专题十 微生物与工程 教案

专题十微生物与工程

微生物主要包括细菌（属于原核生物界）、真菌（属于真菌界）、微小的原生生物（属于原生生物界）和病毒。

病毒没有细胞结构，通常只有由蛋白质组成的外壳和核酸组成的核心，它必须寄生在宿主细胞内才能繁殖。病毒可分为3大类：动物病毒、植物病毒和噬菌体。

细菌细胞比较简单，只有拟核和简单的细胞器（如核糖体)，繁殖方式主要为无性繁殖。

抗生素能够干扰细菌的生长和繁殖从而起抗感染的作用，但随着抗生素的大量使用，细菌很快产生了耐药性。

真菌是异养生物，缺少叶绿素，大部分营腐生生活。只有少数真菌对动物致病，但许多真菌是植物的致病菌。

通过平板划线法和稀释涂布平板法可以对某种细菌或真菌进行分离，获得单个细胞形成的菌落以进行纯培养。

微生物广泛应用于生产生活的许多方面，如生产发酵食品、新型燃料和酶、用于污水处理等。

基因工程的发展进一步拓宽了微生物的应用范围。

酶可制成全细胞制剂和无细胞的酶提取物，还可固定在载体上制成固定化酶以提高酶的使用效率。

细菌细胞的结构

糖被

糖被是细胞壁外的一层黏液状的多糖类物质。与细胞壁结合紧密的糖被称为荚膜，与细胞壁结合松散的糖被称为黏液层。荚膜可能与致病菌的致病毒力有关。

细胞壁比较坚固，起支持、保护细胞的作用，还可作为鞭毛的锚定点。细胞壁主要由肽聚糖组成，还含有一些脂多糖和脂蛋白。很多细菌的细胞壁与细菌的致病能力有关。

拟核DNA

拟核DNA 中的基因大部分是单拷贝。有些基因可能同时存在于质粒和拟核DNA上。细胞中只有拟核，没有以核膜为界限的细胞核。

细胞膜

与真核生物细胞膜组成成分相似，但不够坚固。

质粒

质粒是环状DNA小分子，能独立复制。通过结合作用，质粒可以在不同细胞之间迁移。这种特性使得质粒上的耐药性基因可在细菌之间传播。质粒可用做基因工程的载体。

◎细菌通常以二分裂的方式进行繁殖。由一个细菌分裂生成两个细菌需要的时间称为代时，它与细菌种类和环境条件（如温度）有关。将一些细菌接种到液体培养基中进行培养，间隔一定的时间取样，计算细菌的数目，就能绘出细菌数目随时间变化的曲线，即细菌生长曲线。这里的生长指的是细菌群体繁殖生长。本文假设细菌的代时为20min，来模拟细菌群体生长的过程。在不补充营养物质或移去培养物，保持整个培养液体积不变的条件下，细菌的生长曲线可以分为四个特征时期，分别是调整期、对数期、细菌生长逐渐缓慢的稳定期，以及细菌数目急剧下降的衰亡期。

抗菌药物的作用机理

损伤细胞壁

可在细胞分裂时抑制新细胞壁的合成。

实例：青霉素、万古霉素、头孢霉素、杆菌肽。

抑制蛋白质的合成

干扰翻译过程。

实例：红霉素、四环素、氯霉素、链霉素。

损伤细胞膜

破坏细胞膜的结构。

实例：制霉菌素、霉康唑、多黏菌素B。

抑制酶活性

抑制基础代谢物的合成。

实例：磺胺、三甲氧苄二胺嘧啶（都是磺胺类药物。磺胺类药物是应用非常广泛，仅次于抗生素的一类抗菌药)。

遗传修饰生物可通过插入外源基因、改变现有的基因、删除或关闭基因三种方法获得，遗传修饰技术具有很好的应用前景，但也存在着伦理和安全方面的问题。

限制酶和DNA 连接酶是基因工程的常用工具：限制酶可识别特定的DNA 序列并切割DNA 分子，DNA 连接酶可以将由同一种限制酶切割而来的、不同来源的片段连接起来，形成重组DNA分子。

在基因工程的具体操作过程中， 可利用多聚酶链式反应对微量 DNA 进行快速扩增，产生大量与模板 DNA 相同的拷贝；可利用凝胶电泳技术对 DNA 等大分子物质进行分离；可以通过载体将目的基因导入受体细胞；通过基因克隆产生大量目的基因。

DNA 重组技术

◎如果两个DNA 分子被同一种限制酶酶切，将会产生具有匹配黏性末端的片段。

◎将这样两个具有匹配黏性末端的片段混合，它们会通过碱基配对作用结合在一起，这个过程称作退火。这可以使不同来源的DNA 片段连接起来。

◎连接而成的片段通常呈线状或环状。

◎DNA 片段通过DNA 连接酶连接在一起，形成重组DNA 分子。 多聚酶链式反应（简称PCR ）

转基因 将纯化的 DNA 导入细胞的过程称为转化。由转入了外源基因的细胞发育而来的生物称为转基因生物。转基因技术已应用于植物、动物和微生物中。该技术可以直接修改生物的基因组，甚至可以使生物表现出在自然界并不存在的新性状。转基因技术的应用非常广泛。 脂质体

脂质体是由单层膜形成的磷脂小球。膜上嵌入适宜的表面分子后，可聚集到体内特定类型的细胞周围。脂质体携带的DNA 可以通过胞吞作用或细胞融合进入细胞。因此可用于导入基因到细胞中。

病毒载体

病毒很适合用于基因治疗。病毒的蛋白质外壳内能容纳多达7500个碱基的DNA 片段。当病毒侵染宿主细胞并在细胞内繁殖时，也将重组DNA 带入到细胞中。病毒已经用于多次变性：将获得的 DNA 样品( 也称为目的 DNA) 加热至90 ℃以上 , 使

DNA 变性 经过一次循环，形成两个与样本DNA 完全一样的拷贝 延伸：升温到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成DNA 复性：将样品冷却至

50℃左右，使引物与

DNA 单链进行碱基互补

配对。PCR 中的引物是

单链DNA ，用作DNA

延伸的起始序列 重复该过程，进行约30次循环， 重复加热、冷却的循环过程，直至产生足够数量的目的DNA 分子

基因治疗的临床实验。这种方法存在的问题是宿主对病毒的免疫反应。

显微注射

DNA可以通过显微注射转入动物细胞中。转基因小鼠和家畜都是利用这种方法产生的，但是成功率很低：只有2%～3%的受精卵发育成转基因动物，在这些动物中只有一小部分表达了转入的基因。

许多植物，包括农作物现在都已经利用重组DNA 技术进行了遗传修饰。对植物进行基因工程操作，使许多重要农作物获得了新的优良性状如产量增加、抗病虫害的能力增强，减少了农业化肥的使用。

细胞工程和胚胎工程

◎植物组织培养能应用于植物的快速繁殖，也能用于提高植物的品质，增强植物的抗逆能力。植物微型繁殖是植物组织培养技术的一种应用，原理是植物细胞具有全能性。

运用细胞核移植技术，可由分化了的动物细胞产生克隆。

干细胞是人或其他动物体内仍然保留着分裂和分化能力的细胞，胚胎干细胞是能够分化发育形成人或其他动物体内多种组织的细胞。

◎异种移植是将一个物种的细胞、组织、器官移植给另一个物种，目前这一技术正处于探索和争议中。

胚胎分割技术是产生高等动物体克隆的最简单的方法，但这项技术目前也存在一些问题。◎克隆在生产干细胞方面有着诱人的应用前景，但围绕这项技术的应用也存在很多道德和伦理方面的问题。

◎将克隆技术应用于动物繁育，有助于促进基因优良家畜的快速繁殖。克隆技术与转基因技术相结合，可以提供一种经济可行的方式，以快速繁育导入了优良基因的转基因动物。人胰岛素等人源蛋白现在可以通过基因工程技术进行制备，这极大地提高了生产效率和产品质量，并降低了生产成本。

◎单克隆抗体是一种人工制备的抗体，它来自某单一的B 淋巴细胞。小鼠B 淋巴细胞与肿瘤细胞融合形成的杂种细胞能够产生大量的单克隆抗体。单克隆抗体可以作为诊断试剂或用于癌症治疗等方面。

植物组织培养（微型繁殖）的优点

◎能够由一粒种子或外植体产生大量的克隆。

◎能够直接在体外培养设备中选择所需的性状，减少了田间试验需要占据的大量空间。

◎无需等待结子即可进行植物的繁殖。

◎可实现某些物种的快速繁殖，例如世代时间长的物种，以及种子不易发芽的物种等。

◎能保存花粉和细胞以用于植物繁殖（与种子银行类似）。

◎可实现无菌植物材料的国际交流。

◎有助于消除植物疾病——通过仔细挑选母株、进行无菌消毒等措施即可实现。

◎克服季节限制。

◎能在较小的空间里低温保存大量有活力的植物。

◎疫苗可分为整剂疫苗和亚基疫苗两大类。新型疫苗的生产与生物技术有着密切的关系。例如，用农杆菌将病毒或细菌抗原基因转入某些特定植物细胞，再经栽培获得的农产品有的就可以作为可食用疫苗。可食用疫苗能克服常规疫苗面临的多种问题。

◎基因治疗是指用正常基因取代或修补病人细胞中有缺陷的基因，从而达到治疗疾病的目的。基因治疗需要一定的载体（如用逆转录病毒为载体导入DNA) 。基因治疗已经取得了令人瞩目的进展，有着广阔的应用前景，但目前也面临着许多技术方面的难题。

确定DNA 的核苷酸排列顺序需要用到DNA测序技术。DNA 测序技术包括人工测序（桑格测序法是一种常用的方法）和自动测序技术。DNA 测序的自动化，极大地提高了测定速率，使基因组测序成为可能。

基因组分析包括测定生物体基因组的序列，定位基因，找到控制DNA 活性的区域。

DNA 图谱分析技术是法医鉴定的一种有力工具，该技术的核心思路是分析对比不同人基因组中微卫星或小卫星的差异。

应用基因芯片能够快速、高效地确定未知样本中含有哪些基因，基因芯片也能用于测定未知DNA 的序列，研究基因的表达水平。

人类基因组计划的研究机构在2000 年公布了人类基因组草图，2004 年公布了高质量（金标准）的人类基因组序列。这一计划的完成能给人类带来很多好处，但也可能会产生一些伦理问题。

例1 下列关于病毒的叙述，正确的是（）

A.烟草花叶病毒可以不依赖宿主细胞而增殖

B.流感病毒的核酸位于衣壳外面的囊膜上

C.肠道病毒可在经高温灭菌的培养基上生长增殖

D.人类免疫缺陷病毒感染可导致获得性免疫缺陷综合症

答案：D

例2 下列关于病毒的描述，正确的是（）

A.噬菌体通常在植物细胞中增殖

B.病毒可作为基因工程的运载体

C.青霉素可有效抑制流感病毒增殖

D.癌症的发生与病毒感染完全无关

答案：B

例3 下列叙述正确的是（）

A．当病毒侵入人体后，只有细胞免疫发挥防御作用

B．大肠杆菌在葡萄糖和乳糖作为碳源的培养基上，只有葡萄糖耗尽时才能利用乳糖

C．在水分供应充足的大田中，只有通风透光才能提高光能利用率

D．当甲状腺激素含量偏高时，只有反馈抑制下丘脑活动才能使激素含量恢复正常

答案：B

例4 在细菌的连续培养过程中，要以一定速度不断添加新的培养基，同时以同样速度放出老的培养基。下图表示培养基的稀释率（培养基的更新速率）与培养容器中营养物质浓度、细菌代时（细菌数目增加一倍所需的时间）、细菌密度的关系。下列相关叙述不正确的是（）

A．在稀释率很低的情况下，稀释率的增加会导致细菌密度增加

B．稀释率从a到b的变化过程中，细菌生长速率不断提高

C．稀释率超过b点后，营养物质浓度过高导致细菌死亡率增大，细菌密度降低

D．为持续高效地获得发酵产品，应将稀释率控制在b点附近

答案：C

医学免疫学与微生物学参考答案

1.正常菌群对机体的益处不包括（ D ） A.刺激免疫系统成熟 B.抗肿瘤 C.抗致病菌生长 D.产生干扰素 E.提供营养 参考：教材164页三、微生物与人类的关系正常菌群 2.溶菌酶对G＋菌的作用是（ B ） A.破坏磷壁酸 B.裂解聚糖骨架 C.损伤细胞膜 D.抑制菌体蛋白合成 E.降解核酸 参考：教材169页尾行 3.可在细菌间传递DNA的物质是（ E ） A.鞭毛 B.中介体 C.荚膜 D. 普通菌毛 E. 性菌毛 参考：教材174页2。性菌毛 4.细菌致病性的强弱主要取决于细菌的（ E ） A.荚膜 B.菌毛 C.侵袭性酶 D. 毒素 E. 毒力 参考：教材192页，第三节细菌的毒力物质 5. .决定痢疾杆菌侵袭力的首要因素是( D ) A.内毒素 B.外毒素 C.侵袭性酶 D.菌毛 E.肠毒素 参考：教材252页，二、致病性与免疫性 6.湿热灭菌法中杀菌效果最彻底的是（ D ） A.煮沸法 B.巴氏消毒法 C.间歇灭菌法 D.高压蒸汽灭菌法 E.流通蒸汽灭菌法 参考：教材201页一、热力消毒灭菌法 7.可用于分离脑膜炎球菌的培养基是（ B ） A.血平板 B.巧克力平板 C.沙氏培养基 D.双糖培养基 E.碱性平板 参考：教材240页一、脑膜炎奈瑟菌2。培养特性

8.以内毒素为主要致病因素并可引起全身感染的肠道致病菌是（ A ） A. 伤寒杆菌 B. 志贺痢疾杆菌 C. 大肠杆菌 D.霍乱弧菌 E.肠炎杆菌参考：教材198页3）内毒素血症 9.不引起毒血症的毒素是（ B ） A.葡萄球菌肠毒素 B.霍乱肠毒素 C.志贺毒素 D.白喉毒素 E.破伤风痉挛毒素 参考：教材198页2）毒血症 10.在人体肠道正常菌群中占绝对优势的细菌是（ C ） A.大肠杆菌 B.变形杆菌 C.无芽胞厌氧菌 D.白色念珠菌 E.沙门菌 参考：教材164页三、微生物与人类的关系正常菌群 11.结核菌素试验的用途不包括（ C ） A.选择卡介苗接种对象 B.判断卡介苗接种效果 C.诊断Ⅳ型超敏反应? D.辅助诊断婴幼儿结核病 E.判断细胞免疫功能 参考：教材269页（三）结核菌素试验 12.引起败血症的细菌除外（ A ） A.白喉杆菌 B.金黄色葡萄球菌 C.绿脓杆菌 D.乙型溶血性链球菌 E.大肠杆菌 参考：教材198页4）败血症 13．一般不入血引起败血症的细菌是（ A ） A. 白喉杆菌 B. 大肠杆菌 C. 绿脓杆菌 D. 变形杆菌 E. 产气荚膜杆菌 参考：教材198页4）败血症 14. 与结核杆菌致病性有关的物质是( D ) A.外毒素 B.侵袭性酶 C.菌体表面构造 D.细胞壁类脂 E.内毒素

微生物实验教案05(5)厦门大学 微生物 考研

实验一光学显微镜----油镜的使用 一、实验目的 1 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术 2 了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。 二、实验材料和用具 细菌三型的染色装片、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。 三、操作步骤 (一)观察前的准备 1．将显微镜置于平稳的实验台上。 2．调节光源。 (二)低倍镜观察染色装片 首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。 (三)高倍镜观察 眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。不要移动装片位置，准备用油镜观察。 (四)油镜观察 1．提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油。 2．从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。 3．将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升(切忌反方向旋转)，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作直至物像看清为止。仔细观察并绘图。 4．再次观察提起镜筒，换上金黄色葡萄球菌染色装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察，绘图。重复观察时可比第一次少加香柏油。 (五)镜检完毕后的工作 1．移开物镜镜头。2．取出装片。 3．清洁油镜。4．擦净显微镜，将各部分还原。 四、注意事项 1．使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。 2．下降镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，边观察边下降镜头的错误操作，以免压碎玻片而损坏镜头。 3．使用二甲苯擦镜头时，注意二甲苯不能过多，以防溶解固定透镜的树脂。 4．注意保持显微镜的洁净，对金属部分要用软布擦拭，擦镜头必须用擦镜纸，切勿用手或用普通布、纸等，以免损坏镜头。 五、实验报告 1．绘制油镜下的细菌三型图。 2．使用油镜应特别注意哪些问题？ 3．当物镜从低倍镜转到高倍镜和油镜时，对照明度有何要求？应如何调节？

微生物的接种技术

1目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2实验说明 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3实验器材 3.1器械和用品 酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2菌种和培养基 菌种： 大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphyloccus aureus）。 培养基： 普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4实验流程 斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5操作步骤

5.1斜面接种法 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2液体接种法 多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下： 由斜面培养物接种至液体培养基： 用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。

《医学免疫学与微生物学》

医学免疫学与微生物学》形成性考核册答案 作业一 １、免疫系统具有哪些功能，正常或异常时有何生物学效应？ 答：（１）免疫防御：指机体抵御外来抗原性异物入侵的一种保护功能。正常时可抵御病原微生物的感染和损害，即抗感染免疫。异常时如果防御功能过强出现超敏反应，免疫防御功能过低（免疫缺陷）会导致反复发生感染。 （２）免疫稳定：指维持体内环境相对稳定的生理机能。正常时可及时清除体内损伤、衰老、变性的细胞以及抗原－抗体复合物等抗原性异物，对自身成分耐受和保护。功能紊乱时会导致自身免疫疾病，失去了对自身抗原的耐受而对自身细胞发动攻击。 （３）免疫监视：指免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理保护功能。功能正常时可防止肿瘤产生，功能失调时可导致肿瘤发生，或病毒感染不能及时清除，造成病毒持续性感染。 ２、列出医学上重要的抗原物质 答：（１）微生物及其代谢产物：如细菌及细菌毒素、病毒等微生物，既可在感染时引起机体免疫应答清除病原微生物，也可人工利用这些抗原制备疫苗、类毒素、抗毒素用于人工免疫预防和治疗，或体外进行抗原抗体检测进行疾病的诊断。 （２）动物免疫血清：人工制备的抗毒素如破伤风抗毒素是由马血清制备，对人而言，既含有特异性抗体可中和毒素，又含有异种动物蛋白引起超敏反应。在应用抗毒素前应做皮试判断有无过敏现象。 （３）同种异性抗原：如血型抗原和组织相容性抗原。输血和器官移植前应进行血型鉴定或组织配型以避免发生输血反应和移植排斥反应。 （４）肿瘤抗原：分为肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原。如肝癌患者体内出现高水平ＡＦＰ（甲胎蛋白），可用于肝癌的普查和早期诊断。 ３、简述抗体的种类和主要功能 答：抗体依据重链抗原性不同分为五类：IgG IgA IgM IgD IgE。 IgG：血清中含量最高，是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素 等。还能激活补体，增强巨噬细胞的吞噬功能（调理作用），穿过胎盘保护胎儿及新生儿免受感染。 IgA：分为单体和双体两种。单体存在于血清中，双体存在于粘膜表面及分泌物中，是粘膜局部抗感染的重要因素。 IgM：是分子量最大、体内受感染后最早产生的抗体，具有很强的激活补体作用和调理作用，时作重要的抗感染因子，且常用于诊断早期感染。 IgD：主要存在于成熟Ｂ细胞表面，是Ｂ细胞识别抗原的受体。 IgE：血清中含量最少，某些过敏性体质的人血清中可检测到，参与介导Ⅰ型超敏反应。４、简述补体的生物学活性 答：补体的生物学活性主要有： （１）溶菌和溶细胞。细菌等抗原物质和相应抗体结合形成抗原抗体复合物，可通过经典途径激活补体系统；革兰氏阴性菌的脂多糖可通过旁路途径激活补体，在细菌等靶细胞表面形成膜攻击复合物，最终导致细菌细胞或靶细胞裂解。 （２）促进抗体中和及溶解病毒。补体可明显增强抗体对病毒的中和作用，在没有特异性抗体存在的条件下，补体也可溶解灭活某些病毒。 （３）调理和免疫粘附。补体裂解产物与细菌及吞噬细胞结合，促进吞噬细胞的吞噬作用，即调理作用；若与红细胞、血小板结合可形成较大的聚合物利于吞噬细胞的吞噬，此即免疫粘附作用。

微生物学实验教学大纲

课程编号： 《微生物学实验》教学大纲 学时数：108讲课：108 学制：四年制本科 适合专业：生物科学相关专业 一、本课程的性质和任务 （一）课程的性质： 微生物学实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。 （二）课程的任务： 微生物学实验是生物学重要的基础课之一，要求学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。 二、本课程与其他课程的联系： 1. 通过教师示范、讲解与学生实际操作相结合方法，使学生牢固树立无菌概念，掌握显微镜的使用、生物染色技术、形态学观察的方法、微生物计数、培养基的配置和灭菌方法、微生物分离、纯化等基本操作技能，基本了解常用的仪器设备的基本原理、构造、使用方法及使用中的注意事项，树立严谨求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力，培养勤俭节约、爱护公物和相互协作的优良作风。 2. 本实验课内容包括验证性实验、综合性实验两个部分。验证性实验主要

通过光学显微镜镜检观察方法进行教学，综合实验在教师指导下学生根据所掌握的理论基础和实验技能，由学生自己动手完成。实验过程要求学生仔细观察实验现象，完整记录原始实验数据、结果，分析实验现象并认真填写实验报告。 三、教学内容 （一）实验一实验室安全教育与微生物学实验室常用的器皿 目的要求 掌握实验室安全规则，了解微生物学实验所用的器皿，因其大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此了解其质量、洗涤和包装方法的要求。 实验内容 一、器皿的种类、要求与应用： 1、试管 大试管(约18mm×180mm) :可装倒平板用的培养基；可作制备斜面用；装液体培养基用于微生物的振荡培养 中试管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 装液体培养基培养细菌或做斜面用；用于细菌、霉菌、病毒等的稀释和血清学试验。 小试管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖发酵或血清学试验，和其它需要节省材料的试验。 2、容量瓶 主要用于准确配制一定浓度的溶液，它是一种细长颈、梨形的平底玻璃瓶，配有磨口塞，瓶颈上刻有标线。 3、量筒 用来量取液体体积的一种玻璃仪器，外壁上有刻度。常用量筒的规格有5ml、10ml、25ml、50ml、100ml、250ml等。 4、三角瓶 用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。 5、烧杯 呈圆柱形，顶部的一侧开有一个槽口，便于倾倒液体，有些烧杯外壁标有刻度，可以粗略地估计烧杯中液体的体积，这种烧杯叫印标烧杯，也叫刻度烧杯，其分度并不十分精确，允许误差一般在±5%。 6、烧瓶 通常具有圆肚细颈的外观，因瓶口很窄，不适用玻璃棒搅拌，若需要搅拌时，

(完整版)微生物的接种技术

微生物的接种技术 1 目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2 实验说明 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3 实验器材 3.1 器械和用品 酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2 菌种和培养基 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。 培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4 实验流程 斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5 操作步骤 5.1 斜面接种法 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。

右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2 液体接种法 多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下： 由斜面培养物接种至液体培养基：用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。 由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-5）。 接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。 5.3 固体接种法 普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。按所用菌种或种子菌来源不同可分为： 用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。 用固体种子接种固体料。包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。

《医学免疫学与微生物学》试题及答案

《医学免疫学与微生物学》试题及答案 一、填空题（每空1分，共15分） 1．免疫防御功能正常时表现为_______________，如水平过低可导致 __________________。 2．具有____________性而缺乏 ____________性的物质称为半抗原。 3．经典的Ⅰ类基因和Ⅱ类基因的二个特点是__________________和 ___________________。 4．CK通常以___________的方式作用于产生CK的细胞本身，或以___________方式作用于邻近细胞。 5．TCR-CD3复合体中，TCR的功能是________________,CD3分子则通过胞浆内的______________结构，将抗原信号转导到细胞内。 6．细菌结构中缺乏_____________，称为细菌L型。 7．肠热症主要由______________引起。 8．可感染人的禽流感病毒亚型是________________。 9．汉坦病毒是_________________的病原。 10．细菌内毒素的化学成分是______________。 二、名词解释（每小题3分，共15分） 1．异嗜性抗原 2．单克隆抗体 3．细胞因子 4．败血症 5．微生态失调 三、单选题：从下列A、B、C、D 4个备选答案中，选出1个正确答案并将其英文字母填在括号内（每小题1分，共30分） 1．适应性免疫的特征是（） A．出生时即具有 B．反应迅速 C．特异性 D．无记忆性 2．下列对抗毒素的叙述中，错误的是（） A．类毒素免疫动物的免疫血清制成 B．注射前需作皮肤试验 C．既可中和外毒素，又可能引起超敏反应 D．用于人工自动免疫 3．下列哪类Ｉｇ升高可提示机体近期感染（） A．IgG B．IgM C．IgE D．IgA 4．遗传性血管神经性水肿患者血清中升高的补体成分是（）

微生物发酵工程

发酵工程，是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。 发酵工程的内容 它是一级学科“轻工技术与工程”中的一个重要分支和重点发展的二级学科，在生物技术产业化过程中起着关键作用。 1）“发酵”有“微生物生理学严格定义的发酵”和“工业发酵”，词条“发酵工程”中的“发酵”应该是“工业发酵”。 （2）工业生产上通过“工业发酵”来加工或制作产品，其对应的加工或制作工艺被称为“发酵工艺”。为实现工业化生产，就必须解决实现这些工艺（发酵工艺）的工业生产环境、设备和过程控制的工程学的问题，因此，就有了“发酵工程”。 （3）发酵工程是用来解决按发酵工艺进行工业化生产的工程学问题的学科。发酵工程从工程学的角度把实现发酵工艺的发酵工业过程分为菌种、发酵和提炼（包括废水处理）等三个阶段，这三个阶段都有各自的工程学问题，一般分别把它们称为发酵工程的上游、中游和下游工程。 （4）微生物是发酵工程的灵魂。近年来，对于发酵工程的生物学属性的认识愈益明朗化，发酵工程正在走近科学。 （5）发酵工程最基本的原理是发酵工程的生物学原理。 发酵工程是指采用工程技术手段，利用生物（主要是微生物）和有活性的离体酶的某些功能，为人类生产有用的生物产品，或直接用微生物参与控制某些工业生产过程的一种技术。人们熟知的利用酵母菌发酵制造啤酒、果酒、工业酒精，乳酸菌发酵制造奶酪和酸牛奶，利用真菌大规模生产青霉素等都是这方面的例子。随着科学技术的进步，发酵技术也有了很大的发展，并且已经进入能够人为控制和改造微生物，使这些微生物为人类生产产品的现代发酵工程阶段。现代发酵工程作为现代生物技术的一个重要组成部分，具有广阔的应用前景。例如，用基因工程的方法有目的地改造原有的菌种并且提高其产量；利用微生物发酵生产药品，如人的胰岛素、干扰素和生长激素等。 已经从过去简单的生产酒精类饮料、生产醋酸和发酵面包发展到今天成为生物工程的一个极其重要的分支，成为一个包括了微生物学、化学工程、基因工程、细胞工程、机械工程和计算机软硬件工程的一个多学科工程。现代发酵工程不但生产酒精类饮料、醋酸和面包，而且生产胰岛素、干扰素、生长激素、抗生素和疫苗等多种医疗保健药物，生产天然杀虫剂、细菌肥料和微生物除草剂等农用生产资料，在化学工业上生产氨基酸、香料、生物高分子、酶、维生素和单细胞蛋白等。 从广义上讲，发酵工程由三部分组成：是上游工程，中游工程和下游工程。其中上游工程包括优良种株的选育，最适发酵条件（pH、温度、溶氧和营养组成）的确定，营养物的准备等。中游工程主要指在最适发酵条件下，发酵罐中大量培养细胞和生产代谢产物的工艺技术。这里要有严格的无菌生长环境，包括发酵开始前采用高温高压对发酵原料和发酵罐以及各种连接管道进行灭菌的技术；在发酵过程中不断向发酵罐中通入干燥无菌空气的空气过滤技术；在发酵过程中根据细胞生长要求控制加料速度的计算机控制技术；还有种子培养和生产培养的不同的工艺技术。此外，根据不同的需要，发酵工艺上还分类批量发酵：即一次投料发酵；流加批量发酵：即在一次投料发酵的基础上，流加一定量的营养，使细胞进一步的生长，或得到更多的代谢产物；连续发酵：不断地流加营养，并不断地取出发酵液。在进行任何大规模工业发酵前，必须在实验室规模的小发酵罐进行大量的实验，得到产物形成的动力学模型，并根据这个模型设计中试的发酵要求，最后从中试数据再设计更大规模生产的动力学模型。由于生物反应的复杂性，在从实验室到中试，从中试到大规模生产过程中会出现许多问题，这就是发酵工程工艺放大问题。下游工程指从发酵液中分离和纯化产品的技术：包括固液分离技术（离心分离，过滤分离，沉淀分离等工艺），

医学免疫学与微生物学各章练习题

医学免疫学与微生物学各章练习题 第一篇医学免疫学 一、填空题 1．机体免疫功能正常时，可发挥——功能、——功能和——功能。 2．超敏反应的发生是由于机体免疫防御功能反应——；而发生肿瘤是由于——功能缺陷。 3．免疫是指机体免疫系统识别——和——物质并产生一系列生物学效应的过程。 4．免疫系统清除体内衰老、损伤、变性细胞的功能称为。该项功能失调可引起——。 5．医学免疫学的起源学科是——。 二、名词解释 1．免疫 三、问答题 1．简述基础免疫学的主要研究内容包括哪些? 2．免疫系统具有哪些功能?这些功能正常或失常表现出何种生物学效应? 参考答案 一、填空题 1．免疫防御，免疫自稳，免疫监视 2．过强，免疫监视 3．自己，非己 4．免疫自稳功能，自身免疫病 5．微生物学 二、名词解释 1．免疫：是指机体免疫系统识别“自己”与“非己”抗原物质，对“自己”耐受而排除“非己”抗原物质的生理过程。 三、问答题 1．基础免疫学的主要研究内容包括：(1)免疫系统的组成和功能。(2)抗原物质的种类和特点。(3)免疫应答的过程、规律和特点。(4)免疫学应用，包括免疫学防治和免疫学诊断。 2．免疫系统的功能及效应： (1)免疫防御：是机体抵御外来抗原性异物入侵的一种保护功能。功能正常可防止病原微生物的感染和损 害，即抗感染免疫。功能异常有两种情况：免疫防御功能过强出现超敏反应；免疫防御功能过低(免疫缺陷)会导致反复发生病原微生物的感染。 (2)免疫自稳：是机体免疫系统维持体内环境相对稳定的一种生理机能。功能正常可及时清除体内损伤、 衰老、变性的细胞，以及抗原抗体复合物等抗原异物，对自身成分耐受与保护。功能紊乱或失调会导致自身免疫病，即认己为敌，失去了对自身抗原的耐受而对自身细胞发起攻击。 (3)免疫监视：指机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理保护功能。 功能正常可防止肿瘤产生；功能失调可导致肿瘤发生，或病毒感染不能及时清除，造成病毒持续性感染。 第一章免疫器官 一、填空题 1．免疫系统的组成包括——、——和——。 2．人类中枢免疫器官包括——和——。 3．人类周围免疫器官包括——、——和——。 4．骨髓是——分化成熟场所；胸腺是——分化成熟场所。 5．免疫细胞接受抗原刺激并产生免疫应答的重要场所是——、——和——。 6．淋巴结中的B淋巴细胞主要存在于——区，而T淋巴细胞主要存在于淋巴结的——。 二、A型选择题 1．T细胞分化成熟场所是( )。 A．骨髓 B．胸腺 C．黏膜相关淋巴组织 D．脾 E．淋巴结 2．人类B淋巴细胞分化成熟场所是( )。 A．骨髓 B．胸腺 C．腔上囊 D．脾 E．淋巴结 3．中枢免疫器官的功能是( )。 A．T淋巴细胞成熟场所 B．B淋巴细胞成熟场所 C．T淋巴细胞居住及产生免疫应答场所 D．B淋巴细胞居住及产生免疫应答场所 E．免疫细胞分化成熟场所 4．周围免疫器官的功能不包括( )。 A．接受抗原刺激 B．产生免疫应答 C．过滤和清除病原微生物 D．造血及产生免疫细胞 E．过滤血液 三、问答题 1．简述免疫器官的组成和主要功能。 参考答案 一、填空题

微生物学实验教案

实验一显微镜的构造和使用方法 一、实验目的及要求 1. 了解显微镜的构造和性能 2. 掌握显微镜的正确使用和维护方法 二、原理 微生物最显著的特点是个体微小，必须借助显微镜才能观察它们的个体形态和细胞构造，熟悉显微镜和掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。本实验主要介绍目前微生物学研究中最常用的普通光学显微镜的结构和使用方法，目的在于使同学们通过本实验，对光学显微镜有比较全面的了解，并重点掌握明视野普通光学显微镜中油镜的使用。 三、显微镜的构造和性能 1. 构造（1）机械系统：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、 推进器、调节螺旋。 （2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、反光镜、滤光片。 2. 性能（1）分辨力和数值孔径 分辨力用D表示，D=0.5×(λ/N.A) N.A=n×Sin(α/2) N.A为数值孔径；λ为入射光波长；n为介质折射率。α为镜口角。 （2）放大倍数 放大倍数= 物镜的放大倍数×目镜的放大倍数

四、实验器材 显微镜、标本、擦镜纸、香柏油、二甲苯 五、显微镜的使用方法 1、对光：光强时用平面镜，光弱时用凹面镜，视野明亮即可。 2、镜检：低倍镜——定位；高倍镜——观察；油镜——观察 3、镜检完毕后的工作：擦拭镜头（标本）等，还原显微镜，登记，洗手，离开。 4、总流程：安装—调光源—调目镜—调聚光器—镜检—擦镜头——复原—登记。 六、作业（可选） 1、哪些方法可以提高显微镜的分辨率？ 2、 2、为什么有时候在低倍镜下可看到的目标，换用高倍镜则无法看到？

实验二细菌、放线菌的形态观察 一、实验目的及要求 1. 掌握细菌的制片和染色技术 2. 掌握放线菌形态观察方法 3. 熟练油镜的使用方法 二、细菌染色的基本原理 1. 革兰氏染色 G＋与G－细胞壁结构不同，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇进行脱色时，G＋细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，乙醇脱色使肽聚糖的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在胞内，经脱色处理时，初染剂保留而呈现紫色。G－菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高, 乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。 2. 简单染色 细菌细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。细菌常用碱性染料来进行简单染色，这是因为在中性，碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，很容易使细菌结合使菌体着色，经染色

发酵工程

课题22：第五章微生物与发酵工程第三节发酵工程简介 一、【自主学习】 (一)应用发酵工程的生产实例------谷氨酸发酵： 1、常用的谷氨酸产生菌：、等。 2、培养基：（1）按物理性质属培养基；（2）按化学成分属培养基； （3）培养基中除水、无机盐外，碳源由提供，氮源来自，生长因子为。（4）培养液配制完成后，投放到发酵罐中，通入的蒸汽进行灭菌，冷却后，在条件下加入菌种，即为接种。 3、发酵过程： （1）氧气供应：谷氨酸棒状杆菌是菌，因此发酵过程中要不断通入，并搅拌。搅拌的意义是及 。 （2）温度：℃；（3）pH：；（4）时间：h。（二）发酵工程的概念和内容： 1、概念：采用现代工程技术手段，利用为人生产有用的产品或 直接把应用于工业生产的一种新技术。 2、内容： （1）菌种的选育：方法为、及，其中的方法获得的微生物可生产出一般微生物不能生产的产品。 （2）培养基的配制：要根据选择原料配制培养基且配方要经过 后才能确定。 （3）灭菌：发酵过程中一旦污染杂菌将会导致甚至，因此及均需经过严格灭菌。 （4）扩大培养和接种：要将选育出的优良菌种经过达一定数量后再进行接种。 （5）发酵过程：这是发酵的中心阶段，此过程中除需随时取样检测外，还要及时 以满足菌种的，同时要严格控制 与转速等发酵条件，这是因为环境条件的变化，不仅会 而且会。如谷氨酸发酵中当时，谷氨酸棒状杆菌就会生成乙酰谷氨酰胺；当时，生成的代谢产物就会是乳酸或琥珀酸。其中对溶氧的控制可通过及调节；对pH的控制可通过 及在培养基中加调节。 （6）分离提纯：发酵工程产品有两类，即和。如果产品是，可采用过滤、沉淀等方法分离；如果产品是，可采用等方法提取，分离提纯后的产品，还要经过才能成为正式产品。 （三）发酵工程的应用：

实验 微生物接种技术

实验微生物接种技术 一、目的： 学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。 二、原理： 所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。 三、实验材料： 斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。 四、操作步骤 （一）无菌操作 菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。 操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。 （二）接种方法 （1）斜面接种： 从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物 的接种。 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松 动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在 火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底 部，沿斜面划曲线或直线。 图1. 斜面接种示意图

（2）液体接种： 由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。 （3）穿刺接种： 用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。 （4）平板接种： 将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方法，可分为下面几种： 1)斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点3-4点）即可。 2)平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培养、保存之用。 五、思考题 1．何谓无菌操作？接种前应作哪些准备工作？ 2．总结几种接种方法的要点及应注意的事项？

发酵工程试题

发酵工程 一、名词解释 1、分批发酵：在发酵中，营养物和菌种一次加入进行培养，直到结束放出，中间除了空气 进入和尾气排出外，与外部没有物料交换。 2、补料分批发酵：又称半连续发酵，是指在微生物分批发酵中，以某种方式向培养系统不 加一定物料的培养技术。 3、絮凝：在某些高分子絮凝剂的作用下，溶液中的较小胶粒聚合形成较大絮凝团的过程。 二、填空 1、生物发酵工艺多种多样，但基本上包括菌种制备、种子培养、发酵和提取精制等下游处理几个过程。 2、根据过滤介质截留的物质颗粒大小的不同，过滤可分为粗滤、微滤、超滤和反渗透四大类。 3、微生物的育种方法主要有三类：诱变法，细胞融合法，基因工程法。 4、发酵培养基主要由碳源，氮源，无机盐，生长因子组成。 5、青霉素发酵生产中，发酵后的处理包括：过滤、提炼，脱色，结晶。 6、利用专门的灭菌设备进行连续灭菌称为连消，用高压蒸汽进行空罐灭菌称为空消。 7、可用于生产酶的微生物有细菌、真菌、酵母菌。 常用的发酵液的预处理方法有酸化、加热、加絮凝剂。 8、根据搅拌方式的不同，好氧发酵设备可分为机械搅拌式发酵罐和通风搅拌式发酵罐两种。 9、依据培养基在生产中的用途，可将其分成孢子培养基、种子培养基、发酵培养基三种。 10、现代发酵工程不仅包括菌体生产和代谢产物的发酵生产，还包括微生物机能的利用。 11、发酵工程的主要内容包括生产菌种的选育、发酵条件的优化与控制、反应器的设计及产物的分离、提取与精制。 12、发酵类型有微生物菌体的发酵、微生物酶的发酵、微生物代谢产物的发酵、微生物转化发酵、生物工程细胞的发酵。 13、发酵工业生产上常用的微生物主要有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。 14、当前发酵工业所用的菌种总趋势是从野生菌转向变异菌，从自然选育转向代谢调控育种，从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。 15、根据操作方式的不同，液体深层发酵主要有分批发酵、连续发酵、补料分批发酵。 16、分批发酵全过程包括空罐灭菌、加入灭过菌的培养基、接种、发酵过程、放罐和洗罐，所需的时间总和为一个发酵周期。

微生物培养方法

微生物的培养方法 实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 ２、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。

微生物学实验教案

微生物实验教案 实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察 一、实验目的 以染色玻片为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。 二、实验原理 1显微镜油镜使用的原理 （1）光学部分 : 接目镜、接物镜、照明装置 ( 聚光镜、虹彩光圈、反光镜等 ) 。它使检视物放大 , 造成物象。（ 2）机械部分 : 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转 移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。 2 显微镜的放大倍数和分辨 率（ 1）放大倍数 =接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 （2）显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公 式表示为： D=λ /2n ·sin(α/2 ) 式中 D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 λ：可见光的波长（平均0.55 μ m） n:物镜和被检标本间介质的折射率。 a：镜口角（即入射角）。 3 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。三、实验材料1显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、酒 精灯、火柴、玻璃铅笔、蒸馏水等。 2枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的玻片染色标本。 四、实验方法与步骤 （1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 （ 2）调节光亮度。 （ 3）低倍镜观察：先粗调再微调至物象清晰。 （ 4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。 （ 5）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油， 使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 （ 6）绘出所观察到的细菌形态图像。 （ 7）、换片：另换新片观察，必须从（3）步开始操作。

微生物工程名词解释

微生物工程”：是指利用微生物的特定性状，通过现代工程技术，在生物的反应器中生产有用物质的一种技术系统。 微生物工程特点 ①一般操作条件比较温和； ②原料来源丰富，价格低廉，一般都是可再生资源。 ③过程反应以生命体的自动调节方式进行； ④能够容易地生产复杂的高分子化合物，可以导入复杂基团；能合成复杂的化合物如酶、光学活性体等； ⑤生产产品的生物体本身也是产物，一般污染较小； ⑥生产设备较简单。 ⑦生产过程中，需要防止杂菌污染； ⑧菌种性能被改变，从而获得新的反应性能或提高生产率； 工业育种：是运用遗传学原理和技术对某个用于特定生物技术目的的菌株进行的多方位的改通过改造。 诱变育种：就是利用诱变剂的物理因素和化学试剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再通过适当的筛选方法获得所需要的高产优质菌种的育种方法。 表型延迟：分离性延迟、生理性延迟 是指微生物通过自发突变或人工诱变而产生新的基因型个体所表现出来的遗传特性不能在当代出现，其表型的出现必须经过2代以上的复制。 杂交育种：是指将两个基因型不同的菌株经吻合（或接合）使遗传物

质重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株的一种育种方法。 原生质体融合： 首先用酶分别酶解两个出发菌株的细胞壁，或者使用抗生素抑制胞壁的合成，在高渗环境中释放出原生质，将它们混合，在助融剂或电场作用下，使它们互相凝集，发生细胞融合，实现遗传重组的方法。营养缺陷型是指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质如氨基酸、维生素和碱基等的能力，必须在其基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的变异株。 基因重组育种： 是运用体外DNA各种操作或修改手法获得目的基因，再借助于病毒、细菌质粒或其他载体，将目的基因转移至新的宿主细胞并使其在新的宿主细胞系统内进行复制和表达，或者通过细胞间的相互作用，使一个细胞的优秀性状经其间遗传物质的交换而转移给另—个细胞的方法。 渗透突变株：一种遗传障碍不完全的营养突变型，其特点是酶的活力下降但不完全丧失，使 其能少量合成末一代谢产物，但产物的量又不造成反馈控制。 菌种衰退（degeneration）是指菌种经过长期人工培养或保藏，由于自发突变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 狭义的复壮：在菌种发生退化后，通过纯种分离和性能测定，从退化的群体中，找出尚未退化的个体，以达到恢复该菌种原有性状的一种措施。