大孔树脂分离纯化甘草总黄酮工艺研究

[摘要]:目的:研究大孔树脂分离纯化甘草总黄酮的最佳树脂和最有工艺,为甘草总黄酮的工业化生产提供实验依据。方法：分别对DS-401、D-101、AB-8、HPD-100四种大孔树脂进行静态吸附、静态解吸实验筛选用于甘草总黄酮分离的最佳树脂，采用紫外分光光度法测定总黄酮质量浓度，以总黄酮吸附率、洗脱率、收率、纯度等指标评价AB-8大孔树脂分离纯化甘草总黄酮工艺种上样量、上样液质量浓度、吸附流速、洗脱剂乙醇体积分数极其用量对吸附和解吸效果的影响，从而确定最佳工艺。结果：AB-8型大孔树脂为分离甘草黄酮类组分最佳树脂，其分离的最佳工艺为：总黄酮浓度为 9.20 mg?mL-1的样液，吸附流速为2ml?min-1 ,洗脱剂50%乙醇用量为4倍树脂体积，利用该工艺精制后的干草总黄酮纯度和收率分别为74.45%、35.31%。结论：获得的样品总黄酮纯度达 70 %以上，但收率较低，综合各方方面因素，该工艺简单可。

[关键字] 甘草；总黄酮；分离纯化；大孔树脂

Abstract

Abstract: Objective: To study the optimum macroporous resin separation and purification of total flavonoids from licorice resin and the process, to provide the experimental basis for the industrial production of flavonoids. Methods: DS-401, D-101, AB-8, HPD-100 four kinds of macroporous resin by static adsorption, static desorption experiment screening for licorice flavonoids isolated optimal resin, total flavonoids was determined by UV spectrophotometry, mass concentration, with total flavonoids adsorption, elution rate, yield, purity and evaluation AB-8 macroporous resin separation and purification of total flavonoids of Glycyrrhiza process for the sample volume, sample solution concentration, the velocity of adsorption, elution volume fraction of ethanol extremely dosage on the adsorption and desorption effect, so as to determine the optimum process. Result: the AB-8 macroporous resin for separation of

1

licorice flavonoid components the best resin, the optimum process for the separation of the total flavonoid concentration of sample solution: 9.20 mg ? mL-1, a dsorption velocity is 2ml ? min-1, 50% ethanol elution agent amount was 4 times of resin volume, the purification process of total flavonoids purity of hay and the yield were 74.45%, 35.31%. Conclusion: the total flavone of sample purity was more than 70%, but the yield is low, the parties to the comprehensive factors, the process is simple and can be.

keyword licorice; flavonoids; separation and purification; macroporous resin引言甘草（Radix Glycyrrhiza）为豆科植物的干燥根及根茎[1]。甘草含有多种化学成分，主要成分有甘草酸、甘草黄酮类等。甘草黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗心律失常、抗溃疡、保肝、解痉、抗菌、抗炎和抗变态反应、抗氧化、酶抑制、调血脂、镇痛、镇咳祛痰等多种生物活性[17-22]，被广泛应用于医药、保健及美容等行业。

传统的总黄酮分离纯化方法有萃取法、柱层析法、铅盐沉淀法等。随着社会的发展，大孔树脂吸附法成为近年来的较新分离纯化方法，与传统方法相比，采用大孔树脂分离提纯甘草总黄酮具有吸附性好、效率高、再生简便、成本低、洗脱剂毒性小使用周期长等优点，被广泛用于天然产物的富集和分离[2-4]。

王芸芸[14]等以膜通量为指标讨论了不同温度、压力、时间、浓度下膜通量的变化，确定了在0.6Mp，25-30o C，提取液浓度在原液基础稀释3倍后，操作30min有较大膜通量。本试验拟研究大孔树脂分离纯化甘草总黄酮的动态吸附-解吸条件，并进行工艺验证试验，综合确定较优工艺参数，为生产高纯度甘草总黄酮工业化生产提供试验参考。

1.材料与方法

1.1材料与仪器

材料：市售甘草、芦丁标准品、各型大孔树脂（DS-401、D-101、AB-8、HPD-100）、显色剂（5%亚硝酸钠、10%偏铝酸钠、4%氢氧化钠）以及其他化学试剂。

仪器：T6新悦可见光分光光度计（北京普析）；SHB-3循环水多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；SB-1100水浴锅，（上海爱明仪器）；RE－52CS 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；FA1604型电子天平(上海箐海仪器有限公司)；FZ102型粉碎机（上海洪纪仪器设备有限公司）。

1.2实验方法

1.2.1标准曲线的绘制[13]。

精密称取芦丁样品5.00mg，置50ml容量瓶中，加适量30%乙醇置水浴锅上加热溶解，冷却后用30%乙醇定容至刻度，摇匀。

准确量取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0ml上述溶液分别置于10ml容量瓶中，各加蒸馏水补充至5.0ml，然后加5%亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀，放置6min；加10%硝酸铝溶液

0.3ml摇匀，放置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.0ml，用蒸馏水定容至10ml摇匀，放置15min，以同法作空白对照；置比色皿中在波长510nm处测定吸光度。再以吸光度值A为纵坐标，芦丁含量C（mg·ml-1）为横坐标，绘制标准曲线见附表1所得回归曲线方程为Y=0.008X+0.0001,r2=0.9999。

1.2.2供试液的制备及树脂预处理。

（1）供试液的制备。将甘草粉碎，过40目筛。称取适量粉碎样，置于150ml烧瓶中，加80%的乙醇，以固液比1:20（W/V, g:ml）温度80℃，时间每次2h，次数2次进行回流提取，提取液合并、过滤即得供试液。

（2）树脂的预处理。参见潘见[6]等、李玉霞[16]的方法并根据实际情况有所改进。先用体积分数91%乙醇浸泡，使树脂充分溶胀，再用体积分数为91%乙醇，洗至流出液加适量蒸馏水无白色浑浊，用蒸馏水洗尽乙醇，加入4倍体积8%（2mol·L-1）的NaOH 溶液浸泡12h，并以水洗至中性，再加入4倍体积15%(4mol·L-1)的HCl溶液浸泡12h，并以水洗至中性，备用。

1.2.3 树脂的筛选[10-12]

（1）静态吸附率的测定。用量筒量取预处理好的DS-401型、D-101型、AB-8型、

3

HPD-100型树脂各10ml并称其干重，精密移取40ml精测质量浓度为11.20 mg?mL-1的供试液，静置24h使其饱和吸附，吸取上层清液测定总黄酮浓度，按以下公式计算树脂饱和吸附量和吸附率。

吸附量（mg/g）=(C

原液-C

残余

)×V

上样

/树脂干重，吸附率=(C

原液

-C

残余

)×V

上样

/C

原液

×V

原液

（2）静态解吸率的测定。将静态饱和吸附总黄酮后的树脂滤出，洗去表面黄酮液，吸干表面水分，精密加入90%乙醇40ml，静置24h，吸取上清液测定洗脱液总黄酮浓度，按以下公式计算洗脱率。洗脱率=（洗脱液浓度×洗脱液体积）/饱和吸附量×100%[7]

（3）比较四种大孔树脂对甘草总黄酮的吸附率和解吸率，选择最佳大孔树脂。

1.2.4 AB-8型大孔树脂动态吸附-解吸影响因素的考察

（1）上样液质量浓度的考察。以AB-8型大孔树脂为甘草总黄酮纯化载体，采用湿法装柱。层析柱规格（2cm×25cm），装柱15cm。取总黄酮浓度为11.20 mg?mL-1、9.20 mg?mL-1、7.20 mg?mL-1、5.20 mg?mL-1、3.20 mg?mL-1的样液各40ml以2 ml?min-1流速，分别加入5根同样的树脂柱中，收集残液，10ml一份，测定总黄酮质量浓度计算吸附率，根据吸附率确定最佳上样浓度。

（2）上样液用量的考察。将甘草提取液（总黄酮质量浓度为9.20 mg?mL-1）以2 ml?min-1流速通过15 mlAB-8型大孔树脂柱进行动态吸附，收集每一大孔树脂流出液（10 ml/份），测定总黄酮质量浓度，以流出体积为横坐标，流出液质量浓度为纵坐标，绘制泄漏曲线，根据泄漏点（即流出液质量浓度是上样液质量浓度的10% 时上样液用量）[14]确定上样液用量。

（3）吸附流速。各取220ml甘草总黄酮（9.20 mg?mL-1）溶液分别以1 ml?min-1、2 ml?min-1、3 ml?min-1流速通过15ml AB-8型大孔树脂柱中，收集每一流出液，测定总黄酮质量浓度，根据泄漏点及泄漏率大小确定最佳吸附流速。

（4）洗脱剂乙醇体积分数。用15ml AB-8大孔树脂柱分别饱和吸附甘草总黄酮溶液，再分别以10%、30%、50%、70%、90%的乙醇洗脱，测定洗脱剂总黄酮质量浓

度，根据洗脱率大小确定乙醇最佳体积分数。

（5）洗脱剂乙醇用量。用15ml AB-8大孔树脂饱和吸附甘草总黄酮溶液，再用体积分数为50% 的乙醇150ml洗脱，每15ml收集一次，分别测定各份总黄酮质量浓度，计算总黄酮洗脱率，根据累计洗脱率确定乙醇用量。

1.2.5 AB-8大孔树脂精制甘草总黄酮的工艺验证

在上述实验确定的最佳吸附、解吸条件下，进行AB-8大孔树脂精制甘草总黄酮试验。收集体积分数为50% 乙醇洗脱液，测定总黄酮质量浓度，然后减压浓缩至膏状，取出并在105 0C烘干箱中烘干，称其干膏质量。重复3次，计算平均值、收率和纯度。1.3检查指标及方法[7]

1.3.1总黄酮质量浓度。

参照文献[9]的方法，以芦丁为标准品，配制芦丁标准溶液，梯度稀释利用紫外分光光度法分别测其对应吸光度，以吸光度值（A）为横坐标，甘草总黄酮质量浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方成程Y=0.008X+0.0001,r2=0.9999。

1.3.2总黄酮收率总黄酮收率采用以下公式计算：

总黄酮收率%=（C×V）/（C1×V1）×100%（C和V分别为洗脱液中总黄酮的质量浓度和洗脱液体积，C1和V1分别为吸附前溶液总黄酮的质量浓度和溶液体积）。

1.3.3总黄酮纯度总黄酮纯度采用以下公式计算：

总黄酮纯度%=（C×V）/W×100%

（C和V分别为洗脱液中总黄酮质量浓度和洗脱液体积，W为干膏质量）。

1.3.4 总黄酮洗脱率总黄酮洗脱率采用以下公式计算：

总黄酮洗脱率%=（C×V）/（C2×V2）×100%

（C和V分别为洗脱液中总黄酮质量浓度和洗脱液体积，C2和V2分别为吸附溶液的总黄酮质量浓度和溶液体积）。

2 结果与分析

2.1标准曲线绘制

5

2.2树脂的筛选

表2 四种大孔吸附树脂对甘草总黄酮的吸附率及解吸率

Table2 The four kind of macroporous resin adsorption and desorption rate of total flavonoids

from licorice

树脂类型吸附量/mg.g-1 吸附率/% 解吸率/%

The type of resin Adsorption quantity Adsorption rate Desorption rate

DS-401 20.05 33.28 61.00

D-101 25.73 31.40 77.17

AB-8 26.37 45.90 59.53

HPD-100 23.08 32.59 58.12

2.3 影响AB-8大孔树脂吸附-解吸甘草总黄酮的因素分析

研究表明，不同有效成分（生物碱、黄酮、酚性成分、无机盐）在同一型号大孔树脂上吸附-解吸能力有差异[8]。故选择最佳的甘草上样液用量、上样质量浓度、流速、洗脱剂及用量，可提高大孔树脂吸附-解吸能力，促进甘草总黄酮的富集和分离。

2.3.1 上样液质量浓度对吸附效果的影响上样液质量浓度是影响大孔树脂吸附效果的重要因素之一，由图1可见，AB-8大孔树脂对甘草总黄酮的吸附率虽上样质量浓度增大呈先上升后下降趋势。当上样质量浓度为9.20 mg?mL-1时，大孔树脂对总黄酮的吸附率达到最大值（92.60%）；当上样质量浓度为3.20 mg?mL-1 、5.20 mg?mL-1、7.20 mg?mL-1的吸附率分别为85.45%、86.30%、89.90%当上样质量浓度提高到11.2 mg?mL-1时，吸附率明显下降为82.55%，因此应选择质量浓度为9.20 mg?mL-1甘草总黄酮进行后续试验。

2.3.2上样液用量对吸附效果的影响

AB-8大孔树脂吸附甘草总黄酮的泄漏曲线见图2。由图2可见，AB-8大孔树脂泄漏时间较长，低泄漏时间短。当甘草总黄酮流出液体积达到40ml，即上样液用量为2.7倍树脂体积时，树脂对应的流出液质量浓度达到原液质量浓度的10%左右，此时甘草总黄酮已经透过；当上样液用量达到220ml时，树脂基本吸附饱和，故上样用量定为40ml。

7

2.3.3吸附流速对吸附效果的影响

吸附流速对吸附效果的影响表现为其对溶质在树脂表面扩散的影响[7]。若流速过快，溶质分子来不及扩散到树脂表面就发生泄漏。由图3可见，吸附流速为3 ml?min-1较2 ml?min-1更早出现泄漏现象。同时流经相同树脂体积时。总黄酮质量浓度随流速增大而增大，由表1可见泄漏率随流速增大而增大，考虑1 ml?min-1流速是达到泄漏点较慢，综合时间及各方面因素，选择吸附流速为2 ml?min-1。

表5 上样液的流速对吸附率的影响

Table the effect of solution flow rate on the adsorption rate

流速（ml/min）残液质量浓度（mg.ml-1）吸附率%

Current velocity Concentration Adsorption rate

1 5.08 44.73

2 5.0

3 45.32

3 5.92 35.65

2.3.4乙醇体积分数对解吸效果的影响

为了保护甘草总黄酮的活性成分、减小毒素，本试验采用毒性较小、价格适中的乙醇为洗脱剂，由表2可见，对于AB-8大孔树脂，不同体积分数的乙醇对甘草总黄酮的洗

脱能力不同，随着乙醇体积分数增大总黄酮洗脱率逐渐增大且增大趋势先快后缓，其中10%、30%乙醇洗脱率明显低于50%以上乙醇洗脱率，50%、70%、90%乙醇洗脱率分别为80.00%、82.32%、84.45%，三者差异较小且洗脱率均超过80%，而乙醇浓度过高挥发性增强，综合考虑试验经济性等因素，选用50%乙醇为甘草总黄酮洗脱液。

2.3.5 洗脱剂乙醇用量对解吸效果的影响采用50%乙醇为甘草总黄酮洗脱液，由表3可见，随着乙醇用量的增多总黄酮洗脱率先逐渐增上升后急剧下降。当乙醇用量达到60ml即4倍树脂体积时，洗脱率骤减且累计洗脱率达到71.74%，说明被吸附的甘草总黄酮基本被洗脱。5-10倍体积累计值为8.31%，累计值相对较小，即大于4倍体积的乙醇洗脱总黄酮较少，故采用4倍树脂体积50%乙醇洗脱。

2.4 AB-8大孔树脂精制甘草总黄酮的工艺验证

9

利用最佳条件进行工艺验证试验，结果见表4。可知，纯化后的甘草总黄酮纯度、收率分别为74.75%和35.31%，纯度较高收率较低仍需进一步提高。

表8 AB-8大孔吸附树脂分离甘草总黄酮的纯度及收率

Table8 The purity and yield of Glycyrrhiza AB-8 macroporous adsorption resin

编号干膏质量/mg 纯度/% 收率/%

Number Dry paste quality Purity Yield

1 958.5 74.60 35.33

2 987.

3 72.42 34.88

3 925.8 77.23 35.72

平均 - 74.75 35.31

3 结论与讨论

3.1试验表明：AB-8大孔树脂对甘草总黄酮有较大吸附（26.37mg·g-1）明显高于DS-401、D-101、HPD-100型大孔树脂，吸附率、解吸率分别为45.90%和59.53%，吸附率最大，解吸率适中，综合各方面考虑选用AB-8大孔树脂进行后续试验。

3.2 本试验分别对影响AB-8大孔树脂吸附-解吸因素进行了考察，研究表明：同等条件下，升高上样液总黄酮浓度有利于吸附率的提高，且上样液总黄酮质量浓度为3.20 mg?mL-1 、5.20 mg?mL-1、7.20 mg?mL-1、11.20 mg·ml-1的吸附率分别为85.45%、86.30%、89.90%、82.55%，均明显小于质量浓度为9.20 mg·ml-1的吸附率，且11.20 mg·ml-1的吸附率最小，说明大孔树脂吸附率随上样液质量浓度升高呈先增后减趋势；吸附流速对大孔树脂吸附效果影响体现在其对溶质分子扩散的影响，流速过快溶质还未扩散吸收就发生泄漏降低吸附率，流速过慢溶质虽能充分扩散但却消耗时间，研究表明，流速分别为1 ml?min-1、2 ml?min-1、3 ml?min-1时吸附率分别为4

4.73%、

45.72%、35.65%，且随着流速变大，泄漏点过早出现，吸附率明显下降；洗脱剂乙醇体积分数增大，洗脱率递增且呈现先快后慢趋势，用10%、30%、50%、70%、90%乙醇洗脱其洗脱率分别为60.35%、75.47%、80.00%、82.32%、84.45%，当体积分数达到50%时洗脱率达80%再增加乙醇体积分数洗脱率增加不明显且乙醇挥发性增强，考虑试验经济性等原因选用50%乙醇即可。

3.3 研究表明：王芸芸等[5]采用红外图谱分析和熔点测定证明了大孔树脂分离甘草总黄酮使总黄酮纯度提高了39.97%，其收率尚未有报道，本试验所得甘草总黄酮纯度及收率分别为7

4.75%和3

5.31%，纯度较高，收率偏低，实验技能及试验设计流程仍需改进。

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甘草酸的提取、分离和纯化

甘草酸的提取、分离及纯化实验 甘草酸的性质及用途 甘草为豆科植物的根，主要产于我国内蒙古、山西、甘肃、宁夏、新疆等地。甘草味甘，故又名甜草、蜜草。其主要化学成分有四类：三萜类、黄酮类、生物碱类及多糖类。其中三萜类成分有甘草酸、羟基甘草次酸等。 甘草酸又称甘草皂苷、甘草甜素。白色结晶，可用冰醋酸结晶，有很强的甜味。分子式为C42H62O16，分子量为822.90。纯品为白色、无臭的结晶性粉末，熔点212～217℃，易溶于热水及热的稀乙醇，几乎不溶于无水乙醇或乙醚。甘草酸在植物中常以钙、钾、铵盐等形式存在。从甘草根为原料制得的甘草浸膏中提取的铵盐，其甜度为蔗糖的50～100倍，精制甘草酸钠、钾盐的甜度为蔗糖的200～300倍，是一种天然的甜味剂。 甘草素入口后不能立刻感觉到甜味，而是逐渐才有感觉，并且一直延续很长时间还留有余味，因此甘草素与砂糖、葡萄糖等糖类复配，可以得到口感良好的甜味。因为它是非糖类、高甜度的甜味剂，因此没有褐变、吸湿及发酵等缺点。甘草素在医药上还可用作消化道溃疡治疗剂、解毒剂、消炎剂以及降血脂、抗动脉粥样硬化、降胆固醇等。目前，甘草素已广泛用于食品、医药、化妆品、饮料、卷烟等行业。 我国甘草资源丰富，带皮甘草中含甘草酸7%～10%，去皮甘草中约5.5%～9.0%。甘草经溶剂浸取，可以制得甘草浸膏，再进一步加工可以制得甘草酸。 1 实验目的 1.掌握甘草酸的提取原理和方法。 2.掌握甘草酸的分离纯化方法。 2 实验原理 甘草酸在原料中以钾盐或钙盐形式存在，其盐易溶于水，因此可用极性溶剂提取。 提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离甘草酸。 3实验材料、仪器和试剂 实验材料：甘草 实验仪器：电子分析天平（精确至0.001g）、移液管、紫外分光光度计、超声波清洗器、抽滤装置、水浴锅、旋转蒸发仪、容量瓶（10mL、25mL、100mL） 试剂：70 ％的乙醇溶液、蒸馏水、硫酸（3.5mol/L）、浓氨水、25 ％氨水、冰醋酸、80%甲醇 质量分数为70 ％的乙醇溶液（100 mL）：用量筒量取75 mL 无水乙醇，25 mL 二次重蒸馏水于烧杯中，混匀；质量分数为10 ％的乙醇溶液（100 mL）：用量筒量取12．5 mL 无水乙醇，87．5 mL 二次重蒸馏水于烧杯中，混匀；质量分数为0．5 ％的氨水溶液（100 mL）：

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大孔吸附树脂技术 2007年06月06日星期三 02:50 P、M、 大孔吸附树脂技术 以大孔吸附树脂为吸附剂,利用其对不同成分得选择性吸附与筛选作用,通过选用适宜得吸附与解吸条件借以分离、提纯某一或某一类有机化合物得技术。 该技术多用于工业废水得处理、维生素与抗生素得提纯、化学制品得脱色、医院临床化验与中草药化学成分得研究。它具有吸附快,解吸率高、吸附容量大、洗脱率高、树脂再生简便等优点。 大孔吸附树脂 它就是一种具有大孔结构得有机高分子共聚体,就是一类人工合成得有机高聚物吸附剂。因其具多孔性结构而具筛选性,又通过表面吸附、表面电性或形成氢键而具吸附性。一般为球形颗粒状,粒度多为20-60目。大孔树脂有非极性(HPD-100,HPD-300,D-101,X-5,H103)、弱极性(AB-8,DA-201,HPD-400)、极性(NKA-9,S-8,HPD-500)之分。大孔吸附树脂理化性质稳定,一般不溶于酸碱及有机溶媒,在水与有机溶剂中可以吸收溶剂而膨胀。 大孔吸附树脂技术得基本装置 恒流泵 吸附原理 根据类似物吸附类似物得原则,一般非极性树脂宜于从极性溶剂中吸附非极性有机物质,相反强极性树脂宜于从非极性溶剂中吸附极性溶质,而中等极性吸附树脂,不但能从非水介质中吸附极性物质,也能从极性溶液中吸附非极性物质。 操作步骤 1)树脂得预处理 预处理得目得:为了保证制剂最后用药安全。树脂中含有残留得未聚合单体,致孔剂,分散剂与防腐剂对人体有害。 预处理得方法:乙醇浸泡24h→用乙醇洗至流出液与水1:5不浑浊→用水洗至无醇味→5%HCl通过树脂柱,浸泡2-4h→水洗至中性→2%NaOH通过树脂柱,浸泡2-4h→水洗至中性,备用。 2)上样 将样品溶于少量水中,以一定得流速加到柱得上端进行吸附。上样液以澄清为好,上样前要配合一定得处理工作,如上样液得预先沉淀、滤过处理,pH调节,

大孔树脂吸附分离实验

实验二大孔树脂吸附分离实验 一、实验目的 1、了解大孔树脂的使用方法； 2、掌握利用大孔树脂的静态和动态吸附分离操作； 3、掌握大孔树脂的洗脱方法； 4、学习吸附等温曲线、吸附动力学曲线和洗脱曲线的测定方法。 二、实验原理 大孔树脂是一种具有大孔结构的有机高分子共聚体，是一类人工合成的有机高聚物吸附剂。因其具多孔性结构而具筛选性，又通过表面吸附、表面电性或形成氢键而具吸附性。一般为球形颗粒状，粒度多为20-60目。大孔树脂有非极性（HPD-100,HPD-300,D-101,X-5,H103）、弱极性（AB-8，DA-201,HPD-400）、极性（NKA-9,S-8,HPD-500）之分。大孔吸附树脂理化性质稳定，一般不溶于酸碱及有机溶媒，在水和有机溶剂中可以吸收溶剂而膨胀。 大孔树脂吸附技术以大孔吸附树脂为吸附剂，利用其对不同成分的选择性吸附和筛选作用，通过选用适宜的吸附和解吸条件借以分离、提纯某一或某一类有机化合物的技术。吸附分离依据相似相容的原则，一般非极性树脂宜于从极性溶剂中吸附非极性有机物质，相反强极性树脂宜于从非极性溶剂中吸附极性溶质，而中等极性吸附树脂，不但能从非水介质中吸附极性物质，也能从极性溶液中吸附非极性物质。 大孔吸附树脂吸附技术广泛应用于制药及天然植物中活性成分如皂甙、黄酮、内脂、生物碱等大分子化合物的提取分离以及维生素和抗生素的提纯、化学制品的脱色、医院临床化验和中草药化学成分的研究等。它具有吸附快，解吸率高、吸附容量大、洗脱率高、树脂再生简便等优点。 大孔树脂吸附分离操作步骤： （1）树脂的预处理

目的是为了保证制剂最后用药安全。树脂中含有残留的未聚合单体，致孔剂，分散剂和防腐剂对人体有害。预处理的方法：乙醇浸泡24h→用乙醇洗至流出液与水1：5不浑浊→用水洗至无醇味→5%HCl通过树脂柱，浸泡2-4h→水洗至中性→2%NaOH通过树脂柱，浸泡2-4h→水洗至中性，备用。 （2）上样 将样品溶于少量水中，以一定的流速加到柱的上端进行吸附。上样液以澄清为好，上样前要配合一定的处理工作，如上样液的预先沉淀、滤过处理，pH调节，使部分杂质在处理过程中除去，以免堵塞树脂床或在洗脱中混入成品。上样方法主要有湿法和干法两种。 （3）洗脱 先用水清洗以除去树脂表面或内部还残留的许多非极性或水溶性大的强极性杂质（多糖或无机盐），然后用所选洗脱剂在一定的温度下以一定的流速进行洗脱。 （4）再生 再生的目的：除去洗脱后残留的强吸附性杂质，以免影响下一次使用过程中对于分离成分的吸附。 再生的方法：95%乙醇洗脱至无色，再用2%盐酸浸泡，用水洗至中性，再用2%NaOH浸泡，再用水洗至中性。 注意：再生后树脂可反复进行使用，若停止不用时间过长，可用大于10%的NaCl溶液浸泡，以免细菌在树脂中繁殖。一般纯化某一品种的树脂，当其吸附量下降30%以上不宜再使用。 三、试剂及仪器 仪器：紫外可见分光光度计，电子天平，恒温水浴振荡器，玻璃层析柱，恒流泵 试剂：AB-8大孔树脂，大豆异黄酮，无水乙醇，盐酸，氢氧化钠 四、实验内容

中草药叶下花总黄酮提取方法

中草药叶下花总黄酮提取方法 作者：杨发忠，杨斌，杨德强，陈厚琴，代红娟，张丽，李东海 【摘要】目的对叶下花总黄酮的种类与提取方法进行初步研究。方法采用定性检测、光谱分析、单因素测定、正交实验等，研究黄酮种类，考察乙醇体积分数、温度、固液比、时间对提取率的影响。结果叶下花含黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等多种黄酮类化合物；所考察的影响因素中，对总黄酮提取率影响程度大小顺序为乙醇体积分数＞温度＞时间＞固液比。结论最佳提取条件为A1B2C3D3 (乙醇体积分数30%、温度65℃，提取时间180 min，固液比1∶80)，在此提取条件下，提取量高达5.233%。 【关键词】叶下花总黄酮提取方法正交实验 Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction conditions for the total flavonoids from Ainsliaea pertyoides Franch and to study the categories of the total flavonoids. MethodsThe methods of the chemical qualitative detection, the spectral analysis, single factor determination, orthogonal test were adopted to study the categories of the total flavonoids, and the effect of four factors, i.e. the volume fraction of ethanol, the temperature, the ratio of solid to liquid, the

黄酮提取工艺

黄酮提取工艺 2-1 微波辅助提取金银花总黄酮工艺流程图 3.实验方法 3.1 标准曲线的制备 3.1.1最大吸收波长的选择方法 以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显色剂，分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，在510nm处均有1个强吸收峰，因此选择510nm为测定波长。 3.1.2对照品溶液的制备方法 精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。 3.1.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0，1，2，3，4，5mL，分别置10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝0.3mL，振荡摇匀，放置6min；最后加入4%氢氧化钠试液4mL，加甲醇定容至刻度，摇匀，放置15min。采用分光光度法，在510nm处测定吸光度，以对照品量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3.2 微波提取单因素实验方法 分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,乙醇浓度,固液比对提取效果的影响 3.3 提取工艺正交试验设计方法 系统考察微波提取法的工艺参数，根据已有的资料及实际情况，选用微波辐射功率（A），辐射时间（B），乙醇浓度（C），固液比（D）作为考察因素，以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标，选用L9（34）正交表设计，得到供试液。 3.4微波辅助提取法与乙醇回流法比较 比较两种提取方法的处理时间和液固比对总黄酮提取量的影响。传统乙醇回流法提取总黄酮的所需时间比微波辅助提取法提取长得多，且金银花总黄酮提取量比较低;而微波辅助提取的总黄酮较乙醇回流法高。比较此两种方法在最佳条件下的总黄酮含量。 3.5总黄酮含量测定方法 取0.5mL液，加入5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀，放置6min加入10%硝酸铝0.3mL荡摇匀，放置6min入4%氢氧化钠试液4mL，30%（V/V）乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。 4. 结果 4.1 标准曲线绘制 表4-1 标准曲线表 编号 0 1 2 3 4 5 芦丁浓度 0 0.02 0.03 0.05 0.07 0.09 （mg/mL） 吸光度 0 0.206 0.381 0.548 0.738 0.911 （OD）

甘草酸的纯化工艺研究分析

河北工大学 毕业论文 作者：贾晋阳学号： 学院：化工学院 系(专业)：制药工程 题目：甘草酸的纯化工艺研究 指导者： (姓名) (专业技术职务) 评阅者： (姓名) (专业技术职务) 2012年6月9日

甘草酸的纯化工艺研究 摘要：从6种树脂中通过静态吸附筛选出了ADS-17树脂作为提取纯化甘草酸的最佳树脂。研究了pH值、上样液流速、上样液浓度、洗脱液浓度、洗脱液用量这五个因素对甘草酸吸附、解吸作用的影响，并通过正交试验考察了最佳工艺条件。实验结果证明最佳吸附条件为：pH值为6.0、上样液流速为2BV/h、上样浓度为10mg/ml；最佳解吸条件为：洗脱剂10%乙醇、洗脱液用量234ml。在实验得出的最佳条件下，甘草酸的纯度为65.07%，回收率为61.39%。另外，我们还在氢氧化钠回流的条件下进行了甘草酸构型的转换，结果表明转构后的甘草酸纯度为87.66%，产率44.1%。 关键词：大孔树脂吸附纯化甘草酸

Title The research of the Purification Technology of Glycyrrhizic Acid Abstract By static adsorption, ADS-17 resin is filtered as the optimal resin to extract purified glycyrrhizic acid from the six kinds of resins. The study of pH, supernatant flow rate, supernatant concentration, eluent concentration and eluent amount shows these five factors effects on the adsorption and desorption of glycyrrhizic acid, and optimum conditions were investigated by orthogonal experiment. Experimental results showed that the optimum adsorption conditions as follows: pH 6.0, supernatant flow rate for 2BV/h, the concentration of the supernatant for 10mg/ml; best desorption conditions were as follows: 10% ethanol, eluent amount for 234ml. Under optimal conditions droved by experiment, the purity of glycyrrhizic acid was 65.07%, recovery rate was 65.3%. In addition, we completed the structural conversion of glycyrrhizic acid under a condition of sodium hydroxide's reflux; results showed that the purity of glycyrrhizic acid reached 87.66%; recovery rate reached 44.1% after the conversion. Keywords：Macroporous resins Adsorption Purification Glycyrrhizic Acid

总黄酮的提取方法

总黄酮的提取方法 1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单 3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。 4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。 5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是%，% 和%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。

甘草酸提取及抑菌活性研究

甘草酸提取及抑菌活性研究 以新疆乌拉尔甘草饮片为原料，研究了在超声波条件下影响甘草酸提取率的几个因素，结果表明：以浓度为60%的乙醇为提取剂，料液比1：15，超声作用时间40min，浸泡4h为最佳。此外，分别以甘草酸对真菌（包括棉花枯萎病菌、小麦纹枯病菌、辣椒根腐病菌、辣椒疫病病菌）进行抑菌活性研究，结果表明浓度为1000mg/L的甘草酸对小麦纹枯病菌抑制率为68.15%，抑菌作用明显，对棉花枯萎病菌、辣椒根腐病菌、辣椒疫病病菌抑制作用相对较弱。 标签：甘草；甘草酸；提取工艺；抑菌研究 甘草酸（glycyrrhizic acid，GA）是豆科（legumrrihiza）甘草属（glycyrrhiza）植物的根或根茎中提取的一种天然甜味剂。研究表明甘草酸具有广阔的应用领域，且应用价值极高，但提取效率、成本、纯度又是影响效能的关键问题之一。超声辅助提取在天然植物有效成分的提取中取得良好的效果，且在甘草酸类或同类物质的提取中收效明显，表现出省时、选择性好、收率高、操作方便等一系列满足技术和市场方面的优点。为此，我们提出利用超声波的各种优良特性，在不影响甘草酸的物化、生物活性的基础上，不同条件下促进甘草酸的提取率。 从保护生态环境的角度来看，甘草酸对人体无害而有益，本研究以甘草酸乙醇提取液对真菌进行抑菌活性研究，以甘草酸做为新型杀菌剂防除农田有害病源微生物，将可能成为绿色农药发展的一个新方向。 1材料与方法 1.1材料及设备 材料：甘草饮片购于益和大药房；试剂：glycyrrhizicacid（SIGMA），其他试剂均为分析纯；供试菌种为吉林农业大学实验室提供。 主要设备：KQ5200E超声波清洗器昆山超声仪器有限公司；RE-52A旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂；UV-2000紫外-可见分光光度计尤尼柯有限公司；DHP-9162电热温恒培养箱上海齐欣科学仪器有限公司。 1.2方法 1.2.1提取工艺设计 准确称取甘草粉末5g，加入10mL 70%的乙醇溶液，浸泡后超声波辅助提取2次，抽滤，合并滤液。吸取0.2mL提取液用70%的乙醇定容至25mL，取定容后溶液4mL二次定容至25mL，测定溶液吸光度。采用反复结晶法，将甘草酸超声波粗提液加酸沉淀，再经乙醇溶提，氨化成盐析出，反复结晶得到甘草酸纯品。

黄酮类化合物的提取纯化方法

黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1．1 传统提取方法 1．1．1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。此外，水提取物容易发霉发酵[22]。1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1．1．3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同，可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇为提取溶剂[15]。

举例说明黄酮的提取分离方法

举例说明黄酮的提取分离方法 组长：崔宁 组员：翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成 1.提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2～4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜：生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花：各取5g干菊花4份, ，在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低；pH为11时,虽然黄酮

甘草酸的粗提工艺研究[1]

甘草酸的粗提工艺研究 余华1陈芳2* （1.四川出入境检验检疫局，四川成都 610041； 2. 西南大学药学院，重庆 400715） 2*为通讯作者。 摘要：甘草酸的提取是甘草开发和甘草应用的关键技术之一。试验以甘草的饮片为原料,乙醇作溶剂,用超声波辅助提取法提取甘草酸,研究了在超声波条件下影响提取率的几个因素：包括溶剂用量、溶剂浓度、超声时间、浸泡时间，粒度等几个方面,得到了一条操作简便、省时、提取率高、纯度较高、选择性好的工艺。最佳提取工艺为：以浓度为70%的乙醇为提取溶剂,超声作用时间60min,浸泡2h，粒度为50目。通过此工艺, 提取时间较传统提取工艺缩短，甘草酸的得率有所提高。 关键词：甘草酸；正交实验设计；超声波；提取工艺。 Study on the Primary Process of Glycyrrhizic Acid Extracting from Glycyrrhiza Yu hua1Chen Fang2* (1.Sichuan Entry-Exit Inspection and Quaranting Bureau of P.R. China, Sichuan Chengdu, 610041； 2. School of Pharmaceutical sciences , Southwest University, Chong qing, 400715,China ) Abstract：Glycyrrhizin extraction of Radix Glycyrrhiza is one of the key technologies of the development and application of Radix Glycyrrhiza. This paper used Radix Glycyrrhiza as the

黄酮提取物的纯化

实验二：黄酮提取物的纯化 一、实验目的 1.学习活性炭纯化黄酮的原理和方法。 2.掌握趁热过滤和冷却结晶的操作方法。 3.学习标准曲线测定黄酮纯度的方法。 二、实验原理 活性炭是一种黑色多孔的固体炭质。早期由木材、硬果壳或兽骨等经炭化、活化制得，后改用煤通过粉碎、成型或用均匀的煤粒经炭化、活化生产。主要成分为碳，并含少量氧、氢、硫、氮、氯等元素。活性炭在结构上由于微晶碳是不规则排列，在交叉连接之间有细孔，在活化时会产生碳组织缺陷，因此它是一种多孔碳，堆积密度低，比表面积大。普通活性炭的比表面积在500～1700m2/g间。具有很强的吸附性能，是用途极广的一种工业吸附剂。 根据总黄酮及DMY在不同温度的水中溶解度的差别，可用热水溶解、冷水结晶。使之不断提高纯度。该工艺相对简单，操作方便。在利用重结晶纯化总黄酮及DMY时，加入一定量活性炭可提高纯化速度。 藤茶粗品主要含有：二氢杨梅素（ampelopsin/dihydromyricetin）、杨梅素( myricetin )、槲皮素(quercetin)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-5-O-β–D-glucoside) 、花旗松素( taxifolin)、洋芹苷(apiin)等黄酮类物质。其主要成分为二氢杨梅素。 三、实验试剂及仪器 蒸馏水、活性炭、藤茶粗品、芦丁标准品、70%乙醇 5%亚硝酸钠溶液：5g亚硝酸钠+95ml 10%硝酸铝溶液：10g硝酸铝+90ml水 4%氢氧化钠溶液：4g氢氧化钠+96ml水 玻璃棒、玻璃漏斗、热漏斗、滤纸、表面皿、电热帽、酒精灯、量筒、电子天平、称量纸、分光光度计、容量瓶、烧杯、试管、移液枪 四、实验步骤 （一）纯化 1.称量5g藤茶粗品于烧杯中，在加热条件（95℃-100℃）下，先加入100ml蒸馏水， 搅拌溶解。看是否能完全溶解，如不能完全溶解，再加入水，直至能完全溶解，成 为饱和溶液，加热5-10min。 2.在溶解过程中同时加入0.05g活性炭。 3.趁热过滤，在热漏斗中加入热水，用酒精灯在一旁灼烧以保持温度，将玻璃漏斗放 入热漏斗内预热，加入滤纸，滤纸要高于玻璃漏斗低于热漏斗。 4.冷却至室温，将滤液放入0-4℃的冷库中静置结晶 5.将滤液重复上述实验2-3次（不加活性炭）。 （二）芦丁标准曲线测定纯度

AB-8大孔吸附树脂说明书

AB-8大孔吸附树脂 一、产品概述： AB-8型大孔吸附树脂是苯乙烯型弱极性共聚体，比表面积高于DM-301型，最适宜用于具有弱极性物质的提取、分离、纯化，例如：甜菊苷、生物碱等。 二、产品技术指标参数： 1、产品名称：大孔吸附树脂 2、外观：乳白色或浅黄色不透明球状颗粒 3、粒径范围：（60~16目）0.3~1.25mm≥90% 4、含水量：65~75% 5、比表面积：≥480 m2/g；比照吸附量（酚/干基）≥45mg/g 6、堆积密度：0.65-0.7g/ml (湿态) 三、产品特性: 1、颜色乳白或浅黄给处理操作带来方便，分离、纯化带色的有机化合物，观察容易。 2、物理化学性质稳定，不溶于任何酸、碱及有机溶剂，方便于吸附剂、解吸剂的选择。 3、对有机物选择性好，不受无机盐存在的影响。 4、再生容易，再生剂可选用水、稀碱、稀酸或低沸点有机溶剂。如：甲醇、乙醇、丙酮等。 5、强度适中、正常使用寿命长。 四、注意事项： 1、该树脂含水70%左右，储存、运输应保持5-40oC的温度，以防低温将球体冻裂、高温产生霉变，影响使用。 2、树脂因暴露在空气中或因故失水，不可直接注水，以免树脂漂浮，可用乙醇浸渍处理，使其恢复湿态，再用水清洗干净。 五、树脂预处理： 工业品级树脂均残留惰性溶剂，故使用前须根据应用需要，进行不同深度的预处理：在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3-4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。用同样方法反复洗至出口洗涤液在试管中加3倍量水不显浑浊为止，后用清水充分淋洗至无明显乙醇气味，即可进行一般使用。六、强化再生： 当树脂正常使用一定周期后，吸附能力降低或受急性严重污染时，需要强化再生处理，其方法是加入高于树脂层10-20厘米的3-5%盐酸溶液浸泡2-4小时后，用同样浓度5-7倍体积量盐酸溶液淋洗，再用净水充分淋洗，直至出口洗涤液PH值呈中性，然后以5%氢氧化钠溶液按以上方法浸泡2-4小时，并用同样方法淋洗至通完5-7倍体积量氢氧化钠溶液，再用水充分淋洗直至出水PH值呈中性，即可再次投入使用。

黄酮纯化

1.1.1.1.重结晶法重结晶法重结晶法重结晶法重结晶法利用黄酮类化合物不溶于酸，易溶于碱水、乙醇和丙酮的性质，将黄酮类化合物分离和纯化。多次重结晶可以获得较高纯度的黄酮类化合物[2]。 2.2.2.2.薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法2．1制备型薄层色谱法(PTLC) 制备型薄层色谱法具有操作简单、用时少、分离效果好等特点，可以得到毫克级的物质，一直是分离微量天然药物不可或缺的方法。陈欣安等[3]利用制备型薄层色谱法，以硅胶H—CMC为薄层板。以氯仿—丙酮—醋酸和甲苯—氯仿—丙酮两种三元展开剂．双向展开的方式，从鱼藤中分离出了9种异黄酮类化合物。刘玉红等[4]对聚酰胺柱层析得到的黄酮类化合物组分进行硅胶GGGGFFFF254254254254 薄层板(100 mmx200 mm)层析，加点数次．层析后刮下并合并比移值相同的物质。用乙醇溶解洗脱，得到各组分的溶液后，以HPLC鉴定由薄层层析得到的样品已经达到色谱纯的要求，可以用于结构鉴定。2．2高效薄层色谱法（HPTLC）该法可用于混合物的分离、定性及定量分析，与薄层色谱相比，主要是因为支持剂的改进，而具有了展开时间短、所需样品少、分辨率高等特点，且具有较好的光学活性。王克勤等[5]采用G60高效硅胶板，以氯仿—甲醇—水(18．00：2．30：0．35)为展开剂，芹菜素标样和试样有相同的比移值0．65；用最小二乘法作线性回归，芹菜素含量与斑点峰面积的标准曲线回归方程：Y= 15 138X+7 594．8，r2= 0．993，线性范围：0．332--0．996μg斑点。精密度实验RSD=1. 33％(n=5)，平均回收率达到97．82％。 3.3.3.3.柱色谱分离法柱色谱分离法柱色谱分离法柱色谱分离法3．1硅胶柱色谱该法以硅胶为吸附剂，是一种较为广泛的分离方法。可用于分离二氢黄酮，二氢黄酮醇和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇等。加水活化后可用于分离多羟基黄酮醇及其苷类等极性较大的化合物。通常使用的洗脱剂主要有：乙酸乙酯—石油醚，氯仿—甲醇，石油醚—丙酮。可用氯仿—甲醇—水或乙酸乙酯—丙酮—水作流动相来分离黄酮苷，以氯仿—甲醇为流动相来分离酮苷元。应注意的是硅胶中含有微量金属离子，可用浓盐酸预先处理。另外，甲醇可溶解部分硅胶，要注意调整甲醇比例及分出物质后的处理问题。梁鸿等[6]从北柴胡根醇提物中取正丁醇萃取物，经硅胶(200～300目)干柱层析，以氯仿—甲醇—水(65：30：10)进行洗脱，经纯化后得到8 g黄酮类化合物。姜红芳等[7]从毫菊花纯提物中取正丁醇萃取物30 g，拌以等量硅胶，装入600 g(160～200目)硅胶柱内，以石油醚—乙酸乙酯(3：1、1：1、1：4)梯度洗脱，得到三个黄酮类化合物。3．2聚酰胺柱色谱聚酰胺是一种最常用于分离黄酮类化合物的吸附剂，具有吸附量大、分离效果好等特点。聚酰胺通过与黄酮类化合物形成氢键，化合物酚羟基越多，吸附的程度越强，从而根据吸附作用的强弱进行分离。另外．聚酰胺的吸附能力还与溶剂有关.在水中形成氢键的能力最强，有机溶剂中较弱。在含水系统中类似于反相分配，非水系统中类似于正相分配。所以，聚酰胺分离黄酮类化合物时，用含水流动相时对苷元的吸附能力较强。有机溶剂流动相中，对苷吸附能力较强。杨海艳等[8]用正丁醇、乙酸乙酯、乙醚分别对川楝水溶液中萃取，取正丁醇部萃取物，采用聚酰胺(60～90目)柱层析反复层析，以乙醇—水梯度洗脱，主3．3葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶可以根据分子的大小对化合物进行分离，常用的有Sephadex G型和Sephadex LH—20两种。分离黄酮苷时可以起到分子筛的作用，分子量越大的越先分离出去。分离苷元时，根据酚羟基的多少而分离，越少的越先分离出去。常用的有机溶剂系统有：醇和醇水，水及水的酸、碱液，氯仿甲醇等[9]。以上是三种最常用的分离黄酮类化合物的柱色谱分离方法．可以相互结合起来使用。王红燕等[10]运用上述三种柱色谱法从黄芩茎叶中分离得到白杨素、红花素、异红花素等七种黄酮类化合物，日本学者运用硅胶柱色谱和聚酰谱从黄芩中分离得到三种黄酮类化合物[11]。3．4大孔树脂色谱大孔树脂是一种吸附性与分子筛性相结合的分离材料。被分离的物质根据其分子的大小以及与树脂形成氢键及范德华力作用的大小而被分离。大孔树脂稳定性高、吸附选择性独特、耐腐蚀、再生简便、解吸条件温和，使用周期长、可重复使用；选择性好，易于分离极性不同的物质；避免了用有机溶剂分离而造成的有机溶剂回收难、

大孔吸附树脂纯化甘草提取物中甘草酸的研究

大孔吸附树脂纯化甘草提取物中甘草酸的研究 目的研究光果甘草中甘草酸的最佳大孔树脂纯化工艺。方法以大孔吸附树脂纯化物中甘草酸的含量为考察指标，从24种大孔吸附树脂中筛选出纯化甘草粗提物中甘草酸的最佳大孔吸附树脂，并确定纯化甘草酸的最佳工艺条件。结果AB-8大孔吸附树脂纯化甘草酸效果最佳，最佳工艺条件：上柱液浓度为0.11mg/mL，径高比为1：8，上样体积为所用树脂2BV，上样速度与洗脱速度均为2BV/h，用30%、50%的乙醇除杂，用80%乙醇富集甘草酸。纯化后产品纯度为60.74%，收率为3.29%，转移率为76.33%。结论采用AB-8大孔吸附树脂可较好地纯化甘草酸。 标签：甘草；甘草酸；AB-8大孔吸附树脂 药用甘草为豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fish.），胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Batalin）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根茎[1]。甘草为药食两用植物，甘草酸又称甘草皂苷，是甘草的主要活性成分之一，具有促肾上腺皮质激素作用，能减少尿量及钠排出，增加钾排出，血钠上升，血钙降低。可用于解毒，抗炎[2]，镇咳，抗肿瘤，抗溃疡，抗菌等[3]。近年来的药理研究发现，甘草酸类药物对防治病毒性肝炎、高血脂症和癌症等疾病有一定的疗效[3-4]，对艾滋病毒也有一定的抑制增殖作用[5]。 长期以来，我国是甘草主要出口国，但产品多为原草或浸膏等初加工产品，缺乏深加工。研究有工业应用价值的甘草酸分离与精制技术具有重要意义。本实验将考察24种大孔树脂，选择出最优树脂进行甘草酸的纯化实验，并确定纯化的最佳条件。制定出稳定可靠，成本低廉的纯化工艺，以期对工业化生产有所帮助。 1 材料 LC-2010A高效液相色谱仪（日本岛津公司），FA10004N型万分之一分析天平（上海精密科学仪器有限公司），树脂（河北沧州宝恩吸附材料有限公司），甲醇色谱纯（天津市康科德科技有限公司），冰醋酸分析纯（天津市康科德科技有限公司），醋酸铵分析纯（天津市北方天医化学试剂场），光果甘草（购于河北安国药市长安中药材有限公司，经李天翔教授（天津中医药大学）鉴定），剪段约为3cm，砸至酥松，50℃干燥备用。甘草酸单铵盐对照品（批号为110731-201115，购于天津市药品检验所，纯度>98%）。 2 方法与结果 2.1甘草酸含量测定 2.1.1色谱条件色譜柱为MERITECH-C18柱（4.6mm×200mm，5μm），流动相：甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：32：1），柱温：30℃，流速：1ml/min，

银杏黄酮纯化工艺研究

广泛用于肾移植、肝移植和心脏移植等患者,使器官移植成功率大幅度提高。由于Cs A的安全范围窄,毒性反应强,体内过程个体差异很大,即使患者服用等量的Cs A,其血药浓度也有很大的差异[2]。同时,Cs A浓度过高会导致严重的肝肾毒性、高血糖和神经损害,还会诱发感染和引发肿瘤等。本研究病例中62%的中毒反应发生于Cs A血药浓度高于400ng/m l的患者中,因此将血药浓度控制在400mg/m l以下,可以明显降低Cs A毒性反应的发生。而浓度过低则达不到治疗效果,产生排斥反应[3]。 312　肾移植后采用以Cs A为主的三联免疫抑制用药方案的优越性已为移植专家广泛认同,但由于各单位Cs A起始剂量及减量方案不同,国内外尚无统一的Cs A 治疗窗浓度。本研究通过对肾移植术后接受Cs A免疫抑制治疗的59例患者715例次Cs A全血谷浓度测定结果的分析,综合临床上出现中毒反应和排斥反应时患者Cs A谷浓度测定结果,推荐肾移植后在三联免疫抑制剂治疗方案中,较为理想的治疗浓度范围为:术后 <30d:250～450ng/m l;30～90d:250～400ng/m l; 90～180d:180～400ng/m l;180～360d:150～300 ng/m l;1年以上:100～250ng/m l。结果证明,将Cs A 血药浓度调整到推荐治疗浓度范围的中毒反应发生率为14.5%,移植排斥反应发生率为4%。高于推荐治疗浓度范围的毒性反应发生率为56%,低于这一范围的排斥反应发生率为50.4%。因此,调整Cs A用药剂量,实施个体化给药方案,既能达到满意的免疫抑制效果,又能有效降低毒性和排斥反应的发生率;同时可以降低病人的医疗费用。这进一步说明,肾移植后治疗过程中的Cs A血药浓度监测对Cs A中毒和排斥反应鉴别具有重要意义。 参考文献 1　方芸,王欣,裴云萍.环孢素A监测指标及治疗浓度的研究进展.中国药房,2006,17(4):307 2　石杰,曹勇,张新惠.年龄环孢素浓度肾移植术后疗效之相关性分析. 中华肾脏病杂志,2006,22(3):165 3　肖艳,李学庆,王成,等.影响环孢霉素A血药浓度的药物研究进展. 黑龙江医药,2005,18(4):279 银杏黄酮纯化工艺研究3 张静泽,曹　波,白淑芳,陈　虹 (中国人民武装警察部队医学院,天津　300162) 摘　要　目的:考查非水体系中ZX-4型配位吸附树脂对银杏总黄酮类成分的分离纯化方法。方法:根据银杏黄酮的结构特征,考查ZX-4型配位吸附树脂的吸附性能,并采用HP LC法对银杏总黄酮进行定量分析。结果:Z X-4型配位吸附树脂对银杏总黄酮类成分吸附选择性高。以5%HAc乙醇溶液作为洗脱剂,银杏黄酮纯度提高至53.2%,起到了纯化精制的目的。结论:以配位吸附树脂ZX-4作为纯化银杏黄酮的吸附剂;吸附容量大,解吸容易,分离纯化方法简便有效。 关键词　配位吸附树脂,非水体系,银杏黄酮 中图分类号:R914.4 文献标识码:A 文章编号:100625687(2008)0320003204 Pur i f i ca ti on of fl avono i ds fro m H ippohae R ham noides L Zhang J ingze1,Cao Bo,Bai Shufang,Chen Hong (1.Depart m ent of Phar macy,Medical College of Chinese Peop le’s A r med Police Forces,Tianjin300162) ABSTRACT OBJECTI V E T o study a method for separating and purifying the t otal flavonoids in Ginkgo leaf with the coordinate ad2 s or p ti on in the none-aqueous syste m.METHODS Coordinate ads or p ti on resin Z X-4was systematically studied f or its ads orbing capability.HP LC was used t o measure the content of flavonoids in Ginkgo leaf.RES ULTS Flavonoids in Ginkgo leaf can be highly abs orbed by ZX-4resin.The purity of the flavonoids was54.66%in the dried part of5%HAc ethanolic eluti on.CONCLUSI O N It is a si m p le and efficient method t o separate flavonoids in Ginkgo leaf.The coordinate ads or p ti on ZX-4has higher abs or p ti on content than the other resins and it can be des orbed easily. KE Y WO RD S coordinate ads or p ti on,non-aqueous syste m,Ginkgo flavonoid 3收稿日期:2007212221