基于网络药理学的吴茱萸汤作用机制分析_刘鑫馗
基于网络药理学的吴茱萸汤作用机制分析
刘鑫馗，吴嘉瑞*，蔺梦娟，张晓朦
（北京中医药大学，北京100102）
［摘要］目的：探讨吴茱萸汤的功效物质基础和配伍机制。方法：依托中药系统药理学分析平台（TCMSP）检索吴茱萸汤全方4味中药的化学成分和作用靶点。进而构建化合物-靶点网络、蛋白互作（PPI）网络、靶点-通路网络，研究吴茱萸汤作用机制。结果：化合物-靶点网络包含29个化合物和相应靶点77个，关键靶点涉及PTGS2，PTGS1等。PPI网络包含70个蛋白，关键蛋白涉及AP-1，BCL2，HSP90α等。基因本体（GO）条目145个，其中生物过程相关的条目100个，分子功能相关的条目23个，细胞组成相关的条目22个。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路3条，涉及钙离子信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路、癌症信号通路。结论：本研究结果初步验证了吴茱萸汤的基本药理作用及其机制，并为进一步深入揭示其作用机制奠定了良好基础。
［关键词］吴茱萸汤；网络药理学；蛋白质-蛋白质相互作用；基因本体；通路
［中图分类号］Ｒ285［文献标识码］A［文章编号］1005-9903（2017）16-0203-08
［doi］10.13422/j．cnki．syfjx．2017160203
［网络出版地址］http：//kns．cnki．net/kcms/detail/11．3495．Ｒ．20170420．0936．020．html
［网络出版时间］2017-04-209：36
Study on Mechanism of Wuzhuyu Tang Based on Network Pharmacology
LIU Xin-kui，WU Jia-rui*，LIN Meng-juan，ZHANG Xiao-meng
（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing100102，China）
［Abstract］Objective：To investigate the efficacy and compatibility mechanism of Wuzhuyu Tang．Method：The chemical components and targets related to the four Chinese herbal medicines were searched from the Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform（TCMSP）．The compound-target network，protein-protein interaction（PPI）network，and target-pathway network were constructed to explore the mechanism of Wuzhuyu Tang．Ｒesult：The compound-target network contain29chemicalcomponents and77 targets．The hub targets involve PTGS2，PTGS1and so on．The PPI network contain70proteins，in which the hub proteins involve AP-1，BCL2，HSP90αand so on．In the gene ontology（GO）functional enrichment analysis，there are145GO terms（100Biological Process，23Molecular Function，22Cellar Component）．The pathway enrichment analysis contains3pathways：calcium signaling pathway，neuroactive ligand-receptor interaction，and pathways in cancer．Conclusion：The result of the study preliminarily verifies the basic pharmacological effects and related mechanisms of Wuzhuyu Tang，thuslaying a solid foundation for deeply study on the mechanism of action．
［Key words］Wuzhuyu Tang；network pharmacology；protein-protein interaction（PPI）；gene ontology （GO）；pathway
［收稿日期］20170125（002）
［基金项目］国家自然科学基金项目（81473547，81673829）
［第一作者］刘鑫馗，在读硕士，从事临床中药学研究，Tel：158********，E-mail：lxkchuige@https://www.wendangku.net/doc/762896019.html,
［通讯作者］*吴嘉瑞，博士，教授，硕士生导师，从事临床中药学研究，Tel：010-********，E-mail：exogamy@https://www.wendangku.net/doc/762896019.html,
吴茱萸汤出自汉代张仲景《伤寒论》，由吴茱萸、生姜、人参、大枣4味药物组成。方中吴茱萸辛苦性温，入肝、肾、脾、胃经，上可温胃散寒，下可温暖肝肾，又能降逆止呕，为君药；生姜为臣，温胃散寒，降逆止呕；佐以甘温之人参，补益中焦脾胃之虚；使以甘平之大枣，益气补脾，调和诸药［1］。吴茱萸汤具有温中补虚、降逆止呕之功效，主治虚寒呕吐、食谷欲呕、厥阴头痛和胃脘痛等［2-3］，临床中广泛应用于慢性胃炎、急慢性胃肠炎、慢性胆囊炎、头痛、神经官能症、神经性呕吐、原发性青光眼、美尼尔氏综合征、高血压、消化性溃疡等［3-5］。现代药理研究及临床应用表明，吴茱萸汤对消化系统、神经和精神系统、循环系统以及妇、儿、泌尿、眼、耳鼻喉、传染、肿瘤等各科疾病有着广泛的作用与疗效［6］。中药是多组分、多靶点及其组分间协同作用的复杂体系，因其成分复杂、系统庞大，使得中药的深入研究呈现巨大困难，而中药网络药理学则为复杂中药系统的研究提供了新的思路和视角［7］。网络药理学融合了系统生物学和多向药理学的思想，它从整体的角度探索药物与疾病的关联性，强调从药物、靶点与疾病间相互作用的整体性和系统性出发，反映及阐释中药的多成分-多靶点作用关系，其研究策略的整体性、系统性特点与中医学从整体观念、辨证论治的角度去诊治疾病的理论不谋而合，已被广泛用于中药潜在活性成分和作用靶点的预测及中药作用机制的阐述［8-10］。本研究采用网络药理学方法分析和预测吴茱萸汤作用机制，希冀为揭示吴茱萸汤作用机制的科学内涵提供参考。
1材料与方法
1.1吴茱萸汤的化学成分本研究依托中药系统药理学分析平台（TCMSP）（http：//ibts．hkbu．edu．hk/LSP/tcmsp．php）检索吴茱萸汤全方吴茱萸、人参、大枣、生姜的所有化学成分，共搜集了764个化合物，其中吴茱萸176个、人参190个、大枣133个、生姜265个。
1.2阈值筛选本研究中，吴茱萸、人参、大枣中的化合物口服生物利用度（OB）筛选阈值均为OB≥50%，生姜中的化合物OB筛选阈值为OB≥30%，4味药中的化合物类药性（DL）筛选阈值均为DL≥0.18。通过筛选，764个化合物分子中有29个符合条件，并将其作为候选化合物。
1.3化合物-靶点网络的构建将吴茱萸汤的化合物和相关靶点通过Cytoscape3.4.0软件（http：// www．cytoscape．org/）构建化合物-靶点网络，以探究吴茱萸汤的药理学作用机制。
1.4蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络的构建
为了说明靶点蛋白在系统水平上的作用，将统计所得的吴茱萸汤79个基因上传至在线STＲING10.0软件（http：//string-db．org），设定打分值为高置信度0.7，获取蛋白相互作用信息。将得到的蛋白相互作用数据导入Cytoscape3.4.0软件构建PPI网络，并且利用Ｒversion 3.3.2软件（https：//www．r-project．org/）对PPI网络中Degree前30的蛋白绘制条形图。
1.5基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析为了说明中药化合物的靶点蛋白在基因功能和信号通路中的作用，本研究采用David v6.7数据库（https：//david．ncifcrf．gov/）对PPI网络中的蛋白进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。通过Cytoscape 3.4.0软件对KEGG通路富集分析中筛选出的信号通路构建靶点-通路网络。
2结果
2.1活性化合物的筛选OB是药物吸收、分布、代谢、排泄特性（ADME）中最重要的药代动力学参数之一，它表示口服的药物到达血液循环系统所占口服剂量的比率，高的口服生物利用度通常是决定生物活性分子（即有药效作用的分子）类药性的关键指标［11-12］。为了使筛选的化学成分更具有代表性，同时所筛选出的化合物能够全面反映吴茱萸汤的药理学数据性质，因此本研究中吴茱萸、人参、大枣中的化合物筛选阈值均为OB≥50%，DL≥0.18，生姜中的化合物筛选阈值为OB≥30%，DL≥0.18。通过筛选，从吴茱萸汤的4味中药中的764个化合物中得到了的29个活性成分。其中，有9个活性成分来自吴茱萸，8个来自于人参，9个来自于大枣，5个来自于生姜（人参和大枣含有2个相同的活性成分）。表1为吴茱萸汤中含有的29个活性成分基本信息。
2.2吴茱萸汤化合物-靶点相互作用网络化合物-靶点网络总共包括97个节点（20个化合物节点，77个靶点节点）和288条边，其中橙色节点表示化合物分子，蓝色节点表示药物靶点，每条边则表示化合物分子与靶点之间的相互作用关系（图1），29个化合物中有9个未参与网络构建。在网络中，1个节点的度（Degree）表示网络中和节点相连的路线的条数。根据网络的拓扑学性质筛选Degree较大的节点进行分析，这些连接化合物或靶点较多的
表1吴茱萸汤中含有的29个活性成分基本信息
Table1Information for29active compounds of Wuzhuyu Tang
编号名称OB/%DL来源M12940spiradine A113.520.61大枣M5314celabenzine101.880.49人参M12992mauritine D89.130.45大枣M8647moupinamide86.710.26大枣M3958evodiamine86.020.64吴茱萸M4018goshuyuamide I83.190.39吴茱萸M4014evodiamide73.770.28吴茱萸M803421302-79-473.520.77大枣M3963hydroxyevodiamine72.110.71吴茱萸M4019goshuyuamideII69.110.43吴茱萸M3410ziziphin_qt66.950.62大枣M5308aposiopolamine66.650.22人参M3942rutaevine66.050.58吴茱萸M5321frutinone A65.90.34人参M3648inermin65.830.54人参M4021gravacridoneshlirine63.730.54吴茱萸M5356girinimbin61.220.31人参M787fumarine59.260.83人参，大枣M5360malkangunin57.710.63人参，大枣M5384suchilactone57.520.56人参M4025N-（2-methylaminobenzoyl）tryptamine56.960.26吴茱萸M211mairin55.380.78大枣M4017fordimine55.110.26吴茱萸M492（+）-catechin54.830.24大枣M61296-methylgingediacetate248.730.32生姜M8698dihydrocapsaicin47.070.19生姜M449stigmasterol43.830.76生姜M358beta-sitosterol36.910.75生姜
M1771poriferast-5-en-3beta-ol36.910.75
生姜
橙色表示化合物，蓝色表示靶点，节点的大小与节点的度呈正比例关系（图4同）
图1吴茱萸汤化合物-靶点网络
Fig．1Compound-target network of Wuzhuyu Tang 节点在整个网络中起到枢纽的作用，可能是关键的化合物或者靶点。表2列出了化合物-靶点网络中的关键节点及其拓扑学性质。该网络中，每个化合物的平均靶点数目为10个，每个靶点平均与4个化合物相互作用，因此吴茱萸汤中存在一个化合物与多个靶点之间的相互作用，同时也存在不同化合物共同作用于同一个靶点的现象，这体现了吴茱萸汤多成分与多靶点之间共同作用的机制，同时也符合中药复方的特点。从化合物的角度，有70%的化合物的作用靶点≥10个，其中靶点≥21个的化合物有5个。Degree排名前2位的是生姜中的植物甾醇类成分β-谷甾醇（M358）和豆甾醇（M449），分别能与37个和31个靶点蛋白发生相互作用，远高于其他化合物。人参和大枣中的原阿片碱（M787）作用靶点28个，吴茱萸中的吴茱萸碱（M3958）作用靶点22个、吴茱萸果酰胺Ⅰ（M4018）作用靶点21个。从靶点的角度，Degree排名前2位的是前列腺素内过氧化物合酶
2（PTGS2）和前列腺素内过氧化物合酶1（PTGS1），分
别能与17个和15个化合物发生相互作用。靶点
PＲKACA 和SCN5A 均对应了14个化合物，ADＲB2，HSP90AA1分别对应了13个和12个化合物。
表2
化合物-靶点网络的关键节点及其拓扑学性质Table 2
Topology characteristics of hub nodes from compound-target network
名称
类别介数度beta-sitosterol （M358）compound 0.3399536537stigmasterol （M449）compound 0.2656778131fumarine （M787）compound 0.1592386328evodiamine （M3958）compound 0.0715605522goshuyuamide Ⅰ（M4018）compound 0.0476322521inermin （M3648）compound 0.0423444618goshuyuamide Ⅱ（M4019）compound 0.023*******PTGS2
target 0.0942011517suchilactone （M5384）compound 0.0443534216frutinone A （M5321）compound 0.0853678016PTGS1
target 0.0693432715evodiamide （M4014）compound 0.0128742514SCN5A target 0.0483734514PＲKACA
target 0.0546749514hydroxyevodiamine （M3963）compound 0.0265008213ADＲB2target 0.0441617213HSP90AA1
target 0.0364242212N -（2-methylaminobenzoyl ）tryptamine （M4025）compound 0.0094798511ＲXＲA
target 0.023*******girinimbin （M5356）compound 0.0062168410F10
target 0.0136010810（+）-catechin （M492）
compound
0.06046123
10
2.3
吴茱萸汤靶点PPI 网络的构建与分析
PPI
节点表示蛋白，节点的大小与节点的度呈正比例关系图2吴茱萸汤相关靶点的PPI 网络
Fig．2
PPI network of Wuzhuyu Tang related targets
网络（图2）包含70个节点，188条边，其中节点表示蛋白，每条边则表示蛋白与蛋白之间的相互作用
关系。根据节点的Degree 绘制出了前30个关键蛋白质节点的条形图（图3）。Degree ≥10的节点包括JUN ，BCL2，HSP90AA1，HTＲ2A ，NOS3，PGＲ，ESＲ1
，
图3PPI 网络中的关键节点Fig．3
Hub nodes from PPI network
AＲ，CHＲM1，F2，PPAＲG ，PＲKACA ，TGFB1。Degree
最高的是JUN 编码的转录因子活化蛋白-1（activator protein-1，AP-1）。BCL2和HSP90AA1的Degree 均为15。
2.4GO 富集与通路富集分析
利用DAVID 平台
的GO和PATHWAY富集分析功能，对吴茱萸汤PPI 网络中涉及的70个蛋白的功能进行了研究。在GO 富集分析中，根据错误发现率（false discovery rate，FDＲ）确定了145个GO条目（FDＲ＜0.05，表3根据FDＲ列出前20个），其中生物过程相关的条目100个，涉及系统过程的调控、多细胞生物过程的调控、信号转导、细胞增殖的调控、刺激反应的调控等方面；分子功能相关的条目23个，涉及受体活性、胺结合、神经递质结合、药物结合、乙酰胆碱结合等方面；细胞组成相关的条目22个，涉及质膜、突触、轴突等方面。
表3吴茱萸汤PPI网络中的GO条目（FDＲ＜0.05）
Table3List of GO enrichment results to genes in PPI network（FDＲ＜0.05）
类别编号名称基因数/个FDＲ
分子功能0008227amine receptor activity14 1.11526?10－17分子功能0043176amine binding169.70332?10－15细胞组成0044459plasma membrane part40 6.83897?10－12细胞组成0005886plasma membrane498.62754?10－11生物过程0044057regulation of system process18 1.6398?10－10分子功能0042165neurotransmitter binding13 1.79345?10－10分子功能0008144drug binding11 3.16380?10－10生物过程0051241negative regulation of multicellular organismal process14 1.83656?10－9分子功能0030594neurotransmitter receptor activity12 2.17382?10－9细胞组成0045211postsynaptic membrane13 3.03810?10－9细胞组成0031226intrinsic to plasma membrane28 6.42244?10－9分子功能0042166acetylcholine binding8 1.03394?10－8生物过程0019932second-messenger-mediated signaling15 1.12876?10－8生物过程0051240positive regulation of multicellular organismal process15 1.87522?10－8生物过程0042127regulation of cell proliferation23 1.88736?10－8生物过程0014070response to organic cyclic substance12 2.62474?10－8生物过程0032101regulation of response to external stimulus13 2.64881?10－8细胞组成0005887integral to plasma membrane27 2.69574?10－8生物过程0010033response to organic substance22 2.93206?10－8生物过程0007242intracellular signaling cascade27 1.21741?10－7
在通路富集分析中，得到23条信号通路，根据FDＲ＜0.05筛选出3条信号通路（表4，图4），包括钙离子信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路、癌症信号通路，表明吴茱萸汤的有效成分可能通过作用于这些信号通路来达到治疗疾病的目的。本研究中，有20个基因富集在钙离子信号通路上，分别为PＲKCA，DＲD1，CACNA1S，CHＲM5，ADＲB2，ADＲB，CHＲM3，CHＲM2，CHＲM1，ADＲA1B，CALM3，ADＲA1A，NOS3，CHＲNA7，PＲKACA，NOS2，CALM2，ADＲA1D，CALM1，HTＲ2A；有20个基因富集在神经活性配体-受体相互作用信号通路上，分别为OPＲM1，DＲD1，GABＲA2，GABＲA1，GABＲA3，GABＲA5，CHＲM5，ADＲB2，ADＲB1，CHＲM4，CHＲM3，CHＲM2，CHＲM1，F2，ADＲA1B，ADＲA2A，ADＲA1A，ADＲA1D，HTＲ2A，OPＲD1；有15个基因富集在癌症信号通路上，分别为PＲKCA，PIK3CG，AＲ，HSP90AA1，PTGS2，ＲXＲA，PPAＲG，TGFB1，Caspase-3，Caspase-9，JUN，Bax，Bcl-2，Caspase-8，NOS2。
表4吴茱萸汤PPI网络中的通路（FDＲ＜0.05）
Table4List of pathway enrichment results to genes in PPI network（FDＲ＜0.05）
编号名称
基因数
/个
FDＲ
hsa04020calcium signaling pathway18 3.13?10－9 hsa04080neuroactive ligand-receptor interaction20 1.41?10－8 hsa05200pathways in cancer15 1.10?10－2
图4靶点-通路网络（FDＲ＜0.05）
Fig．4Target-pathway network（FDＲ＜0.05）
3讨论
吴茱萸汤具有温中补虚、散寒降逆的作用，是临床常用方剂之一［2］，用药历史悠久。为了研究吴茱萸汤的作用机制，本研究依托TCMSP中药系统药理学分析平台，研究了吴茱萸汤4味中药（吴茱萸、生姜、人参、大枣）的有效成分，同时构建了化合物-靶点网络，分析了化合物与靶点直接的相互作用关系，为吴茱萸汤多成分、多靶点、多途径的治疗机制提供了参考。吴茱萸汤化合物-靶点网络中的关键化合物包含生姜中的β-谷甾醇和豆甾醇，其Degree 远高于其他化合物。由此推测生姜可能在吴茱萸汤中发挥关键作用，这与原方重用生姜使其发挥温胃散寒、降逆止呕等重要作用的初衷相一致。研究表明β-谷甾醇具有抗炎、抑制肿瘤、免疫调节、防治前列腺肥大、抗氧化、抗高血脂、镇痛、促进伤口愈合等广泛的药理活性［13］；豆甾醇具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎症、降低血液中胆固醇、改善学习记忆等药理活性［14］。吴茱萸汤化合物-靶点网络中的关键靶点包括PTGS1，PTGS2等，而这些关键靶点参与调控的疾病如痛经病、消化性溃疡等，与已有的吴茱萸汤治疗上述疾病的研究达成一致。PTGS是花生四烯酸合成前列腺素类物质的关键性限速酶，有2种异构酶：PTGS1和PTGS2。PTGS及其产物参与机体的肿瘤新生、血压调节、炎症反应、凝血平衡等多种生理和病理过程［15］。现代医学对于痛经病最常用的一线治疗药物是前列腺素合成酶抑制剂，而吴茱萸汤能降低经血和子宫内膜前列腺素合成，使经行腹痛及其伴随症状得到明显改善［16］。王皓宇［17］研究表明，吴茱萸汤可以通过促进前列腺素合成抗消化性溃疡。由此可见，吴茱萸汤对PTGS的调控在治疗痛经病、消化性溃疡的过程中发挥重要作用。将吴茱萸汤的靶点进行PPI映射并构建网络，对网络分析后发现了多个与多种复杂疾病紧密相关的关键靶点，如AP-1，Bcl-2，HSP90α等。由此推测，吴茱萸汤正是通过多种组分与这些关键靶点直接或间接相互作用达到治疗疾病的目的。AP-1是Toll样受体，肿瘤坏死因子受体，T细胞受体，B细胞受体等多种信号通路的关键下游，参与调控多种炎症介质及细胞因子的表达［18］。吴歌［19］通过对人参皂苷Ｒh2诱导小鼠前胃癌MFC细胞凋亡的信号转导机制进行研究，发现人参皂苷Ｒh2可通过上调核转录因子c-Jun，ATF2的表达，促进AP-1的活性，在转录水平调控凋亡相关蛋白，进而诱导凋亡发生而完成抑制肿瘤细胞分裂增殖进而杀死肿瘤细胞的全过程。冯子强［20］研究表明，人参皂苷Ｒh2抑制肝癌HepG2细胞的迁移可能是通过MAPK通路抑制AP-1转录因子从而降低基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的表达来实现的。李群益等［21］研究表明，人参皂苷代谢产物能够抑制炎症因子TNF-α诱导的支气管上皮细胞分泌ＲANTES，其机制可能与激活GＲ，抑制AP-1对下游靶基因的调控有关。由此推测，人参在吴茱萸汤中虽然作为佐药，但是其对AP-1的调控可能在吴茱萸汤治疗多种复杂疾病中发挥着重要作用。B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）是一种肿瘤凋亡抑制基因，其基因产物是一种重要的调节正常B细胞发育和分化的抗凋亡蛋白，在恶性肿瘤细胞中对免疫化疗反应发挥着重要的调节作用，很多肿瘤细胞都测到Bcl-2水平升高的现象，例如黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、慢性淋巴细胞白血病和结肠癌等［22-23］。研究表明，吴茱萸碱可能通过下调Bcl-2，促进人胶质瘤细胞、人结肠癌细胞、人肝癌细胞的凋亡［24-26］。人参中的化学成分可以通过调控Bcl-2的表达对多种细胞
诸如胃癌侧群细胞、肝癌细胞、心肌缺血再灌注损伤细胞、间歇性高糖诱导的雪旺细胞、精索静脉曲张睾丸生精细胞等的凋亡过程发挥至关重要的作用［27-32］。HSP90AA1编码的热休克蛋白90α（HSP90α）作为热休克蛋白家族中的重要一员，与肿瘤的发生、发展关系密切，在一些癌基因及其产物诱导的转化细胞核以及许多肿瘤细胞中，HSP90α的表达均有所升高［33-34］。刘泽洪等［35］通过研究人参皂苷Ｒh2对人白血病细胞体内抑制作用，发现人参皂苷Ｒh2具有较好的体内抗肿瘤作用，可能通过HSP90通路调节自噬凋亡，抑制肿瘤细胞在体内增殖。为了说明吴茱萸汤作用靶点在基因功能和信号通路中的作用，本研究对PPI网络中出现的基因进行了GO功能富集和通路富集分析。GO功能富集分析发现，吴茱萸汤治疗多种疾病的基因功能主要体现在受体活性、质膜、系统过程的调控等方面。KEGG通路主要涉及钙离子信号通路、神经活性配体-受体相互作用信号通路、癌症信号通路，由此推测吴茱萸汤的有效成分可能通过作用于这些信号通路来达到治疗疾病的目的。钙离子信号通路中的关键分子具有多种生物学功能，并且与调节细胞各种酶的活性、调节肌肉收缩和舒张、调节神经系统功能、参与刺激分泌偶联、调节糖代谢、调节前列腺素和胰岛素合成与释放、增强大脑记忆等生理作用密切相关［36］。由此推测，吴茱萸汤治疗各种消化系统疾病诸如肝寒犯胃型慢性浅表性胃炎，虚寒型十二指肠球部溃疡，慢性非特异性溃疡性结肠炎，2型糖尿病性胃轻瘫，慢性胆囊炎［6］等可能是通过作用于该信号通路实现的。神经活性配体-受体相互作用信号通路是质膜上所有与细胞内外信号通路相关的受体配体的集合，在生理学上与神经功能关系最密切［37］。由此推测，吴茱萸汤治疗各种神经精神系统疾病诸如偏头痛、眩晕、呕吐、呃逆、神经官能症、癔病、戒毒综合征［6］等可能是通过作用于该信号通路实现的。对于癌症的治疗，牛占海等［38］以吴茱萸汤治疗上消化道癌并发泛吐清涎证168例，治愈率69%，总有效率92%。王莉［39］研究表明，吴茱萸汤对小鼠肉瘤生长有一定的抑制作用，对肿瘤血管形成有明显抑制作用，降低血管内皮生长因子（VEGF）的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。由此推测，吴茱萸汤可能通过作用于癌症信号通路对癌症的治疗起到一定的作用，然而相关临床报道较少，还有待进一步深入研究。
综上所述，本研究应用网络药理学方法，对吴茱萸汤复方多成分、多靶点、多途径的复杂网状关系进行研究。研究结果初步验证了吴茱萸汤的基本药理学作用和相关机制，并为进一步深入探讨其作用机制奠定了良好的基础。
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［责任编辑邹晓翠］