TRNzol Reagent

2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS 洗涤细胞，吸除PBS ，向

细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free 的离心管中，300×g 离心5 min ，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。

注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA 的产量降低。

d. 细胞悬液：离心取细胞。每5×106-107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入

1 m l TRNzo l 。加入TRNzo l 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA 。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。

e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRNzo l （推荐0.25 m l 全血加入0.75 m l

TRNzo l ），充分振荡混匀。

2. 将匀浆样品在15-30℃放置5 min ，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤：4℃ 12,000 rpm(~13,400×g ) 离心10 min ，取上清。

注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA ，上清中含有RNA 。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。4. 每使用1 m l TRNzo l 加入0.2 m l 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec ，室温放置3 min 。

注意：如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2 min 代替。

5. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g )离心10-15 min ，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层

和上层无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相（约600 μl ）转移到新的离心管中。(如要分离DNA 和蛋白质，可向天根公司索取提取方法)。

6. 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置20-30 min 。

7. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g )离心10 min ，去上清。离心前RNA 沉淀经常是看不见的，离

心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

8. 加入1 m l 75%乙醇 (RNase-Free ddH 2O 配置) 洗涤沉淀。每使用1 m l TRNzo l 至少用1 m l

75%乙醇对沉淀进行洗涤。

注意事项

匀浆后，加氯仿前，样品可在-70℃ 放置一个月以上；

RNA 沉淀可以保存在75%酒精中，2-8℃一个星期以上或-20℃一年。

预防RNase 污染，应注意以下几方面

1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。

2. 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3. RNA 在TRNzo l 试剂中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase

的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h ，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 min ，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase 。

4. 配制溶液应使用RNase-Free ddH 2O 。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓

度0.1%( v/v)，放置过夜，高压灭菌）。

RNA 提取操作步骤

准备试剂：氯仿、异丙醇、RNase-Free ddH 2O 、75%乙醇（用RNase-Free ddH 2O 配制）。1. 匀浆处理

a. 植物组织：以叶片RNA 提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直

接在TRNzo l 中研磨，研磨要迅速，最好不要超过1 min 。大约100 m g 叶片使用1 m l TRNzo l 。

b. 动物组织：以鼠肝脏RNA 提取为例。取新鲜或-70℃冻存组织，每30-50 m g 组织加入

1 m l TRNzo l ，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积一般不要超过TRNzo l 体积的10%。c. 单层培养细胞：单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107）：可直接在

培养容器中裂解（容器体积不超过10 cm ）,或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。（在摇瓶中培养的单层贴壁细胞通常采用胰蛋白酶处理的方法）。

1) 直接裂解法： 直接在培养板中加入TRNzo l 裂解细胞，每10 cm 2

面积加入1 m l

TRNzo l 。用取样器吹打几次。注意：TRNzol 加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRNzol 加量不足，可能导致提取的RNA 中有DNA 污染。

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Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

9. 4℃ 5,000 rpm(~2,300×g )离心3 min 。倒出液体，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液体

短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸到沉淀。

10. 室温放置晾干（不要晾的过干，RNA 完全干燥后会很难溶解，大约晾干2-3 min 左右即

可），根据实验需要，加入30-100 μl RNase-Free ddH 2O ，反复吹打、混匀，充分溶解RNA 。

不同组织或细胞RNA 提取预期得率植物叶片 100-200 μg/g 叶片动物组织 6-10 μg/mg 肝脏组织动植物培养细胞 5–10 μg/106 细胞大肠杆菌 2–10 μg/ml DH5α过夜菌血液

3–5 μg/ml 人全血

问 题 指 南

低得率 A ．样品裂解或匀浆处理不彻底。

B ．最后得到的RNA 沉淀未完全溶解。

A 260/ A 280<1.65

A ．检测吸光度时，RNA 样品不是溶于TE ，而是溶于水。

低离子浓度和低pH 条件下，A 280值会较高。 B ．样品匀浆时加的试剂量太少。 C ．匀浆后样品未在室温放置5 min 。 D ．水相中混有有机相。

E ．最后得到的RNA 沉淀未完全溶解。RNA 降解

A ．组织取出后没有马上处理或冷冻。

B ．样品或提取的RNA 沉淀保存于-5– -20℃，未在-60– -70℃保存。

C ．细胞在胰蛋白酶处理时被破坏。

D ．溶液或离心管未经RNase 去除处理。

E ．电泳时使用的甲酰胺pH 低于3.5。DNA 污染 A ．样品匀浆时加的试剂体积太少。

B ．样品中含有组织溶剂(如乙醇，DMSO 等)，强缓冲液或碱性溶液。蛋白和多糖污染

A ．样品中蛋白、多糖含量高。

B ．样品量太大。

C ．水相中混有有机相。

版本号: DP121221

产品内容

目录号 产品组成 DP405-01 20 m l

DP405-02

100 m l

产品简介

TRNzo l 是可即用的从细胞和组织中提取总RNA 的试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRNzo l 可保持RNA 完整性，同时裂解细胞，溶解细胞内含物。

加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA 在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA ；中间层用乙醇沉淀可回收DNA ；有机相用异丙醇沉淀可回收蛋白。

TRNzo l 试剂可用于小量样品（50-100 m g 组织、5×106细胞），也可用于大量样品（≥1 g 组织或≥107细胞），对人、动物、植物和细菌组织提取都适用，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染，可用于Northern B l ot 、Dot B l ot 、Po ly A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等。

产品特点

本公司生产的TRNzo l 为黄颜色，便于区分水相和有机相，方便使用。

保存条件

2-8℃ 避光保存12个月。

TRNzol Reagent TRNzol 总RNA 提取试剂

目录号：DP405