CTAB法提DNA

一、CTAB法提取DNA主要试剂及配方：

CTAB缓冲液（2%）：

试剂用量(g/L)

CTAB 20

NaCl 81.816

Tris-base 7．444

EDTA-Na212.114

β巯基乙醇2~3mL

pH 8.0

称量好后65℃水浴，搅拌，直至完全溶解，然后定容，调pH

24:1溶液：

24:1为体积比，如果是一瓶新的三氯甲烷（500mL），可直接加入21mL异戊醇即可。70%乙醇：

二、CTAB法提取DNA的简要步骤

步骤备注

1将新鲜叶片叶脉去掉，剪碎置于研钵中，加入液氮快速研磨成粉末状，转入2mL离心管，加入65℃预热的CTAB提取液900 uL充分混匀，65℃保温40 -60min，在此期间轻轻颠倒离心管几次。加入CTAB后，需及时充分混匀，然后水浴。开始混匀可以使劲，后面的混匀要轻，保证DNA的完整性。此步骤是裂解细胞，释放细胞

产物

2水浴完后，冷却至室温，加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)混合液轻轻摇动10 min。12000 r/min离心10 min；第一次抽提24:1尽量加满2mL的离心管，摇和离心的时候尽量轻拿轻放。此步骤是用氯仿抽提有机相，异戊醇的作用是去除气泡。

3取上清液，再用等体积的氯仿/异戊醇抽提一次，12000 r/min离心10 min；离心后，DNA溶于上层水相，变性蛋白溶于下层氯仿，第二次24:1抽

提加1mL即可。

4小心吸出上清液于另一2mL离心管中，加入0.6倍上清液体积的异丙醇，缓慢混匀，于-20℃冰箱中沉淀DNA；

第二次吸上清尽量不要吸到中间层，按需要浓度大小，可选择性吸取。异丙醇用前需预冷。

5挑出成团的DNA，用70％乙醇洗2～3次；挑出的DNA还是含有一定的杂质，因此，第一次70%乙醇洗时间建议

长些，一般不低于10分钟，期间上

下摇晃几次，但不可太长，否则DNA

要断裂6无水乙醇洗1次；

7倒干残余乙醇，自然干燥也可以进行真空干燥

8加无菌水溶解DNA

9 RNA去除，按100微升DNA溶液加1微升RNA

RNA酶可以加到水中，溶解DNA 酶

10溶解后放置几小时后（尽量过夜）便可电泳检测，

浓度测定

三、提取过程中可能出现的一些情况（主要是提玉米DNA）

四、10×TBE配方

Tris-base 108g/L

硼酸55 g/L

EDTA-Na27.444 g/L

pH 8.0