习题2核酸分子杂交技术
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第二章核酸杂交技术
（一）名词解释
1．原位杂交
2．核酸分子杂交技术
3．探针
4．反向点杂交
5．缺口平移标记法
6．随机引物标记法
7．末端标记法
8．Southern blot杂交
9．荧光原位杂交
10．菌落杂交
（二）选择题
【A型题】
1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）
A G－C含量
B A－T含量
C A－G含量
D A－C含量
E T－G含量
2．液相杂交是下列哪一种（）
A Southem印迹杂交
B Northem印迹杂交
C Dot印迹杂交
D Slot印迹杂交
E RPA实验
3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（）
A 菌落杂交
B Southern杂交
C Northern杂交
D 液相杂交
E 原位杂交
4．Southern杂交通常是指（）
A DNA和RNA杂交
B DNA和DNA杂交
C RNA和RNA杂交
D 蛋白质和蛋白质杂交
E DNA和蛋白质杂交
5．最容易降解的核酸探针是( )
A cDNA探针
B dsDNA探针
C ssDNA探针
D gDNA探针
E: RNA
6．探针基因芯片技术的本质就是（）
A 核酸分子杂交技术
B 蛋白质分子杂交技术
.
C 聚合酶链反应技术
D 基因重组技术
E 酶切技术
7．DNA探针的长度通常为( )
A 1000 ～2000个碱基
B 500 ～1000个碱基
C 400 ～500个碱基
D 100 ～400个碱基
E. <100个碱基
8．寡核苷酸探针的最大的优势是（）
A 杂化分子稳定
B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列
C 易标记
D 易合成
E 易分解
9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( )
A 甲醛
B 乙醛
C 氢氧化钠
D 碳酸钠
E 盐酸
10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）
A 脆性大
B 本底低
C 共价键结合
D 非共价键结合
E 高结合力
11．最常用的DNA探针标记方法是( )
A 随机引物
B 切口平移
C 3′-末端标记
D 5′-末端标记
E PCR法
12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）
A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过
B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过
C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过
D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过
E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过
13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )
A T4多聚核苷酸激酶
B 末端转移酶
C AKP
.
D DNA polⅡ
E DNA pol
14．血友病是一种（）
A 染色体病
B X连锁遗传病
C 先天性代谢缺陷病
D 先天畸形
E 常染色体隠性遗传病
15．预杂交中最常用的封闭剂是( )
A Denhavdt's溶液
B 5×TBE
C 1×TBE
D 1×TAE
E 1×TPE
16．检测目标是RNA的技术是（）
A Southern杂交
B Western杂交
C Northern杂交
D Eastern杂交
E 杂交淋巴瘤
17．检测靶序列是DNA的技术是（）
A Southern杂交
B Western杂交
C Northern杂交
D Eastern杂交
E 杂交淋巴瘤
18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称（）
A 变性
B 复性
C 复杂性
D 杂交
E 探针
19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）
A 变性
B 复性
C 复杂性
D 杂交
E 探针
20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）
A 变性
B 复性
C 复杂性
D 杂交
E 探针
21．点/狭缝杂交可以用于（）
A 快速确定是否存在目的基因
B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定
的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息
C 用于基因定位分析
D 阳性菌落的筛选
E 蛋白水平的检测
22．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )
A -70℃
B -30℃
C -20℃
D -10℃
E 4℃
23．Southern印迹杂交可以用于（）
A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定
的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息
B 检测的目标是RNA
C 用于基因定位分析
D 阳性菌落的筛选
E 蛋白水平的检测24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( )
A Tm=4(G+C)+2(A+T)
B Tm=2(G+C)+4(A+T)
C Tm=6(G+C)+4(A+T)
D Tm=2(G+C)+6(A+T)
E Tm=6(G+C)+2(A+T)
25．Northern印迹杂交可以用于（）
A 快速确定是否存在目的基因
B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定
的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息
C 检测的目标是RNA
D 用于基因定位分析
E 阳性菌落的筛选26
26．荧光原位杂交可以用于（）
A 快速确定是否存在目的基因
B 检测的目标是RNA
C 用于基因定位分析
D 阳性菌落的筛选
E 蛋白水平的检测
27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）
A 正常人
B 杂合体患者
C 纯合体患者
D 携带者
E 不能确定
28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( )
A pH为3～5
B pH为4～5
C pH为5～6
D pH为5～9
E pH为8～11
29．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）
A 2-10bp
B 17-50bp
C 60-100bp
D 100-200bp
E 200-300bp
30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )
A 甲酰胺
B 氢氧化钠
C 浓盐酸
D 稀盐酸
E 甲醇
31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针
B cDNA探针不包含内含子
C cDNA探针不包含大量的高度重复序列
D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题
E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( )
A 15～25℃
B 10～15℃
C 5～10℃
D 30～40℃
E 40～50℃
33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm值( )
A 30～40℃
B 20～30℃
C 15～30℃
D 10～15℃
E 5℃
34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( )
A 90
B 80
C 75
D 68
E 58
35．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( )
A 70
B 65
C 55
D 42
E 35
36．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( )
A 0.5℃
B 1～1.5℃
C 2～2.5℃
D 3～3. S℃
E 4～4.5℃
37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( )
A 1～5℃
B 5～10℃
C 10～15℃
D 15～20℃
E 20～25℃
38．杂交的时间一般为Cot1/2的( )
A l倍
B 1～3倍
C 3 ～5倍
D 5～8倍
E 10倍以上
39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( )
A ssDNA
B 1×SSC
C 10×SSC
D 5×TBEC
E 50×TAE
40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( )
A 4个
B 6个
C 8个
D 10个
E 12个
【X型题】
41．下列哪些是影响DNA复性的因素( )
A DNA浓度
B DNA的分子量
C 温度
D 碱基组成
E DNA的来源
42．DNA探针的优点有（）
A 制备方法简单
B DNA探针易降解
C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择
D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽
E 单链，不存在竞争性的自身复性
43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）
.
A DNA加尾法
B DNA切口平移标记法
C 随机引物标记法
D 末端标记
E 尾端标记
44．关于DNA变性的描述正确的是( )
A 二级结构破
B 一级结构破坏
C 黏度降低
D 生物活性丧失
E 浮力密度增加
45．以下哪些因素可以使DNA变性（）
A 增加溶液的浓度
B 加热
C 改变溶液的pH值
D 有机溶剂
E 冷藏
46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( )
A ssDNA
B BSA
C 小牛胸腺DNA
D 脱脂奶粉
E DTT
47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）A 粘度下降B 沉降速度增加
C 浮力下降
D 紫外光吸收增加
E 紫外光吸收减少
48.下列物质适于非放射性探针标记的是( )
A AKP
B ACP
C 生物素
D 地高辛
E 荧光素
49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( )
A 特异性高
B 可依赖氨基酸序列推测其序列
C 分子量小
D 可用于相似基因顺序差异性分析
E 可用末端转移酶进行5′端标记
50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）
A 采用大片段探针
B 少量的反应体积
C 高反应温度
D 不断的振摇
E 大量的反应体积
51．关于切口平移法下述正确的是( )
A 可标记线性DNA
B 可标记松散螺旋DNA
C 可标记超螺旋DNA
D 可标记存在缺口的双链DNA
E 可标记随机引物
52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）
A 毛细转移
B 真空转移
C 负压转移
D 电泳转移
E 冷冻转移
53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( )
A 可标记单链DNA
B 可标记双链RNA
C 可标记单链RNA
D 比活性高达108cpm／μg DNA以上
E 常经过SephadexG-50纯化才可使用
54．可以采用哪些方法来标记探针（）
A 杂交标记法
B 切口平移标记法
C 5’-末端的标记
D 3’-末端的标记
E 化学法延长标记
55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）
A 预杂交
B 杂交
C 洗脱
D 固定
E 转移
56．放射自显影可以被分为（）
A 直接放射自显影
B 氧化显影
C 封闭显影
D 间接放射自显影
E 固定显影
57．关于电转移下列描述正确的是( )
A 快速、高效
B 需要特殊设备
C 缓冲液用TAE或TBE
D 可产生高温
E 常用NC膜作为支持介质
58．预杂交的主要目的是（）
A 平衡滤膜
B 封闭非特异性杂交的位置
C 提高杂交信号的检测效率
D 便于从滤膜上除去探针
E 清除用于杂交反应检测的显色物质
59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )
A 对人体危害小
B 需要特殊设备
C 可长时间使用
D 灵敏度不如放射性探针
E 重新杂交新探比较容易
60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。可以通过哪些方法检测（）
A PCR扩增
B RAPD
C Southerm印迹杂交
D Northern印迹杂交
E 以上都不是
61．重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（）
A 菌落印迹杂交
B Northern印迹杂交
C Western印迹杂交
D 原位杂交
E 斑点杂交
62．关于RNA探针的描述下列正确的是( )
A 可用于随机引物标记
B 特异性高
C 灵敏度高
D 可用非同位素标记法标记
E 不易降解63．下列哪些可以作为核酸探针使用（）
A microRNA
B 单链DNA
C 寡核苷酸
D mRNA
E 双链RNA
64．关于核酸探针的描述下列正确的是( )
A 可以是DNA
B 可以是RNA
C 可用放射性标记
D 可用非放射性标记
E 必须是单链核酸
（三）问答题
1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？
2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围3．试述Northern blot杂交的操作步骤？
4．什么是肽核酸？并简述其应用？
5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。
6．请叙述杂交探针标记方法的种类。
7．简述直接放射自显影的原理。
参考答案
（一）名词解释
1．原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内基因定位或基因表达的检测技术。
2．核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。利用核酸分子杂交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。3．探针：是一段单链或双链核苷酸，用放射性核素或非放射性物质标记其末端或全链，可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交，以探测它们的同源程度。这一段标记的核苷酸被称为探针。
4．反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样品DNA又互不干扰，故能一次性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一个未知序列。
5．缺口平移标记法：该法是利用低浓度DNase I 在DNA双链上随机切开若干个切口，然后利用E. coli DNA聚合酶I的5’→3’外切酶活性和5’→3’聚合酶活性，使DNA链上的核苷酸不断被切除，而带放射性核素标记的dNTP不断地被填入缺口位置，从而形成两条链被均匀标记的高放射活性的探针。
6．随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺DNA的DNase I降解物。随机引物在较低的退火温度下，能与各种单链DNA模板结合。首先使双链DNA分子变性成为单链，然后退火使随机引物结合于两条单链模板上，当反应液中存在的4种dNTP中有一种带放射性核素标记时，在DNA 聚合酶催化下合成新的带标记的DNA链。反应结束后经纯化即可得到标记的DNA探针。
7．末端标记法：寡核苷酸探针由于较其他类型的探针短，需要采用末端标记法。该法需要DNA分子的末端带有羟基，而人工合成寡核苷酸的5’端本身即为羟基。其原理是利用多核苷酸激酶将[γ-32P] ATP分子上7位磷酸基转移至寡核苷酸链的5’末端，末端标记也可在3’端进行。
8．Southern blot杂交：是研究DNA图谱的基本技术，在遗传诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析
等方面有重要价值。Southern印迹杂交的方法是将标本DNA用限制性内切酶消化后，经琼脂糖电泳分离各酶切片段，接着，使酶切片段DNA发生变性并转印到一固相支持物(通常是硝酸纤维素薄膜或尼龙膜)上，经固定后和标记探针进行杂交。这种方法不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息。
9．荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。
10．菌落杂交：用于重组细菌克隆筛选的固相杂交，称菌落杂交，主要步骤包括：①菌落平板培养；②滤膜灭菌后放到细菌平板上，是菌落粘附到经适当饱和的吸水纸上；③菌斑溶解产生单练的DNA、固定DNA，用32P标记的探针与菌落进行杂交；④杂交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于X线胶片
进行放射自显影；⑤将自显影胶片、滤膜、培养平
板相比较，就可以确
定阳性菌落。
（二）选择题
【A型题】
1．A 2．E 3．D 4．B 5．E 6．A
7．C 8．B 9．C 10．B 11．A 12．A
13．A 14．B 15．A 16．C 17．A 18．A
19．B 20．D 21．A 22．A 23．A 24．A
25．C 26．C 27．D 28．D 29．B 30．A
31．E 32．A 33．E 34．D 35．D
36．B 37．E 38．B 39．A 40. B
【X型题】
41．ABCD 42．ACD 43．BC 44．ACDE 45．47．ABD 48．ACDE 49．ABCD 50．BCD 51．53．ABCD 54．BCD 55．ABC 56．AD 57．59．ABCD 60．AC 61．ADE 62．ABCD 63．
（三）问答题
1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪
几类？
①根据杂交核酸分子的种类，可以分为DNA 与DNA杂交，DNA与RNA杂交，RNA与RNA 杂交；②根据杂交探针标记的不同，可以分为同位素杂交和非同位素杂交；③根据杂交介质的不同，可以分为液相杂交、固相杂交和原位杂交；其中固相杂交又可以分为菌落杂交、Southern杂交、Northern杂交、点杂交和狭缝杂交。
2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围反义核酸技术是近几年发展起来的一项新的生物技术。它是根据碱基互补的原理，设计出能特异地同相应靶基因结合的RNA或DNA，从而影响靶基因的转录和翻译，以达到调控靶基因表达的目的。反义核酸技术包括反义RNA技术，反义DNA 技术及核酶技术。
3．试述Northern blot杂交的操作步骤？
①RNA的变性琼脂糖电泳；②将硝酸纤维薄膜放在含有RNA电泳条带的凝胶上；③转印盘中的转移缓冲液将逐渐为胶和膜上覆盖的吸水纸吸收，从而利用④毛细作用将胶中的变性RNA分子转移到硝酸纤维薄膜上；⑤转印完成后，使RNA 分子固定到膜上；⑥膜上的RNA分子与探针杂交；
⑦经放射自显影或其他检测技术显示出杂交区带。4．什么是肽核酸？并简述其应用？
肽核酸是一种全新的DNA类似物，在20世纪90年代由丹麦科学家发明。肽核酸中以中性的肽链酰胺2-氨基乙基苷氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键，其余结构与DNA相似。PNA可以通过碱基互补配对的形式识别并结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构。由于PNA不带电荷，与DNA和RNA之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高；PNA与DNA或RNA 的杂交能力远远优于DNA、DNA或DNA、RNA 杂交，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鉴于上述诸多优点，近年来，PNA被广泛应用在许多高科技领域。如：病原体、遗传病的检测，抗癌、抗病毒反义核酸的研究和应用。特别是PNA可取代核酸用于基因芯片的制备，被认为是基因芯片的升级产品。PNA还可用于定量PCR分析。随着对PNA 研究的不断深入，PNA将显示出更大的优越性和更为广阔的应用前景。
5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用
在临床检验科，杂交技术最常用于基因诊断的例子
是镰状细胞贫血病的基因诊断。
镰状细胞贫血是一种单基因遗传性疾病，病因是编码血红蛋白的基因发生点突变导致编码β链第6位的谷氨酸被缬氨酸取代，表示为β6(A 3)谷→缬。在血红蛋白基因的碱基序列上表现为第6位密码子GAA突变为GTA，也就是在这一位点发生了A到T的点突变。由于这一突变导致基因内部一个Mst II限制性酶切位点丢失，因而针对这一情况，可以设计与β-珠蛋白基因杂交的核酸探针。先扩增靶片断，并用Mst II消化扩增的DNA片断，电泳分离消化的DNA片断。将DNA片断转印到硝酸纤维素薄膜上，采用Southern杂交技术检测DNA片断。以此将正常人、携带者和患者区分开来。
此外, 还可以用凝血因子Ⅸ基因探针检测B型血友病，凝血因子ⅩⅢ基因探针检测A型血友病，用胰岛素基因探针检测糖尿病，用苯丙氨酸羟化酶基因探针检测苯丙酮尿症。以上都是杂交技术在临床检验科进行基因诊断的例子。
6．请叙述杂交探针标记方法的种类
探针的标记方法可分为放射性核素标记法和非放射性核素标记法两大类。
(1) 放射性核素标记的探针，灵敏度高、特异性强，主要缺点是容易造成放射性污染，而且放射性核素的半衰期较短，必须随用随标。
标记手段主要有：缺口平移法、随机引物合成法和末端标记法。
(2)非放射性核素标记法：非放射性核素标记法无放射性污染，探针标记后可保存较长时间(2年以上)，但灵敏度和特异性尚不如核素标记。常用的标记物有生物素、地高辛配基和辣根过氧化物酶。标记手段类似于放射性核素标记。
①生物素标记探针：生物素(biotin)是一种水溶性维生素，可与dUTP的C－5位共价结合，用其标记的dUTP可代替dTTP掺入DNA探针。这种标记探针能与抗生物素蛋白(avidin)特异结合，而抗生物素蛋白上结合的碱性磷酸酶可使反应中的底物显色，从而指示出探针所在位置。
②地高辛配基标记探针：地高辛配基(digoxigenin)可与dUTP共价结合，用其标记的dUTP也可代替dTTP掺入DNA探针，可用与酶或荧光色素结合的抗地高辛配基抗体直接检测，或间接使用免疫荧光法进行检测。
③辣根过氧化物酶标记探针：首先将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)与带正电荷的聚
乙烯亚胺(polyethylene imine)交联结合，然后由这种带正电荷的复合物与带负电荷的单链或双链DNA结合，在戊二醛稀溶液作用下，HRP与DNA 形成共价键，产生酶标记探针。杂交后利用酶促反应使底物显色即可指示探针位置。该法是利用化学反应直接将酶连接在核酸上，而不需要将酶先连接于dNTP再掺入DNA分子，因此更为简便。7．简述直接放射自显影的原理
直接放射自显影是在暗室巾将含放射性杂化分子的滤膜与X胶片紧密的贴在一起，放入不透光的盒子，同位素衰减会释放β射线感光胶片上的银颗粒，产生稳定的潜影，胶片经冲洗后产生可见的图像。图像的位置与胶片上杂化分子的位置一致，图像的深浅反应了杂化分子的含量。X线胶片常常为弹性塑料片，在其两面均覆盖了照相感光乳胶和白明胶，白明胶覆盖在照相感光乳胶的外层以防止其被刮脱。32P、35S、14C元素放射的β射线会穿透X线胶片，少部分作用于X线胶片的照相感光乳胶。
核酸分子杂交精彩试题(全
实用标准文案 核酸分子杂交试题 一. 名词解释: 1. 核酸分子杂交 2. DNA复性 3. Southern杂交 4. Northern杂交 5. 斑点印迹 6. 原位杂交 二. 单项选择题: 1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。 A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 2.DNA变性的本质是（）的断裂。 A. 盐键 B. 氢键 C. 离子键 D. 共价键 3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。 A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃ 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。 A. A260吸收值 B. A280吸收值 C. A320吸收值 D. A360吸收值 5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。 A. 0.1μg B.0.1—0.5μg C.0.5--1μg D.1.0—1.5μg 6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。 A. 50—300bp B. 20—200bp C.300—400bp D.200—500 7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。 A.10℃ B.15℃ C.20℃ D.25℃ 8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。 A.5℃ B.10℃ C.15℃ D. 25℃ 9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。 A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇 10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间内从凝胶中移动出来，必须将最长的
核酸分子杂交技术
核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色，检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。 Northern印迹杂交:由Southerm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，进行杂交反应，以鉴定基中特定mRNA分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法，可推臬出癌基因的表达程度。 差异杂交（differential hybridization） 是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上，用两种混合的不同cDNA探针（如：转移性和非转移性癌组织的mRNA逆转录后的cDNA）分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物（如人），则因工作量太大，表达的序列所占百分比较低（仅5％左右），价值不大。 cDNA微点隈杂交（cDNA microarray hybridization） 是指将cDNA克隆或cDNA的PCR产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上（如：尼龙膜或
分子蒸馏技术和应用
分子蒸馏技术及其应用 摘要 分子蒸馏又称短程蒸馏，是一种新型的液－液分离技术，与常规蒸馏相比具有许多优点，本文对分子蒸馏的基本原理、设备、特点以及在食品、医药、化工工业中的应用进行了阐述。 关键词：分子蒸馏、食品工业。 分子蒸馏是在高真空度下进行的非平衡蒸馏技术（真空度可达 0．01Pa），是以气体扩散为主要形式、利用不同物质分子运动自由程的差异来实现混合物的分离。由于蒸发面和冷凝面的间距小于或等于被分离物料的蒸气分子的平均自由程，所以也称短程蒸馏。由于分子蒸馏过程中。待分离物质组分可以在远低于常压沸点的温度下挥发，并且各组分的受热过程很短，因此分子蒸馏已成为对高沸点和热敏性物质进行分离的有效手段。目前已广泛应用于食品、医药、油脂加工、石油化工等领域，用于浓缩或纯化低挥发度、高分子量、高沸点、高黏度、热敏性、具有生物活性的物料。 一、分子蒸馏的概念原理和过程 1.1分子蒸馏的基本概念分子有效直径：分子在碰撞过程中，两分子质心的最短距离，即发生斥离的质心距离。分子运动自由程：指一个分子与其他气体分子相邻两次分子碰撞之间所走的路程。分子运动平均自由程：在一定的外界条件下，不同物质中各个分子的自由程各不相同。就某一种分子来说在某时间间隔自由程的平均值称为平均自由程。 1．2分子蒸馏的基本原理分子蒸馏的分离是建立在不同物质挥发度不同的基础上，其操作是在低于物质沸点下进行，当冷凝表面的温度与蒸发物质的表面温度有差别时就能进行分子蒸馏。根据分子运动理论，液体混合物中各个分子受热后会从液面逸出，不同种类的分子，由于其有效直径不同，逸出液面后直线飞行距离是不相同的。轻分子的平均自由程大，重分子的平均自由程小，若在离液面小于轻分子平均自由程而大于重分子平均自由程处设置一冷凝面，使得轻分子落在冷凝面上被冷凝，而重分子则因达不到冷凝面，返回原来液面这样就将混合物分离了，分子平均自由程是分子蒸馏基本理论的核心。 1.3分子蒸馏的基本过程根据分子蒸馏的基本理论，可将蒸馏过程分解为 以下5个步骤：①物料在加热面上形成液膜；②分子在液膜表面上自由蒸发；③分子从加热面向冷凝面的运动；④轻分子在冷凝面上被捕获，重分子返回物料液膜；⑤馏出物和残留物的收集。 二、分子蒸馏的特点
核酸分子杂交精彩试题(全,打印)
核酸分子杂交试题 一. 名词解释: 1. 核酸分子杂交 2. DNA复性 3. Southern杂交 4. Northern杂交 5. 斑点印迹 6. 原位杂交 二. 单项选择题: 1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。 A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 2.DNA变性的本质是（）的断裂。 A. 盐键 B. 氢键 C. 离子键 D. 共价键 3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。 A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃ 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。 A. A260吸收值 B. A280吸收值 C. A320吸收值 D. A360吸收值 5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。 A. 0.1μg B.0.1—0.5μg C.0.5--1μg D.1.0—1.5μg 6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。 A. 50—300bp B. 20—200bp C.300—400bp D.200—500 7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。 A.10℃ B.15℃ C.20℃ D.25℃ 8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。 A.5℃ B.10℃ C.15℃ D. 25℃ 9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。 A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇 10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA片段控制在大约（）。 A. 1Kb B. 2 Kb C. 3 Kb D. 4 Kb 11. 将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。
第八章核酸分子杂交技术习题
第八章核酸分子杂交技术 习题 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
第八章核酸分子杂交技术 一．选择题 【A型题】 1.DNA链的Tm值取决于核酸分子的 A.G-C含量 B.A-T含量 C.A-G含量 D.A-C含量 E.T-G含量 2.研究得最早的核酸分子杂交种类是 A.菌落杂交 B. Southern杂交 C. Northern杂交 D.液相杂交 E.原位杂交 3.Southern杂交通常是指 A．DNA和RNA杂交 B．DNA和DNA杂交C．RNA和RNA杂交 D．蛋白质和蛋白质杂交 E．DNA和蛋白质杂交 4.基因芯片技术的本质是 A.核酸分子杂交技术 B.蛋白质分子杂交技术 C.聚合酶链反应技术 D.基因重组技术 E.酶切技术 5.寡糖苷酸探针的最大的优势是 A.杂化分子稳定 B.可以区分仅仅一碱基辑差别的靶序列 C. 易标记 D.易合成 E.易分解 6.血友病是一种 A.染色体病 B.X链锁遗传病 C.先天性代谢缺陷病 D.先天 畸形 E.常染色体隐性遗传病
7.检测的靶序列是RNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 8. 检测的靶序列是DNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 9.DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 10.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 11.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 12.标记的参与杂交反应的核酸分子，称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 13.点/缝杂交可以用于 A.快速确定是否存在目的基因 B.不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C.用于基因定位分析
医学检验本科班分子生物学检验技术试卷
医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷 一. 选择题（在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分,共20分）: 1. 在核酸提取时,常需要使用氯化钠,醋酸钠等盐溶液,真正的目的是（） A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀 B. 调节PH值 C. 保持核算的完整性 D. 提高核酸的浓度 E. 无特定目的 2. 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（） A. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6% E. 无法计算 3.下列那项不是扩增反应所必需的?（） A. 引物和模板 B. dNTP C. Mg++ D .DNase E. 缓冲液 4. 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（） A. 基因结构与功能的关系 B. 基因结构变异与疾病的关系 C. 病原微生物的基因结构特征 D. 基因的表达.调控与疾病的关系 E. 以上皆是 5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术?（） A. 核酸分子杂交技术 B. DNA测序技术 C. PCR技术 D. DNA重组技术 E. 以上全是 6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（） A. 肝功能检测 B.乙肝两对半检测 C. 乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测 D. 肿瘤细胞培养 E. 病原微生物培养 7. 在核酸的分离纯化过程中,为保证其一级结构的完整性,应采取（） A. 尽量简化分离步骤,缩短提取时间 B. 适当延长提取时间 C. 在37摄氏度条件下进行 D. 加入Mg++,Ca++等二价金属离子 E. 以上全是 8. 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0,请问该样品属于哪类核酸样品?（） A. DNA B. RNA C. 是DNA,但有蛋白质污染 D. 是RNA,但有蛋白质污染 E. DNA和RNA 9. 在RNA提取和纯化过程中,为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（）
习题2核酸分子杂交技术
第二章核酸杂交技术 （一）名词解释 1．原位杂交 2．核酸分子杂交技术 3．探针 4．反向点杂交 5．缺口平移标记法 6．随机引物标记法 7．末端标记法 8．Southern blot杂交 9．荧光原位杂交 10．菌落杂交 （二）选择题 【A型题】 1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（） A G－C含量 B A－T含量 C A－G含量 D A－C含量 E T－G含量 2．液相杂交是下列哪一种（） A Southem印迹杂交 B Northem印迹杂交 C Dot印迹杂交 D Slot印迹杂交 E RPA实验 3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（） A 菌落杂交 B Southern杂交 C Northern杂交 D 液相杂交 E 原位杂交 4．Southern杂交通常是指（） A DNA和RNA杂交 B DNA和DNA杂交 C RNA和RNA杂交 D 蛋白质和蛋白质杂交 E DNA和蛋白质杂交 5．最容易降解的核酸探针是( ) A cDNA探针 B dsDNA探针 C ssDNA探针 D gDNA探针 E: RNA 6．探针基因芯片技术的本质就是（） A 核酸分子杂交技术 B 蛋白质分子杂交技术 C 聚合酶链反应技术 D 基因重组技术 E 酶切技术 7．DNA探针的长度通常为( ) A 1000 ～ 2000个碱基 B 500 ～ 1000个碱基 C 400 ～ 500个碱基 D 100 ～ 400个碱基 E. <100个碱基 8．寡核苷酸探针的最大的优势是（） A 杂化分子稳定 B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列 C 易标记 D 易合成 E 易分解 9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛
核酸的分子杂交技术及其应用
核酸的分子杂交技术及其应用 1概述 核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。这时加入异源的DNA或RNA(单链)并在一定离子强度和温度下保温(复性)，若异源DNA或RNA之间的某些区域有互补的碱基序列，则在复性时可形成杂交的核酸分子。 在进行分子杂交技术时，要用一种预先分离纯化的已知RNA或DNA序列片段去检测未知的核酸样品。作为检测工具用的已知RNA或DNA序列片段称为杂交探针(probe)。它常常用放射性同位素来标记。 虽然核酸分子杂交技术的应用仅有二十多年的历史，但它在核酸的结构和功能的研究中作出了重要贡献，在基因的表达调控和物种的亲缘关系研究中也发挥重要作用。而且，随着核酸探针制备及标记技术的丰富和完善以及以不同材料为支持物的固相杂交技术的发展，使核酸分子杂交技术在分子生物学领域中的应用更加广泛。这里我们将就分子杂交技术的几个主要过程及其应用进行介绍。 2核酸探针的制备 核酸分子杂交的灵敏性主要依赖杂交探针的放射性比活度。比活度高就可提高反应的灵敏性，减少待测样品的用量。目前一般所用的是体外标记，这里介绍几种最常用的方法： 2.1DNA的切口平移 双链DNA分子的一条链有切口时，大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ可把核苷酸残基加到切口处的3’端，同时由于此酶具有5’→3’外切核酸酶活性，它还可从5’端除去核苷酸。这样5’端核苷酸的去除与3’端核苷酸的加入同时进行，导致切口沿着DNA链移动，称切口平移(nicktranslation)。常用于在双链DNA 上打开切口的酶为胰DNA酶Ⅰ。由于高放射性比活度的核苷酸置换了原有核苷酸，就有可能制备比活度大于108计数/(分.μg)的32P标记的DNA探针。 2.2单链DNA探针的制备 与传统的双链探针相比，单链探针由于不存在互补链，因此可以消除由探针的两条链重退火形成无效杂交体的可能。最常用的是以M13噬菌体载体合成单链DNA探针的方法。其主要原理是用人工合成的寡核苷酸引物(其序列与载体上固定区段的序列相互补。可从生物试剂公司直接购买)与来自重组M13噬菌体的单链DNA退火，然后以此寡核苷酸作为引物在大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow大片段催化下合成互补的放射性标记DNA。 2.3单链RNA探针的制备 首先将感兴趣的DNA序列到带有SP6噬菌体或T7及T3噬菌体的启动子的重组载体质粒中。由于这些重组质粒带有的强启动子能被噬菌体的依赖DNA的RNA聚合酶所识别。因此，当把线状质粒与适当的依赖DNA的RNA聚合酶及4种rNTP(核糖核苷三磷酸)在体外混合并温育时，就可在噬菌体启动子处开始合成RNA。 单链RNA探针除具有单链DNA探针的优点之外，还具有：①合成效果高(模板可反复被转录)；②
分子蒸馏技术及其应用的研究进展(精)
综述与专论 分子蒸馏技术及其应用的研究进展 陈立军陈焕钦 (华南理工大学化学工程研究所,广州510640 摘要分子蒸馏是一种在高真空下进行的特殊蒸馏技术。分子蒸馏是一项国内外正在工业化开发应用的高新分离技术,尚未实现大规模的工业化。分子蒸馏技术同普通蒸馏技术的差别很大。介绍了分子蒸馏基本原理、技术特点、主要装置和优势。此外还详细介绍了分子蒸馏技术在国内外的应用新进展,并提出了未来分子蒸馏领域的重点研究方向。关键词 平均自由程分子蒸馏应用进展R esearch Progress in the T echnique of Molecular Distillation and its Application Chen Lijun Chen H uanqin (R esearch I nstitute of Chemical E ngineering ,Southern China U niversity of T echnology ,G uangzhou 510640 Abstract The m olecular distillation (short -path distillation or unobstructed distillation is a special separation technique of liquid -liquid and a special distillation technique under the high vacuum.It is an industrializing Hi -tech at home and abroad and not used in
核酸检测考核试题和答案大全
1.临床实验室若对检测系统进行性能核实,需要进行以下哪组实验(单项该题正确答案: A.精密度、准确 2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案: A、核酸分子杂交技术 3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案: D.小潮气量和低吸气压力 4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案: C、NTP 5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子 6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案 探针 7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案 A套管“或“伞型罩“连接 8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案 E、单分子测序 9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D 以上均不是 10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案: B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100% 11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项) 该题正确答案D、1000bp 关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案 E、分子信标设计简单 13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案: A《病原微生物实验室生物安全管理条例》 14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案 D丙型肝炎病毒 15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案 C.Tm减5℃ 16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是 17.下列关于Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案 E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键 18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案 D孔位不足时,可将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解,加热时间不变。 9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案: A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩 20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案 E.进行核酸提取的有效性评价 21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项)
核酸分子杂交技术与应用综述样本
核酸分子杂交技术与应用综述 摘要核酸分子杂交技术是20世纪70年代发展起来的一种崭新的分子生物学技术。它是基于DNA分子碱基互补配对原理, 用特异性的核酸探针与待测样品的DNA/RNA形成杂交分子的过程。分子杂交实验依据其形式的不同能够分为液相杂交、固相杂交、原位杂交, 而固相杂交又能够分为菌落杂交、点/狭缝杂交、 Southern印迹杂交和Northern印迹杂交。各类型杂交稻基本原理和步骤是基本相同的, 只是选用的杂交原材料、点样方法有所不同。 关键字核酸分子杂交液相杂交固相杂交原位杂交应用 本文是对分子杂交技术的原理和类型分类及其应用的一篇综述。旨在了解各种杂交类型的应用方向, 即在生物、医学上的应用。 一、核酸分子杂交原理 DNA分子是由两条单链形成的双股螺旋结构, 维系这一结构的力是两条单链碱基氢键和同一单链上相邻碱基间的范德华力。在一定条件下, 双螺旋之间氢键断裂, 双螺旋解开, 形成无规则线团, DNA分子成为单链, 这一过程称作变性或融解。加热、改变DNA融解的pH 值, 或有机溶剂等理化因素, 均可使DNA变性。变性的DNA粘度下降, 沉降速度增加, 浮力上升, 紫外光吸收增加。在温度升高引起的DNA变性过程中, DNA的变性会在一个很狭窄的 温度范围内发生, 这一温度范围的重点被称作融解温度T m 。T m 值得大小取决于核酸分子的G-C 含量, 核酸分子的G-C含量越高, 其T m 值越高。因为G-C碱基之间有三个氢键, 而A-T碱基之间只有两个氢键。变性DNA只要消除变性条件, 具有碱基互补的单链又能够重新结合形成双链, 这一过程称作复性。根据这一原理, 将一种核酸单链标记成为探针, 再与另一种核酸单链进行碱基互补配对, 能够形成异源核酸分子的双链结构, 这一过程称作杂交( hybridization) 。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补, 因此不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补序列就能够形成杂交体。 二、核酸分子杂交类型 ( 一) 固相杂交
核酸分子杂交
核酸分子杂交 概念及特点：核酸分子杂交技术的基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补配对成双链，用特异性的探针与待测样品的DNA或RNA形成杂交分子的过程。核酸分子杂交技术主要有以下几种：Southern杂交、Northern杂交、原位杂交（ISH）、荧光原位杂交（FISH）、芯片杂交。核酸杂交技术具有其高度特异性、灵敏性、快速等特点。 在环境监测中的应用：核酸分子杂交技可以快速检测出环境微生物中独特的核酸序列。如对活性污泥中的特定微生物的生长速率进行测定，根据放射性强度可以定量分析特定细菌的DNA量。在对被石油污染的土壤分析中，用核酸杂交法得到某种烃降解基因的检出率显著高于不污染样品，结果表明，污染越严重，这种降解基因的含量也越高，可用来评价中石油污染程度。 荧光原位杂交技术（FISH）是核酸原位杂交技术中应用最为广泛的技术之一。该技术结合了分子生物学的精确性和显微镜的可视性，无需单独分离出DNA或RNA，通过激发杂交探针的荧光来检测信号从而对未知的核酸序列进行检测，结果可直接在荧光显微镜下观察。GulnurCoskuner认为FISH技术能揭示更多硝化细菌的微生物学方面的信息及它们种群的大小，更有利于改进生物脱氮系统的工艺，避免了传统的、用培养方法计数带来的偏差。彭永臻等列举了FISH在活性污泥细菌检测，高效生物除磷（EBPR）反应器微生物群落的测定、污水处理微生物检测等方面的应用。 一、核酸分子杂交应用于物种之间亲缘关系的鉴定。把取自两种不同生物体细胞的DNA 进行RCR扩增，并同时带上不同的放射性标记。然后将其混合在一起，先高温解链，再低温复性。来自两种不同生物的DNA分子单链中的互补区域就可以互补配对。互补配对的区域越大，说明亲缘关系越近。 二、基因诊断：用带有标记的已知缺陷基因的特异性片段做探针，通过和待测样品DNA 中进行分子杂交，检测被测样品中是否含有缺陷基因。 三、疾病诊断：用带有放射性标记的病毒核酸的特异性片段做探针，检测待测者血液中是否含有该病毒。 四、和上面的疾病诊断相似，可以用核酸分子杂交法检测水被某种病毒感染的程度。 五、在基因工程中，用核酸杂交法检验目的基因是否导入受体细胞和目的基因是否在受体细胞中转录出了相应的mRNA。 除了核酸分子杂交法外，还有抗原-抗体杂交法，实际上是利用抗原和抗体的特异性结合。由于单克隆抗体技术的发展，此法在疾病诊断中具有特异性强、灵敏度高等优点。着两种方法都可以广泛的应用于环境监测中。 1、细胞遗传学分析 ①产前诊断：在新生儿的先天性疾病中，染色体的数目异常要占很大的一部分，其中以染色体X、Y、13、18和21数量的异常最为多见。利用FISH技术的优势还可以用于产前诊断中的羊水细胞核型分析。常规的染色体型分析技术需要对羊水细胞进行培养，时间较长。FISH技术可以在少量的羊水细胞涂片上进行异常染色体的数目分析，不需要羊水细胞的培养，记得地缩短了病人等待的时间。
分子蒸馏技术的原理和应用(精)
分子蒸馏技术的原理和应用 分子蒸馏技术简介 分子蒸馏是一项较新的尚未广泛应用于产业化生产的分离技术，能解决大量常规蒸馏技术所不能解决的题目。分子蒸馏是一种特殊的液－液分离技术，能在极高真空下操纵，它依据分子运动均匀自由程的差别，能使液体在远低于其沸点的温度下将其分离，特别适用于高沸点、热敏性及易氧化物系的分离。由于其具有蒸馏温度低于物料的沸点、蒸馏压强低、受热时间短、分离程度高等特点，因而能大大降低高沸点物料的分离本钱，极好地保护了热敏性物质的特点品质，该项技术用于纯自然保健品的提取，可摆脱化学处理方法的束缚，真正保持了纯自然的特性，使保健产品的质量迈上一个新台阶。 分子蒸馏技术，作为一种对高沸点、热敏性物料进行有效的分离手段，自本世纪三十年代出现以来，得到了世界各国的重视。到本世纪六十年代，为适应浓缩鱼肝油中维生素Ａ的需要，分子蒸馏技术得到了规模化的产业应用。在日、美、英、德、苏相继设计制造了多套分子蒸馏装置，用于浓缩维生素Ａ，但当时由于各种原因，应用面太窄，发展速度很慢。但是，在过往地三十多年中，人们一直在不断地重视着这项新的液－液分离技术的发展，对分离装置精益求精、完善，对应用领域不断探索、扩展，因而一直有新的专利和新的应用出现。特别是从八十年代末以来，随着人们对自然物质的青睐，回回自然潮流的兴起，分子蒸馏技术得到了迅速的发展。 对分子蒸馏的设备，各国研制的形式多种多样。发展至今，大部分已被淘汰，目前应用较广的为离心薄膜式和转子刮膜式。这两种形式的分离装置，也一直在精益求精和完善，特别是针对不同的产品，其装置结构与配套设备要有不同的特
点，因此，就分子蒸馏装置本身来说，其开发研究的内容尚十分丰富。 在应用领域方面，国外已在数种产品中进行产业化生产。特别是近几年来在自然物质的提取方面应用较为突出，如：从鱼油中提取EPA与DHA、从植物油中提取自然维生素E等。另外，在精细化工中间体方面的提取和分离，品种也越来越多。 我国对分子蒸馏技术的研究起步较晚，八十年代末期，国内引进了几套分子蒸馏生产线，用于硬脂酸单甘酯的生产。国内的科研职员也曾经作过一些研究，但未见产业化应用的报道。 分子蒸馏成套产业化装置具有设计新奇、结构独特、工艺先进，可明显进步分离效率。从小试到产业化生产又到小试的反复循环实验探索中，特别解决了产业化生产中轻易出现的突出题目。如有效地解决了物料返混题目，明显地进步了产品质量，创造性地设计了有补偿功能的消息密封方式；实现了产业装置高真空下的长期稳定运行。该项技术属国内领先、国际先进。 截止目前为止已经开发的产品有二十余种，如：硬脂酸单甘酯、丙二醇酯、玫瑰油、小麦胚芽油、米糠油、谷维素等。并已确定了应用分子蒸馏技术的有关工艺条件，为进行产业化生产奠定了基础。 分子蒸馏的原理和装置的结构决定其有如下特点： １、分子蒸馏的操纵温度远低于物料的沸点： 由分子蒸馏原理可知，混合物的分离是由于不同种类的分子溢出液面后的均匀自由程不同的性质来实现的，并不需要沸腾，所以分子蒸馏是在远低于沸点的温度下进行操纵的，这一点与常规蒸馏有本质的区别。 ２、蒸馏压强低： 由于分子蒸馏装置独特的结构形式，其内部压强极小，可以获得很高的真空，因此分子蒸馏是在很低的压强下进行操纵，一般为×10-1Pa数目级（×10-3为托数目级）。
核酸分子杂交的种类及应用
核酸分子杂交 摘要:核酸分子杂交技术就是基因工程中重要的研究手段,就是目前生物化学、分子生物学、与细胞生物学研究中应用最广泛的技术之一。也就是现阶段定性、定量与定位检测DNA与RNA序列片段必须掌握的基本技术与方法。本文主要介绍了核酸分子的原理,分类以及它的相关应用。 关键词:核酸分子;分类;应用; 1、核酸杂交技术的原理 核酸分子(DNA、RNA)就是由许多单核苷酸分子通过3,5磷酸二酯键相互连接所形成的生物大分子。DNA分子双链的形成,DNA的复制,以及RNA的转录等都遵循碱基互补配对原则。DNA就是由两条互补配对的单核苷酸链通过氢键连接的双链分子。双链结构的核酸分子在加热、偏碱环境或受尿素、甲酰胺等氢键解离剂的作用,则形成单链分子,称为核酸“变性”。两条单链核甘酸若有同源顺序,则在一定条件下,她们的碱基互补配对,从而形成双链分子,称为核酸“复性”或核酸“杂交”[1]。核酸分子杂交就是用核酸分子的变性,复性等理化性质而设计的一种常用技术。通常利用一种顺序已知,并被放射性同位素标记的核酸片段瞧作为探针,与未知样品的核酸进行分子杂交,如果样品中的核酸与探针有碱基互补顺序就能形成杂交分子。此时标有同位素或生物素的探针则固定在标本上,用放射性自显影法或免疫组化法可显示出探针[2]。 核酸分子杂交可分为液相杂交、固相杂交与原位杂交[3]。 2、固相分子杂交: 将待测的靶核甘酸链预先固定在固体支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,而标记的探针则游离在溶液中,进行杂交反应后,使杂交分子留在支持物上,然后再进行检测与计算。 固相分子杂交又可分为:Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、Western印迹杂交、斑点杂交、菌落原位杂交等。 2、1 Southern印迹杂交 1975年建立的一种DNA转移方法。该法利用硝酸纤维素膜(或经特殊处理的滤纸或尼龙膜)具有吸附DNA的功能。首先用酚提法从待检测组织中提取DNA,然后以限制性内切酶消化待测的DNA片段,接着进行琼脂糖凝胶电泳使DNA按分子量大小分离,电泳完毕后,将凝胶放入碱性溶液中使DNA变性,解离为两条单链。再在凝胶上贴上硝酸纤维素膜,使凝胶上的单链DNA区带按原来的位置吸印到膜上。然后直接在膜上进行核酸探针(已被同位素标记)与被测样品之间的杂交,再通过放射自显影对杂交结果进行检测[4]。 2、2 Northern印迹杂交 1976年Alwine建立了该方法。这就是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。其检测过程与Southern转移杂交基本相同,所不同的就是用DNA探针检测经凝胶电泳分开的RNA分子。它主要用于研究基因的转录活性及表达[5]。 2、3 Western印迹杂交 Western印迹就是指将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,然后转移至到固相载体上,然后用抗体通过免疫学反应检测目的蛋白,分析基因的表达程度。
(完整版)现代分子生物学试题答案
1．SD序列：起始密码子AUG上游5-10个核苷酸处，有一段可与核糖体16S rRNA配对结合的、富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为AGGA(也有说是AGGAGG)，此序列称 SD序列(Shine-Dalgarno sequence) 2．顺式作用元件：cis-acting element是指对基因表达有调控活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同处于一个DNA 分子上的基因 3．核小体nucleosome构成真核染色质的一种重复珠状结构，是由大约200 bp的DNA区段和多个组蛋白组成的大分子复合体。其中大约146 bp的DNA区段与八聚体(H2A、H2B、H3和H4各两分子)的组蛋白组成核小体的核心颗粒，核心颗粒间通过一个组蛋白H1的连接区DNA彼此相连。 基因产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。 冈崎片段Okazaki fragment 在DNA不连续复制过程中，沿着后随链的模板链合成的新DNA片段， 模板链DNA双链中其序列与编码链或信使核糖核酸互补的那条链。在DNA复制或转录过程中，作为模板指导新核苷酸链合成的亲代核苷酸链。 基因家族真核生物的基因组中有很多来源相同、结构相似、功能相关的基因，将这些基因称为基因家族 蛋白质内含子其DNA序列与外显子一起转录和翻译，产生一条多肽链，然后从肽链中切除与内含子对应的aa序列，再把与外显子对应的氨基酸序列连接起来，成为有功能的蛋白质。 翻译内含子mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这一序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列 Northern blot过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段 Sorthern blot 蛋白激酶C protein kinase丝氨酸/苏氨酸激酶的家族成员。在多种免疫受体介导的信号转导中可被二酰甘油和钙离子所激活。 原癌基因proto-oncogene调控细胞生长和增殖的正常细胞基因。突变后转化成为致癌的癌基因。 多顺反子mRNA两个以上相关基因串在一起转录所得到的信使核糖核酸(mRNA)。多顺反子mRNA一般可同步翻译产生功能相关的多个蛋白质或酶。 Alternative splicing在高等真核生物中，内含子通常是有序或组成型地从mRNA前体分子中被剪接，然而，在个体发育或细胞分化时，可以有选择地越过某些外显子或某个剪接点进行变位剪接，产生出组织或发育阶段特异性mRNA，成为内含子的可变剪接。 端粒酶端粒酶是一种含RNA链的逆转录酶，通过识别并结合于富含G的端粒末端，以所含的RNA为模板，逆转录合成端粒。 X染色体失活人和鼠的Xist（ Xi-specific transcript）基因只在失活的X染色体上表达，编码一功能性RNA分子，此分子能与Xic位点相互作用，引起后者构象变化，更容易与各种蛋白因子相结合，最终导致X染色体失活 锌指结构指的是在很多蛋白中存在的一类具有指状结构的结构域，这些具有锌指结构的蛋白大多都是与基因表达的调控有关的功能蛋白由一个含有大约30个氨基酸的环和一个与环上的4个Cys或2个Cys和2个His配位的Zn构成， 反式作用因子trans-acting factor是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。 染色质chromatin chromosome 指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式。 所谓C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。 一般高等生物的C值均大于低等生物,但某些植物或两栖动物的C值比人高出几十倍,这种C值与进化复杂性不一致的现象称为C值反常现象或称为C值矛盾（C-value paradox） 断裂基因或不连续基因（interrupted/discontinuous genes） 所谓断裂基因就是基因的编码序列在DNA分子上是不连续的，为不编码的序列所隔开。编码的序列称为外显子（exon），不编码的序列称为内含子（intron）。 寡核苷酸（oligonucleotide）：一般是指二至十个核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。 回文序列是指沿同一方向(如5’→3’)序列相同的结构，即碱基序列的反向重复(inverted repeats) 核酸的变性：是指核酸双螺旋区的氢键断裂，DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象 变性的DNA在适当的条件下，两条彼此互补的DNA单链可以重新缔合形成双螺旋结构，这个过程称之为复性 DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制
完整版分子生物学期末复习试题及答案
一、名词解释 二、分子生物学：包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构与功能，以及从分子水平研究生命活动 RNA组学：RNA组学研究细胞中sn mRNA啲种类、结构和 功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、不同状态下sn mRNA啲表达具有时间和空间特异性。增色效应：DNA变性时其溶液OD260曽高的现象。 减色效应：DNA复性时其溶液OD260笔低的现象。 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%寸的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm) 。其大小与G+C含量成正比。 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260 (absorbanee , A, A260代表溶液在260nm处的吸光率) 值作图，所得的曲线称为解链曲线。 DNA复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 核酸分子杂交：在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件(温度及离子强度) 下，就可以在不同的分子间形成杂化双链，这种现象称为核酸分子杂交。 基因：广义是指原核生物、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位。狭义指能产生一个特定蛋白质的DNA序列。 断裂基因：不连续的基因称为断裂基因，指基因的编码序列在DNA上不连续排列而被不编码的序列所隔开。 重叠基因：核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因，或称嵌套基因。 致死基因：删除后可导致机体死亡的基因。 基因冗余：由于一基因在个体中有若干份拷贝，当删除其中一个时，个体的表型不发生明显变化。 DNA重组：DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合， 又称为遗传重组或基因重排。 同源重组：发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组。 接合作用：当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)的DNA转移称为接合作用(conjugatio n)。 转化作用：通过自动获取或人为地供给外源DNA使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，称为转化作用(transformation) 。 转导作用：当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来、再次感染另一 (供体) 细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用位点特异重组：位点特异重组(site-specific recombi natio n) 是由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。 12-23规则：重组发生在间隔为12bp到23bp的不同信号序列之间，称为12-23 规则。 转座子： ( transposon )在基因中可以移动的一段DNA 序列。 转座：由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition) 。 克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon) ，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 基因工程：(genetic engineering) 实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组DNA X艺学。限制性核酸内切酶：(restriction endonuclease, RE) 是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的—类内切酶。 同功异源酶：来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同功异源酶。 同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。 载体：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 复制：(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA 为模板合成子链DNA的过程。 半保留复制： ( semi-conservative replication )DNA 生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template) 按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。 子代细胞的DNA 一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DN 碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 复制子：(replicon ) DNA分子中能独立进行复制的单位称为复制子。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子。 复制眼：(replication eye ) DAN正在复制的部分在电 镜下观察起来犹如一只眼睛，称为复制眼。 复制叉： ( replication fork )复制一开始，复制起始点要形成一个特殊的叉型结构，是复制有关的酶和蛋白质组装成复合物