pET-11c(+)
编号 载体名称
北京华越洋生物VECT5150 pET--‐11c(+)
pet11c载体基本信息
别名: pET--‐11c, p et 11c
质粒类型: 大肠杆菌表达载体
表达水平: 高
克隆方法: 多克隆位点,限制性内切酶
载体大小: 5672bp
5' 测序引物: T7
5' 测序引物序列: 5'--‐TAATACGACTCACTATAGGG--‐3'
载体标签: T7 t ag (N--‐端)
载体抗性: Ampicillin
备注: Approximate s ize i s 5675 b p. H osts: E.coli. R elated v ectors: p BR322. 稳定性: 瞬时表达 Transient
组成型: 组成型 Constitutive
病毒/非病毒: 非病毒
pet11c载体质粒图谱和多克隆位点信息
Feature N ame Start End
T7_terminator 316 188
T7_Terminal_primer 256 274
T7_leader 358 326
Xpress_fwd_primer 359 341
T7_transl_en_RBS 383 367
lacO 428 401
T7_promoter 446 428
pBRrevBam_primer 549 530
lacI 824 1915
tet (576 --‐ 1190) 1974 2588
ROP 3227 3418
pGEX_3_primer 3434 3412
Ampicillin 5464 4604
AmpR_promoter 5534 5506
ORF Start End
ORF f rame 1 583 1083
ORF f rame 2 956 1915
ORF f rame 1 2393 1698
ORF f rame 3 1971 2588
ORF f rame 2 5464 4604
Enzyme N ame Cut
ClaI 24
HindIII 29
BamHI 319
NheI 350
NdeI 357
XbaI 395
BglII 461
BclI 1197
ApaI 1394
HpaI 1689
EagI 2251
NruI 2286
MscI 2758
PstI 4922
AatII 5599
EcoRI 5670
pet11c载体简介
pET--‐11a--‐d 载体具有N端T7标签和 BamH I 多克隆克隆位点。这些载体是很多pET家族载体的前身。pET--‐21a--‐d(+)系列载体分别对应于 pET--‐11a--‐d 载体,但是包含有几个额外的特征序列。独特的酶切位点在载体图谱中被标注出来。需要注意的是,这些载体序
列是依据载体pBR322的方向来进行编号的,所以T7标签表达区域在载体图谱上是反向的。
The pET--‐11a--‐d vectors carry an N--‐terminal T7?Tag? sequence and BamH I cloning site. Thesevectors are the precursors to many pET family vectors; the pET--‐21a--‐d(+) series corresponds topET--‐11a--‐d but incorporates several additional features. Unique sites are shown on the circle map.Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so t he T7 e xpression r egion i sreversed o n t he c ircular m ap.
pet11c载体序列
ORIGIN
1 TTCTCATGTT TGACAGCTTA TCATCGATAA GCTTTAATGC GGTAGTTTAT CACAGTTAAA
61 TTGCTAACGC AGTCAGGCAC CGTGTATGAA ATCTAACAAT GCGCTCATCG TCATCCTCGG
121 CACCGTCACC CTGGATGCTG TAGGCATAGG CTTGGTTATG CCGGTACTGC CGGGCCTCTT
181 GCGGGATATC CGGATATAGT TCCTCCTTTC AGCAAAAAAC CCCTCAAGAC CCGTTTAGAG
241 GCCCCAAGGG GTTATGCTAG TTATTGCTCA GCGGTGGCAG CAGCCAACTC AGCTTCCTTT
301 CGGGCTTTGT TAGCAGCCGG ATCCGACCCA TTTGCTGTCC ACCAGTCATG CTAGCCATAT
361 GTATATCTCC TTCTTAAAGT TAAACAAAAT TATTTCTAGA GGGGAATTGT TATCCGCTCA
421 CAATTCCCCT ATAGTGAGTC GTATTAATTT CGCGGGATCG AGATCTCGAT CCTCTACGCC
481 GGACGCATCG TGGCCGGCAT CACCGGCGCC ACAGGTGCGG TTGCTGGCGC CTATATCGCC
541 GACATCACCG ATGGGGAAGA TCGGGCTCGC CACTTCGGGC TCATGAGCGC TTGTTTCGGC
601 GTGGGTATGG TGGCAGGCCC CGTGGCCGGG GGACTGTTGG GCGCCATCTC CTTGCATGCA
661 CCATTCCTTG CGGCGGCGGT GCTCAACGGC CTCAACCTAC TACTGGGCTG CTTCCTAATG
721 CAGGAGTCGC ATAAGGGAGA GCGTCGAGAT CCCGGACACC ATCGAATGGC GCAAAACCTT
781 TCGCGGTATG GCATGATAGC GCCCGGAAGA GAGTCAATTC AGGGTGGTGA ATGTGAAACC
841 AGTAACGTTA TACGATGTCG CAGAGTATGC CGGTGTCTCT TATCAGACCG TTTCCCGCGT
901 GGTGAACCAG GCCAGCCACG TTTCTGCGAA AACGCGGGAA AAAGTGGAAG CGGCGATGGC
961 GGAGCTGAAT TACATTCCCA ACCGCGTGGC ACAACAACTG GCGGGCAAAC AGTCGTTGCT
1021 GATTGGCGTT GCCACCTCCA GTCTGGCCCT GCACGCGCCG TCGCAAATTG TCGCGGCGAT
1081 TAAATCTCGC GCCGATCAAC TGGGTGCCAG CGTGGTGGTG TCGATGGTAG AACGAAGCGG
1141 CGTCGAAGCC TGTAAAGCGG CGGTGCACAA TCTTCTCGCG CAACGCGTCA GTGGGCTGAT
1201 CATTAACTAT CCGCTGGATG ACCAGGATGC CATTGCTGTG GAAGCTGCCT GCACTAATGT
1261 TCCGGCGTTA TTTCTTGATG TCTCTGACCA GACACCCATC AACAGTATTA TTTTCTCCCA
1321 TGAAGACGGT ACGCGACTGG GCGTGGAGCA TCTGGTCGCA TTGGGTCACC AGCAAATCGC
1381 GCTGTTAGCG GGCCCATTAA GTTCTGTCTC GGCGCGTCTG CGTCTGGCTG GCTGGCATAA
1441 ATATCTCACT CGCAATCAAA TTCAGCCGAT AGCGGAACGG GAAGGCGACT GGAGTGCCAT
1501 GTCCGGTTTT CAACAAACCA TGCAAATGCT GAATGAGGGC ATCGTTCCCA CTGCGATGCT
1561 GGTTGCCAAC GATCAGATGG CGCTGGGCGC AATGCGCGCC ATTACCGAGT CCGGGCTGCG
1621 CGTTGGTGCG GATATCTCGG TAGTGGGATA CGACGATACC GAAGACAGCT CATGTTATAT
1681 CCCGCCGTTA ACCACCATCA AACAGGATTT TCGCCTGCTG GGGCAAACCA GCGTGGACCG
1741 CTTGCTGCAA CTCTCTCAGG GCCAGGCGGT GAAGGGCAAT CAGCTGTTGC CCGTCTCACT
1801 GGTGAAAAGA AAAACCACCC TGGCGCCCAA TACGCAAACC GCCTCTCCCC GCGCGTTGGC
1861 CGATTCATTA ATGCAGCTGG CACGACAGGT TTCCCGACTG GAAAGCGGGC AGTGAGCGCA
1921 ACGCAATTAA TGTAAGTTAG CTCACTCATT AGGCACCGGG ATCTCGACCG ATGCCCTTGA
1981 GAGCCTTCAA CCCAGTCAGC TCCTTCCGGT GGGCGCGGGG CATGACTATC GTCGCCGCAC
2041 TTATGACTGT CTTCTTTATC ATGCAACTCG TAGGACAGGT GCCGGCAGCG CTCTGGGTCA 2101 TTTTCGGCGA GGACCGCTTT CGCTGGAGCG CGACGATGAT CGGCCTGTCG CTTGCGGTAT 2161 TCGGAATCTT GCACGCCCTC GCTCAAGCCT TCGTCACTGG TCCCGCCACC AAACGTTTCG 2221 GCGAGAAGCA GGCCATTATC GCCGGCATGG CGGCCGACGC GCTGGGCTAC GTCTTGCTGG 2281 CGTTCGCGAC GCGAGGCTGG ATGGCCTTCC CCATTATGAT TCTTCTCGCT TCCGGCGGCA 2341 TCGGGATGCC CGCGTTGCAG GCCATGCTGT CCAGGCAGGT AGATGACGAC CATCAGGGAC 2401 AGCTTCAAGG ATCGCTCGCG GCTCTTACCA GCCTAACTTC GATCACTGGA CCGCTGATCG 2461 TCACGGCGAT TTATGCCGCC TCGGCGAGCA CATGGAACGG GTTGGCATGG ATTGTAGGCG 2521 CCGCCCTATA CCTTGTCTGC CTCCCCGCGT TGCGTCGCGG TGCATGGAGC CGGGCCACCT 2581 CGACCTGAAT GGAAGCCGGC GGCACCTCGC TAACGGATTC ACCACTCCAA GAATTGGAGC 2641 CAATCAATTC TTGCGGAGAA CTGTGAATGC GCAAACCAAC CCTTGGCAGA ACATATCCAT 2701 CGCGTCCGCC ATCTCCAGCA GCCGCACGCG GCGCATCTCG GGCAGCGTTG GGTCCTGGCC 2761 ACGGGTGCGC ATGATCGTGC TCCTGTCGTT GAGGACCCGG CTAGGCTGGC GGGGTTGCCT 2821 TACTGGTTAG CAGAATGAAT CACCGATACG CGAGCGAACG TGAAGCGACT GCTGCTGCAA 2881 AACGTCTGCG ACCTGAGCAA CAACATGAAT GGTCTTCGGT TTCCGTGTTT CGTAAAGTCT 2941 GGAAACGCGG AAGTCAGCGC CCTGCACCAT TATGTTCCGG ATCTGCATCG CAGGATGCTG 3001 CTGGCTACCC TGTGGAACAC CTACATCTGT ATTAACGAAG CGCTGGCATT GACCCTGAGT 3061 GATTTTTCTC TGGTCCCGCC GCATCCATAC CGCCAGTTGT TTACCCTCAC AACGTTCCAG 3121 TAACCGGGCA TGTTCATCAT CAGTAACCCG TATCGTGAGC ATCCTCTCTC GTTTCATCGG 3181 TATCATTACC CCCATGAACA GAAATCCCCC TTACACGGAG GCATCAGTGA CCAAACAGGA 3241 AAAAACCGCC CTTAACATGG CCCGCTTTAT CAGAAGCCAG ACATTAACGC TTCTGGAGAA 3301 ACTCAACGAG CTGGACGCGG ATGAACAGGC AGACATCTGT GAATCGCTTC ACGACCACGC 3361 TGATGAGCTT TACCGCAGCT GCCTCGCGCG TTTCGGTGAT GACGGTGAAA ACCTCTGACA 3421 CATGCAGCTC CCGGAGACGG TCACAGCTTG TCTGTAAGCG GATGCCGGGA GCAGACAAGC 3481 CCGTCAGGGC GCGTCAGCGG GTGTTGGCGG GTGTCGGGGC GCAGCCATGA CCCAGTCACG 3541 TAGCGATAGC GGAGTGTATA CTGGCTTAAC TATGCGGCAT CAGAGCAGAT TGTACTGAGA 3601 GTGCACCATT GCGGTGTGAA ATACCGCACA GATGCGTAAG GAGAAAATAC CGCATCAGGC 3661 GCTCTTCCGC TTCCTCGCTC ACTGACTCGC TGCGCTCGGT CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG 3721 TATCAGCTCA CTCAAAGGCG GTAATACGGT TATCCACAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA 3781 AGAACATGTG AGCAAAAGGC CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC GCGTTGCTGG 3841 CGTTTTTCCA TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA AAATCGACGC TCAAGTCAGA 3901 GGTGGCGAAA CCCGACAGGA CTATAAAGAT ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA AGCTCCCTCG 3961 TGCGCTCTCC TGTTCCGACC CTGCCGCTTA CCGGATACCT GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG 4021 GAAGCGTGGC GCTTTCTCAT AGCTCACGCT GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC 4081 GCTCCAAGCT GGGCTGTGTG CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG 4141 GTAACTATCG TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA 4201 CTGGTAACAG GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC TTGAAGTGGT 4261 GGCCTAACTA CGGCTACACT AGAAGGACAG TATTTGGTAT CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG 4321 TTACCTTCGG AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG 4381 GTGGTTTTTT TGTTTGCAAG CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC 4441 CTTTGATCTT TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT 4501 TGGTCATGAG ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATCCT TTTAAATTAA AAATGAAGTT 4561 TTAAATCAAT CTAAAGTATA TATGAGTAAA CTTGGTCTGA CAGTTACCAA TGCTTAATCA 4621 GTGAGGCACC TATCTCAGCG ATCTGTCTAT TTCGTTCATC CATAGTTGCC TGACTCCCCG
4681 TCGTGTAGAT AACTACGATA CGGGAGGGCT TACCATCTGG CCCCAGTGCT GCAATGATAC 4741 CGCGAGACCC ACGCTCACCG GCTCCAGATT TATCAGCAAT AAACCAGCCA GCCGGAAGGG 4801 CCGAGCGCAG AAGTGGTCCT GCAACTTTAT CCGCCTCCAT CCAGTCTATT AATTGTTGCC 4861 GGGAAGCTAG AGTAAGTAGT TCGCCAGTTA ATAGTTTGCG CAACGTTGTT GCCATTGCTG 4921 CAGGCATCGT GGTGTCACGC TCGTCGTTTG GTATGGCTTC ATTCAGCTCC GGTTCCCAAC 4981 GATCAAGGCG AGTTACATGA TCCCCCATGT TGTGCAAAAA AGCGGTTAGC TCCTTCGGTC 5041 CTCCGATCGT TGTCAGAAGT AAGTTGGCCG CAGTGTTATC ACTCATGGTT ATGGCAGCAC 5101 TGCATAATTC TCTTACTGTC ATGCCATCCG TAAGATGCTT TTCTGTGACT GGTGAGTACT 5161 CAACCAAGTC ATTCTGAGAA TAGTGTATGC GGCGACCGAG TTGCTCTTGC CCGGCGTCAA 5221 CACGGGATAA TACCGCGCCA CATAGCAGAA CTTTAAAAGT GCTCATCATT GGAAAACGTT 5281 CTTCGGGGCG AAAACTCTCA AGGATCTTAC CGCTGTTGAG ATCCAGTTCG ATGTAACCCA 5341 CTCGTGCACC CAACTGATCT TCAGCATCTT TTACTTTCAC CAGCGTTTCT GGGTGAGCAA 5401 AAACAGGAAG GCAAAATGCC GCAAAAAAGG GAATAAGGGC GACACGGAAA TGTTGAATAC 5461 TCATACTCTT CCTTTTTCAA TATTATTGAA GCATTTATCA GGGTTATTGT CTCATGAGCG 5521 GATACATATT TGAATGTATT TAGAAAAATA AACAAATAGG GGTTCCGCGC ACATTTCCCC 5581 GAAAAGTGCC ACCTGACGTC TAAGAAACCA TTATTATCAT GACATTAACC TATAAAAATA 5641 GGCGTATCAC GAGGCCCTTT CGTCTTCAAG AA
//
其他大肠杆菌表达载体:
pBV221 ptdTomato pET-52b(+) pAmCyan pDsRed-Express2 pBV220 pCold-GST pColdS-SUMO pCold TF pCold IV pCold III pCold II
pCold I pE-SUMO pCold-ProS2 pBAD102/D-TOPO pBAD202/D-TOPO pACYC184 pBAD/Thio-TOPO pBad/Myc-His C pBad/Myc-His B pBad/Myc-His A pBad/His C pBad/His B pBad/His A pBAD-TOPO pET-23b(+) pET-23a(+)
pET-23c(+) pET-23(+) pET-12b(+) pET-12c(+)
pET-12a(+) pET-11b(+) pET-11a(+) pET-11c(+) pBad24 pQE-82L pQE-81L pQE-80L
pQE-32 pQE-9 pQE-16 pQE-31
pQE-60 pQE-70 pQE-40 pET-51b(+)
pET-50b(+) pET-49b(+) pET-48b(+) pET-47b(+)
pET-26b(+) pET-32a(+) pET-21b(+) pET-22b(+)
pET-14b pET-16b pET-15b pET-19b
pET-20b(+) pET-21d(+) pET-21c(+) pET-21b(+)
pET-21a(+) pET-24a(+) pET-24d(+) pET-25b(+)
pET-27b(+) pET-28a(+) pET-30a(+) pET-42a(+)
pET-43.1c(+) pET-43.1b(+) pET-43.1a(+) pET-44a(+)
pET-44c(+) pET-46 EK/LIC pET-37b(+) pTrcHis2 C pTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-His pET302/NT-His pRSET-CFP pRSET-EmGFP pRSET-BFP pGFPuv
pET300/NT-DEST pET301/CT-DEST pGEM-T pBad43
pGEX-4T-3 pGEX-5X-2 pBlueScript SK(+) pG-Tf2
pG-KJE8 pGro7 pET-SUMO pSE380
pET-17b pET102/D-TOPO pCDFDuet-1 pMAL-p5x
pTf16 pET-28c(+) pBluescript II SK(+) pET-30b(+) pSUMO pProEX HTc pProEX HTb pProEX HTa pKD3 pKD13 pKD46 pTYB1
pTYB2 pTWIN2 pBluescript II KS(-) pTYB12
pMAL-p5e pACYCDuet-1 pEGM-11ZF(+) pEGM-7ZF(+) PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-2 PinPoint Xa-1 pSP73
pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1
pET-5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII A pET-5a(+) pMal-p4X pMal-p2G pkk223-3
pkk232-8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18
pMAL-c5x pMal-p2E pMal-p2X pET-44 EK/LIC pET-43.1 EK/LIC pET-41 EK/LIC pMal-c4X pTrcHis B
pET-31b(+) pET-3b(+) pET-41a(+) pGEX-3X
pGEX-4T-2 pETDuet-1 pGEX-4T-1 pTrc99a
pET-28b(+) pET-His pALEX a,b,c pACYC177
pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10
pEcoli-6xHN-GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-KG
pGEX-2T pRSFDuet-1 pCOLADuet-1 pTrcHis C pTrcHis A pET-41b(+) pET-42b(+) pET-3a(+) pGEX-6P-3 pGEX-6P-2 pGEX-6P-1 pGEX-5X-3 pGEX-5X-1 pGEX-2TK pRSET A pMal-c2G
pMal-c2E pMal-c2X pRSET C pQE-30
pET-45b(+) pET-44b(+) pET-42c(+) pET-41c(+) pET-40b(+) pET-33b(+) pET-39b(+) pET-32 EK/LIC pET-32 Xa/LIC pET-32c(+) pET-32b(+) pET-30 Xa/LIC pET-30 EK/LIC pET-30c(+) pET-29c(+) pET-29b(+) pET-29a(+) pET-24c(+) pET-24b(+) pET-24(+)
pET-23d(+) pET-11d(+) pBad33
目录 第一章芽孢杆菌的简要介绍 (1) 第一节芽孢杆菌种类 (1) 第二节芽孢杆菌表达系统发展简史 (2) 第二章枯草芽孢杆菌的转化系统 (3) 第一种方法:电转化 (3) 第二种方法:Spizizen转化 (3) 第三种方法:原生质体法(Takashi) (4) 第四种方法:原生质体转化之二 (4) 第五种转化方法:质粒混合法(BGSC推荐) (5) 第三章芽孢杆菌表达系统发展简史 (6) 第一节芽孢杆菌表达系统的优点(相对于大肠杆菌) (7) 第二节芽孢杆菌的缺点 (7) 第三节助表达系统 (7) 第四节芽孢杆菌基因表达的主要特点 (7) 第四章枯草芽孢杆菌转录翻译系统 (8) 第一节:转录系统 (9) 第二节:翻译系统 (9) 第五章芽孢杆菌常用的宿主和载体 (10) 第六章芽孢杆菌表达系统应用实例 (11) 1 中国 (11) 2 日本 (12) 3 加拿大 (12) 第七章芽孢杆菌其他产品 (13) 第一节核苷类产品 (13) 第二节核黄素 (13) 第三节微生物制剂/益生菌 (13) 第八章结语 (14) 附录一. 芽孢杆菌的相关经典文章 (14) 附录二. 枯草芽孢杆菌相关数据库 (15) 致谢及参考文献 (15)
第一章芽孢杆菌的简要介绍 芽孢杆菌作为一个属,于1872年被首次提出,至今已有一百多年。目前人们对芽孢杆菌的研究几乎涉及到了革兰氏阳性可生孢细菌的各个领域。尤其是在感受态、芽孢形成及其调控、遗传操作、菌种改良、生物技术等领域进行了大量的工作。芽孢杆菌是一个泛泛的概念,而科学研究中应用最多的当属枯草芽孢杆菌,例如168菌株及其大量的衍生菌株。枯草杆菌的研究之所以领先于其他芽孢杆菌的种,主要是由于他的转化、转导方法较完善,以及大量的衍生菌株。 目前应用最多的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和耐碱的芽孢杆菌以及病原菌炭疽芽孢杆菌等12种。 第一节芽孢杆菌种类 目前,芽孢杆菌属很多菌株的全基因组序列已经报道,截至2011年10月,在KEGG 上公布全基因组序列的芽孢杆菌属菌种有: 简称菌种名称测序时间测序链接 bsu Bacillus subtilis1997RefSeq bss Bacillus subtilis subsp. spizizenii W232010RefSeq bst Bacillus subtilis subsp. spizizenii TU-B-102011 RefSeq bsn Bacillus subtilis BSn52011RefSeq bha Bacillus halodurans2000RefSeq ban Bacillus anthracis Ames2003RefSeq bar Bacillus anthracis Ames 05812004RefSeq bat Bacillus anthracis Sterne2004 RefSeq bah Bacillus anthracis CDC 6842009 RefSeq bai Bacillus anthracis A02482009 RefSeq bal Bacillus cereus biovar anthracis CI2010RefSeq bce Bacillus cereus ATCC 145792003RefSeq bca Bacillus cereus ATCC 109872004RefSeq bcz Bacillus cereus ZK2004RefSeq bcr Bacillus cereus AH1872008 RefSeq bcb Bacillus cereus B42642008 RefSeq bcu Bacillus cereus AH8202009 RefSeq bcg Bacillus cereus G9******* RefSeq bcq Bacillus cereus Q12009RefSeq
pET-32b(+) 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT5030 pET--‐32b(+) pET32b载体基本信息 别名: pET32b, p et 32b 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点,限制性内切酶 载体大小: 5899bp 5' 测序引物: T7或者Trx--‐F 5' 测序引物序列: T7: 5'--‐TAATACGACTCACTATAGGG--‐3'; Trx--‐F: 5' T TCCTCGACGCTAACCTG 3' 载体标签: thioredoxin (N端); H is (中间和C端) 载体抗性: Ampicillin 备注: Production of soluble, active target proteins; N--‐term thrombin cleavage s ite; Nterm e nterokinase c leavage s ite; a,b,c v ary b y M CS 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 组成型 Constitutive 病毒/非病毒: 非病毒 pET32b载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET32b载体简介 The pET--‐32a--‐c series is designed for cloning and high--‐level expression of peptide sequences fused with the 109aa Trx?Tag? thioredoxin protein (1). Cloning sites are available for producing fusion proteins also containing cleavable His?Tag? and S?Tag? sequences for detection and purification. Unique sites are shown on the circle map. Note that t he s equence i s n umbered b y t he p BR322 c onvention, s o t he T7 e xpression r egion i s reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single--‐stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single--‐stranded sequencing should be performed u sing t he T7 t erminator p rimer . pET32b载体序列 ORIGIN 1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTAGCAGC CGGATCTCAG TGGTGGTGGT GGTGGTGCTC GAGTGCGGCC GCAAGCTTGT 181 CGACGGAGCT CGAATTCGGA TCCGATATCG CCATGGCCTT GTCGTCGTCG TCGGTACCCA 241 GATCTGGGCT GTCCATGTGC TGGCGTTCGA ATTTAGCAGC AGCGGTTTCT TTCATACCAG 301 AACCGCGTGG CACCAGACCA GAAGAATGAT GATGATGATG GTGCATATGG CCAGAACCAG 361 AACCGGCCAG GTTAGCGTCG AGGAACTCTT TCAACTGACC TTTAGACAGT GCACCCACTT 421 TGGTTGCCGC CACTTCACCG TTTTTGAACA GCAGCAGAGT CGGGATACCA CGGATGCCAT 481 ATTTCGGCGC AGTGCCAGGG TTTTGATCGA TGTTCAGTTT TGCAACGGTC AGTTTGCCCT 541 GATATTCGTC AGCGATTTCA TCCAGAATCG GGGCGATCAT TTTGCACGGA CCGCACCACT 601 CTGCCCAGAA ATCGACGAGG ATCGCCCCGT CCGCTTTGAG TACATCCGTG TCAAAACTGT 661 CGTCAGTCAG GTGAATAATT TTATCGCTCA TATGTATATC TCCTTCTTAA AGTTAAACAA 721 AATTATTTCT AGAGGGGAAT TGTTATCCGC TCACAATTCC CCTATAGTGA GTCGTATTAA 781 TTTCGCGGGA TCGAGATCGA TCTCGATCCT CTACGCCGGA CGCATCGTGG CCGGCATCAC 841 CGGCGCCACA GGTGCGGTTG CTGGCGCCTA TATCGCCGAC ATCACCGATG GGGAAGATCG 901 GGCTCGCCAC TTCGGGCTCA TGAGCGCTTG TTTCGGCGTG GGTATGGTGG CAGGCCCCGT 961 GGCCGGGGGA CTGTTGGGCG CCATCTCCTT GCATGCACCA TTCCTTGCGG CGGCGGTGCT 1021 CAACGGCCTC AACCTACTAC TGGGCTGCTT CCTAATGCAG GAGTCGCATA AGGGAGAGCG 1081 TCGAGATCCC GGACACCATC GAATGGCGCA AAACCTTTCG CGGTATGGCA TGATAGCGCC 1141 CGGAAGAGAG TCAATTCAGG GTGGTGAATG TGAAACCAGT AACGTTATAC GATGTCGCAG 1201 AGTATGCCGG TGTCTCTTAT CAGACCGTTT CCCGCGTGGT GAACCAGGCC AGCCACGTTT 1261 CTGCGAAAAC GCGGGAAAAA GTGGAAGCGG CGATGGCGGA GCTGAATTAC ATTCCCAACC 1321 GCGTGGCACA ACAACTGGCG GGCAAACAGT CGTTGCTGAT TGGCGTTGCC ACCTCCAGTC 1381 TGGCCCTGCA CGCGCCGTCG CAAATTGTCG CGGCGATTAA ATCTCGCGCC GATCAACTGG 1441 GTGCCAGCGT GGTGGTGTCG ATGGTAGAAC GAAGCGGCGT CGAAGCCTGT AAAGCGGCGG 1501 TGCACAATCT TCTCGCGCAA CGCGTCAGTG GGCTGATCAT TAACTATCCG CTGGATGACC 1561 AGGATGCCAT TGCTGTGGAA GCTGCCTGCA CTAATGTTCC GGCGTTATTT CTTGATGTCT 1621 CTGACCAGAC ACCCATCAAC AGTATTATTT TCTCCCATGA AGACGGTACG CGACTGGGCG 1681 TGGAGCATCT GGTCGCATTG GGTCACCAGC AAATCGCGCT GTTAGCGGGC CCATTAAGTT 1741 CTGTCTCGGC GCGTCTGCGT CTGGCTGGCT GGCATAAATA TCTCACTCGC AATCAAATTC
大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一 点击次数:982 作者:佚名发表于:2009-09-27 00:00转载请注明来自丁香园 来源:丁香园 实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因,每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp (基因Ⅷ)。E.coli基因组中还包含有许多插入序列,如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。 利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造,使其中的某些基因发生突变或缺失,从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化,这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型(Phenotype),把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型(Genotype)。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。 分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则,采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态,除非在基因型上另外注明。 大肠杆菌基因型的表示方法(Demerec, et, al. 1966): 一、一般规则: 1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。例如:D NA Adenine Methylase→dam。 2、不同的基因座,其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同,其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。例如:Recombination→recA、recB、recC。 3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。如supE44(sup基因座E的44位突变)。
如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变,则用连字符“ -”代替大写字母,如trp-31。 4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。其基因符号应与基因座的表示符号明显区别,符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内;质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。 5、对于携带附加体的菌株的完整基因型描述应包括附加体的状态(游离或整合)。以F因子为例,F-:F因子缺失;F+:自主性F因子,不携带任何遗传可识别染色体片段;F':携带有遗传可识别细菌染色体片段的自主性F因子;Hfr:整合到染色体上的F因子(high frequency of recombination)。当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时,用()“或”/“等以区别。例如:/F' [traD3 6、proAB、lac I q、lacZ. M 15] 6、某个基因或某个领域缺失时,在其基因型前面加上“ ”表示。例如:lac-proAB基因缺失时它的基因型表示为(lac-proAB)。 7、由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化,有时也用其表现型代替基因型进行表示。例如:某些抗药性的获得或丧失,用如下方式表示:Streptomycin抗性→Str +或Str r,Ampicilli n敏感性→ Amp-。(第一个字母要大写,“+”或“r”表示有抗性,“-”表示无抗性或敏感)。 8、根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。例如:TH2菌株上有一种基因型表示如下:hsdS20 (rB-、mB-),其中S20代表特异性识别蛋白发生变异,()中的rB-、mB-表示由于 S20的变异而导致B株来源的hsdR和hsdM的功能缺失。 9、蛋白质的名称与对应的基因或等位基因相同,但不用斜体,且首字母大写,如,UvrA、UvrB。 二、基因符号和意义(见表1)
基因工程制药综述 班级:生技132 : 学号:
大肠杆菌表达系统的研究进展综述 自上世纪 70 年代以来, 大肠杆菌一直是基因工程中应用最为广泛的表达系统。尽管基因工程表达系统已经从大肠杆菌扩大到酵母、昆虫、植物及哺乳动物细胞,并且近年来出现了很多新型的真核表达系统, 但是大肠杆菌仍然是基因表达的重要工具。尤其是进入后基因组时代以来, 有关蛋白结构以及功能研究的开展 ,对基因表达的要求更高,这时大肠杆菌往往是表达的第一选择。文章综述了近年来有关大肠杆菌表达载体及宿主细胞的改造工作。 1 表达载体 1. 1 表达调控 构建有效的表达载体是表达目的基因的基本要求, 同时也是影响基因表达水平以及蛋白活性的重要因素。标准的大肠杆菌表达载体的主要组成: 启动子、操纵子、核糖体结合位点、翻译起始区、多克隆位点、终止子、复制起点以及抗性筛选因子等。理想的表达载体要求在转录和翻译水平上可以控制目的基因的表达 ,然而目的基因在宿主体过分表达(选用较强的启动子等)会对宿主造成压力, 引起相关的细胞应答反应, 影响蛋白的活性等。基因组、RNA 转录组、蛋白质组、代调控组等领域的研究成果给我们提供了大量关于基因表达调控的信息[ 1]。现已能从基因和细胞的整体水平来方便地选择合适的启动子或合理开发新的载体系统。譬如 Lee 等利用二维凝胶电泳法比较了重组载体和空载体被分别转入宿主细胞后蛋白组学的差异,发现两者都产生了大肠杆菌热休克蛋白并引起了 cAMPCRP 调节蛋白的应答, 其中重组子的影响更为强烈;另外, 还发现外源基因的表达使宿主核糖体合成速率、翻译延长因子和折叠酶表达水平、细胞生长率下降 , 而使细胞呼吸活力上升[ 2]。目前应用的表达载体主要问题是表达过程中出现的全或无的情况, 通常表达的培养物都是非纯种的细胞群, 其中有一些细胞可以最大限度地被诱导,而另一些细胞在诱导后基因的表达被关闭。分离具有合适强度启动子及翻译速率的载体变种可以优化表达水平,说明启动子的选择对于基因的诱导表达非常重要。 Deborahat 提出在芯片上排列具有不同强度级别启动子的载体进行互补分析, 可能有助于筛选最为适合的启动子[3]。开发非 IPTG 或阿拉伯糖诱导的载体也可以提高基因表达水平, Qing 等利用 cspA 基因的独特性开发了一系列冷休克表达载体pCold, 使目的基因在低温下(<15℃) 诱导表达,提高了产物的溶解性和稳定性[4]。 1. 2 融合表达载体 除了表达载体的调控性,为了提高蛋白产物的活性以及简化下游纯化的操作等 ,往往在表达载体上插入其它辅助的基因序列与目的基因构成融合蛋白表达。融合信号肽(PelB、Om pA 、MalE、PhoA 等)表达可以使融合蛋白通过经典的 Sec 途径分泌到周质或胞外表达, 有利于形成二硫键以及避免胞质蛋白酶的水解和 N 端甲硫氨酸的延伸。另外,最近开发的双精氨酸转运体系(Tat)可以有效分泌正确折叠的重组蛋白[5]。常见的纯化标签多根据亲和层
禽大肠杆菌病就是由埃希氏大肠杆菌得某些致病性菌株引起得多种疾病总称,包括大肠杆菌性败血症、肠炎、脐带炎、肝周炎、心包炎、腹膜炎、全眼球炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、关节炎、肉芽肿等,并能导致胚胎与幼雏死亡。由于大肠杆菌血清型复杂,给免疫防治带来一定得困难,药物防治仍就是控制禽大肠杆菌病得主要手段。yz、ag365yz、ag365 本文就防治禽大肠杆菌病得常用药物作一简述。yz、ag365yz、ag365
一、β-内酰胺类抗生素yz、ag365yz、ag365 β-内酰胺类抗生素为化学结构中含有β-内酰胺环一类抗生素,主要包括青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺酶抑制剂。抗病作用机理均为抑制细胞壁得合成。yz、ag365yz、ag365 1、青霉素类。防治禽大肠杆菌病得青霉素类抗生素主要为半合成广谱抗生素氨苄西林、阿莫西林。氨苄西林、阿莫西林均耐酸、不耐酶,内服或肌注易吸收。阿莫西林耐
酸较氨苄西林强,该药抗菌谱广,杀菌力强,作用迅速,阿莫西林得血清浓度比氨苄西林高1、5-3倍。阿莫西林对大肠杆菌有较强得抗菌作用,其体外抗菌谱等同于氨苄西林,但体内效果则增强2-3倍。yz、ag365yz、ag365 用法与用量:⑴氨苄西林:内服一次量为每千克体重10毫升或肌注为一次量每千克体重10毫升,1日2-3次。⑵阿莫西林:内服一次量为每千克体重10-15毫升,1日2次。yz、ag365yz、ag365
2、头孢菌素类。为广谱半合成抗生素,具杀菌力强、抗菌谱广、毒性小、对酸与β-内酰胺酶比青霉素类稳定等优点,第三、四代头孢菌素对大肠杆菌具有较强得抗菌作用,因较贵而多用于宠物、种畜禽及贵重动物。临床上应用得有头孢噻呋、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢她啶、头孢吡肟。yz、ag365yz、ag365 头孢噻呋就是美国普强于80年代开发成功得兽医专用第三代头孢菌素,该药1998年在美国首次上市。头孢噻呋抗菌谱广,抗菌活性强,对G+菌、G-菌及一些厌氧菌有很强
pET-48b(+) 编号 载体名称 北京华越洋生物VECT4670 pET--‐48b(+) pET48b载体基本信息 别名: pET48b, p ET 48b 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点,限制性内切酶 载体大小: 5605 b p 5' 测序引物序列: T7: 5'--‐TAATACGACTCACTATAGGG--‐3'; Trx--‐F: 5'--‐TTCCTCGACGCTAACCTG--‐3' 3' 测序引物序列: T7t: 5'--‐TGCTAGTTATTGCTCAGCGG--‐3' 载体标签: N--‐Trx, N--‐His,N--‐HRV 3C, C--‐S, C--‐Thrombin 载体抗性: Kanamycin (卡那霉素) 备注: Same as pET47 but also has Nterm Trx Tag; contains HRV 3C Protease cleavage site for fusion tag removal at low temperatures; Cterm thrombin c leavage s ite. 稳定性: 瞬时表达 组成型: 组成型 病毒/非病毒: 非病毒 pET48b载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET48b载体简介 pET--‐48b载体含有N端Trx和His标签,在标签后面紧跟着的是HRV 3C蛋白酶切位点。HRV 3C蛋白酶能够高特异性的识别LEVLFQ↓GP蛋白序列,能够在低温下高效切割掉融合标签序列。pET--‐48b载体还含有一个可选择的C端Thrombin蛋白酶切位点,紧接着位点后是S标签。 pET48b载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意:载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的,所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。 T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的,所以在T7噬菌体聚合酶的作用下,包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够