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平末端DNA片段加A方法的改进

背景：高保真PCR酶利用自身的3’→5’外切酶活性(pfu DNA Polymerase，PrimeSTAR HS DNA Polymerase等)能保证PCR产物的保真度，但扩增的PCR 产物为不带A尾的平末端DNA片段，不能直接TA克隆。因此，平末端DNA

片段需要进行加A后方可TA克隆。平末端DNA加A的步骤一般是先纯化PCR 产物，加入dATP Buffer利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接TA克隆。步骤较为烦锁，要购买特定的dATP Buffer。

方法改进：平末端DNA片段加A方法根据实验者的技能程度推荐两种方法：(1)保守法，先对平末端PCR产物纯化后，浓度要求至少20ng/ ul(大概就好，跑胶图像条带清晰，明亮)，取14.5 ul PCR产物，加入2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq酶，在72度反应10~20min, 后直接回收纯化加A尾的DNA片段可用于TA克隆，此方法操作容易，成功率高；(2)快速法，高保真酶PCR后的管子(体系为50ul)不用先纯化直接加入3ul dNTP 和0.5 ul Taq酶继续72度反应10~20min，此后直接回收或跑胶回收纯化加A尾的DNA片段可用于TA克隆，此方法操作步骤较少和方便，节省实验时间和实验经费。

结果：推荐的两种方法均能使平末端DNA片段加A尾，方便TA克隆。另外，使用dNTP 代替dATP，节省实验经费。

误差理论与测量平差基础期末考试试卷样题

误差理论与测量平差基础期末考试试卷样题一、填空题（15分） 1、误差的来源主要分为、、。 2、中误差是衡量精度的主要指标之一，中误差越，精度越。极限误差是指。 3、在平坦地区相同观测条件下测得两段观测高差及水准路线的长分别为： h 1=10.125米，s 1 =3.8公里，h 2 =-8.375米，s 2 =4.5公里，那么h 1 的精度比h 2 的精度______，h 2的权比h 1 的权______。 4、间接平差中误差方程的个数等于________________,所选参数的个数等于 _______________。 5、在条件平差中，条件方程的个数等于。 6、平面控制网按间接平差法平差时通常选择________________为未知参数，高程控制网按间接平差法平差时通常选择________________为未知参数。 7、点位方差与坐标系，总是等于。

二、水准测量中若要求每公里观测高差中误差不超过10mm ，水准路线全长高差中误差不超过20mm,则该水准路线长度不应超过多少公里？（5分）三、已知观测向量()L L L T =1 2的协方差阵为D L =--?? ?? ?3112,若有观测值函数 Y 1=2L 1，Y 2=L 1+L 2，则σy y 12等于？（5分）

四、观测向量L L L T =()1 2的权阵为P L =--( )31 14 ，若有函数X L L =+12,则函数X 与观测向量L 的互协因数阵Q XL 等于什么? （5分）五、对某长度进行同精度独立观测，已知一次观测中误差为2mm ，设4次观测值平均值的权为2。试求：（1）单位权中误差0σ；（2）一次观测值的权；（3）若使平均值的权等于8，应观测多少次？（9分）

微生物基因组DNA提取方法的比较与改进

收稿日期:2006-09-041 作者简介:刘晓侠(1978-　),女,江苏丰县人,嘉兴学院生物与化学工程学院教师,博士,研究方向为基因工程、发酵工程。微生物基因组DNA 提取方法的比较与改进刘晓侠1 ,林建平2 ,岑沛霖 2 (11嘉兴学院生物与化学工程学院,浙江嘉兴314001;21浙江大学生物工程研究所,浙江杭州310027) 摘　要:高质量的微生物基因组DNA 是基因工程的前提。目前国内外关于微生物基因组DNA 提取的方法很多,根据研究对象和目的不同而方法各异。该文就现有方法中应用最为广泛的三种提取微生物基因组 DNA 的方法进行了比较,并对它们进行一些改进,获得了针对不同细胞壁成分的微生物相应的简便、快速且高质量基因组DNA 提取方法,并对提取的DNA 进行PCR 特异性扩增检测,获得较清晰的谱带[1],为基因克隆表达研究奠定了基础。关键词:微生物;DNA 提取;PCR 中图分类号:Q933 Co m par ison and I m prove m en t of Extracti on M ethods for Geno m i c D NA L I U Xiao -xia 1 ,L I N J ian -p ing 2 ,CE N Pei -lin 2 (11School of B i ol ogy and Che m ical Engineering,J iaxing university,J iaxing,Zhejiang 3140001; 21I nstitute of B i oengineering,Zhejiang University,Hangzhou,Zhejiang 310027) Abstract:H igh quality genom ic DNA fr om m icr oorganis m is the p reconditi on of genetic mani pulati on .Now many methods f or the extracti on of genom ic DNA are devel oped according t o different research object and intenti on .Three kinds of methods widely app lied are compared and ref or med in is olati on of genom ic DNA fr om m icr oorganis m.And ef 2fective methods for extracting high pure genom ic DNA are established considering different cell wall components .Ge 2nom ic DNA gained by three different methods above is s pecifically a mp lified and clear band is observed by agar ose gel electr ophoresis,which is convenient t o genetic mani pulati on later . Key words:m icr oorganis m;DNA extracti on;PCR (Poly merase Chain Reacti on ) 文献标识码:A 1　文章编号:1008-6781(2007)03-0048-03 1　材料与方法111　试验材料黄色短杆菌(B revibacteriu m helvolum AT CC11822,G -)从北京微生物所购买;放射形土壤杆菌 (Agr obacteriu m radi obacter ACCC10056,G -)从中国菌种保藏中心购买;金黄色葡萄球菌(G +),枯草芽孢杆菌(G + )为本实验室保藏。 112　试剂及仪器 [2] 主要试剂为10mg/m l 溶菌酶,20mg/m l 蛋白酶K,2×CT AB (十六氨基三乙基溴化铵)。引物序列为:5π-ggaattcggatccatggacttcgaggcattt (B am H I,EcoR I ),3π-ttaagcttcctcacgccaccgcacgcgc (H in d III ),由上海博亚生物技术有限公司合成。仪器有Lengguang Tech 1Spectrum lab54型分光光度计,L I TT LE GE N I U S (Japan )基因扩增仪。113　聚合酶链式反应(PCR ) PCR 扩增的反应体系为:反应总体积20μl,含10pmole 引物,50ng 基因组DNA,2μl 10×PfuTaq ? 84? 嘉兴学院学报 Jou rna l of J iaxing U n iversity 第19卷第3期2007年5月 Vol .19No .32007.5

DNA提取方法和试剂作用

1试剂的作用氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 2 DNA提取分为三个基本步骤每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。 .细胞的破碎细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA 结合的组蛋白。将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA 的商业化试剂盒。 DNA提取的几种方法 (1).浓盐法 A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳抽提,得到的DNA粘液与含有少量蛋白质氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来. B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNA,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白. 两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些. C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中

条件平差与间接平差的内在关系研究

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/714887675.html, 条件平差与间接平差的内在关系研究作者：曹白金王兵张健来源：《城市建设理论研究》2013年第23期摘要：条件平差和间接平差是测量平差的两大基础,本文从条件平差原理和间接平差原理入手，利用矩阵分析理论,导出了条件平差与间接平差法的计算公式，揭示了平差模型计算公式的内在规律，并给出了相应的实例，从根本上解决了这两大平差基础之间的关系问题，并以此为基础证明了这两种平差方法结果之间的一致性。关键词：平差方法;一致性;条件平差;间接平差中图分类号： P207 文献标识码： A 文章编号： Abstract:Condition adjustment and indirect adjustment are the two basic methods of the measurement adjustment.To start with the methods of condition adjustment and indirect adjustment,the formula was deduced using matrix theory in this paper,and the internal rules have been revealed of the adjustment models.The corresponding example is also been given in the paper.The basic relationship between the two adjustment methods has been solved,and it is also the foundation to prove the consistency of two different adjustment methods. Key words:adjustment method,consistency,condition adjustment,indirect adjustment 1 条件平差与间接平差原理 1.1 条件平差的原理条件平差是以个观测量的平差值作为未知数，并通过它们之间存在的个条件方程来消除观测值之间的不符值，同时运用求条件极值的原理解出改正数，从而求得各观测量的平差值。条件平差的数学模型为,条件方程个数等于多余观测数，为观测值总个数，为必要观测数，存在关系。设个平差值线性条件方程为： 1-1 其中、、...、为各平差值条件方程式中的系数；、、...、为各平差值条件方程式中的常数项。将式代入1-1，得相应的改正数条件方程式 1-2

DNA提取方法和试剂作用详解

1 试剂的作用氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA 时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA 的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或 NaAc，Na+中和DNA 分子上的负电荷，减少DNA 分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 2 DNA 提取分为三个基本步骤每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。 .细胞的破碎细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS 处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA 结合的组蛋白。将DNA 在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA 在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA 的商业化试剂盒。 DNA 提取的几种方法 (1).浓盐法 A.利用RNA 和DNA 在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳抽提,得到的DNA 粘液与含有少量蛋白质氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA 位于上层水相中,用2 倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来. B.也可用0.15 MNaCL 液反复洗涤细胞破碎液除去RNA,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白. 两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

误差理论与测量平差(专升本)阶段性作业4

误差理论与测量平差(专升本)阶段性作业4 试卷总分：100分单选题 1. 某平差问题有17个同精度观测值，必要观测数等于9，现取8个参数，且参数之间有2个限制条件。若按附有限制条件的条件平差法进行平差，误差方程和限制条件方程的个数分别为_______。(4分) (A) 26,2 (B) 14,2 (C) 13,2 (D) 16,2 参考答案：B 2. 在间接平差中，平差值、观测值L以及改正数V之间的关系正确的是_______。(4分) (A) (B) (C) (D) 参考答案：C 3. 在利用间接平差法求解参数时，计算得到法方程为，则未知数的协因数为(4分) (A) 5 (B)

(C) (D) 4 参考答案：B 4. 下列对于概括平差模型计算出的估计量和的统计性质的有效性的描述中，正确的是(4分) (A) 满足有效性，不满足有效性 (B) 满足有效性，不满足有效性 (C) 不满足有效性，满足有效性 (D) 不满足有效性，不满足有效性参考答案：B 5. 在附有限制条件的间接平差中，以下说法正确的是_______。(4分) (A) 任意选取个参数 (B) 参数的选取方法唯一 (C) 平差是可列出个方程和个限制方程 (D) 限制条件参考答案：C 6. 若n代表观测值总数，代表必要观测数，再增选个参数且个参数中含有个独立参数，在附有限制条件的间接平差中，误差方程的个数为_______。(4分) (A) (B) (C) (D)

7. 在间接平差法中，对于平差值，闭合差，改正数与未知数的关系描述中，下列式子成立的是_______。(4分) (A) (B) (C) (D) 参考答案：B 8. 已知某平面控制网中待定点P的协因数阵为，并求得，则位差参数E和F的值分别为_______。(4分) (A) 1.24，0.95 (B) 1.24，0.92 (C) 1.29,0.95 (D) 0.95，,092 参考答案：A 9. 某三角网中有一待定点P，设其坐标参数为，经平差求得，，则时的位差为_______。(4分) (A) (B) (C) (D)

测量平差期末试题

一、填空。（每空1分，共22分） 1．与的比值称为相对中误差。 2．误差椭圆的三个参数是________、________、_________。 3．闭合导线按条件平差时条件方程式的个数等于___个，分别是 ____个____________________条件和____对_______________________条件。 4 ．设某平差问题中，观测值个数为n个，必要观测数为t个，若按条件平差，条件方程的个数等于______个，法方程的个数等于_______个。若按间接平差，误差方程式的个数等于______个，未知数的个数等于 ______个，法方程的个数等于____个。 5．根据误差传播定律，若某一站观测高差的中误差为2mm，在A、B 两点间共观测了4站，则A、B两点间高差的中误差为mm。 6．导线网按条件平差，所列条件方程中的未知数，既有___________的改正数，也有___________的改正数。 7．在水准测量中若已知每公里观测高差的中误差均相等，且又知各水准路线的长度为Si（I=1，2，……n），则观测高差的权可用公式_________ 求出。 8．偶然误差的特性为：绝对值较小的误差出现的可能性；绝对值相等的正负误差出现的可能性；偶然误差的理论平均值。 1．__________、_________和_________合称为观测条件。 2．水准路线的定权方法有两种：根据_________定权和根据_________定权。 3．由三角形闭合差来计算测角中误差的公式为，称其为菲列罗公式。 4．由不等精度的双观测值之差计算单位权中误差的公式为σ0= ，由等精度的双观测值之差计算观测值中误差的公式为。 5 ．单导线按条件平差时条件方程的个数永远等于个，附合导线中个坐标方位角条件和一对条件，闭合导线中一个条件和对闭合条件。6．常用的衡量精度的指标有、、、 1.独立边角同测网条件方程式的种类，除了具有测角网和测边网的条件式外，还具有反映边角关系的二种条件，它们是和。 2.按间接平差时，首先要设定个独立未知数，在进行水准网的平差时，可以选择作为未知数，也可以选择为未知数，但最好选择为未知数。

DNA提取方法

一、移液器使用移液器（也称作“枪”）是所有分子实验操作不可或缺的工具，其正确使用是顺利开展各项实验的先决条件。为保证实验结果的准确性和稳定性，同时延长移液器的使用寿命，请大家细心操作并遵守以下使用规则和注意事项： 1.从未使用移液器或刚进入实验室的研究生，只有完全准确掌握移液器使用规则后方可独立使用移液器。 2.按需要选用合适量程的移液器，调整刻度时，注意看移液器刻度表，不要超过最大刻度。 3.装配吸头时，用力不要过猛，以免吸头难以脱卸，同时损坏移液器。 4.吸取液体时，注意要慢慢向上释放控制按钮以免吸入速度过快导致液体进入移液器内。 5.切忌平放带有残液的吸头的移液器，更不能倒放。 6.使用移液器清洗或溶解固体物质等需反复吸打时，请装配多个叠加的吸头，且调整刻度不超过移液器最大量程的一半。 7.移液器使用完毕，务必调到最大刻度，并稳妥地放回对应的移液器架上。 8.细心操作，如不小心使移液器表面沾到液体，请及时清洗干净；如不小心将液体吸入移液器内，应及时清洗。 9.严禁用沾有放射性或腐蚀性物质的手套触摸移液器表面；严禁不熟悉移液器构造者私自校对移液器刻度。第一节叶片总DNA的提取一、取样须知 1. 取样之前一般要先编号（牌子和离心管的编号）和挂牌，务必保证离心管中的叶片是来自于同一编号单株，编号切勿混淆； 2. 为保证质量，所取样品尽量为幼嫩叶片组织，并尽量保证全程低温（使用冰袋或碎冰）； 3. 取样时间最好在晴天或阴天上午叶面露水干后进行，尽量使样品不沾水及泥土。 4. 如使用塑料袋装样品，切记将袋内空气排尽，以免在–70℃保存时塑料袋破裂导致样品混合。二、试剂的配制 1. Tris-HCl ( 1.0 M/L, pH8.0 ) 121.16g Tris-HCl 和43ml HCl 加dd H2O 定容至1 L. 2. EDTA ( 0.5M/L, pH8.0 ) 186g EDTA和25g NaOH加dd H2O 定容至1 L. 3. 2％CTAB 81.9g NaCl 100ml 1.0 M/L Tris-HCl ( pH8.0 )

导线网数据处理中条件平差和间接平差比较分析任务书

毕业论文任务书课题名称导线网数据处理中条件平差和间接平差比较分析姓名周敏学号 1002601-20 院系市政与测绘工程学院专业测绘工程指导教师曹元志（讲师） 2014 年 1 月 5 日 ※※※※※※※※※ ※ ※ ※ ※ ※※ ※※※※※※※※※ 2014届学生毕业论文材料（一）

一、设计（论文）的教学目的： 1．毕业论文写作是对学生在校期间专业学习成果的综合性的全面考察。 2．撰写毕业论文有利于培养和提高学生理论研究水平，增强学生分析和解决具体问题的能力。 3．撰写毕业论文有利于培养和提高学生写作及表达能力，有利于计算机应用、英语写作、文献查询等基本技能的训练。 4．撰写毕业论文有利于提高学生的阅读能力，加强学生整理、分析、组织相关数据和资料以及制表绘图的能力。 5．撰写毕业论文有利于学生树立理论联系实际，实事求是的工作作风，培养踏踏实实的工作态度。二、设计（论文）的主要内容： 1.条件平差原理 2.间接平差原理 3.条件平差与间接平差在工程实例中的应用 4.精度评定 5.两种平差方法的比较。三、设计（论文）的基本要求： 1. 专业知识要求在毕业设计工作中，能综合运用学科的理论知识和技能来分析和解决工程实际问题，通过学习、研究和实践，熟悉各种相关测绘仪器、设备以及各种软件的使用。熟悉整个工作的设计流程和技术路线，掌握数据处理的过程和方法。 2. 能力培养要求依据毕业设计的课题任务，进行复杂水准网平差方案的设计并进行实地测量布网；提高设计中理论分析、具备撰写技术文件和独立分析、解决问题的能力3. 综合素质要求通过毕业设计树立正确的设计思想，培养严肃认真的科学态度和严谨求实的科学作风，遵守纪律，并具有善于与他人合作的协作精神和对工作高度负责的

植物DNA提取经典方法

植物DNA提取经典方法：CTAB法原理植物DNA提取经典方法：CTAB法原理植物DNA提取经典方法CTAB法标题:植物DNA提取经典方法：CTAB法原理摘要: CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0 7mol L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复…… 关键词:植物DNA提取经典方法CTAB法最专业的生命科学学术交流论坛 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。一、CTAB提取缓冲液的经典配方： Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；

β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。二、CTAB提取缓冲液的改进配方： (1) PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖； (2) 蛋白质的去除：酚/氯仿抽提使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)高盐洗涤蛋白酶处理核酸分离，纯化； (3)多糖的去除：高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl，高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA：在500 μL DNA液中加入200μl 20% PEG8000 (含1.2 M NaCl)，冰浴20min.核酸分离，纯化； (4) 多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂：如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合； (5) 盐离子的去除：70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸，其它的杂质均被洗掉，达到纯化DNA的目的另一种方式加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M)，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后应用70%的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNasepH值为8.0，可防止DNA发生酸解。三、基因组DNA提取常见问题 DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制

武大测绘学院研究生平差试题

武大测绘学院研究生平差试题 TTA standardization office【TTA 5AB- TTAK 08- TTA 2C】

武汉大学 2004年攻读硕士学位研究生入学考试试题考试科目：测量平差科目代码884 一、填空题（共10个空格，每个空格4分） 1、已知观测向量1 ,3L 的协方差阵?? ?? ? ?????--=212140206LL D 及单位权方差22= σ。现有函数32123L L L F -+=。则其方差=F D （），协因数= F Q （），函数F 关于观测值向量1 ,3L 的协方差阵=L F D （），协因数阵=L F Q （）。 2、已知观测值向量1 ,2L 的权阵?? ? ???--=4223LL P ，则观测值的权=1L P （），=2L P （），观测值的协因数阵LL Q ＝（）。 3、条件平差的函数模型是（），附有参数的条件平差的函数模型是（），它们的随机模型是（）。二、问答题（共两小题，每小题15分） 1、在图1所示测角网中，A 、B 为已知点，C 、D 、E 和F 为待定点，同精度观测了1621,...,,L L L 共16个角度。若按条件平差法对该网进行平差；（1 （22、在间接平差中，误差方程为,1 ,t n n B V =

式中)(1 ,d BX L l n +-= ，观测值1,n L 的权阵为n n P ,。（图1）已知参数1 ,1 ,1 ,t t t x X X += 的协因数阵1 1)(--==bb T XX N PB B Q 。现应用协因数传播律由误差方程得T bb T XX VV B BN B BQ Q 1-==。以上做法是否正确为什么三、计算题（共4小题，每小题15分） 1、有水准网如图2所示。图中为A 、B 、C 为已知点，21,p p 为待定点。已知高程为),(000.7),(500.8m H m H B A == )(256),(738.2),(241.121m h m h m h ==。设各水准路（1）、21,p p 两点高程的平差值；（2）、平差后21,p p 两点间高差的权。 2、在图3所示的测角网中，A 、B 、C 为已知点，P 为待定点，6 21,...,,L L L 为同精度观测值。其中2.418457,2.42056621'''='''= L L 。若按坐标平差法对该网进行平差，计算得 0.39021980.59953220.2290256' ''='''=' ''= PC PB PA α αα， 10 .)(10.)(22 jk jk jk jk jk jk s x b s y a ?-=?=ρ ρ 现设参数改正数p p y x δδ,的单位是“ （图3）（1）、试列出1L 和5L （2）、列出平差后PC PC α的权函数式。

用MATLAB解决_条件平差和间接平差(可编辑)

用MATLAB解决_条件平差和间接平差测量程序设计条件平差和间接平差一、条件平差基本原理A LA0 函数模型 A VW0 r n n 1 r 1 r 1 2 21 随机模型 D? Q? P 0 0 T V P Vm i n 平差准则条件平差就是在满足r个条件方程式条件下,求使函数V‘PV最小的V值,满足此条件极值问题用拉格朗日乘法可以求出满足条件的V值。? A LA0 1、平差值条件方程: 0 r n n 1 r 1

r 1 a La L a La0 1 1 2 2 n n 0 b Lb L b Lb0 1 1 2 2 n n 0? r Lr L r Lr0 1 1 2 2 n n 0 a , b ,, r i1 , 2 ,, n 条件方程系数 i i i a , b ,, r 0 0 0 常数项? A LA0 2、条件方程: 0 r n n 1 r 1 r 1将 LLV 代入平差值条件方程中,得到A VW0 r 1 n 1 r 1 r 1

w , w ,, w a b r 为条件方程闭合差 WA LA 闭合差等于观测值减去其应有值。3、改正数方程: 按求函数条件极值的方法引入常数 T K k , k ,, k a b r r 1 称为联系系数向量,组成新的函数: T T? V P V2 K A VW 将Ω对V求一阶导数并令其为零? T T2 V P2 K A0V T1 T T P VA K 则: VP A KQ A K4、法方程: 将条件方程 AV+W0代入到改正数方程VQATK 中,则得到: T A Q A KW0 N KW0

记作: a a r 1 r 1 r 1 r r T R N R A Q A R A r 由于 a a1 T1 K? N W? A Q A A LA Naa为满秩方阵, a a 0 TLLV VQ A K按条件平差求平差值计算步骤 A VW0 1、列出rn-t个条件方程 r 1 n 1 r 1 r 1 T1 T N KW0 NA Q AA P A 2、组成法方程 a a a a r 1 r 1 r 1 r r1

DNA提取方法进展综述

DNA提取方法进展综述 2014-05-10 14:18:51 来源：浏览次数：21 网友评论 0 条 [DNA提取方法进展综述] 张宁，王凤山(山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南250012《中国海洋药物》杂志2004年第2期(总第98期)摘要：dna的提取是分子生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程(Genetic Engi [海洋生物微生物 DNA提取方法进展细胞组织蛋白质] 张宁，王凤山 (山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南250012 《中国海洋药物》杂志2004年第2期(总第98期) 摘要：dna的提取是分子生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程(Genetic Engineering)各项研究所必需的条件。近年来一些新的或改进的DNA提取纯化方法不断出现，本文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生物提取DNA的方法进行综述。关键词：DNA；提取；动物；植物；微生物；海洋生物 Advances of DNA extraction methods ZHANG Ning，WANG Feng-shan (Institute o f Biochemic and Biotechnological Drugs，School of Pharmacy，Shandon g University, Jinan 250012，China) Abstract：DNA extraction is a basic technology of molecular biology. The purity and the integrality of DNA structure are necessary for different experiments of gene eng ineering. In recent years there have been some new or improved DNA extraction methods appeared. The methods of DNA extraction from animals，plants，microorga nisms and marine organisms were summarized in this article. Keywords：DNA；ex traction；an imals；plants；microorganisms；marineo rganisms 自20 世纪50年代Watson和Crick提出DNA双螺旋模型以来，分子生物学在广度和深度上都获得空前的发展。DNA作为分子生物学研究的基础，在生物领域尤其是遗传学方面的研究日渐深人，在此基础上产生的基因工程(Genetic Engineering)技术已在医药、农业、畜牧业等领域获得广泛应用。研究和应用DNA的基础是提取纯化结构完整的DNA，为此针对不同来源的DNA建立了不同的提取纯化方法。本文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生物来源的DNA的传统提取方法及近年来诸多的改良方法进行综述。

误差理论与测量平差试题+答案

《误差理论与测量平差》（1） 1．正误判断。正确“T”，错误“F”。（30分） 1．在测角中正倒镜观测是为了消除偶然误差（）。 2．在水准测量中估读尾数不准确产生的误差是系统误差（）。 3．如果随机变量X和Y服从联合正态分布，且X与Y的协方差为0，则X与Y相互独立（）。 4．观测值与最佳估值之差为真误差（）。 5．系统误差可用平差的方法进行减弱或消除（）。 6．权一定与中误差的平方成反比（）。 7．间接平差与条件平差一定可以相互转换（）。 8．在按比例画出的误差曲线上可直接量得相应边的边长中误差（）。 9．对同一量的N次不等精度观测值的加权平均值与用条件平差所得的结果一定相同（）。 10．无论是用间接平差还是条件平差，对于特定的平差问题法方程阶数一定等于必要观测数（）。 11．对于特定的平面控制网，如果按条件平差法解算，则条件式的个数是一定的，形式是多样的（）。 12．观测值L的协因数阵Q LL的主对角线元素Q ii不一定表示观测值L i的权（）。13．当观测值个数大于必要观测数时，该模型可被唯一地确定（）。 14．定权时σ0可任意给定，它仅起比例常数的作用（）。 15．设有两个水平角的测角中误差相等，则角度值大的那个水平角相对精度高（）。 16．用“相等”或“相同”或“不等”填空（8分）。已知两段距离的长度及其中误差为±; ±。则： 1．这两段距离的中误差（）。 2．这两段距离的误差的最大限差（）。 3．它们的精度（）。 4．它们的相对精度（）。 17．选择填空。只选择一个正确答案（25分）。

1．取一长为d 的直线之丈量结果的权为1，则长为D 的直线之丈量结果的权P D =（）。 a) d/D b) D/d c) d 2/D 2 d) D 2/d 2 2.有一角度测20测回，得中误差±秒，如果要使其中误差为±秒，则还需增加的测回数N=（）。 a) 25 b) 20 c) 45 d) 5 3.某平面控制网中一点P ，其协因数阵为： ??? ???--=??????=5.025.025.05.0yy yx xy xx XX Q Q Q Q Q 单位权方差2 0σ=±。则P 点误差椭圆的方位角T=（）。 a) 90 b) 135 c) 120 d) 45 4.设L 的权为1，则乘积4L 的权P=（）。 a) 1/4 b) 4 c) 1/16 d) 16 5.设 ????????????--=??????21311221x x y y ； ? ?? ???=4113xx D 又设12x y F +=，则=2 F m （）。 a) 9 b) 16 c) 144 d) 36 四、某平差问题是用间接平差法进行的，共有10个独立观测值，两个未知数，列出10个误差方程后得法方程式如下（9分）： ??????--=????????????--146??8221021x x 且知[pll]=。求： 1．未知数的解

测量平差基础复习题

山东理工大学成人高等教育测量平差基础复习题一、观测误差可以分为几类？分别是什么？平差的研究对象是什么？平差的任务是什么？二、试推导条件平差里0?=V L Q 三、如图所示：若k 为已知点，其它二点为未知点，选未知点坐标为参数进行间接平差，近似值已确定，试写出角度观测β和边长观测kj S 的误差方程。四、已知：某控制网平差后点A 的平差值的协因数阵为 ()() 22 ?? 2.100.25/"0.25 1.60XX Q cm -??=?? -?? 单位权方差估计值()2 2 "0? 1.0σ =，求（1）A 点误差椭圆三要素（2）A 点的点位方差2 A σ 五、什么是观测条件，观测条件对观测成果的质量有什么影响？观测误差可以分为几类？分别是什么？六、证明：在附有参数条件平差中，观测值平差值L ?与其改正数V 无关（即0?=V L Q ）。七、在导线网平差中，选未知点坐标为参数进行间接平差，近似值已确定，一个角度L 测站点为i ,左照准点为j ，右照准点为k 。 (1) 若k 为已知点，其它二点为未知点，度列出角度L 的误差方程式和i 到j 的边长S 的误差方程；(不须要线性化) (2) 若j 为未知点，其它二点为已知点，度列出角度L 的误差方程式和i 到j 的边长S 的误差方程。(不须要线性化) 八、测量平差的任务是什么，写出四种平差方法的数学模型。九、简答题 1.什么是观测条件？ 2.平差的基本任务是什么？九、推导附有限制条件的间接平差原理公式。 k

十一、证明在条件平差中，观测值的平差值L ?与其改正数V 无关。十二、已知某控制网中的两点A 、B 平差后坐标的协因数 ? ????? ????? ?=996.0009.0797.0006.0009.0300.0085.0160.0027.0272.0Q ， Q 单位为厘米2/秒2，单位权中误差2.3?0''±=σ，又已知AB 边长平差值为2067.892米，方位角为135o。求（1）B 点的点位误差；（2）A 点误差椭圆参数；（3）AB 相对误差椭圆参数；（4）AB 边长中误差和方位角中误差；十三、对一个圆观测了4个点(坐标单位是米) )80.462 07.673 (1P )16.495 23.710(2P )47.525 25.648(3P )89.654 57.625(4P 请拟合圆的方程（只列出函数模型即可）。山东理工大学成人高等教育测量平差基础复习题参考答案一、答：观测误差可以分为三类，分别是偶然误差、系统误差和粗差。平差的研究对象是带有偶然误差的观测值。处理由于多余观测引起的观测值之间的不符或闭合差，求出未知量的最佳估值并评定其精度。二、 11 0T T T aa aa V QA K QA N AL QA N A --==-- ?L L V =+ 1T aa N A P A -= ?LV VV LV Q Q Q =+ 1 T LV aa Q QA N AG -=- 1T VV aa Q QA N AG -= 结论得证。

误差理论与测量平差习题课

一．填空题 1、有一段距离，其观测值及其中误差为mm m 25400± ，该观测值的相对中误差 K 为。 2、已知独立观测值[]T L L L 21 1 ,2=的方差阵?? ????=8004LL D ，单位权方差42 0=σ，则其权阵LL P 为。 3、测量平差的任务：求观测值的及其评定观测值及平差值的精度。 4、设有某个物理量同精度观测了n 次，得),,2,1(n i L i =，若每次观测的精度为σ，权为p ，则其算术平均值L 的权为。 5、已知某三角网中P 点坐标的协因数阵为))/((60.125.025.010.22 2??"? ? ????=cm Q X X ，单位权方差的估值为22 0)(0.1?"=σ，位差的极大值方向E ?为。 6、观测误差按其性质可分为、和粗差。经典测量平差主要研究的是。 7、已知某平差问题，观测值个数为30个，必要观测量个数为20个，若选20个独立参数进行平差，应该利用的平差模型是，则方程个数为 8、有一段距离，其观测值及其中误差为，该观测值的相对中误差为。 9、已知独立观测值[]T L L L 211,2=的方差阵160064LL D ??=???? ，单位权方差1620=σ，则其权阵LL P 为。 10、某角以每测回中误差为"±1的精度测量了9次，其平均值的权为1，则单位权中误差为。 11、设有观测向量[]T L L L X 32 1 =，其协方差阵为???? ? ??----=1630302024XX D 。则观测值3L 关于2L 协方差32σ是。 12、已知某三角网中P 点坐标的协因数阵为))/((60.125.025.010.222??"? ? ? ???--=cm Q X X ，单位权方差的估值为220)(0.1?"=σ，位差的极小值方向F ?为。 13、某平差问题的必要观测数为t ，多余观测数为r ，独立的参数个数为u 。若u=t ，则平差的函数模型为。若，则平差的函数模型为附有参数的条件平差。 14、测量是所称的观测条件包括、观测人员、。 15、中误差是衡量精度的主要指标之一，中误差越，精度越高。 mm m 15300±

DNA提取方法(一)

v1.0 可编辑可修改 1 各种DNA 提取方法一，基因组DNA 提取方法制备基因组DNA 是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb 。在DNA 提取过程中应尽量避免使DNA 断裂和降解的各种因素，以保证DNA 的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB 方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等试验步骤： 1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。 2、细胞重悬于冰冷的PBS 漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。 3、加入5mlDNA 提取缓冲液，(10mmol/%SDS)混匀。 4、加入25ul 蛋白酶K 使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h 5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm 离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min 离心收集水相 6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L 的LiCL 混匀，冰浴，10min.。 7、2500rpm 离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min 。2500rpm 离心10min 。弃上清。 8、加入倍体积3mol/L 乙酸钠与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min 。 9、12000r/min 室温离心5min 。弃上清。将DNA 溶于适量TE 中。二，外周血DNA 提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤： 1、取人肘静脉血5ml ，EDTA 抗凝，2500rpm 离心10min 。 2、小心吸取上层血浆，分装到3个离心管中。 3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min 。 4、2500rpm 离心10min ，弃上清。 5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min 。 6、3000rpm 离心10min ，弃上清。 7、倒置离心管，去掉残液。 8、得白细胞，－80℃冻存。试验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h ，4℃放置不超过5h ，以防白细胞自溶。三，氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA ：试验试剂： Ligsisbuffer ： 7.12g30.071g ；最后加灭菌去离子水至1000ml ，高压灭菌。ACD 抗凝剂：__________柠檬酸1.68g 柠檬酸钠4.62g 葡萄糖5.15g ；最后加灭菌去离子水至350ml ，高压灭菌。提取缓冲液（Extractionbuffer ）： 10mMTrisCl(PH=(PH=(PH=(PH=%SDS10%；最后加灭去离子水至100ml ，高压灭菌试验步骤： 1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm ，离心5min 。弃上清液。 2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm ，离心5min 。 3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h 。