苦参碱的提取与含量测定
苦参碱的提取与含量测定
摘要：本论文通过单因子试验，研究了乙醇浓度、浸泡时间、浸泡温度、提取次数和液料比对苦参中苦参碱提取率的影响；采用紫外可见分光光度法测定该成分含量，作为评价指标。目的是为了优选苦参中苦参碱的提取条件，测定苦参中苦参碱的含量。最佳条件是：乙醇浓度为60%、浸泡时间为2.5小时、浸泡温度为60℃、提取次数为2次、液料比为12：1，在此最佳工艺条件下苦参碱含量与提取率均较高，苦参中苦参碱的得率为8.89%。优选得到的提取工艺条件，简便易行且稳定性好。
关键词：苦参；苦参碱；提取条件；含量测定
Matrine Extraction and Determination
Abstract: In this paper, single-factor experiment was conducted to study the ethanol concentration, soaking time, soaking temperature, frequency and fluid extraction than expected rate of extraction of matrine in matrine impact; using UV-visible spectrophotometric determination of the ingredients, as the evaluation indicators. The purpose of optimization of the extraction of matrine in matrine conditions, the determination of matrine in matrine content. The best conditions are: 60% ethanol concentration, soaking time of 2.5 hours, soaking temperature of 60 ℃, for 2 times the number of extraction and liquid feed ratio of 12:1, the optimum conditions in the concentration and extraction of matrine rates are higher in Matrine Kushen a rate of 8.89 percent. The optimized extraction conditions, simple and good stability.
Key Words: Kushen; Matrine; extraction conditions; Determination
目录
1 前言 (1)
1.1 苦参碱的特点 (1)
1.2 研究苦参碱的目的和意义 (2)
1.3 国内外研究的状况 (3)
1.3.1 国外研究概况 (3)
1.3.2 国内研究概况 (3)
1.4 本文的研究内容 (5)
1.5 本文的研究目的及意义 (5)
2 实验部分 (5)
2.1 实验仪器及药品试剂 (5)
2.1.1 主要仪器 (5)
2.1.2 药品试剂 (5)
2.2 实验方法 (6)
2.2.1最大吸收波长的选择 (6)
2.2.2标准曲线绘制 (6)
2.2.3样品的测定 (7)
3 结果与分析 (7)
3.1 苦参碱的最大吸收波长选择与标准曲线绘制 (7)
3.2 单因素试验 (9)
3.2.1乙醇浓度对苦参中苦参碱得率的影响 (9)
3.2.2提取次数对苦参中苦参碱得率的影响 (10)
3.2.3浸泡时间对苦参中苦参碱得率的影响 (11)
3.2.4浸泡温度对苦参中苦参碱得率的影响 (11)
3.2.5液料比对苦参中苦参碱得率的影响 (12)
3.3 验证试验 (13)
3.4 苦参中苦参碱理化性质的分析结果 (14)
4 结论 (14)
参考文献 (15)
致谢 (16)
1 前言
生物碱是指从植物中分离出的一类含氮杂环的有机物，具有碱性和显著的生理活性。目前从植物中分离出的生物碱有5000-6000种，一些生物碱因其具有防治病虫害等作用，被开发为植物源农药产品，并成为近年来研究的热点。
适宜的提取方法对制备生物碱农药保持有效成分的活性具有重要意义。随着科技的发展，生物碱提取和纯化方面出现了许多新技术，如微波萃取技术、超临界流体萃取技术、超声萃取技术、膜分离技术、高速逆流色谱等，这些方法使生物碱中有效成分提取率和纯度与常规提取方法相比，均有所提高。
苦参，别名野槐根、山槐根、干人参、苦骨。双子叶植物纲，豆科。落叶亚港灌木。根黄色、奇数羽状复叶，夏季开花，碟形花冠，淡黄色。中医学上以根入药。
根呈圆柱形，微扭曲，外表棕黄色，粗糙，有明显的纵皱纹，皮孔突出，皮薄易脱落，多破碎向外反卷，断面黄色，显纤维，有粉质，中心部微菊花心，味极苦。主产于西昌、德昌、甘洛等县市，年产量10万多公斤，功能清热燥湿，杀虫利尿，主治各种传染性皮肤病和痢疾，痔血、湿热黄痘、是配制各种治疗皮肤药品的主要原料，可根据其药用价值、进一步开发加工增值。
1.1 苦参碱的特点
苦参碱Matrine(Sophocarpidine)：本品系从豆科属植物苦参(Sophora flavescens Ait.)或平科植物广豆根(Sophora subprostrata Chun et T.Chen)中分离出来的生物碱。
性状：苦参碱是白金雀儿碱(lupanine)的异构体，为白色粉末，有四种形态。
a－苦参碱，为针状或柱状结晶，熔点为76度；
β－苦参碱，为斜方晶状体，熔点为87度；
r－苦参碱，为液体，沸点为223度；
&－苦参碱是柱状结晶，熔点为84度。
常见的是a－苦参碱，苦参碱能溶于水、笨、氯仿、甲醇、乙醇，微溶于
石油醚。
苦参碱在1958年首次被分离和确认，是一类独特的生物碱(喹里西啶生物碱，也称羽扇生物碱tetracyclo-quinolizindine alkaloids)，存在于Sophora
类植物中，主要用来治疗癌症，病毒性肝炎，心脏病(例如病毒性心肌炎)，以及皮肤病牛皮癣和湿疹(psoriasis and eczema)。
1.2 研究苦参碱的目的和意义
在我国，乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒携带者有1亿多人，每年治疗经费高达百亿元，严重影响国家的经济发展和人民的身体健康。目前，治疗慢性乙型肝炎的药物颇多，但临床效果高、低不一，临床比较认同的是IFN-α，但因其价格较贵及副作用使其临床应用受限，而苦参素有IFN-α相似的治疗作用，且不良反应少，价格低廉等优点，将是一种极有前途的乙型肝炎治疗药物。
目前公认的具有抗病毒作用的中药主要是苦参素。
苦参素是从苦豆子或苦参中提取的生物碱，其主要成分是氧化苦参碱。祖国传统医学认为其具有清热利湿，退黄利尿之功。
现代药理研究发现苦参素具有以下作用：
a.抑制乙肝病毒的作用。
b.降酶保肝作用。
c.抗肝硬化作用。
d.免疫调节作用。
近10年来，国内、外对氧化苦参碱及苦参碱的研究较多[20]，但仅限于实验研究。1994年，上海市传染病医院研究者发现氧化苦参碱抗麻鸭乙型肝炎病毒作用，经上海市多家医院协作采用氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎结果均取得良好疗效；1996年12月，由卫生部指定的上海医科大学附属华山医院、北京佑安医院完成了40例随机双盲验证及其它有关药效、不良反应的基础论证工作；1998年2月24日，卫生部批准氧化苦参碱为治疗慢性乙型肝炎的五类新药。苦参素注射液，苦参素胶囊和苦参素片是我国自主开发完成、享有完全知识产权的纯天然生物碱类药品，由于疗效可靠，临床使用量迅速增长，
故进一步加强对苦参碱的研究具有重要的社会意义和巨大的经济效益。
1.3 国内外研究的状况
近几年来对苦参碱的研究已得到了突飞猛进的发展，尤其是苦参碱的制备技术和药理性质的研究。
1.3.1 国外研究概况
从苦豆子中提取分离纯化苦参碱，在本世纪30年代起国外学者Oreknov等就已经做了研究。他们采用分级碱化、石油醚中反复溶解、转变为碘氢酸盐的方法来分离提取苦参碱。而在1964 年，外学者Aslunov等首次采用了氧化铝柱层析法来提取分离苦参碱[1]。在1973 年，Mohaxoba 等将苦豆子提取的总生物碱按照极性的大小分成强碱和弱碱，然后用不同极性的溶剂进行萃取，再结合柱层析法进行提取和分离[2]。在1974年，Mohaxoba 又从可溶于石油醚的非极性生物碱中，利用生物碱碱性强弱的不同，用同一溶剂分段萃取，再结合氧化铝柱层析提取分离苦参碱，在1977年Kyhkapob用甲醇提取总生物碱经苯提取后柱层析，提取和分离苦参碱[3]。
1.3.2 国内研究概况
国内对苦参碱的研究起步较晚[19]。在1983年宁夏人名出版社出版的仲仁山著的《苦豆子的研究及其应用》一书中记载了1971年宁夏盐池制药厂赵博光等利用生物碱的极性不同，用不同极性溶剂进行萃取，分为若干部分，再利用氧化铝柱层析和反流分布法进行分离，从而得到苦参碱的工艺。1980年中草药杂志第8期350页公开了同样是赵博光等对苦豆草成熟的种子及花期叶中的苦参碱提取分离的生产工艺进行了初步的研究。认为用甲苯提取分离苦参碱，所得产品纯度高，且具有价廉、易回收的优点[4]。
中国专利公开了《从苦豆子制备苦参碱的工艺》，它是将苦豆子经浸出、提取、转型、沉淀、催化加氢和水相有机萃取，重结晶等工艺步骤，制得苦参碱。高红宁[5]等利用陶瓷膜微滤技术来澄清苦参水提液，李宗效[6]等利用工业甲醇回流提取苦参粉多次后合并提取液过滤，滤液减压蒸馏回收溶剂，然后用亲脂性溶剂
脱脂萃取的方法来提取和分离苦参碱。张存莉[7]等用不同浓度的乙醇和阳离子交换树脂对苦参中苦参碱进行了提取和纯化，并对不同的苦参中的苦参碱的纯化工艺进行了比较和研究。张奎远[8]等利用正交设计对乙醇的浓度、用量、提取时间、提取次数等进行了正交实验确定了苦参中苦参碱的最佳提取工艺。于喜水[9]等做了乙醇法、氨-氯仿法、阳离子交换树脂法三种方法的对比实验，证明了树脂法提取苦参碱收率高、质量好。杨基森[10]等用正交试验对苦参提取、精制工艺条件进行了考察，以苦参碱为定量指针，用薄层扫描法测定不同工艺条件苦参碱含量变化的动向参数，结果表明水提醇沉法损失较大，醇提水沉法损失次之。蔡中琴[11]等也用正交试验对苦参碱的提取工艺进行了优选。试验选择提取溶剂、提取方式、浓缩温度三个因子，每因子三水平，用正交表进行试验设计。结果表明用水作提取剂，采用渗漉法，渗漉液80下浓缩为提取苦参碱的条件。秦学功[12]等也考察了苦豆子中苦参碱的提取工艺。在室温下用稀盐酸水提取苦豆子中苦参总碱，考查pH值、浸提时间、苦豆子粉粒度及保持副压、超声波振荡下总碱浸出率，并对比热浸状况，结果表明稀酸水冷浸条件下苦参总碱浸出率比热浸要高，并且也可加快浸提速度。秦学功[12]等也作了用大孔吸附树脂吸附分离苦参碱的研究，以总生物碱吸附量和解吸率为指标，从大范围筛选树脂，并研究吸附与解吸的优化条件。
随着苦参碱研究的深入，其分析检测方法也得到了很大程度的改进，目前用来分析检测苦参碱的方法主要有以下几种，即酸碱滴定法、安培滴定法、改良REIFER、试剂显色法、毛细管气相色谱法、双波长薄层扫描法、纸色谱法、柱色谱法、分光光度法薄、层色谱法、高效液相色谱法[13]，其中前几种方法操作过程复杂、灵敏度低，在苦参碱的分析测定中不常用。分光光度法也可用于苦参中苦参碱的测定中，但此法也有一定缺陷，在测定中可能会受到其它杂质和色素的干扰而影响了测定结果。因此，此法一般是和薄层色谱法同时运用的。而薄层色谱法自从1958年建立后，应用范围极其广泛。经过各种改进后，基本上代替了纸色谱法。它操作迅速，能以较高的分离性能处理微量物质，此法除特别的挥发性物质外，基本上可用于所有的各种化合物，尤其成为植物成分分析和研究方面不可缺少的实验手段，也是目前对生物碱定性分离的主要方法。具有代表性的有康红英[14]等采用薄层色谱法鉴别和分离了色嗄诺中的苦参碱，证明了此法简便、省时、分离效果好、斑点清晰、结果易判断。陆华[15]等采用薄层扫描法测定了苦参散中苦参碱的含量。高效液相色谱法则在苦参碱含量测定中应用的比较普遍，它可以
将苦参碱与其它副产品完全分离，从而快速、准确的测定苦参碱的含量。具有代表性的有熊英等采用RP-HPLC法测定了龙凤洁身纯中苦参碱和蛇床子素的含量，证明此法灵敏、准确。
1.4 本文的研究内容
本论文通过单因子试验，对苦参中苦参碱的提取工艺条件进行了研究，研究了乙醇浓度、浸泡时间、浸泡温度、提取次数和液料比对苦参中苦参碱提取的影响；采用紫外可见分光光度法测定该成分含量，作为评价指标。以期为苦参的精深加工与利用和苦参中苦参碱的生物学活性研究与应用提供依据。
1.5 本文的研究目的及意义
通过对苦参中苦参碱的提取工艺的研究，选择提取苦参中苦参碱的最佳提取条件。苦参素在治疗慢性乙型肝炎中有同IFN-α相似的治疗作用，且不良反应少，价格低廉。研究苦参中苦参碱的提取，可以为苦参素的制造和治疗慢性乙型肝炎提供依据。
2 实验部分
2.1 实验仪器及药品试剂
2.1.1 主要仪器
UV-7504紫外-可见分光光度计：上海欣茂仪器有限公司；DF-101S磁力搅拌器：金坛市岸头国瑞实验仪器厂；HHS数字恒温水浴锅：天津华北实验仪器有限公司；FA1004电子天平：上海恒平科学仪器有限公司；NOKIA1200计时器：北京诺基亚制造厂。
2.1.2 药品试剂
（1）苦参碱标准品：购自郑州永和制药有限公司
（2）苦参：购自运城市药材市场
（3）溴麝草酚兰pH=7.6缓冲液：精确称取溴麝草酚兰0.125g，加入到依式子“65.0X+435.0Y+水=1000mL，X: 0.2mol/L的磷酸二氢钠，Y: 0.2mol/L的磷酸氢二钠”配制的溶液中，振摇。
（4）碘化汞钾溶液：二氧化汞1.36g，加水60mL使之溶解。另取碘化钾5g，加水10mL使之溶解。将两种液体混合，加水稀释至1000mL。
（7）0.2mol/L的磷酸二氢钠：精确称取磷酸二氢钠 3.1202g，加水稀释，定容于100mL的容量瓶中。
（8）0.2mol/L的磷酸氢二钠：精确称取磷酸氢二钠14.196g，加水稀释，定容于100mL的容量瓶中。
（9）二氧化汞，碘化钾，无水乙醇，氯仿
以上所用试剂均为分析纯。
2.2 实验方法
2.2.1最大吸收波长的选择
精确称取苦参碱标准品250mg，置于25mL容量瓶中，用无水已醇定容，摇匀。精密吸取标准品溶液4.0mL，置于10mL容量瓶中，用无水已醇稀释至刻度线，摇匀。再吸取稀释液2mL于三角烧瓶中，加5mL pH=7.6的溴麝草酚兰缓冲溶液和10mL氯仿，密塞，振摇2min，移入50mL分液漏斗中，静置30min，分出氯仿层于具塞比塞管中。
空白试剂以2mL无水乙醇代替标准品稀释液，其他步骤同上。
2.2.2 标准曲线绘制
精确称取苦参碱标准品250mg，置于25mL容量瓶中，用无水已醇定容，摇匀。分别精密吸取标准品溶液1.0、2.0、3.0 、4.0、 5.0mL,置于10mL容量瓶中, 用无水已醇稀释至刻度线，摇匀。再分别吸取稀释液2mL于5个三角烧瓶中，各加5mL的pH=7.6的溴麝草酚兰缓冲溶液和10mL氯仿，密塞，振摇2min，移入50mL 分液漏斗中，静置30min，分出氯仿层于具塞比塞管中。
空白试剂以2mL无水乙醇代替标准品稀释液，其他步骤同上。
2.2.3样品的测定
精确取样品提取液2mL，加5mL pH=7.6的溴麝草酚兰缓冲溶液和10mL氯仿，密塞，振摇2min，移入50mL分液漏斗中，静置30min，分出氯仿层于具塞比塞管中。在波长410nm处测定苦参碱的A值。重复3次，取其平均值。根据标准曲线方程求出提取物中苦参碱的含量，按下面方法计算苦参碱得率。
苦参碱得率= 苦参碱质量/苦参质量×100%
3 结果与分析
3.1 苦参碱的最大吸收波长选择与标准曲线绘制
将 2.2.1所制得的药剂置入紫外-可见分光光度计中，测定其不同波长的吸光度。重复3次，求其平均值。
表1. 苦参碱的最大吸收波长选择
波长（nm）吸光度(A) 平均值(A) 380 0.540 0.335 0.277 0.384
390 0.579 0.360 0.276 0.405
395 0.594 0.374 0.264 0.411
400 0.590 0.404 0.261 0.418
410 0.597 0.425 0.268 0.430
415 0.580 0.406 0.264 0.417
将2.2.2所制得的药剂置入紫外-可见分光光度计中，测定其在特定波长的吸光度。重复3次，求其平均值。
表2. 苦参碱的标准曲线绘制
浓度（μL/mL ）
吸 光 度(A)
平均值(A) 1 0.124 0.133 0.132 0.130 2 0.279 0.272 0.259 0.270 3 0.401 0.362 0.353 0.372 4 0.511 0.493 0.481 0.495 5
0.706
0.627
0.607
0.647
由图1可知，苦参碱与溴麝草酚兰反应物在波长410nm 处有最大吸收，与文
献报道基本一致，故选择410nm 为测定波长。继续在410nm 处测定各个浓度的吸光度，以浓度（μL/mL ）为横坐标，吸光度（A ）为纵坐标，得回归方程为：Y=0.1259X+0.0051，R 2=0.9960（见图2）。
3.2 单因素试验
3.2.1 乙醇浓度对苦参中苦参碱得率的影响
分别准确称取5.0g 苦参于5个烧杯中，再分别向其中加100%、80%、60%、40%、20%的乙醇20mL ，浸置3小时，过滤，测定其滤液吸光度（方法同2.2.3）。
表3. 乙醇浓度对苦参碱得率影响表
瓶号 吸 光 度(A)
平均值(A) 得率（%） 1
0.790 0.818 0.827 0.811 2.563 2 1.342 1.339 1.337 1.339 4.239 3 1.692 1.568 1.557 1.606 5.085 4 1.336 1.334 1.317 1.329 4.206 5 1.477
1.475
1.474
1.475
4.671
图3. 乙醇浓度对苦参碱得率影响图
由图 3不同乙醇浓度对苦参碱得率的影响可知，在乙醇浓度40%-60%范围内，随着浓度的增加，苦参碱得率逐渐升高，当浓度超过60%
，得率开始下降。这是
由于此浓度的乙醇溶液和苦参碱的极性相差开始加大，进而导致苦参碱得率下降。因此，提取所用乙醇浓度为60%。
3.2.2提取次数对苦参中苦参碱得率的影响
分别准确称取5.0g苦参于5个烧杯中，各向其中加入60%的乙醇33.3mL，再分别浸泡1、2、3、4、5次，每次一小时，过滤，测定滤液吸光度（方法同2.2.3）。
表4. 提取次数对苦参中苦参碱得率的影响表
提取次数吸光度(A) 平均值(A) 得率（%）
1 1.063 0.994 0.993 1.017 5.315
2 0.834 0.795 0.782 0.804 8.448
3 0.490 0.469 0.46
4 0.474 7.447
4 0.28
5 0.272 0.260 0.272 5.655
5 0.201 0.195 0.198 0.198 5.102
由图4提取次数对苦参碱得率的影响结果可知，并不是提取次数越多，苦参碱得率就越高。提取2次，苦参碱得率最高。提取次数再增加，得率不但不升，反而开始下降。这是由于溶剂增加以及其他杂质的溶出，导致苦参碱浓度下降，进而使得率略微下降。故提取的最佳次数为2次。
3.2.3浸泡时间对苦参中苦参碱得率的影响
分别准确称取5.0g苦参于6个烧杯中，各向其中加入60%的乙醇33.3mL ，再分别浸泡1.0、1.5、2.0、2.5、3.5、5小时，过滤，测定滤液吸光度（方法同2.2.3）。
表5. 浸泡时间对苦参中苦参碱得率的影响表
浸泡时间吸光度(A) 平均值(A) 得率（%）1.0小时 1.063 0.994 0.993 1.017 5.351
1.5小时 1.046 1.032 1.017 1.032 5.430
2.0小时 1.181 1.150 1.144 1.158 6.101
2.5小时 1.561 1.489 1.481 1.510 7.963
3.5小时0.945 1.069 1.081 1.032 5.430 5.0小时0.928 0.918 0.903 0.916
4.820
图5. 浸泡时间对苦参中苦参碱得率的影响图
由图5浸置时间对苦参中苦参碱得率的影响可知，浸置2.5小时之内，得率增加，时间延长，得率开始下降。这可能是由于2.5小时时，被提取的苦参碱浓度最大，时间再延长，其浓度虽可继续增加，但过高的浓度导致苦参碱被分解、破坏，进而苦参碱得率下降。所以，综合作用结果，浸置2.5小时,得率最高。
3.2.4浸泡温度对苦参中苦参碱得率的影响
分别准确称取2.0g苦参于4个三角烧瓶中，各向其中加入50%的乙醇10.0mL，
分别置于30℃、40℃、50℃、60℃的水域中，浸置3.5小时，过滤，测定滤液吸光度（方法同2.2.3）。
表6. 浸泡温度对苦参中苦参碱得率的影响表
浸泡温度吸光度(A) 平均值(A) 得率（%）30℃0.836 0.830 0.832 0.833 3.287 40℃ 1.190 1.156 1.142 1.163 4.597 50℃ 1.379 1.221 1.191 1.264 4.998 60℃ 1.468 1.472 1.400 1.447 5.725
图6. 浸泡温度对苦参中苦参碱得率的影响图
为了更好确定温度与得率的关系，选用不同的温度进行提取。由图6浸泡温度对苦参中苦参碱得率的影响可知，随着浸泡温度的升高，得率增加。
3.2.5液料比对苦参中苦参碱得率的影响
分别准确称取 2.0g[18]苦参于5个三角烧瓶中，各向其中加入50%的乙醇8.0mL、10.0mL、16.0mL、20.0mL、24.0mL，常温下浸置1.0小时，过滤，测定滤液吸光度（方法同2.2.3）。
表7. 液料比对苦参中苦参碱得率的影响表
液料比吸光度(A) 平均值(A) 得率（%）
4 0.417 0.556 0.581 0.518 1.630
5 0.47
6 0.496 0.505 0.492 1.935
8 0.556 0.530 0.503 0.530 3.333
10 0.552 0.513 0.464 0.510 4.007
12 0.483 0.436 0.385 0.435 4.078
图7. 液料比对苦参中苦参碱得率的影响图
不同的液料比对苦参中苦参碱得率的影响结果见7图。从图6可以看出，在所选液料比试验范围内苦参碱的得率随液料比增加而升高，当液料比为12：1时，苦参碱得率最高。因此，液料比选12：1为最佳。
3.3 验证试验
在上面确定的最佳提取工艺下进行验证试验。准确称取2.0g苦参于三角烧瓶中，加入24mL60%的乙醇，置于60℃的水域中，浸置2.5小时，过滤，提取2次，测定滤液吸光度（方法同2.2.3）。
表8. 上面确定的最佳提取工艺下进行验证试验
吸光度(A)平均值(A)得率（%）
0.465 0.448 0.501 0.471 8.89
由表8.上面确定的最佳提取工艺下进行验证试验可知，在此工艺下测定的苦参碱得率最高，稳定且可靠[16]。
3.4 苦参中苦参碱理化性质的分析结果
取苦参中苦参碱滤液1mL，加碘化汞钾试液，立即产生明显淡黄色沉淀，表明提取物为苦参碱。滤液冻干后为浅棕黄色粉末，略有豆腥味、微溶于高浓度的乙醇、氯仿、甲醇、丙酮等有机溶剂[21]。
4 结论
本论文以不同浓度的乙醇为提取剂，通过单因子试验，研究了乙醇浓度、浸泡时间、浸泡温度、提取次数和液料比对苦参中苦参碱提取的影响；采用紫外可见分光光度法测定该成分含量，作为评价指标[17]。得到了如下结论：乙醇浓度为60%、浸泡时间为2.5小时、浸泡温度为60℃、提取次数为2次、液料比为12：1，在此最佳工艺条件下苦参碱含量与提取率均较高，得率为8.89%。
参考文献
[1] A. Ueno et al. Studies on Lupin Alkaloids VI. Isolation and structure of (+)-Isomatrine[J]. Chem. Parma. Bull.1975, 23(11): 2560.
[2] 詹原尧.苦参生物碱-苦参碱和氧化苦参碱的提取、分离[J].天津药学，1991,12 (3): 7-10.
[3] 赵玉英，庞青云，刘京渤，等.苦参生物碱的研究[J].天然产物研究与开发，1994，6（1）:10-13.
[4] 王秀坤，李家实，魏璐雪.苦参挥发油成分的研究[J].中国中药杂志，1994,19 (9): 552-553.
[5] 袁黎明，傅苦农，张天佑.高速逆流色谱在植物有效成分分离中的应用[J].药物分析杂志，1998, 18(1): 60-64.
[6]胡爱军，丘秦球.物理场强化萃取新技术及应用[J].安徽化工，2002,126-29.
[7]赵玉英，郭敏杰，王那，等.苦参中生物碱含量测定[J].北京医科大学学报，1992, 24(5): 419-420.
[8]姚三桃，张启伟.气相色谱法测定抗类风湿胶囊中苦参碱含量[J].中成药，1994, 16 (8 ): 17-18.
[9]赵晓莉.碱化条件对基地收率的影响[[J].黑龙江商学院学报(自然科学报)，2000, 16(1):9-11.
[10]王宇.苦参化学、工艺、制剂及质量研究近况[J].中成药，1997, 19 (4):39-41.
[11]李尧.中药，新世纪的形象L程[J].生物医药世界，2001, (2): 6-7
[12]林家齐，孙晶华，傅荔韬.磁场对水结构的影响[J].哈尔滨电工学院学报，1996, 19 (4): 470-472.
[13]刘志，毕鸿亮.应用紫外分光光度法测定苦参总碱的含量田.黑龙江医药，2001，14 (3):174-175.
[14]黎海彬，李琳，郭祀远，等.药用植物有效成分提取技术[J].现代化工，2000, 22 (5 ): 59-62.
[15]房微，房继忠.苦参素提取分离工艺方法研究[J].兰州医学院学报，1991，17(1):17-20
[16]蔡中琴.用正交试验法优选苦参中苦参碱的最佳提取工艺.中药材，1998，21 （4）：204-205
[17]常琪等.中国中药杂志，1998，2（9）：554-555
[18]杜保民等.苦豆根生物碱的研究.西北药学杂志，1989，4（2）15-16
[19]黄秀梅等.苦豆子类生物碱的药理学研究进展.中国药事，2002 ，16 （3）：175-177
[20]李典鹏等.广西植物，2000，20（3）：270-276
[21]刘程等.食品添加剂实用大全.北京：北京工业大学出版社，1994
致谢
本论文是在老师杨美玲和崔东亚的悉心指导下才得以顺利完成的。老师严谨的治学态度，忘我的工作精神始终是我学习的榜样和前进的动力。恩师的言传身教，学生将受益终生，再次深表衷心的感谢和崇高的敬意!
同时，我也要感谢运城学院应用化学系的各位老师和领导对我学习、生活的关心与帮助。四年来，他们一直关心我的成长，再次表示深深谢意。四年来，我也得到0501班各位同学的帮助和支持。共同的学习和生活，使我们建立了深厚的友情，再次一并感谢!
再次，我要深深感激我的家人。在我多年求学生涯中，给予我巨大的物质资助和精神支持，他们的恩情我将铭记在心!
最后再次向所有关心、帮助和支持我的老师、同学、家人和朋友们表示深深的感激和谢意!
中草药中生物碱的提取与分离
工艺与设备 中草药中生物碱的提取与分离 蔡艳华赵红卫钟本和 (四川大学化工学院,成都,610051) 摘要 生物碱是许多中草药的有效成分。因其具有广泛的生理功能,引起了人们的关注。本文综述了近年来不同的提取和分离方法在生物碱中的应用原理。指出了各方法的优缺点及其今后发展的方向。 关键词:中草药生物碱提取纯化 1前言 生物碱是动植物中一类具有碱性的含氮物质。它们大多是极有价值的药物。中草药含有很多种生物碱,中草药的疗效大多是由所含的生物碱而来。 近年来生物碱作为中草药中的有效成分之一成为研究的热点。提取工艺是生物碱工业化生产的首要环节,特别是其提取和分离操作[1]。传统的生物碱提取分离方法能耗、物耗大,杂质多,效率低。针对这种情况,众多学者从不同角度对中药材中生物碱的提取分离进行了优化和改进[3)22]。本文就生物碱的提取分离技术,特别是几种新兴技术进行了综述。 2生物碱的提取方法 211传统提取方法 绝大多数生物碱是利用溶剂提取法进行提取。生物碱在溶剂中的溶解符合/相似相溶0的规律。极性强的生物碱亲水性较强,易溶于极性溶剂;弱极性生物碱亲脂性较强,易溶于弱极性溶剂。游离的生物碱大多亲脂性较强,而生物碱盐一般亲水性较强。按极性强弱可将生物碱提取溶剂分为极性溶剂、半极性溶剂和非极性溶剂[2]。 21111极性溶剂 极性溶剂有水、甘油、二甲亚砜等。水是最常用的强极性溶剂。具有碱性的生物碱在植物体中多以盐的形式存在,可直接以水作为提取溶剂。而弱碱性或中性生物碱则以不稳定的盐或游离的形式存在,这部分生物碱的亲水性比较弱,为增加其溶解度,可以采用酸水为提取液,使生物碱与酸生成盐而溶出。水提取物不易稳定,易染菌,此外含果胶,黏液质类成分的水提物难于过滤,影响分离操作。 21112半极性溶剂 半极性溶剂有乙醇、丙酮、丙二醇等。乙醇是最常用溶剂,游离的生物碱及盐类一般都能溶于乙醇。它可与水、甘油、丙二醇以任意比例混溶提取生物碱。有时也可采用醇酸溶液作提取剂。 21113非极性溶剂 非极性溶剂有乙醚、石油醚,氯仿、脂肪油、乙酸乙酯、液体石蜡等。以盐的形式存在于植物细胞中的生物碱采用非极性溶剂提取时,必须先使生物碱转变成游离碱后再用溶剂提取。非极性溶剂提出的总生物碱一般只含有亲脂性生物碱,不含水溶性生物碱。这种方法得到的生物碱杂质较少,易于进一步纯化。但溶剂渗入能力较弱,需反复提取。 溶剂提取法按具体操作可分为浸渍法、渗漉法、煎煮法、热回流法和连续回流法(索氏提取法)。21114浸渍法 浸渍法是将处理过的药材用适当的溶剂在常温
苦参碱Matrine
苦参碱Matrine [编辑本段] 植物来源 ：豆科植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根。 英文名称：Matrine [编辑本段] 别名 ：母菊碱 [编辑本段] 苦参的生物学基本特性. 中文科名(Family Name)：豆科(leguminous plants) 来源品名(Botanical Origin):苦参Sophora japonica (kushen,Sophora flavesc ens Ait.)；Lighiyellow Sophora Root；豆科植物苦参Sophora flavescens Ait．的根。 其他来源：山豆根Sophora subprostrata (shandougen)，以及Sophora alope curoides地上部分 一般中文名：苦参(Sophora japonica (kushen))；sophoraal opecuraidesl；So phora flavescens Ait. 学名:Sophora japonica 英文名：(英)Sophora japonica(kushen),Sophora alopecuroides L.；Radix S ophorae Flavescentis 中文别名：别名苦甘草、苦参草、苦豆根,西豆根,苦平子,野槐根、山槐根、干人参、苦骨。 中文品名：苦参提取物Lighiyellow Sophora Root P.E.:苦参碱(Matrine,C15H2 4N2O)98%HPLC 中文品名：苦参提取物Lighiyellow Sophora Root P.E.:氧化苦参碱(苦参素)(ox ymatrine,C15H24N2O2)98%HPLC [编辑本段] 化学成分: 国外早在30年代初苏联开始研究，国内开始于1972年，国内外研究的重点均放在生物碱上，目前国内自苦参植物中提取、分离、鉴定的生物碱主要有氧化苦参碱(oxymatrine,C15H24N2O2),苦参碱(Matrine,C15H24N2O),异苦参碱(Iosmatrine,C1
苦参碱实验
实验一 氧化苦参碱的提取分离和鉴定 一．实验目的与要求 1. 掌握渗漉法的原理、操作与影响因素，了解离子交换树脂的结构、性质及使用方法。 2. 掌握连续回流提取法的原理、特点及仪器的使用方法。 3. 学习粗提物的纯化方法，学会分析纯化过程中所应用的原理。 4. 进一步理解对粗品进行检识的意义及方法。 5. 学习制备性薄层色谱及闪柱色谱的操作，了解色谱条件的选择方法及影响分离度的因素。 二．实验方法 （一）概述 中药苦参是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根，有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。苦参中主要生物碱有：苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定 (3)、槐果碱(4)，结构如图1。氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。 氧化苦参碱13C-NMR 数据： 68.7(C-2), 17.0(C-3), 25.9(C-4), 34.3(C-5), 66.6(C-6), 42.4(C-7), 24.4(C-8), 17.0(C-9), 69.1(C-10), 52.8(C-11), 28.3(C-12), 18.5(C-13), 32.7(C-14), 169.8(C-15), 41.6(C-17)。 苦参碱 氧化苦参碱 槐定 槐果碱 表11-1 主要苦参生物碱的理化性质 中英名称 分子式 性状 mp(℃) 旋光 溶解度 N N O
苦参碱(matrine) C15H24N2O 白色针状 结晶 76 +39.11° 易溶于醇、氯仿，溶于 乙醚、苯，难溶于水 氧化苦参碱(oxymatrine) C15H24N2O2白色方晶207-208 +47.7° 易溶于水、乙醇、甲醇、 氯仿，不溶于乙醚、苯 槐定 (sophoridine) C15H24N2O 白色棱晶106-108 槐果碱 (sophocarpine) C15H22N2O 白色棱晶80-81 -29.44°同上从苦参中提取生物碱一般用水、酸水或醇提法，粗提物用树脂法或酸碱法纯化，分离方法多用氧化铝或硅胶柱层色谱。 （二）操作步骤 1．离子交换树脂的预处理 将70g聚苯乙烯磺酸型树脂(交联度3%)，放入烧杯中，加200ml 80℃的蒸馏水溶胀30分钟，倾出蒸馏水后加入2mol/L盐酸300ml，充分搅拌，放置半小时(静态转型)，后装入树脂柱(2cm×100cm)，并使全部酸水溶液通过树脂柱(动态转型)，流出液的速度以液滴不成串为宜。后用蒸馏水洗至中性，待用。注意从装柱到洗涤过程中始终保持液面高于树脂床。 2．总生物碱的提取与纯化 称苦参根的粉末200g，加入260ml左右0.5%的盐酸湿润，搅匀，放置20分钟后装入渗漉筒，加入适量0.5%盐酸至下口有溶液流出且筒内无气泡。 将渗漉筒与树脂柱相连，计算渗漉速度。然后以合适的流速开始渗漉和离子交换，实验开始时及每过1小时之后检查渗漉液和交换液的pH值和生物碱反应，并讨论其变化的原因。当生物碱提取完全或树脂完全饱和时终止实验。 停止渗漉后，用蒸馏水洗树脂至中性，倾出水层，将树脂倒入搪瓷盘中，铺平，空气中晾干。 将晾干的树脂称重后放入烧杯中，加14%的氨水湿润(使树脂充分溶胀又无过剩的水)，加盖，静置20分钟，装入沙氏提取器，用300ml 95%乙醇回流提取生物碱约6小时，中间注意检查生物碱是否已被提取完全。停止实验后，将树脂回收，提取液置500ml三角瓶中保存。 3．氧化苦参碱粗品的获得 将乙醇提取液常压回收乙醇至小体积（6ml左右），加入70ml~80ml氯仿溶解，转入分液漏斗中，静置分层，分出氯仿层，油状物另外保存。氯仿溶液用无水硫酸钠干燥1~2小时(注意干燥过程中经常振摇)，回收氯仿至干。残留物用丙酮析晶，即析出黄白色固体，放置，抽滤，用少量丙酮洗涤，得氧化苦参碱粗品，交给老师，放干燥器中干燥，母液放置待用。氧化苦参碱粗品用丙酮重结晶可得其精品。 4．氧化苦参碱的分离
苦参生物碱的提取分离与鉴定最终版
实验五苦参生物碱的提取分离与鉴定 苦参是豆科槐属植物苦参的干燥根，含有多种生物碱，总碱含量高达约1%，其中以苦参碱、氧化苦参碱含量最高。苦参碱可溶于水、乙醚、三氯甲烷、苯，难溶于石油醚。氧化苦参碱为白色柱状结晶，可溶于水、三氯甲烷、乙醇‘难溶于乙醚、石油醚。现代药理学研究表明，苦参中的生物碱具有消肿利尿、抗肿瘤和抗心律失常的作用。 一、实验目的 本实验通过从苦参中提取苦参生物碱，考察盐酸的浓度和渗漉速度对提取产率的影响 了解化学反应萃取分离在天然药物提取过程中的应用 掌握渗漉法和离子交换提取生物碱的原理、方法与工艺过程，并熟悉用柱层析法分离生物碱。 二、实验内容 （1）苦参总碱的提取。 ①将苦参粗粉用不同浓度的HCl溶液润湿后渗漉，收集渗漉液； ②将收集的渗漉液通过阳离子交换树脂柱，进行离子交换； ③洗脱并回流提取苦参总碱。 （2）分别用柱层析法和溶解度差异法分离氧化苦参碱。 三、实验时间 步骤所需时间/h 渗漉 2 离子交换 2 回流 5 柱层析（或溶解度差异法） 2.5
鉴定0.5 四、实验原理 1.提取与分离方法 利用苦参生物碱具有弱碱性，可与强酸结合成易溶于水的盐的性质，将总碱从药材中提取出来。结合动态连接提取工艺过程，实现生物碱充分溶出。然后，加碱碱化，即可得到苦参生物总碱。以苦参碱为例： 2. 工艺流程
五、实验材料与设备 1. 实验设备与仪器 层析柱，渗漉桶，烧杯，布氏漏斗，医用搪瓷盘，恒温水浴箱，层析槽，索氏提取器，研钵。 2.实验材料与试剂 苦参，强酸性阳离子树脂，层析用氧化铝，三氯甲烷，甲醇，浓氨水，乙醚，碘化铋钾，盐酸，氢氧化钠。 碘-碘化钾试剂，碘化汞钾试剂，碘化铋钾试剂，硅钨酸试剂。 六、实验步骤 1.反应提取步骤 （1）动态连续提取 ①取苦参粗粉200g加一定浓度的盐酸，拌匀，放置30min,使生药膨胀。 ②然后装入渗漉桶中，边加边压，层层加紧，全部装完后，药面压平，盖一层滤纸，滤纸上压一些洗净的玻璃塞。 ③加入一定浓度的HCl溶液经过药面，以4~5mL/min的速度渗漉，收集渗漉液至无明显的生物碱反应为止，收集渗漉液约2500mL。 （2）交换 ①将收集的渗漉液置于阳离子交换树脂进行交换，如交换液有为交换的生物碱时，仍可以继续交换，直至流出液无生物碱反应为止。 ②将树脂倾入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，除去杂质，于布氏漏斗中抽干，倒入唐磁盘中晾干。 （3）总生物碱的洗脱 ①将晾干的树脂，加浓氨水适量，搅匀，使湿润度适宜，树脂充分膨胀，盖好放置20min。 ②装入索氏提取器中，加三氯甲烷300mL在水浴上回流洗脱，提至尽生物碱为止。 ③回收三氯甲烷，得棕色粘稠物。 ④加无水丙酮适量，加热溶解，过滤，减压蒸干。 必要时重复此操作，以脱除粗生物碱中的水，再在无水丙酮中重结晶。2．氧化苦参的分离 （1）柱色谱法取100目色谱用氧化铝50g，用漏斗缓慢加入色谱柱内（1cm ×24cm，干法装柱），取苦参0.2g，加入适量氧化铝，搅匀，研细，装入色谱柱顶端，先用50ml三氯甲烷通过色谱柱，再用三氯甲烷-甲醇（9:1）洗脱，流速
氧化苦参碱提取工艺研究
苦参中氧化苦参碱的提取工艺研究 摘要目的：利用正交试验，确定最佳提取工艺，并考察阳离子交换树脂法精制苦参中氧化苦参碱的效果，且与其它大孔树脂法进行了比较。方法：采用HPLC法测定氧化苦参碱的含量。结果：确定最佳工艺，即用10倍量于药材的1%醋酸溶液提取，两小时三次，用001×4强酸型阳离子交换树脂法较大孔树脂法可更有效的保留有效成分、去除杂质。结论：优选得到的工艺简便易行。 关键词苦参；氧化苦参碱；正交试验；阳离子交换树脂 Study on different extraction process of oxymatrine in Radix Sophora flavescens Abstract Objective: To study the effect of cation exchange resin method in fefining of oxymatrine in Sophora flavescens, and to compare the results with that of macroporous resin. Orthogonal test was used to optimize the technology for extracting oxymatrine. Mehtods: HPLC was applied to analyze the content of oxymatrine in the samples. Results: The optimal extraction technology was as follows: the medicinal mateial was refluxed with 1% acetum for three times and each time was 2 hours. 001×4 cation exchange resin method was more effective than macroporous resin for refining oxymarine in Sophora flavescens. Conclusion: This optimized method is simple and efficient. Key words Radix Sophora flavescens; oxymatrine; orthogonal test; cation exchange resin 苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Art.的干燥根，有清热燥湿，杀虫，利尿之功效。主要成分为氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱等多种生物碱类成分。现代研究表明，氧化苦参碱具有抗心律失常，抗癌及抗衰老等活性。目前，如何高效、快速提取、分离、纯化氧化苦参碱，满足其在医药、化妆品、植物生长调节剂等方面的不断增长的大量需求，研究不足，而且产品的纯度等方面均达不到要求，影响其药理活性的发挥和进一步的开发利用。本文以氧化苦参碱为考察对象，对苦参的不同提取工艺进行比较，优选出氧化苦参碱的最佳提取工艺。 1 实验材料及仪器 1.1 实验材料 苦参，购于河北省安国，氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所）；001
两相滴定法测定苦参片中苦参碱的含量_王以明
天然产物研究与开发 2003 Vo1.15 No.3NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEV ELOPMEN T 两相滴定法测定苦参片中苦参碱的含量 王以明 张 勇 汪模辉 邓天龙 (成都理工大学材料与生物工程学院 成都 610059) 摘 要 用两相滴定法测定苦参片中苦参碱的含量。用NaCl饱和溶液为水相,含苦参碱的CHCl3为有 机相,011%邻氯酚红为指示剂,在两相溶液中加入定量的酸标准液,充分振摇后,用标准碱液剩余滴定。 加标回收,测定6次,平均回收率为:99167%;RSD为1.86%(n=6)。 关键词 两相滴定;苦参碱;测定 苦参碱常用的测定方法有:酸碱滴定法、高效毛细管电泳法[1](HPCE)、薄层扫描法[2]、高效液相色谱法[3,4](HPLC)等。本实验采用两相滴定法测定苦参片中苦参碱的含量。它克服了传统酸碱滴定法中操作复杂的特点,其实验结果表明,本法结果准确,重现性好。精密度较高。 1 仪器及试剂 分析天平(上海天平仪器厂) 苦参碱对照品(购自中国药品生物制品检定所) 苦参片(贵州的确神药业有限公司) H2SO4标准液(0.01322mol/L) NaOH标准液(0.01934mol/L) 011%邻氯酚红 其它试剂均为分析纯 2 实验方法 211 薄层条件及苦参碱的定性检测 层析板:硅胶GF254加适量013%CMC2Na,搅拌均匀后,将其铺在10cm×20cm的薄玻璃板上,厚度为0.5mm,110℃活化30min。展开剂:氯仿—甲醇—氨水(50∶6∶2)上展开,展距为14cm,在制备好的层析板上,分别点样品和苦参碱对照品,展开后,以改良的碘化铋钾喷雾显色,测定其比移值。确定样品成分为苦参碱。 212 苦参碱对照品液的制备 精密称取苦参碱对照品5.0mg,加氯仿适量转移至10ml容量瓶中并稀释至刻度。 213 苦参片样品液的制备 取5片苦参片,去糖衣,用研钵研细并混匀,精密称重,置于100ml磨口三角瓶中,准确加入乙醇(70%)约50ml,塞紧,振摇,放置过夜,过滤,洗涤,合并滤液。在60℃恒温蒸至近干,用012%HCl使其充分溶解并过滤。将滤液用25%的氨水调p H为8～9,用CHCl3萃取至无生物碱,再用脱脂棉过滤CHCl3层,定容,待用。 214 样品测定 取苦参片样品液10.00ml,加入10.00mlNa2 Cl,准确加入10.00mlH2SO4标准液,充分振摇后,滴加2～3滴邻氯酚红指示剂,然后用NaOH标准液滴定。其结果见表1。 表1 苦参片中苦参碱的含量 Table1 The content of matrine in the tablet of Sophora Flavescens 样品Samples 苦参碱(mg/ml) Matrine(mg/ml) 批内RS D(%) In batch RS D(%) 批间RS D(%) Among batchs RS D(%) 苦参碱(Matrine) 每片平均重Average weight(mg) 10.78 1.05 20.750.99 1.3815.36 30.770.85 40.76 1.01 收稿日期:2003203210 修回日期:2003203226 942
苦参碱农药说明书
苦参碱农药说明书 篇一：苦参碱的用途——小麦田杀虫剂 苦参碱的用途——小麦田杀虫剂 临床药用 1、利尿作用苦参作为药用植物，在我国据文字记载已经有两千多年的历史，主要功用具有清热、利尿、杀虫、祛湿等功效，同时还具有抗病毒、抗肿瘤抗过敏等多种作用。 2、抗病原体作用煎剂在试管中，高浓度(1:100)对结核杆菌有抑制作用。煎剂(8%)水煎剂在体外对某些常见的皮肤真菌有不同程度的抑制作用。 3、其他作用苦参碱注射于家兔：发现中枢神经麻痹现象，同生痉挛，终由呼吸停止而死。注射于青蛙：初呈兴奋，继则麻痹，呼吸变为缓慢而不规则，最后发生痉挛，以致呼吸停止而死。其痉挛的发作系起因于脊髓反射。 4、氧化苦参素碱的抗乙型和丙型肝炎病毒效应氧化苦参素碱在体外和在动物模型中显示对HBV有强有力的抗病毒活性，在人体内同样具有抗HBV作用，已有不少的报道用于治疗慢性病毒性肝炎。农业方面的应用 在农业中使用的苦参碱农药实际上是指从苦参中提取
的全部物质，叫苦参提取物或者苦参总碱。近几年在农业上广泛应用，且有良好的防治效果，是一种低毒、低残留、环保型农药。主要防治各种松毛虫、茶毛虫、菜青虫等害虫。具有杀虫活性、杀菌活性、调节植物生长功能等多种功能苦参碱作为生物农药的特点： 首先苦参碱是一种植物源农药，具有特定性、天然性的特点，只对特定的生物产生作用，在大自然中能迅速分解，最终产物为二氧化碳和水。其次苦参碱是对有害生物具有活性的植物内源化学物质，成分不是单一的，而是化学结果相近的多组和化学结构不相近的多组的结合，相辅相成，共同发挥作用。第三，苦参碱因为多种化学物质共同作用，使其不易导致有害物产生抗药性，能长期使用。第四，对相应的害虫不会直接完全毒杀，而是控制害虫生物种群数量不会严重影响到该植物种群的生产和繁衍。这种机理和在化学农药防护副作用凸显后经过几十年研究得出的综合防治体系中有害生物控制的原则是十分近似的。综上四点可以说明苦参碱与一般高毒、高残留的化学农药有着明显区别，是十分绿色、环保的。 绿禾宝的麦霸就是例证以苦参碱为有效成份的小麦田杀虫剂。 效果最好的小麦杀虫剂 - 麦霸
苦参碱的提取与含量测定
苦参碱的提取与含量测定 摘要：本论文通过单因子试验，研究了乙醇浓度、浸泡时间、浸泡温度、提取次数和液料比对苦参中苦参碱提取率的影响；采用紫外可见分光光度法测定该成分含量，作为评价指标。目的是为了优选苦参中苦参碱的提取条件，测定苦参中苦参碱的含量。最佳条件是：乙醇浓度为60%、浸泡时间为2.5小时、浸泡温度为60℃、提取次数为2次、液料比为12：1，在此最佳工艺条件下苦参碱含量与提取率均较高，苦参中苦参碱的得率为8.89%。优选得到的提取工艺条件，简便易行且稳定性好。 关键词：苦参；苦参碱；提取条件；含量测定
Matrine Extraction and Determination Abstract: In this paper, single-factor experiment was conducted to study the ethanol concentration, soaking time, soaking temperature, frequency and fluid extraction than expected rate of extraction of matrine in matrine impact; using UV-visible spectrophotometric determination of the ingredients, as the evaluation indicators. The purpose of optimization of the extraction of matrine in matrine conditions, the determination of matrine in matrine content. The best conditions are: 60% ethanol concentration, soaking time of 2.5 hours, soaking temperature of 60 ℃, for 2 times the number of extraction and liquid feed ratio of 12:1, the optimum conditions in the concentration and extraction of matrine rates are higher in Matrine Kushen a rate of 8.89 percent. The optimized extraction conditions, simple and good stability. Key Words: Kushen; Matrine; extraction conditions; Determination
苦参碱测定
HPLC法测定苦参中苦参碱的含量 张 毅 (安徽省药物研究所,合肥 230022) 摘要 目的 应用高效液相色谱(HPLC)法对苦参中苦参碱的含量进行测定。方法 采用Kromasil C18柱(416mm×250mm,5μm),以甲醇2乙腈2磷酸盐缓冲液(p H716)2三乙胺(15∶25∶65∶011,用磷酸调至p H718)为流动相,检测波长220nm。结果 苦参碱与其它成分分离良好,在512176～52.176mg?L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1),平均回收率10015%,RSD 为2118%(n=6)。结论 该方法简便、快速、准确。 关键词 高效液相色谱法;苦参碱;苦参 Determination of matrine in sophora f lavescens ait by HPLC ZHAN G Y i (A nhui Instit ute of Pharm acy,Hef ei 230022) ABSTRACT AIM To determination of matrine in sophora f lavescens ait by HPLC.METH ODS Using kromasil C18column(416 mm×250mm,5μm),methanol2acctonitrile2p H716phosphate buffer(15∶20∶65∶011,p H718by phosphate)as mobile phase,UV detector at wavelength220nm.RESU LT The matrine curvers were linear between512176～521176mg?L-1(r=1),the average recovery was10015%,RSD=2118%(n=6).CONC L USION This mathod is simple,quick and accurate. KYE WORDS HPLC;matrine;sophora f lavescens ait 苦参为豆科苦参(sophora f lavescens ait)的干燥根。苦,寒,归心,肝,胃,大肠,膀胱经。具有清热燥湿,杀虫,利尿作用。用于热痢,便血,黄疸尿闭,赤白带下,阴肿阴痒,湿疹,湿疮,皮肤瘙痒,疥癣麻风;外治滴虫性阴道炎。苦参中主要含生物碱成分1,2,同时还含黄酮类,醌类等成分3。其中生物碱中苦参碱和氧化苦参碱含量较高,多作为控制质量的有效成分1,2。本文采用高效液相色谱法对苦参中苦参碱的含量进行测定,结果表明:该法操作简便、快速、准确,适用于对苦参药材的质量控制。 1 仪器与试剂 LC210A vp高效液相色谱仪,SPD210A vp紫外2可见波长检测器,日本岛津公司。J S23030色谱工作站,大连江申公司。Rheodyne7725进样阀,美国Rheodyne公司。苦参药材,购自安徽中医学院附属医院药剂科。苦参碱对照品,购自中国药品生物制品检定所。 2 色谱条件及色谱图 2.1 色谱柱 Kromasil ODS柱,416mm×250mm,5μm(大连江申公司);流动相:甲醇2乙腈2磷酸盐缓冲液p H7162三乙胺(15∶25∶65∶011用磷酸调至p H718);流速:018ml?min-1;检测波长:220nm,0110AU FS。进样量:20μl。在此条件下对照品与供试品的色谱图见图1,2。 3 供试品的制备 取苦参粉末110g,精密称定,置100ml量瓶中,精密加氯仿50ml、浓氨试液1ml,密塞,称定重量,时时振摇,放置24h后,超声30min,再称定重量,用氯仿补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10ml,加在中性氧化铝柱(1cm×9 cm,内装2cm中性氧化铝)上,收集过柱氯仿液(流速110ml?min-1),再用20ml氯仿2甲醇(7∶3)洗脱(流速110ml?min-1),合并洗脱液与过柱氯仿液,置60℃水浴蒸干。残渣用甲醇溶解并定容至5ml,即得。 4 方法学考察 4.1 线性范围 精密称取苦参碱对照品10187mg,置25ml 量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液(014348g?L-1)。分别精密吸取对照品储备液3ml,置25ml量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为1号对照品溶液;分别精密吸取1号对照品溶液5,3,2,1ml,置10ml量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别作为2,3,4,5号对照品溶液。取以上溶液各20μl注入液相色谱仪,苦参碱在512176～521176mg?L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程(n=5)为 S=271243C+233166,r=019999 。 图1 苦参碱对照品 ? 3 2 1 ? 安徽医药 A nhui Medical and Pharm aceutical Journal 2004Apr;8(2)
苦参碱市场调查
苦参碱市场调查 一、苦参碱 苦参碱是由豆科植物苦参的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成的，是生物碱，一般为苦参总碱，其主要成分有苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱等多种生物碱，以苦参碱、氧化苦参碱含量最高。其他来源为山豆根及山豆根地上部分，纯品外观为白色粉末。 （一）、苦参碱的用途 1、利尿作用 苦参作为药用植物，在我国据文字记载已经有两千多年的历史，主要功用具有清热、利尿、杀虫、祛湿等功效，同时还具有抗病毒、抗肿瘤抗过敏等多种作用。 2、抗病原体作用 煎剂在试管中，高浓度(1：100)对结核杆菌有抑制作用。煎剂(8%)，水煎剂在体外对某些常见的皮肤真菌有不同程度的抑制作用。 3、其他作用 苦参碱注射于家兔，发现中枢神经麻痹现象，同生痉挛，终由呼吸停止而死。注射于青蛙，初呈兴奋，继则麻痹，呼吸变为缓慢而不规则，最后发生痉挛，以致呼吸停止而死；其痉挛的发作，恐系起因于脊髓反射。 4、氧化苦参素碱的抗乙型和丙型肝炎病毒效应 氧化苦参素碱在体外和在动物模型中显示对HBV有强有力的抗病毒活性，在人体内同样具有抗HBV作用，已有不少的报道用于治疗慢性病毒性肝炎。
（二）、苦参碱在农业方面的应用 在农业中使用的苦参碱农药实际上是指从苦参中提取的全部物质，叫苦参提取物或者苦参总碱。近几年在农业上广泛应用，且有良好的防治效果，是一种低毒、低残留、环保型农药。主要防治各种松毛虫、茶毛虫、菜青虫等害虫。具有杀虫活性、杀菌活性、调节植物生长功能等多种功能。 （三）、苦参碱作为生物农药的特点 首先苦参碱是一种植物源农药，具有特定性、天然性的特点，只对特定的生物产生作用，在大自然中能迅速分解，最终产物为二氧化碳和水。 其次苦参碱是对有害生物具有活性的植物内源化学物质，成分不是单一的，而是化学结果相近的多组和化学结构不相近的多组的结合，相辅相成，共同发挥作用。 第三，苦参碱因为多种化学物质共同作用，使其不易导致有害物产生抗药性，能长期使用。 第四，对相应的害虫不会直接完全毒杀，而是控制害虫生物种群数量不会严重影响到该植物种群的生产和繁衍。这种机理和在化学农药防护副作用凸显后经过几十年研究得出的综合防治体系中有害生物控制的原则是十分近似的。 综上四点可以说明苦参碱与一般高毒、高残留的化学农药有着明显区别，是十分绿色、环保的。 二、苦参碱的行业概况 （一）、我国生物农药产业发展现状 近几年来我国在生物农药菌种引进、资源筛选评价、新品种开发、工艺生产、产品质量检测等方面已经取得长足发展，登记的生物农药活性成分品种达140 多种，年产12~13万吨制剂，每年新研制成功和等级注册的生物农药品种不断增加，但是我国生物农药市场发展还不完善，还有很多方面亟待解决。
苦参提取工艺
1.1溶剂提取法苦参碱的溶剂提取法,常用水、酸水及乙醇等 作为提取溶媒,提取方法多为浸渍、渗滚、煎煮、回流等经典方法。孔令明等川从酸水回流提取、乙醇回流提取两大苦参总碱方法 的对比中发现,乙醇回流法在保证较高的苦参碱得率的情况下, 出膏率相对较低,综合比较发现,乙醇回流法对苦参总碱的提取 效果较好,是一种目前较为合适的苦参总碱溶剂提取方法。其最 佳工艺参数为:采用筛分目数20一60目的苦参粉,以60%的乙 醇溶液,料液比为1:2,回流提取2次。谭桂莲[a]分别对水煎法、 乙醇回流法和渗滤法提取氧化苦参碱工艺进行优选研究,结果表明,渗滤法所得浸提物中,氧化苦参碱含量明显高于水煎法和乙 醇回流法,故认为渗滤法为氧化苦参碱的最佳提取方法。选择浸 泡时间、乙醇浓度、溶剂用量、流速4个因素,每因素3水平,用 肠(34)正交表进行实验设计,以氧化苦参碱的含量为考核指标。 结果分析:根据各因素的影响来看,其影响大小顺序是乙醇浓度 >溶剂用量>浸泡时间>流速。因此,可推断最佳工艺为加ro 倍量65%乙醇,浸泡24h渗滤,流速为5ml/mino 表面活性剂有降低表面张力及增溶作用。在提取剂中加人 表面活性剂,一方面相互聚集形成胶束,从而增加了提取剂对药 材的浸提能力;另一方面可降低提取剂与药材间的界面张力,促 进润湿,在胶束作用下有效成分易被解吸、提取。应用表面活性 剂于苦参碱的提取,一般选用毒性相对较小,对皮肤刺激性较低 的非离子型表面活性剂吐温类。鲁传华等[3l以多种浓度的乙 醇、稀盐酸溶液、胶束分散系及水为提取溶剂,常温浸渍法提取苦参中苦参碱,考察表面活性剂吐温80的水及醇溶液正向胶束体 系提取苦参碱的效率。结果表明,含有表面活性剂的提取剂能更 快地达到最大提取量,提高生产率。李晓梅[’J在提取溶剂(水或 乙醇)中分别加人0.2%吐温20或吐温80提取苦参碱,以苦参 碱含量为考核指标,考察非离子型表面活性剂在苦参碱提取中的 实际应用价值。结果表明,在苦参碱提取中应用吐温20和吐温80,可以降低药材与溶剂之间的表面张力,增加药材中细胞渗透 性,使溶剂最大限度地溶解或增溶药材中有效成分,显著增加苦 参碱提取率,降低成本,提高经济效益。 1.2离子交换法利用生物碱盐通过强酸型阳离子交换树脂柱, 使生物碱盐阳离子交换在树脂上,而非生物碱化合物则流出柱 外,将交换后的树脂晾干,用氨水碱化,氯仿提取的原理。高拴平 等图研究了离子交换法提取分离苦参碱的工艺过程,技术路线 是:苦参粉、甲醇回流提取。回收溶剂*粗提物、稀硫酸溶解* 脱脂一水层*除揉一上201型阳离子交换树脂一碱化树脂一抓 仿提取*回收溶剂叶脱水一丙酮一苦参碱结晶。采用上述提取 分离方法,苦参碱的产率高,结晶质量好。张存莉等[.]采用不同 浓度的乙醇和阳离子交换树脂对苦参碱进行提取和纯化,并对不 同的苦参碱纯化工艺进行比较和研究。结果表明,用60%的乙 醇进行提取和用阳离子交换树脂进行纯化的工艺过程,生物碱收 率较高,生产成本较低,工序较为简单,适宜工业化生产。
概述：生物碱的提取
Dictamnine 白鲜碱；Skimmianine 茵芋碱； Fagarine 青椒碱；Robustine ； <分子式> C12H9NO2 <相对分子质量> 199 <性状>棱柱粉末。又称白鲜胺，白藓碱。棱柱结晶(由乙醇中结晶)，熔点133℃。溶于热乙醇和氯仿，微溶于乙醚，难溶于水。其盐酸盐为针状结晶(由乙醇中结晶)，熔点170℃(分解)。其苦味酸盐为黄色棱晶(由乙醇中结晶)，熔点1.63℃。存在于芸香科植物白鲜(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的根。 芸香科植物白鲜的根；芸香科植物欧白鲜；芸香科植物花椒属竹叶椒的根；芸香科植物阿诺梯花椒的茎；芸香科植物得卡瑞花椒的茎皮；芸香科植物刺异叶花椒的根；芸香科植物蚬壳花椒的茎；芸香科植物乔木状花椒的叶；芸香科植物崖椒的茎皮；芸香科植物两面针；芸香科植物松风草的地上部分；芸香科花椒属植物梅宇崖椒的树皮；芸香科植物的树皮；芸香科植物似番樱桃叶芸香草地上的部分；芸香科植物火山生芸香草的全草；芸香科植物的茎；芸香科植物的根和茎；芸香科的叶；芸香料的树皮 <生物活性>强心和对平滑肌的作用；松弛血管的作用；抗真菌和DNA光毒性作用；皮肤光损害作用；抗血小板聚集作用；昆虫拒食作用。 防己提取物 【英文或拉丁名】：Stephania Tetrandra extract 【产品规格】：Tetrandrine12% Fangchinoline6% 【包装规格】：25kg/paper drum 【产品介绍】：药材为防己科植物石蟾蜍Stephania tetrandra S. Moore的根。棕色粉末。
【化学成分】：含多种异喹啉生物碱，主要有粉防己碱(tetrandrine )、防己诺林碱(fangchinoline)、轮环藤酚碱(cyclanoline)、二甲基粉防己碱(dimethyltetrandrine) 以及小檗胺(berbamine)等。 【功能主治】：利水消肿，祛风止痛。用于水肿脚气、小便不利、风湿痹痛、湿疹疮毒、高血压症。 【备注】： 植物形态多年生落叶缠绕藤本。茎纤细，有纵条纹。叶互生，宽三角状卵形，先端钝，具小突尖，基部截形或略心形，两面均被短柔毛，全缘，掌状脉5条；叶柄盾状着生。花小，单性，雌雄异株；雄花序为头状聚伞花序，排成总状，萼片4，花瓣4，雄蕊4，花丝连成柱状体，上部盘状，花药着生其上；雌花萼片、花瓣与雄花同，心皮1。核果球形，熟时红色。花期5-6月，果期7-9月。 生于山坡、丘陵地带的草丛及灌木林缘。主产浙江、安徽、湖北、湖南。 采制秋季采挖，除去粗皮，晒至半干，切段或纵剖，干燥。 性状根不规则圆柱形，或剖切成半圆柱形或块状，常弯曲，弯曲处有深陷横沟而呈结节状，长5-15cm，直径1-5cm。表面灰黄色，有细皱纹及横向突起的皮孔。质坚重，断面平坦，灰白色，粉性。气微，味苦。
苦参碱提取工艺与氧化苦参碱制备方法
1 简述 苦参碱、氧化苦参碱(苦参素)是苦豆子、苦参、广豆根等豆科槐属植物中生物碱的主要成份。苦参碱(matrine)和氧化苦参碱(oxymatrine)化学分子式分别为 C15H24N2O 和C 15H24N2O2，分子量分别为248 和264，是苦参型生物碱的主要活性成分，二者在一定条件下可以转化. 2 苦参碱提取工艺 2.1溶剂提取法 苦参碱的溶剂提取法, 常用水、酸水及乙醇等作为提取溶媒, 提取方法多为浸渍、渗滚、煎煮、回流等经典方法。 孔令明等川从酸水回流提取、乙醇回流提取两大苦参总碱方法的对比中发现,乙醇回流法对苦参总碱的提取效果较好, 是一种目前较为合适的苦参总碱溶剂提取方法。其最佳工艺参数为: 采用筛分目数20—60 目的苦参粉, 以60 % 的乙醇溶液, 料液比为1 : 2 , 回流提取2 次。 谭桂莲分别对水煎法、乙醇回流法和渗滤法提取氧化苦参碱工艺进行优选研究, 结果表明, 渗滤法所得浸提物中, 氧化苦参碱含量明显高于水煎法和乙醇回流法, 故认为渗滤法为氧化苦参碱的最佳提取方法。 2.2 离子交换法 利用生物碱盐通过强酸型阳离子交换树脂柱, 使生物碱盐阳离子交换在树脂上, 而非生 物碱化合物则流出柱外, 将交换后的树脂晾干, 用氨水碱化, 氯仿提取的原理。 高拴平等研究了离子交换法提取分离苦参碱的工艺和过程, 技术路线是:苦参粉→甲醇回流提取→回收溶剂→粗提物→稀硫酸溶解→脱脂→水层→除鞣→上D201型阳离子交换树脂※碱化树脂→氯仿提取→回收溶剂→脱水→丙酮→苦参碱结晶。采用上述提取分离方法, 苦参碱的产率最高, 结晶质量最好。 张存莉等采用不同浓度的乙醇和阳离子交换树脂对苦参碱进行提取和纯化, 并对不同的苦参碱纯化工艺进行比较和研究。结果表明, 用60%的乙醇进行提取和用阳离子交换树脂进行纯化的工艺过程生物碱收率较高, 生产成本较低, 工序较为简单, 有一定的进步性, 适宜工业化生产。 2.3 树脂吸附法
苦参碱 Matrine
苦参碱Matrine 苦参碱系列产品前序： 苦参碱系列产品属于生物碱类，提取于中药苦参干燥的根，提取苦参碱等原料是经过严格的选材，产地为内蒙，甘肃，含量稳定，做出来的产品，色泽好，纯度高，药用价值高。 苦参是在植物学上属于豆科苦参属，生长条件一般在海拔1300米以上，多数生长在沙地，山坡以及灌木林，目前基本上都是野生药材。药典上对这味药材的功效有这样的描述：清热燥湿，杀虫，利尿。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎。 苦参中包含数种生物碱，其中常见的为苦参碱Matrine，氧化苦参碱oxymatrine，槐果碱，槐定碱sophoridine，槐果碱sophocarpine，氧化槐果碱Oxysophocarpine等。 目前能工业大生产的也就是这几种，其中苦参碱和氧化苦参碱的产量最大，医用价值也是最高的。 我司生产的苦参碱系列产品色泽好，纯度高，主用应用于制药工业。 苦参碱产品纯度：98% HPLC 国家药品标准 苦参碱产品外观：纯白细微结晶性粉末 苦参碱产品CAS：519-02-8 苦参碱产品药用价值以及应用领域： 一、苦参碱具有利尿的作用，经过实验室的动物实验表明：苦参碱具有利尿作用，尿量 明显增加，且之前有盐分排出增多。 二、苦参碱具有抗病原体的作用：实验表明对结核菌，真菌，细菌，霉菌都有一定的抑 制效果。 三、苦参碱具有杀虫的作用：主用应用于天然农药的生产，苦参碱制剂具有无残留，对 人畜低毒安全性高，广谱杀虫剂。主要应用于蔬菜，茶叶，果树，烟草等一些农作物的杀虫。目前市场上的常见的制剂为0.3%苦参碱水剂、1%苦参碱水剂，1.1%苦参碱粉剂等制剂。另外,苦参碱对蔬菜刺吸式口器昆虫蚜虫，鳞翅目昆虫菜青虫、茶毛虫、小菜蛾，以及茶小绿叶蝉等都具有理想的防效。另外对蔬菜霜霉、疫病、炭疽病也有很好的防效。 四、苦参碱在妇科制药领域的应用，苦参碱具有很好的抗菌性，且安全，所以广泛使用 到妇科药物中，常见的制剂苦参碱栓，苦参碱洗液等。 苦参碱的包装：1kg 2kg 5kg 10kg 25kg 苦参碱的保存：避光保存，密封，干燥处 苦参碱的保质期：适当的保存条件下为48个月 药用苦参碱苦参素氧化苦参碱苦参碱总碱苦参提取物
苦参碱的综述
苦参碱的测定方法和药理作用 摘要：对苦参中的苦参碱进行提取、分离方法，并对其进行深入的工艺、药理、药效和生物利用度等方面的系统研究具有重要的意义。苦参碱具有抗炎、抗肿瘤、镇痛、抗心律失常、平喘、镇咳、杀菌等作用。近年来国内外在研究和使用苦参类生物碱的过程中, 进一步发现了其多方面的药理活性和临床功能，是一类很有前途的药物。本文就苦参类生物碱含量测定方法及其药药理作用的进展作一综述。 关键词：苦参碱提取分离药理作用应用前景 引言：苦参又名苦骨、川参、凤凰爪、牛参、地槐、野槐等，为豆科多年生落叶亚灌木植物舌参的根，采挖后去芦头及须根晒干切片入药，全国各地均产，功能主要为清热、燥湿、杀虫等，主治热毒血痢、肠风下血、黄疸、赤白带下、小儿肺炎、急性扁桃体炎等多种炎症和痔漏、疥癞恶疮、皮肤瘙痒、阴疮湿痒等疾病( 据研究得知，苦参的根含有多种生物碱，如氧化苦参碱、羟基苦参碱、甲基野靛碱、臭豆碱、赝靛叶碱、脱氢苦参碱、槐果碱)等多种生物碱及黄酮类化合物( 因为苦参碱具有多方面的药理作用，如抗肿瘤作用、抗癌作用、抗病毒作用，所以对苦参总碱的提取与分离具有重要的意义。) 1苦参碱以及其化学结构 1.1苦参碱基本性质 苦参碱（Matrine）系从豆科植物苦参（sophra flavescens Ait.）苦豆子（S.alopecuroides L. ）、山豆根（S,subprostrataCHun et T.Chen）中分离出来的生物碱，是上述 3种传统中草药的主要活性成分之一，是苦参类生物碱的代表( 《中国药典》 2000 年版一部中，是以苦参碱的含量作为苦参药材的质量控制指标［1］。) 2005 年版一部中，苦参碱的含量也是苦参药材的质量控制指标之一。 1.2苦参碱的化学结构 苦参碱是白金雀儿碱（lupanine）的异构体，属于喹喏里西啶类衍生物，由2个喹喏里西啶环骈合而成，有 2个氮原子，一个是叔胺氮，一个是酰胺氮，其 分子式为C 15H 24 N 2 O,分子量为245.37，苦参碱有 4 种形态：α-苦参碱为针状或