380nm处有最大吸收峰,故选择380nm做最大吸收波长进行含量测定。2.5标准曲线的制备[14,16]

精密量取标准品溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml,分别置10ml容量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液,摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液0.4ml,摇匀,放置6min,加4%氢氧化钠试液4ml,加双蒸水定容,摇匀,放置15min。以加0.00ml标准品为空白,置1cm 比色杯中,于380nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标,浓度C为横坐标绘出标准曲线,如图1所示。所得回归方程为:A=3.8×10-3+32.3393C。r= 0.999(n=6)。结果表明:标准品溶液在0.006~ 0.012mg/ml浓度范围内呈线性关系。

3样品中总黄酮含量的测定

取石榴皮样品液5份各2.0ml按“2.5”项下方法操作,测得吸光度值,用回归方程计算样品中总黄酮含量。平均值为66.5mg/g。同法得石榴渣样品中总黄酮含量平均值为20.40mg/g。见表1、表2

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

图1黄酮标准曲线

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

表1石榴皮中总黄酮含量测定结果

试验号吸光度

检出量平均含量平均百分(mg/ml)(mg/ml)含量(%)

10.4210.0129

20.4260.0131

30.4460.01370.0133 6.65 40.4430.0136

50.4350.0133

表2石榴渣中总黄酮含量测定结果

试验号吸光度

检出量平均含量平均百分(mg/ml)(mg/ml)含量(%)

1 1.3430.0414

2 1.2630.0389

3 1.3500.04160.0407 2.04

4 1.3260.0409

5 1.3130.0405

4讨论和小结

上述结果说明,石榴皮、石榴渣中都含有黄酮类物质。本文采用分光光度法,用芦丁做标准品,在380nm处测得,石榴皮中黄酮类物质含量范围在64.5~68.5mg/g,平均总黄酮含量为66.5mg/g,百分含量为6.65%;石榴渣中黄酮类物质含量范围在19.45~20.80mg/g,平均总黄酮含量为20.40mg/g,百分含量为2.04%。

据报道,沙棘叶中总黄酮含量为0.74%[17];桑叶中总黄酮含量为0.753%~4.849%[18];黄刺玫叶片中总黄酮含量为4.88mg/g[19];银杏花粉中总黄酮含量为1.37%~2.40%[20]。通过比较与本次试验测定,得出结果表明,石榴皮、石榴渣中总黄酮含量均较高,其中石榴皮效果更好。这一测定结果对于利用、开发石榴皮、石榴渣提供了一定的参考依据。若把这部分废弃资源做黄酮的新型制剂,尤其是抗氧化剂的开发利用,则不但能变废为宝,为丢弃的石榴皮、石榴渣找到一条新的利用途径,而且能增加药农经济,同时为饲料中寻求天然、高效、无毒、无污染、低廉的抗氧化剂提供了可靠的理论依据。

因此,石榴皮、石榴渣很具有深入研究的价值,今后我们将继续进行黄酮类成分单体化合物的分离及抗氧化性的试验研究探索。◎

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石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定

作者:乔清亮, 刘利林

作者单位:乔清亮(吉木萨尔县泉子街镇畜牧兽医站,新疆 吉木萨尔,831700), 刘利林(塔里木大学动物科学学院,新疆阿拉尔 843300; 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室,新疆 阿拉尔 843300)

刊名:

新疆畜牧业

英文刊名:XINJIANG XUMUYE

年,卷(期):2015(5)

引用本文格式:乔清亮.刘利林石榴皮、石榴渣总黄酮含量的测定[期刊论文]-新疆畜牧业 2015(5)