分枝杆菌菌种鉴定试剂盒

分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（Taqman探针法）

说明书

【产品名称】

通用名：分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（Taqman 探针法）

英文名：Mycobacteria Identification PCR Diagnostic Kit

【使用目的】

通过对临床标本核酸检测，诊断患者是否存在分枝杆菌感染，并区分结核分枝杆菌（复合群）与非结核分枝杆菌，指导临床治疗。

【试验原理】

本试剂盒是以Real-time PCR仪为平台，结合双重荧光定量PCR技术和Taqman探针技术，可快速检测临床标本核酸样品，诊断患者是否存在分枝杆菌感染。本品含有分别对结核分枝杆菌（复合群）和非结核分枝杆菌的特异性引物和探针，探针采用不同的荧光标记。通过检查不同通道的荧光信号，鉴定结核分枝杆菌（复合群）和非结核分枝杆菌。

【主要组成】（35次检查）

PCR试剂

PCR反应液Ⅰ320μL

-20℃保存

PCR反应液Ⅱ200μL

Solution A 200μL

阳性对照品30μL

【使用仪器】

Real-time PCR扩增仪

【样品要求】

适用于临床分离株或病变组织病理切片【试验方法】

一、PCR扩增：

每份样本测定采用1个PCR反应，反应管的试剂加入量按下表进行：

试剂1反应（μL）

PCR反应液Ⅰ8

PCR反应液Ⅱ 5

Solution A 5

样本DNA 2

总体积20

每次试验需同步检测阳性及空白对照。阳性对照管中的模板为试剂盒中提供的阳性对照，空白对照用无菌超纯水代替模板。

整个操作过程都应在冰浴中进行，试验完毕后将剩余试剂放回-20℃储存。

扩增程序如下：

95℃95℃

1 Cycle

FAM和ROX通道收集荧光

40 Cycles

图1 PCR扩增程序

★在此温度收集荧光，荧光检测通道选择FAM 和ROX检测通道。

【结果判读】

当荧光定量PCR仪运行结束后，用其配套软件对本次试验结果进行数据分析。阳性对照品管在FAM和ROX通道均扩增，空白对照应不扩增，表明实验结果正常，对样品进行分析。

若样品只在FAM通道出现扩增曲线，则判定为结核分枝杆菌感染；

若样品只在ROX通道出现扩增曲线，则判定为非结核分枝杆菌感染；

若样品在FAM和ROX通道同时出现扩增曲线，则判定为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌复合感染。

图2 对照反应结果示意图

【结果常见问题分析】

1.阳性对照至少有一个通道无扩增曲线，则该

批次样品需要重新检测。请确认所使用的试

剂是否仍在有效期内，确定操作是否严格按

照说明书进行。2.空白对照至少有一个通道出现扩增曲线，则

可能为试剂受到污染或操作过程中的污染，

请排除污染源后重新检测。

【产品性能指标】

本试剂盒可快速检测临床标本核酸样本，诊断患者是否存在分枝杆菌污染，并区分结核分枝杆菌（复合菌）与非结核分枝杆菌(NTM)。灵敏度达10-1000copies/反应。

【注意事项】

1.实验前请仔细阅读本产品说明书。

2.实验过程中应穿着专用工作服和使用一

次性手套及枪头。

3.PCR操作各阶段应在不同的实验室进行。

实验应该分试剂配置区、标本处理区和

PCR扩增区。人、物单向流动。PCR试剂

盒不应存放在样本处理区。

4.PCR操作各阶段使用专用的仪器和设备。

5.实验前应该对实验室进行紫外线消毒等，

并用70%乙醇擦拭工作台和微量加样器。

6.本产品仅供科研用。

【包装、规格】35Test/Kit

【贮存】4日内可于2-8℃避光储存运输；长期应于-20℃储存。

【有效期】6个月

【生产企业电话】

公司名称：上海雅心生物技术有限公司

电话：139********