流式细胞术的发展、原理及临床应用
综述Sum m ar i ze
流式细胞术的发展、原理及临床应用
张玮玮
(河北保定解放军252医院检验科071000)
流式细胞术(FcM)是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。是近年来随着细胞生物学、分子生物学、激光技术、电子计算机技术等学科的高度发展而形成的一种对细胞或生物粒子的结构、功能以及相互间作用进行多参数分析的技术，具有速度快、敏感性高、准确性好等优剧L卫。下面就从FC M的发展，原理以及临床应用上进行一综述，供大家参考。
1FC M的发展
1930年人类致力于细胞的计数，1947年烟雾微粒计数器研制成功，1954年光电粒子计数器的诞生，1969年发明第一台荧光检测细胞计，1972年细胞分选器的改进型研制成功，1975年提出单克隆抗体技术，现今随着光电技术的进一步发展，流式细胞仪已开始向模块化发展。进入了2l世纪，流式细胞术已经日臻完善，成为分析细胞学领域中无可替代的重要工到烈。
2FC M的原理
流式细胞仪主要由4部分组成：液流系统、光学系统、电子系统、分析系统。它只能检测悬浮的单细胞或微粒的信号。一般是将待测细胞或微粒进行荧光染色后制成悬液标本，在一定气体压力下将待测样品压入流动室，形成一个圆形的流束(即鞘流)，在激光束的照射下产生散射光和激发荧光，这些荧光信号的强度代表所测细胞膜表面抗原的强度或其细胞内、核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模／数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，从而使计算机采集．分析拉】o
3FC M的临床应用
3．1FCM在血液学中的应用
近年来自血病／淋巴瘤的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤的重要标准之一。目前国内外均主张采用FCM C D45／SSC双参数散点图设计方法进行自血病免疫分型，采用此法可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞、单核细胞、成熟粒细胞、幼稚细胞和有核红细胞群，这样可以排除正常细胞对免疫分型的干扰，从而提高了免疫分型的准确性。采用流式细胞术有助于白血病亚型的诊断，特别对用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源时及杂合性白血病。此外，在A M L治疗过程中，包括初次诱导治疗以及形态学缓解后的流式细胞术监测对患者的复发以及总的无病生存率均有独立的预后判断意义。因此，流式细胞术对于A M L的临床治疗尤其是个体化治疗面也有极其重要的指导意义删。
单核细胞C D45，C D33．C D l l b表达的荧光强度高于
粒细胞，而粒细胞C D l5表达的荧光强度高于单核细胞，从
而有助于鉴别粒细胞和单核细胞。C D l4阳性病例可以除
外淋系白血病H1。．细胞是否为单克隆性是判定良、恶性淋巴组织增生
的重要依据，尤其是B—N H L的诊断，这也是FCM的一个
显著优势，因为它能进行定量分析。在正常或良性增生的
淋巴组织中，两种免疫球蛋白轻链的表达比率(K／入)接近
40*／,～60％，因此，当细胞群不表达免疫球蛋白轻链或表达
的比率明显偏离正常时，即K／入的比值>3／l或<1／2时，
可认为该群细胞具有单克隆性…。
此外，还可采用流式细胞术进行血小板相关抗体的检
测、血小板膜表面糖蛋白分析、血小板活化分析等，红细
胞表面相关免疫球蛋白测定、红细胞血型抗原分析等B别。
3．2F C M在肿瘤中的应用
流式细胞术利用实体瘤标本或穿刺标本、胸腹腔液
体、膀胱冲洗液、尿液、食道镜及支气管镜钳取的少量活23检组织等对肿瘤细胞D N A含量测定，解析细胞周期，通过——肿瘤细胞异倍体测定，鉴别良性与恶性肿瘤，预测各种癌的孚预后，并能在化疗中对药物的选择，放疗中强度、时间的决量定等起主要作用。根据细胞周期分析结果，适当选用周期基特异性药物或非周期特异性药物，可协助拟定治疗方案；根=据化疗过程中肿瘤细胞D N A含量分布直方图的变化，可了鸯解细胞动力学变化，以此评估药物疗效州。毫‘3．3FCM在免疫学中的应用
FCM根据直接荧光染色的原理，利用荧光标记的抗
B27的M c A b和淋巴细胞表面的B27抗原结合，根据通道值的
高低判断B27抗原阳性或阴性。C hou等报道FCM的敏感性98．6％，特异性85．7‰但其结果易受单抗质量的影响F’。
采用流式细胞仪检测外周血中红细胞和中性粒细胞
表达的膜糖基磷脂酰肌醇(C PI)连接的补体调节蛋白CD55
和C D59是日前诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PN H)最
可靠．最敏感的方法。外周血中只要C D55和CD59阴性的
细胞占3％以上，流式细胞术即可检出，其灵敏度和特异性
优于传统的酸溶血实验，并能对PN H进行正确分型，该方
法还可作为目前l临床鉴别诊断PN H与其它类型贫血的较
好方法吲。
3．4FCM在微牛物中的应用
FCM可进行病毒抗原、抗体检测。还可通过荧光染
料标记检测病原菌，毒素和血清抗体，还可用于抗生素敏
感性试验，对抗生索后效应、细菌耐药的异质性等进行分