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核酸分子杂交试题 (全 ,打印)

核酸分子杂交试题

一. 名词解释:

1. 核酸分子杂交

2. DNA复性

3. Southern杂交

4. Northern杂交

5. 斑点印迹

6. 原位杂交

二. 单项选择题:

1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。

A. DNA变性

B. DNA复性

C. DNA重组

D. DNA杂交

2.DNA变性的本质是（）的断裂。

A. 盐键

B. 氢键

C. 离子键

D. 共价键

3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。

A. 60—70℃

B. 70—80℃

C. 80—90℃

D. 90—100℃

4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。

A. A260吸收值

B. A280吸收值

C. A320吸收值

D. A360吸收值

5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。

A. 0.1μg

B.0.1—0.5μg

C.0.5--1μg

D.1.0—1.5μg

6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。

A. 50—300bp

B. 20—200bp

C.300—400bp

D.200—500

7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。

A.10℃

B.15℃

C.20℃

D.25℃

8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。

A.5℃

B.10℃

C.15℃

D. 25℃

9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。

A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇

10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间内从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA片段控制在大约（）。

A. 1Kb

B. 2 Kb

C. 3 Kb

D. 4 Kb

11. 将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。

A. 原位杂交

B. 核酸酶保护实验

C. 斑点印迹

D. 狭缝印迹

12. 核酸保持在细胞或组织切片中经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为（）。

A. 原位杂交

B. 核酸酶保护实验

C. 斑点印迹

D. 狭缝印迹

13. 在将固定于膜上的DNA片段与探针进行杂交之前，必须将膜上所有能与DNA结合的位点全部封闭，称为（B ）。

A. 杂交

B. 预杂交

C. 杂交前处理

D. Nouthern印迹杂交

14. 进行间期细胞内染色体DNA的原位杂交时，关键是（）。

A. 细胞的培养

B. 加固定液

C. 载波片上的固定

D. 细胞染色体的制备

15. 组织细胞杂交前的预处理的关键是（ C ）。

A. 降解细胞外蛋白

B. 降解细胞内蛋白

C. 降解核酸表面蛋白

D. 降解核酸内DNA

16. 组织细胞杂交前预处理时，降解核酸表面的蛋白质常用的蛋白酶是（）。

A. 蛋白酶C

B. 蛋白酶K

C. 蛋白酶A

D. 蛋白酶I

17. 在进行原位杂交时，RNA探针杂交的时间最好是（）。

A. 2—4h

B. 4—6h

C. 6—8h

D. 过夜

18. 在核酸杂交中，目前应用最为广泛的一种探针是（ A ）。

A. 基因组DNA探针

B. 寡核苷酸探针

C. cDNA探针

D. RNA探针

19. 在Southern印迹杂交中用来标记核酸探针最常用的核素是（）。

A. 32P

B. 3H

C. 35S

D. 125I

20．在下列非核素标记物中，既属于半抗原，同时也属于配体的是（）。

A. 地高辛

B. 生物素

C. 亲合素

D. 罗丹明

21.一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以象核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。这些标记物称为（）。

A.半抗原

B.配体

C.荧光素

D.化学发光探针

22. Sephadex G—50 柱析法中，随着流动相流出的是（）。

A.小分子物质

B. dATP

C.大分子探针

D. dGTP

23. 下列DNA分子的组成中，哪种是核酸变性的最主要的因素（ C ）。

A. AT

B. AG

C. GC

D. TC

24. 在探针的纯化时，无水乙醇可以沉淀（）。

A．DNA片段 B. 蛋白质分子

C．RNA片段 D. 小分子物质

25. 待测DNA样品的电泳分离中，作为分子量标准的λDNA是用（）酶消化的。

A. HindⅢ

B. BglI

C. ApaI

D. BamHI

三. 多项选择题:

1. 导致DNA变性的常用方法有（）。

A. 热变性

B. 碱变性

C. 酸变性

D. 化学试剂变性

2. 影响核酸杂交的因素有（）。

A. 核酸分子的浓度和长度

B. 温度

C. 离子浓度

D. 核酸分子的复杂性

3. 核酸分子处于何种情况下，核酸的双链可以完全打开成为单链（）。

A. PH＜3

B. 3＜PH＜5

C. 5＜PH＜10

D. PH＞10

4. 在杂交液中加入甲酰胺，其目的是（）。

A. 在低温下探针更稳定

B. 使杂交液为中性

C. 能更好的保留非共价结合的核酸

D. 减少核酸杂交的副反应

5. 为减少非特异性杂交反应，在杂交前将非特异性杂交位点进行封闭，常用的封闭物有（）。

B. 复性的非特异性RNA

C. 变性的非特异性DNA

D. 高分子化合物

E. 低分子化合物

6. 下列哪些步骤属于Southern印迹杂交（）。

A. 待测核酸样品的制备

B. 待测DNA样品的电泳分离

C. 凝胶中核酸的变性

D. Southern转膜

7. Southern转膜时常用的膜是（）。

A. 化学活化膜

B. 尼龙膜

C. 硝酸纤维素膜

D. 滤纸

8. 常用的Southern转膜方法有哪几种（）。

A. 硝酸纤维素膜法

B. 毛细管虹吸印迹法

C. 电转印法

D. 真空转移法

9. 用于Southern印迹杂交的探针可以是（）。

A. 纯化的DNA片段

B. 纯化的RNA片段

C. 多核苷酸

D. 寡核苷酸片段

10. 原位杂交可以用来检测（）。

A. DNA

B. RNA

C. cDNA

D. RNA和DNA

11. 原位杂交所用的探针可以是（）。

A. mRNA

B. DNA

C. RNA

D. cDNA

12. Northern印迹杂交中转膜时可采用的方法有（）。

A. 毛细管虹吸印迹法

B. 电转印法

C. 真空转移法

D. 凝胶分离法

13. 核酸原位杂交包括（）。

A. 组织细胞的固定

B. 预杂交

C. 杂交

D. 冲洗

14. 下列哪些属于核酸原位杂交的常用固定液（）。

A. 10%甲醛

B. 4%多聚甲醛

C. 乙醇：冰醋酸（3：1）

D. 戊二醛

15. RNA酶保护分析法可用于（）。

A. mRNA定量

B. mRNA定性

C. mRNA末端定位

D. 确定内含子在相应基因中

16. 核酸酶S1能降解（）。

A. DNA 单链

B. DNA双链

C. RNA单链

D. DNA/RNA杂交双链

17. 根据检测方法的不同，非核素标记物可分为以下几类（）。

A. 半抗原

B. 配体

C. 荧光素

D. 化学发光探针

18. 下列物质属于半抗原的是（）。

A. 亲和素

B. 罗丹明

C. 生物素

D. 地高幸

19. 核酸分子杂交所用探针采用体外标记法的优点是（）。

A.安全系数高

B.需要活体生物或细胞培养系统

C.探针，核酸分离和纯化及储存很方便

D.体外标记一般比体内标记的比放射活性高

20. 化学法体外标记核酸探针最常用的是（）。

A. 125I

B. 光敏生物素

C. 3H

D. 32P

21. DNA探针的酶促标记法包括（）。

A. 缺口平移法

B. 随机引物法

C. PCR标记法

D. 末端标记法

22. 探针的纯化包括（）。

A．乙醇沉淀法 B. SephadexG-50

C. 甲醇沉淀法

D. 丝柱离心法

23 DNA变性后的理化性质的变化有（）。

A. 粘度降低

B. 密度增加

C. 紫外吸收值增加

D. 熔点减小

24. Southern杂交结果检测包括（）。

A．放射自显影 B. 比色或化学发光检测

C. 酶切图谱分析

D. 凝胶电泳分离

25. Southern杂交在医学中的应用包括（）。

A. 酶切图谱分析

B. 特定基因定性和定量

C. 基因突变分析

D. 限制性片段长度多态性的分析

四. 填空题:

1. 核酸分子杂交中，杂交的双方分别称为与。

2. 核酸分子杂交中已知的核酸序列称为。

3. 适当的电泳缓冲液中，DNA在电场作用下，由负极向正极泳动，分子越大，泳动速度。

4. 当促使变性的因素解除后，两条DNA又通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构，称为。

5. 在DNA的碱基组成中，AT之间是氢键，GC之间是氢键。

6. 鉴别DNA靶分子的杂交称为，鉴别RNA靶分子的杂交称为。

7. 根据检测对象的不同，可将原位杂交分为和。

8. 常用的液相杂交有和。

9．RNA酶保护分析法（RPA）的基本程序包括：、、、、。

10. 液相杂交的核酸酶S1保护分析法可用于、、和。

11. 核酸探针包括：、、和。

12. 在用核酸标记的探针，大多数标记方法需要的是α-32P，末端标记必须使用。

13.核酸的体外标记法分为和。

14.核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。

五、简答题

1、DNA变性的常用方法有哪几种？

2、简述DNA的复性过程。

3、一个良好固相支持物应具备哪些特性？

4、试比较硝酸纤维素膜、尼龙膜和化学活化膜的优缺点。

5、核酸原位杂交的理想固定液应具备哪些特点？

6、一种理想标记物应具备哪些特性？

7、随机引物法标记DNA探针有哪些优点？

六、论述题

1、试述核酸分子杂交的原理。

2、试述影响核酸分子杂交的因素。

3、试述Southern印迹杂交的基本步骤。

4、试述Southern印迹的常用方法及原理。

5、试述核酸原位杂交的基本过程。

6、试述探针的种类及其制备。

7、试述切口平移法标记DNA探针的原理。

名词解释：

SiRNA:

利用双链小片段RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。

Blue/white screen:

蓝白斑筛选。即β-半乳糖苷酶基因失活筛选。其原理是：某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因，该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α－肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内α－互补，形成完整的β－半乳糖苷酶。该酶能催化指使剂底物X－gal形成蓝色菌落。当外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位点)，lacα－肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无β－半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。

Knock down:

（基因）敲除。是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。基因敲除除可以终止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变，既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。

G-protein :

G蛋白。是三聚体GTP结合调节蛋白的简称，位于质膜内胞浆的一侧，由α，β，γ三个亚基组成，βγ二聚体通过共价结合锚定于膜上起稳定α亚基的作用，而α亚基本身具有GTP酶活性。G蛋白在信号转导过程中起着分子开关的作用，当G蛋白α亚基与GDP结合，处于关闭态；当胞外配体与受体结合形成复合物时，导致受体胞内结构域与α亚基偶连，并促使α亚基结合的GDP被GTP交换而被活化，即处于开启状态，从而传递信号。

DNA-chip:

DNA芯片。指通过微阵列技术将高密度DNA片断阵列通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面作为探针，荧光标记的样品DNA/RNA借助碱基互补作用与探针进行杂交，从而进行大量的基因表达及检测等方面的研究。

Off-target effect:

脱靶效应。指的是与一个内源性基因某一位点并不完全同源的RNA亦能通过抑制翻译而导致基因表达的静默。

Super gene family:

超基因家族。指一个共同的祖先基因通过各种各样的变异，产生了结构大致相同但功能却不尽相似的一大批基因，这一大批基因分属于不同的基因家族，但可以总称为一个超基因家族。

Environment genetic project :

环境基因工程，指专门鉴定体积暴露在特定环境下的那些显示易感或抗性基因的DNA多态性。

Tumor vaccine:

肿瘤疫苗。肿瘤疫苗的本质是将某一抗原组份作用于生物体，从而激发该机体对该抗原或抗原载体的免疫保护，这种抗原形式或抗原的载体形式即是疫苗。肿瘤疫苗的形式有细胞性疫苗和可溶性抗原疫苗两大类。细胞疫苗是将肿瘤细胞进行某些处理灭活后直接作用于机体。可溶性抗原或多肽疫苗则是在体外通过基因工程的方法制备出已知某肿瘤的抗原成分，与不同的佐剂联合应用达到免疫激发的目的。

问答题：

1.请从“一条基因一条蛋白”到“一条蛋白一条基因”说说你对基因概念的变化的理解。

2.基因诊断的优缺点及发展前景。

3.逆转录酶在RNA病毒感染宿主及自身复制中的意义。

4.PCR与细胞内DNA复制的异同点。（不少于5点）

5.试从肿瘤多基因，多机制说明肿瘤的基因筛选。

答：1. 基因概念演变过程如下：

基因一次是1909年丹麦生物学家W.Johannsen首先使用，以代替在此之前所用的“遗传因子”这个术语。在开始使用“基因”一词时，基因是遗传性状的符号，并未设计到基因的物质概念。

1926年Morgan发表了“基因论”，指出基因实在特定染色体上，而且是呈直线排列在染色体上的遗传颗粒，位于同源染色体的同一位置的相对基因叫做等位基因；基因是世代相传的，基因决定了遗传性状的表达。

20世纪40年代，Bendle和Tatum用X射线照射链孢霉菌使其产生不同的突变体，发现突变可以影响代谢反应，故认为突变可致催化代谢的酶发生缺陷，因而提出了“一个基因，一个酶”的学说。

20世纪50年代初，Benzer在研究T4噬菌体的一群紧密连锁的突变群时发现了顺反效应，从而提出了“顺反子”概念。一个顺反子即是一个基因。但后来“顺反子”多用于指RNA分子中对应于一个结构基因的序列，现代分子生物学中所称单顺反子RNA和多顺反子RNA,即是由此而来。

20世纪60年代，遗传密码的破译使人们对基因表达的机制有了更多的了解，认识到基因是基因组中的一个区域（一段DNA序列），其转录产物是编码一条多肽链的RNA分子或者是一个有独力功能的RNA 分子（tRNA或rRNA）。

20世纪90年代以来，对基因的结构与功能的研究不断深入，许多基因的核苷酸序列被测定，对基因的认识更加丰富，逐渐形成了基因的现代概念。基因的现代分子生物学概念是：基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位，是RNA和蛋白质相关遗传信息的基本存在形式，是指贮存RNA序列信息和有功能蛋白质多肽链序列信息、以及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。大部分生物中构成基因的核苷酸物质是DNA，少数生物（如RNA病毒）中是RNA.

题中“一条基因一条蛋白”反应的是20世纪40年代“一个基因，一个酶”的学说，而“一条蛋白一条基因”反应的是基因的现代概念。两种学说都是正确的，体现了对基因概念的理解的不断深化。

2.基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能

（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。基因诊断有时也称为分子诊断或DNA诊断(DNA diagnosis)。

与传统的方法相比，基因诊断具有下列优点：（1）应用范围广。（2）简便、快速、经济。（3）特异

性强，敏感性高，且便于定量操作。（4）可预先诊断。

基因诊断的应用：

（1）辅助遗传病的临床诊断

（2）遗传病患病风险分析，如出生缺陷的产前诊断，植入前遗传诊断，遗传筛选等。

（3）其他疾病易感性预测性诊断，如肿瘤或其他家族性疾病（糖尿病、高血压、肥胖和AD等多基因病）的易感性预测。

（4）疗效评价及用药指导，例如评价临床治疗急性淋巴细胞性白血病。

（5）法医学个体认定

（6）病原体诊断，包括病毒、细菌、真菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体以及寄生虫等的诊断。

3.逆转录酶的三种反应活性①RNA指导的DNA合成②RNA水解③DNA指导的DNA合成

逆转录酶的意义：（1）用于合成cDNA，建立cDNA文库；（2）获得基因或探针；（3）用于RT-PCR。

4. 原理相同，都是利用碱基配对互补的原则而且复制的时候都是半保留复制，都需要引物，底物都是

dNTP。

不同点：

所处的反应环境不同，复制方式不同，所需酶原料不同，复制起始点不同，聚合酶不同，终止方式不同1。一个体内一个体外

2。聚合酶链式反应（PCR）不会产生冈崎片断

3。一个细胞只在有丝和减数分裂的时候进行DNA复制而PCR可以反复进行

4。细胞中的DNA复制受到许多复杂的因子的调控

5。两者进行的温度不同

6。PCR产物短小，DNA复制不精确; 体内DNA复制是整体染色体的复制

4.试从肿瘤多基因，多机制说明肿瘤的基因筛选。

分子生物学考题汇总基因治疗

SiRNA

基因免疫

卫星DNA

假基因

超基因家族环境基因组计划基因芯片

G蛋白

基因封闭

基因敲除

脱靶效应

癌基因

抑癌基因

原癌基因

细胞癌基因

基因免疫

基因组

回文结构

微卫星或简单串联重复（STR）

基因组文库

感受态细胞

蓝白斑筛选试验

载体

多克隆位点

荧光原位杂交（fluorescence in-situ hybridization,FISH）

基因表达

表达调控

Selfish DNA siRNA

blue white screen

knock down

off target effect

super gene family

g protein

DNA-chip

enviroment genetic project tumor vaccine

请从一条基因一条蛋白到一条蛋白一条基因谈谈基因概念的变化

基因诊断的优缺点及其发展前景

逆转录酶在RNA病毒感染宿主及自身复制中的意义

PCR与细胞内DNA复制的异同点（至少五条）是从肿瘤的多基因多机制谈谈肿瘤的基因筛选基因治疗的主要内容和三个核心

基因治疗的应用研究范围及其前景

人类基因组计划的主要内容

原癌基因激活的机理

谈谈你对癌基因和抑癌基因的理解

真核生物基因组的特点和功能

原核生物病毒基因组的特点

真核生物基因组和原核生物基因组的主要区别卫星现象

限制性内切酶信号活性

荧光定量PCR

基因

基因组

PCR引物

基因重叠

基因诊断

质粒特性

人类基因组计划

真核生物基因组和原核生物基因组的主要区别真核生物基因组的特点和功能

乳糖操纵子调控机制

基因工程载体，具备的条件

谈谈你对癌基因和抑癌基因的理解

DNA重组技术的基本原理

对基因治疗的认识

真核RNA聚合酶的特点

核酸分子杂交精彩试题(全

实用标准文案核酸分子杂交试题一. 名词解释: 1. 核酸分子杂交 2. DNA复性 3. Southern杂交 4. Northern杂交 5. 斑点印迹 6. 原位杂交二. 单项选择题: 1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。 A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 2.DNA变性的本质是（）的断裂。 A. 盐键 B. 氢键 C. 离子键 D. 共价键 3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。 A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃ 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。 A. A260吸收值 B. A280吸收值 C. A320吸收值 D. A360吸收值 5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。 A. 0.1μg B.0.1—0.5μg C.0.5--1μg D.1.0—1.5μg 6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。 A. 50—300bp B. 20—200bp C.300—400bp D.200—500 7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。 A.10℃ B.15℃ C.20℃ D.25℃ 8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。 A.5℃ B.10℃ C.15℃ D. 25℃ 9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。 A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇 10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间内从凝胶中移动出来，必须将最长的

核酸分子杂交技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。固相杂交固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。斑步杂交（dot hybridization）是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色，检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。 Northern印迹杂交:由Southerm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，进行杂交反应，以鉴定基中特定mRNA分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法，可推臬出癌基因的表达程度。差异杂交（differential hybridization）是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上，用两种混合的不同cDNA探针（如：转移性和非转移性癌组织的mRNA逆转录后的cDNA）分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物（如人），则因工作量太大，表达的序列所占百分比较低（仅5％左右），价值不大。 cDNA微点隈杂交（cDNA microarray hybridization）是指将cDNA克隆或cDNA的PCR产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上（如：尼龙膜或

核酸分子杂交精彩试题(全,打印)

核酸分子杂交试题一. 名词解释: 1. 核酸分子杂交 2. DNA复性 3. Southern杂交 4. Northern杂交 5. 斑点印迹 6. 原位杂交二. 单项选择题: 1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。 A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 2.DNA变性的本质是（）的断裂。 A. 盐键 B. 氢键 C. 离子键 D. 共价键 3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。 A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃ 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。 A. A260吸收值 B. A280吸收值 C. A320吸收值 D. A360吸收值 5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。 A. 0.1μg B.0.1—0.5μg C.0.5--1μg D.1.0—1.5μg 6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。 A. 50—300bp B. 20—200bp C.300—400bp D.200—500 7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。 A.10℃ B.15℃ C.20℃ D.25℃ 8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。 A.5℃ B.10℃ C.15℃ D. 25℃ 9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。 A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇 10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA片段控制在大约（）。 A. 1Kb B. 2 Kb C. 3 Kb D. 4 Kb 11. 将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。

第五章-分子生物学常用技术-习题

第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程）一、选择题（一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要 A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要 A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为

第八章核酸分子杂交技术习题

第八章核酸分子杂交技术习题 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

第八章核酸分子杂交技术一．选择题【A型题】 1.DNA链的Tm值取决于核酸分子的 A.G-C含量 B.A-T含量 C.A-G含量 D.A-C含量 E.T-G含量 2.研究得最早的核酸分子杂交种类是 A.菌落杂交 B. Southern杂交 C. Northern杂交 D.液相杂交 E.原位杂交 3.Southern杂交通常是指 A．DNA和RNA杂交 B．DNA和DNA杂交C．RNA和RNA杂交 D．蛋白质和蛋白质杂交 E．DNA和蛋白质杂交 4.基因芯片技术的本质是 A.核酸分子杂交技术 B.蛋白质分子杂交技术 C.聚合酶链反应技术 D.基因重组技术 E.酶切技术 5.寡糖苷酸探针的最大的优势是 A.杂化分子稳定 B.可以区分仅仅一碱基辑差别的靶序列 C. 易标记 D.易合成 E.易分解 6.血友病是一种 A.染色体病 B.X链锁遗传病 C.先天性代谢缺陷病 D.先天畸形 E.常染色体隐性遗传病

7.检测的靶序列是RNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 8. 检测的靶序列是DNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 9.DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 10.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 11.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 12.标记的参与杂交反应的核酸分子，称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 13.点/缝杂交可以用于 A.快速确定是否存在目的基因 B.不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C.用于基因定位分析

医学检验本科班分子生物学检验技术试卷

医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷一. 选择题（在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分,共20分）: 1. 在核酸提取时,常需要使用氯化钠,醋酸钠等盐溶液,真正的目的是（） A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀 B. 调节PH值 C. 保持核算的完整性 D. 提高核酸的浓度 E. 无特定目的 2. 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（） A. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6% E. 无法计算 3.下列那项不是扩增反应所必需的?（） A. 引物和模板 B. dNTP C. Mg++ D .DNase E. 缓冲液 4. 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（） A. 基因结构与功能的关系 B. 基因结构变异与疾病的关系 C. 病原微生物的基因结构特征 D. 基因的表达.调控与疾病的关系 E. 以上皆是 5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术?（） A. 核酸分子杂交技术 B. DNA测序技术 C. PCR技术 D. DNA重组技术 E. 以上全是 6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（） A. 肝功能检测 B.乙肝两对半检测 C. 乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测 D. 肿瘤细胞培养 E. 病原微生物培养 7. 在核酸的分离纯化过程中,为保证其一级结构的完整性,应采取（） A. 尽量简化分离步骤,缩短提取时间 B. 适当延长提取时间 C. 在37摄氏度条件下进行 D. 加入Mg++,Ca++等二价金属离子 E. 以上全是 8. 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0,请问该样品属于哪类核酸样品?（） A. DNA B. RNA C. 是DNA,但有蛋白质污染 D. 是RNA,但有蛋白质污染 E. DNA和RNA 9. 在RNA提取和纯化过程中,为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（）

习题2核酸分子杂交技术

第二章核酸杂交技术（一）名词解释 1．原位杂交 2．核酸分子杂交技术 3．探针 4．反向点杂交 5．缺口平移标记法 6．随机引物标记法 7．末端标记法 8．Southern blot杂交 9．荧光原位杂交 10．菌落杂交（二）选择题【A型题】 1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（） A G－C含量 B A－T含量 C A－G含量 D A－C含量 E T－G含量 2．液相杂交是下列哪一种（） A Southem印迹杂交 B Northem印迹杂交 C Dot印迹杂交 D Slot印迹杂交 E RPA实验 3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（） A 菌落杂交 B Southern杂交 C Northern杂交 D 液相杂交 E 原位杂交 4．Southern杂交通常是指（） A DNA和RNA杂交 B DNA和DNA杂交 C RNA和RNA杂交 D 蛋白质和蛋白质杂交 E DNA和蛋白质杂交 5．最容易降解的核酸探针是( ) A cDNA探针 B dsDNA探针 C ssDNA探针 D gDNA探针 E: RNA 6．探针基因芯片技术的本质就是（） A 核酸分子杂交技术 B 蛋白质分子杂交技术 C 聚合酶链反应技术 D 基因重组技术 E 酶切技术 7．DNA探针的长度通常为( ) A 1000 ～ 2000个碱基 B 500 ～ 1000个碱基 C 400 ～ 500个碱基 D 100 ～ 400个碱基 E. <100个碱基 8．寡核苷酸探针的最大的优势是（） A 杂化分子稳定 B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列 C 易标记 D 易合成 E 易分解 9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛

核酸检测考核试题和答案大全

1.临床实验室若对检测系统进行性能核实,需要进行以下哪组实验(单项该题正确答案: A.精密度、准确 2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案: A、核酸分子杂交技术 3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案: D.小潮气量和低吸气压力 4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案: C、NTP 5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子 6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案探针 7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案 A套管“或“伞型罩“连接 8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案 E、单分子测序 9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D 以上均不是 10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案: B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100% 11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项) 该题正确答案D、1000bp 关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案 E、分子信标设计简单 13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案: A《病原微生物实验室生物安全管理条例》 14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案 D丙型肝炎病毒 15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案 C.Tm减5℃ 16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是 17.下列关于Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案 E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键 18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案 D孔位不足时,可将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解,加热时间不变。 9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案: A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩 20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案 E.进行核酸提取的有效性评价 21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项)

核酸的分子杂交技术及其应用

核酸的分子杂交技术及其应用 1概述核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。这时加入异源的DNA或RNA(单链)并在一定离子强度和温度下保温(复性)，若异源DNA或RNA之间的某些区域有互补的碱基序列，则在复性时可形成杂交的核酸分子。在进行分子杂交技术时，要用一种预先分离纯化的已知RNA或DNA序列片段去检测未知的核酸样品。作为检测工具用的已知RNA或DNA序列片段称为杂交探针(probe)。它常常用放射性同位素来标记。虽然核酸分子杂交技术的应用仅有二十多年的历史，但它在核酸的结构和功能的研究中作出了重要贡献，在基因的表达调控和物种的亲缘关系研究中也发挥重要作用。而且，随着核酸探针制备及标记技术的丰富和完善以及以不同材料为支持物的固相杂交技术的发展，使核酸分子杂交技术在分子生物学领域中的应用更加广泛。这里我们将就分子杂交技术的几个主要过程及其应用进行介绍。 2核酸探针的制备核酸分子杂交的灵敏性主要依赖杂交探针的放射性比活度。比活度高就可提高反应的灵敏性，减少待测样品的用量。目前一般所用的是体外标记，这里介绍几种最常用的方法： 2.1DNA的切口平移双链DNA分子的一条链有切口时，大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ可把核苷酸残基加到切口处的3’端，同时由于此酶具有5’→3’外切核酸酶活性，它还可从5’端除去核苷酸。这样5’端核苷酸的去除与3’端核苷酸的加入同时进行，导致切口沿着DNA链移动，称切口平移(nicktranslation)。常用于在双链DNA 上打开切口的酶为胰DNA酶Ⅰ。由于高放射性比活度的核苷酸置换了原有核苷酸，就有可能制备比活度大于108计数/(分.μg)的32P标记的DNA探针。 2.2单链DNA探针的制备与传统的双链探针相比，单链探针由于不存在互补链，因此可以消除由探针的两条链重退火形成无效杂交体的可能。最常用的是以M13噬菌体载体合成单链DNA探针的方法。其主要原理是用人工合成的寡核苷酸引物(其序列与载体上固定区段的序列相互补。可从生物试剂公司直接购买)与来自重组M13噬菌体的单链DNA退火，然后以此寡核苷酸作为引物在大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow大片段催化下合成互补的放射性标记DNA。 2.3单链RNA探针的制备首先将感兴趣的DNA序列到带有SP6噬菌体或T7及T3噬菌体的启动子的重组载体质粒中。由于这些重组质粒带有的强启动子能被噬菌体的依赖DNA的RNA聚合酶所识别。因此，当把线状质粒与适当的依赖DNA的RNA聚合酶及4种rNTP(核糖核苷三磷酸)在体外混合并温育时，就可在噬菌体启动子处开始合成RNA。单链RNA探针除具有单链DNA探针的优点之外，还具有：①合成效果高(模板可反复被转录)；②

(完整版)现代分子生物学试题答案

1．SD序列：起始密码子AUG上游5-10个核苷酸处，有一段可与核糖体16S rRNA配对结合的、富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为AGGA(也有说是AGGAGG)，此序列称 SD序列(Shine-Dalgarno sequence) 2．顺式作用元件：cis-acting element是指对基因表达有调控活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同处于一个DNA 分子上的基因 3．核小体nucleosome构成真核染色质的一种重复珠状结构，是由大约200 bp的DNA区段和多个组蛋白组成的大分子复合体。其中大约146 bp的DNA区段与八聚体(H2A、H2B、H3和H4各两分子)的组蛋白组成核小体的核心颗粒，核心颗粒间通过一个组蛋白H1的连接区DNA彼此相连。基因产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。冈崎片段Okazaki fragment 在DNA不连续复制过程中，沿着后随链的模板链合成的新DNA片段，模板链DNA双链中其序列与编码链或信使核糖核酸互补的那条链。在DNA复制或转录过程中，作为模板指导新核苷酸链合成的亲代核苷酸链。基因家族真核生物的基因组中有很多来源相同、结构相似、功能相关的基因，将这些基因称为基因家族蛋白质内含子其DNA序列与外显子一起转录和翻译，产生一条多肽链，然后从肽链中切除与内含子对应的aa序列，再把与外显子对应的氨基酸序列连接起来，成为有功能的蛋白质。翻译内含子mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这一序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列 Northern blot过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段 Sorthern blot 蛋白激酶C protein kinase丝氨酸/苏氨酸激酶的家族成员。在多种免疫受体介导的信号转导中可被二酰甘油和钙离子所激活。原癌基因proto-oncogene调控细胞生长和增殖的正常细胞基因。突变后转化成为致癌的癌基因。多顺反子mRNA两个以上相关基因串在一起转录所得到的信使核糖核酸(mRNA)。多顺反子mRNA一般可同步翻译产生功能相关的多个蛋白质或酶。 Alternative splicing在高等真核生物中，内含子通常是有序或组成型地从mRNA前体分子中被剪接，然而，在个体发育或细胞分化时，可以有选择地越过某些外显子或某个剪接点进行变位剪接，产生出组织或发育阶段特异性mRNA，成为内含子的可变剪接。端粒酶端粒酶是一种含RNA链的逆转录酶，通过识别并结合于富含G的端粒末端，以所含的RNA为模板，逆转录合成端粒。 X染色体失活人和鼠的Xist（ Xi-specific transcript）基因只在失活的X染色体上表达，编码一功能性RNA分子，此分子能与Xic位点相互作用，引起后者构象变化，更容易与各种蛋白因子相结合，最终导致X染色体失活锌指结构指的是在很多蛋白中存在的一类具有指状结构的结构域，这些具有锌指结构的蛋白大多都是与基因表达的调控有关的功能蛋白由一个含有大约30个氨基酸的环和一个与环上的4个Cys或2个Cys和2个His配位的Zn构成，反式作用因子trans-acting factor是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。染色质chromatin chromosome 指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式。所谓C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。一般高等生物的C值均大于低等生物,但某些植物或两栖动物的C值比人高出几十倍,这种C值与进化复杂性不一致的现象称为C值反常现象或称为C值矛盾（C-value paradox）断裂基因或不连续基因（interrupted/discontinuous genes）所谓断裂基因就是基因的编码序列在DNA分子上是不连续的，为不编码的序列所隔开。编码的序列称为外显子（exon），不编码的序列称为内含子（intron）。寡核苷酸（oligonucleotide）：一般是指二至十个核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。回文序列是指沿同一方向(如5’→3’)序列相同的结构，即碱基序列的反向重复(inverted repeats) 核酸的变性：是指核酸双螺旋区的氢键断裂，DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象变性的DNA在适当的条件下，两条彼此互补的DNA单链可以重新缔合形成双螺旋结构，这个过程称之为复性 DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制

第八章核酸分子杂交技术习题

第八章核酸分子杂交技术一．选择题【A型题】 1.DNA链的Tm值取决于核酸分子的 A.G-C含量 B.A-T含量 C.A-G含量 D.A-C含量 E.T-G含量 2.研究得最早的核酸分子杂交种类是 A.菌落杂交 B. Southern杂交 C. Northern杂交 D.液相杂交 E.原位杂交 3.Southern杂交通常是指 A．DNA和RNA杂交B．DNA和DNA杂交C．RNA和RNA杂交D．蛋白质和蛋白质杂交E．DNA和蛋白质杂交 4.基因芯片技术的本质是 A.核酸分子杂交技术 B.蛋白质分子杂交技术 C.聚合酶链反应技术 D.基因重组技术 E.酶切技术 5.寡糖苷酸探针的最大的优势是 A.杂化分子稳定 B.可以区分仅仅一碱基辑差别的靶序列 C.易标记 D.易合成 E.易分解 6.血友病是一种 A.染色体病 B.X链锁遗传病 C.先天性代谢缺陷病 D.先天畸形 E.常染色体隐性遗传病

完整版分子生物学期末复习试题及答案

一、名词解释二、分子生物学：包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构与功能，以及从分子水平研究生命活动 RNA组学：RNA组学研究细胞中sn mRNA啲种类、结构和功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、不同状态下sn mRNA啲表达具有时间和空间特异性。增色效应：DNA变性时其溶液OD260曽高的现象。减色效应：DNA复性时其溶液OD260笔低的现象。 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%寸的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm) 。其大小与G+C含量成正比。解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260 (absorbanee , A, A260代表溶液在260nm处的吸光率) 值作图，所得的曲线称为解链曲线。 DNA复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。核酸分子杂交：在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件(温度及离子强度) 下，就可以在不同的分子间形成杂化双链，这种现象称为核酸分子杂交。基因：广义是指原核生物、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位。狭义指能产生一个特定蛋白质的DNA序列。断裂基因：不连续的基因称为断裂基因，指基因的编码序列在DNA上不连续排列而被不编码的序列所隔开。重叠基因：核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因，或称嵌套基因。致死基因：删除后可导致机体死亡的基因。基因冗余：由于一基因在个体中有若干份拷贝，当删除其中一个时，个体的表型不发生明显变化。 DNA重组：DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合，又称为遗传重组或基因重排。同源重组：发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组。接合作用：当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)的DNA转移称为接合作用(conjugatio n)。转化作用：通过自动获取或人为地供给外源DNA使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，称为转化作用(transformation) 。转导作用：当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来、再次感染另一 (供体) 细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用位点特异重组：位点特异重组(site-specific recombi natio n) 是由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。 12-23规则：重组发生在间隔为12bp到23bp的不同信号序列之间，称为12-23 规则。转座子： ( transposon )在基因中可以移动的一段DNA 序列。转座：由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition) 。克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon) ，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。基因工程：(genetic engineering) 实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组DNA X艺学。限制性核酸内切酶：(restriction endonuclease, RE) 是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的—类内切酶。同功异源酶：来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同功异源酶。同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。载体：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。复制：(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA 为模板合成子链DNA的过程。半保留复制： ( semi-conservative replication )DNA 生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template) 按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA 一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DN 碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。复制子：(replicon ) DNA分子中能独立进行复制的单位称为复制子。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子。复制眼：(replication eye ) DAN正在复制的部分在电镜下观察起来犹如一只眼睛，称为复制眼。复制叉： ( replication fork )复制一开始，复制起始点要形成一个特殊的叉型结构，是复制有关的酶和蛋白质组装成复合物

核酸检测考核试题和答案大全

A.精密度、准确 2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案: A、核酸分子杂交技术 3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案: D.小潮气量和低吸气压力 4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案: C、NTP 5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子 6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案探针 7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案 A套管“或“伞型罩“连接 8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案 E、单分子测序 9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D以上均不是 10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案: B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100% 11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项) 该题正确答案 D、1000bp 关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案 E、分子信标设计简单 13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案: A《病原微生物实验室生物安全管理条例》 14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案 D丙型肝炎病毒 15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案减5℃ 16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是 17.下列关于 Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案 E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键 18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案 D孔位不足时,可将管放入加热孔中进行热裂解,加热时间不变。 9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案: A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩 20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案 E.进行核酸提取的有效性评价 21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项) 该题正确答案

第八章核酸分子杂交技术

第八章核酸分子杂交技术主要用途：①核酸定性或定量检测；②基因克隆、突变及其表达研究；③疾病的临床诊断。第一节核酸杂交概述及基本原理一、核酸杂交概述 ?1961年Hall等建立核酸杂交技术，探针与靶序列溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体； ?60年代中期Nygaard 等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素(NC)膜上的DNA序列奠定了基础； ?70年代末期到80年代早期，分子克隆技术的出现，各种质粒和噬菌体DAN载体系统的构建，使特异性DNA探针的来源变得十分丰富； ?80年代中期，PCR技术的发明与核酸分子杂交有机的结合，又使得核酸分子杂交技术的灵敏度大大提高； ?90年代，基因芯片技术的出现使得一次性对大量样品序列进行检测和分析成为可能，从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。核酸的结构：一级结构：核苷酸的排列循序，稳定键为磷酸二酯键；二级结构：双螺旋结构，稳定键为氢键、碱基堆积力、疏水键；高级结构：染色体二、核酸变性核酸变性(nucleic acid denaturation)：在某些理化因素的作用下，维系DNA分子二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双螺旋变成单链过程。 ?化学键变化：维持双螺旋稳定的氢键和疏水键发生断裂，断裂可以是部分的或全部的，可以是可逆的或是非可逆的。 ?化学结构变化：DNA变性改变了其空间结构，不涉及到其一级结构的改变。 DNA的变性因素：凡能破坏双螺旋稳定性的因素都可以成为变性的条件。如加热；极端的pH；有机试剂(甲醇、乙醇、尿素、甲酰胺等) 变性DNA的性质：变性能导致DNA的一些理化性质及生物学性质发生改变 ①溶液黏度降低---DNA双螺旋是紧密的“刚性”结构，变性后代之以“柔软”无规则单股线性结构，DNA黏度明显下降。 ②溶液旋光性发生改变---变性后DNA分子的对称性及局部构型改变。 ③紫外吸收增加---DNA变性后，DNA 溶液的紫外吸收增强，双链DNA＜单链DNA＜单核苷酸。变性DNA的增色效应增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 ?DNA分子在250-280nm 波长具有吸收紫外光的特性，其吸收峰值在260nm。 ?增色效应可以作为DNA变性的指标。 ?不同来源DNA的变化不一，如大肠杆菌DNA经热变性，其260nm的吸光度值可增加40%以上，其它不同来源的DNA溶液的增值范围大多在20-30%之间。解链曲线：通常利用DNA变性后在波长260nm处吸光度(A260)的增加来监测DNA变性的过程。如果以温度对A260的关系作图，所得的曲线称为解链曲线。典型DNA变性曲线呈S型。

核酸分子杂交技术与应用综述

核酸分子杂交技术与应用综述摘要核酸分子杂交技术是20世纪70年代发展起来的一种崭新的分子生物学技术。它是基于 DNA分子碱基互补配对原理，用特异性的核酸探针与待测样品的DNA/RNA形成杂交分子的过程。分子杂交实验依据其形式的不同可以分为液相杂交、固相杂交、原位杂交，而固相杂交又可以分为菌落杂交、点/狭缝杂交、Southern印迹杂交和Northern印迹杂交。各类型杂交稻基本原理和步骤是基本相同的，只是选用的杂交原材料、点样方法有所不同。关键字核酸分子杂交液相杂交固相杂交原位杂交应用本文是对分子杂交技术的原理和类型分类及其应用的一篇综述。旨在了解各种杂交类型的应用方向，即在生物、医学上的应用。一、核酸分子杂交原理 DNA分子是由两条单链形成的双股螺旋结构，维系这一结构的力是两条单链碱基氢键和同一单链上相邻碱基间的范德华力。在一定条件下，双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成无规则线团，DNA分子成为单链，这一过程称作变性或融解。加热、改变DNA融解的pH值，或有机溶剂等理化因素，均可使DNA变性。变性的DNA粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外光吸收增加。在温度升高引起的DNA变性过程中，DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生，这一温度范围的重点被称作融解温度T m 。T m 值得大小取决于核酸分子的G-C含量，核酸分子的G-C含量越高，其T m 值越高。因为G-C碱基之间有三个氢键，而A-T碱基之间只有两个氢键。变性DNA只要消除变性条件，具有碱基互补的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称作复性。根据这一原理，将一种核酸单链标记成为探针，再与另一种核酸单链进行碱基互补配对，可以形成异源核酸分子的双链结构，这一过程称作杂交（hybridization）。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补序列就可以形成杂交体。二、核酸分子杂交类型（一）固相杂交固相杂交是把欲检测的核酸样品先结合到某种固相支持物上，再与溶解于溶液中的杂家探针进行反应，杂交结果可用仪器进行检测，但大多数情况下直接进行放射自显影，然后根据自显影图谱分析杂交结果。 1、菌落杂交用于重组细菌克隆筛选的固相杂交，称作菌落杂交。主要步骤包括菌落平板培养、滤膜灭菌后放到细菌平板上，使菌落粘附到滤膜上，将滤膜放到经适当溶液饱和度吸水纸上，菌斑溶解产生单链的DNA，固定DNA用32P标记的单链探针与菌落DNA进行杂交。杂交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于X线胶片进行放射自显影。将自显影胶片、滤膜、培养平板比较就可以确定阳性菌落。

核酸化学综合测试题一

第二章核酸一．填空： 1.无论DNA还是RNA都是由许许多多（）通过（）连接而成的。 2.（）是RNA中才有的含氮碱基。 3.（）是DNA中才有的含氮碱基。 4.核酸的结构单位是（）。上的（）可以识别mRNA上的密码子。 6. ( )是分子量最小的一类RNA。 7. DNA中( )与胞嘧啶以1?1的比例存在。 8. DNA能形成双螺旋的作用力是( )。 { 年( )和( )提出DNA的双螺旋结构模型。 10.双螺旋的每一转有( )对核苷酸.每转高度为( )nm.。的3′一端都含有( )三个核苷酸具有（）作用。 12.在左旋DNA中主链呈Ｚ字形左向盘绕.直径约为（）埃．螺距（）埃。螺旋的每一转含（）个碱基对.整个分子比较细而伸。． 13.Ｔm值常用于DNA的碱基组成分析.在标准条件下0.165M ?L ΝаCl中)(G-C)%=( )。 14.核酸分子中含有( )和( )所以对波长( )有强烈吸收。 15.一般来说,DNA分子G-C含量高,分子较稳定,同时比重( ),熔解温度( )。变性后,刚性( )粘度( )紫外吸收值( )。 17.核酸研究中,地衣酚(3,5-二羟基甲苯)法常用来测定( ),二苯胺法常用来测定( )。< 18.核酸中参与氢键形成的重要官能团如嘌呤上的( )基( )基及氧原子,嘧啶碱上的( )基及氧原子。 19.四种核苷酸在DNA链中排列的可能方式数目极大,例如由100个核苷酸组成的短链就有( )种不同的排列方式。二．是非题： 1.核酸的基本组成成分是碱基、戊糖和磷酸。只存在于细胞核的染色体中。是遗传信息的载体。是转运核糖核酸.tRNA是信使核糖核酸。 5.细胞内RNA含量最大的是rRNA。 ; 6.核苷中碱基和糖的连接一般是C-C连接的糖苷键。 7.核苷是指碱基与戊糖通过糖苷键连接而成的化合物。 8.嘌呤环的第9位氮原子或嘧啶环的第3位氮原子与戊糖第1位碳原子连接形成的化学键称糖苷键。

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