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茜素红染色预实验

茜素红染色

成骨分化是干细胞的一个重要特性。在特定的诱导培养基作用一段时间后,干细胞可分化为成骨细胞,在细胞表面沉积钙盐,形成钙结节。应用茜素红的复合物,可用于鉴定干细胞是否已成功向成骨细胞转化

一.实验目的:通过茜素红染色检测细胞成骨分化

二.实验原理:

1.成骨诱导的过程是使钙离子能够以钙盐的方式沉淀下来,即“钙结节”,鉴定钙结节的染色方法常用茜素红染色法。

2.茜素红:茜素磺酸钠,茜素S,茜素红S,茜素胭脂红,1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠,1,2-二羟基蒽醌-3-磺酸钠盐。橙黄色或黄棕色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于苯和氯仿。1%水溶液pH为2.15,其水溶液呈前黄褐色,加盐酸后变为黄色,加氢氧化钠后则变成蓝紫色。有刺激性。能与许多金属离子生成有色化合物,能与锆、钍、铝、钛及钙发生显色反应。

3.染色原理:茜素红与钙发生显色反应,产生一种深红色的带色化合物,这样成骨诱导的细胞外面沉积的钙结节也就被染成了深红色。

三.实验试剂及仪器

1.试剂:PBS 10%甲醛缓冲液0.1%茜素红-Tris-HCL染液蒸馏水

2.仪器:倒置显微镜

四.实验步骤

1.弃培养液,PBS冲洗2次

2.10%甲醛缓冲液固定10min

3.蒸馏水冲洗3次

4.加入0.1%茜素红-Tris-HCL染液(pH8.3),37℃下染色30min

5.蒸馏水冲洗

6.在倒置显微镜下观察有无茜素红染色阳性细胞

五.实验结果及讨论

茜素红染色预实验

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