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阿替洛尔脂质体制备工艺及处方优化研究

 201 

β2CD 各自的熔点峰已消失,而在30918℃产生1个新的吸

热峰。与游离的DS 相比,相变温度向高温区移动约20℃。这不仅说明了包合物的形成,而且也提示超分子中主客体间存在着弱的相互作用

阿替洛尔脂质体制备工艺及处方优化研究

图3 β2CD ?DS 体系DSC 曲线图

注:β2CD ?DS :包合物;DS ?β2CD :物理混合物

3 小结

由IR 谱、1

HNMR 谱和DSC 曲线分析确证,分子比为1∶1的β2CD ?DS 包合物如图4所示,是DS 不同部位被β2CD 包合的位置异构体

阿替洛尔脂质体制备工艺及处方优化研究

图4 β2CD ?DS 包合物结构示意图

参考文献

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用研究[J ].化学学报,1995,53(9):916

阿替洛尔脂质体制备工艺及处方优化研究

李凌冰,刘华强3

(山东大学药学院药剂教研室,济南 250012)

摘要:目的 研制阿替洛尔脂质体给药系统。方法 采用逆向蒸发法、乙醚注入法、薄膜法和硫酸铵梯度法制备了

阿替洛尔脂质体,证实硫酸铵梯度法包封率最高且稳定性最好。采用均匀设计法,以包封率为指标,优化硫酸铵梯度法制备脂质体的处方和工艺。并用透射电镜对脂质体进行了考察。结果 证实最优处方制得的脂质体的外观比较圆整,包封率和粒径均令人满意。结论 硫酸铵梯度法对于弱碱性药物来说是一个比较好的制备方法。关键词:阿替洛尔;脂质体;包封率;处方工艺筛选中图分类号:R943 文献标识码:A 文章编号:1672-2981(2005)04-0201-03

Optimization of the preparation and formulation of atenolol liposomes

Li Ling 2bing ,Liu Hua 2qiang 3(Department of Pharmaceutics ,S chool of Pharmacy S handong Universit y ,J inan 250012)

ABSTRACT :OB JECTIVE To prepare atenolol liposomes.METH ODS The preparation methods of liposomes such as reverse phase evaporation ,injection ,film dispersion and ammonium sulfate transmembrane gradients were explored in order to select suitable technique.The uniform design was adopted to screen the formulation of atenolol liposomes.The appearance and size distribution were examined by casting electron microscope.RESU LTS The entrapment effi 2ciency and particle size of atenolol liposomes prepared by optimized method were satisfactory.CONC L USIONS Ammo 2nium sulfate transrnembrane gradient method is a suitable method for atenolol.KE Y WOR DS :atenolol ;liposomes ;entrapment efficiency ;optimization

阿替洛尔[1](atenolol )系第2代β2肾上腺素受体阻滞药,临床主要用于高血压、心绞痛等。此外研究表明013%水溶液滴眼可治疗青光眼、降低眼压等[2]。但传统滴眼液给药,由于眼球运动和鼻泪系统的作用,使大量药物损失,需

作者简介:李凌冰(1964~ 

),男,博士,副教授,主要从事药物新剂型和体内外相关性研究 Tel :(0531)6828794(H ),

8382015(O ) E 2mail :cnlbli @http://www.wendangku.net/doc/781ab823aaea998fcc220ec2.html 3该校学生

中南药学2005年8月第3卷第4期 Cent ral Sout h Pharmacy.August 2005,Vol 13No 14

每日多次给药,剂量不准确,眼内药物浓度波动大。脂质体作为眼部给药系统,组成材料为脂质双分子层膜,类似于生物膜;易于生物融合,促进药物对生物膜的穿透性,故药物外用滴眼的跨角膜转运效率较高。为此我们制备了阿替洛尔脂质体眼用给药系统。并对其制备工艺和处方进行了优化。1 仪器与材料

UV—2102PCS型紫外分光光度计(美国惠普公司); 85B—Ⅰ型磁力加热搅拌器(南通科学仪器厂);RE—52型旋转蒸发仪(上海雅荣生化仪器厂);J Y92—Ⅱ型超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所);SHB—B95型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);透析袋(美国产, D21mm,相对分子质量8000~14000)。原料药(上海三维制药有限公司,批号20000304);Sephadex C250(上海长征制药厂);大豆卵磷脂(四川英格尔公司);胆固醇(温州市瓯海食品生化厂)。

2 方法与结果

211 脂质体制备方法的考察

21111 逆向蒸发法[3] 取大豆卵磷脂60mg、胆固醇30mg 溶于10mL乙醚中,置于锥形瓶中。以p H714

冲液为溶剂配制1%阿替洛尔溶液,电磁搅拌下,将1%阿替洛尔溶液6mL,搅拌使与乙醚形成乳浊液,减压蒸馏1h将乙醚蒸除,得脂质体。

21112 乙醚注入法[3] 以p H714的磷酸盐缓冲液为溶剂配制1%阿替洛尔溶液,取6mL于锥形瓶中。将大豆卵磷脂60mg、胆固醇30mg溶于3mL乙醚中。电磁搅拌下,缓缓将乙醚溶液用五号针头(针尖在液面以下)注入阿替洛尔溶液中。搅拌均匀后加热至65℃,挥发除去乙醚,得脂质体。21113 薄膜法[3] 大豆卵磷脂60mg、胆固醇30mg溶于10mL乙醚中,用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂,在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜。加6mL含1%阿替洛尔的p H714的磷酸盐缓冲液,浸泡,搅拌洗脱脂质膜,可得脂质体。21114 硫酸铵梯度法[4] 取大豆卵磷脂60mg、胆固醇30mg溶于10mL乙醚中,用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂,在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜,于真空干燥箱中干燥后,加入10mL硫酸铵溶液浸泡洗脱脂质膜。将制备的空白脂质体用探头超声细胞破碎器破碎后,装入透析袋中(约10mmol?L-1),放入019%氯化钠溶液中透析48h,取出透析后的空白脂质体,加入6mL1%阿替洛尔溶液,置于60℃水浴中孵化10min,得脂质体。

212 包封率测定[5]

采用透析法测定脂质体包封率。各取上述几种方法制备的脂质体5mL置于透析袋中,分别置50mL烧杯中,精密加入磷酸缓冲液45mL浸泡,每隔2h搅拌15min。12h后取浸泡液215mL置于25mL容量瓶中,加p H714磷酸盐缓冲液定容。以p H714磷酸盐缓冲液为空白在274nm处测吸收度。同步,取5mL1%阿替洛尔溶液于透析袋中透析,作为空白药物对比,采用包封率计算公式:

包封率=C总-C游离

C总

×100%

其中C总为脂质体混悬液中总药量,C游离为未包入脂质体中药物量。结果见表1。

表1 不同方法制备脂质体的包封率

乙醚注入法逆向蒸发法薄膜法硫酸铵梯度法

包封率(%)3612551148187816

由此可知,制备阿替洛尔脂质体采用硫酸铵梯度法包封率较高。

213 脂质体稳定性的测定[6]

在透析袋中分别加入薄膜法和硫酸铵梯度法制备脂质体1mL,置于p H714磷酸缓冲液50mL中,恒温(37℃)下持续搅拌,分别于0、015、110、210、410、610、810、1010、1210h吸取透析液015mL于5mL容量瓶中,加p H 714磷酸盐缓冲液定容。以p H714磷酸盐缓冲液为空白在274nm处测吸收度,同时补充015mL磷酸缓冲液,计算样品在各个时间点的渗漏百分率,结果见图1。由图可见硫酸铵梯度法制备的脂质体更加稳定

阿替洛尔脂质体制备工艺及处方优化研究

图1 渗漏率曲线

214 处方优化

阿替洛尔为微溶于水的弱碱性药物,用传统的制备脂质体的方法制备包封率较低。p H梯度法即通过内外水相的不同H+梯度载药,可显著提高药物的包封率,并且脂质体渗漏率小,更加稳定。

根据查阅资料和预试验的结果,以包封率为指标,选取影响包封率主要因素:硫酸铵浓度、孵化温度、药脂比3个因素用均匀设计法考察。

3因素试验采用均匀设计表U7(76)表设计处方(见表2)。

表2 处方设计表

处方硫酸铵浓度(mmol?L-1)T(℃)药脂比包封率(%) 150401∶347129

2100501∶479170

3150601∶249197

4150401∶455174

5200501∶144130

6200601∶356142

7250601∶569156

将实验结果分别以硫酸铵浓度(X1)、温度(X2)、药脂比(X3)为自变量,包封率(Y)为因变量进行线性回归和二项式回归,得如下方程:

Y=013053+0100025X1+010046X2-0102251X3, (r=018876)(1) Y=010263X1-010787X2+0100011X12+ 010030X22-010007X1X2+010096X1X3-010448

Central Sout h Pharmacy.August2005,Vol13No14 中南药学2005年8月第3卷第4期

 202

 

 203 

X 2X 3,(r =019987)(2)

采用优化技术对实验结果进行优化并结合具体情况,得

优化处方为硫酸铵浓度100mmol ?L -1,温度50℃,药脂比1∶4。215 脂质体的电镜观察采用优化处方制的脂质体,2%磷钨酸负染,透射电镜下观察粒子形态、粒径,记录800个,计算其粒径范围。结果见图2

阿替洛尔脂质体制备工艺及处方优化研究

图2 脂质体电镜图(×200000)

3 讨论

311 硫酸铵梯度法原理

阿替洛尔为弱碱性药物,微溶于水,以传统的注入法、

逆向蒸发法和薄膜法制备的脂质体,包封率较低。用硫酸铵梯度法制备脂质体过程中,脂质体内水相的N H 4+易分解成

N H 3和H

+

,从而导致脂质体内外水相的H +

浓度差即p H

梯度。阿替洛尔为弱碱性药物进入内水相后,遇到酸性环境变成离子态,且与硫酸根离子形成溶解性更小的硫酸盐,阻止其返回外水相,且可以大大提高包封率(见表1)。312 硫酸铵浓度对包封率的影响

由方程(1)可看出随着硫酸铵浓度的增加,脂质体的包封率相应增加,这是由于硫酸铵浓度越大,内外水相的硫酸铵梯度越大,药物进入内水相的量也就越大,包封率越高。313 温度对包封率的影响

对温度来说,温度越高,包封率越高,说明药物进入脂

质体的过程为消耗能量的主动过程。314 p H 梯度对包封率的影响 在用硫酸铵梯度法制备脂质体过程中,内外水相的p H 梯度越大,药物进入内水相的量越大,包封率越高。因此在制备过程中,要将外水相的硫酸铵透析掉。在本实验中,采用透析48h 以确保硫酸铵充分透析完全,确保对眼部无刺激性。315 渗漏率实验

由图1可见,由硫酸铵梯度法制备的脂质体渗漏率比其他常规方法制备的脂质体小,因此稳定性好。这可能是因为阿替洛尔为弱碱性药物进入内水相后,遇到酸性环境变成离子态,且与硫酸根离子形成溶解性更小的硫酸盐,阻止其返回外水相。316 外观与粒径分布测定

优化处方制得脂质体透射电镜图见图2,由图2可见,所形成脂质体形状比较规则,隐约可见双分子层膜,粒径范围在20~300nm 。由粒径范围可知,脂质体的粒径大小变化较大,这是由于在制备时采用超声分散的方法所致,可采用在制备后用微孔滤膜过滤的方法使粒径范围变窄。

参考文献

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高效液相色谱法测定人血浆中氟罗沙星浓度

谭志荣1,欧阳冬生1,曾玲1,周淦1,王连生1,李智1,王丹1,韩春婷1,郭栋1,陈尧1,郑姣1,胡东莉1,陈安朝2,周宏灏13(11中南大学临床药理研究所,长沙 410078;21中南大学药学院,长沙 410013)

摘要:目的 建立测定人血浆中氟罗沙星浓度的高效液相色谱法。方法 血浆样品用三氟醋酸沉淀后离心,取上清液直接进样。色谱柱为ZORBAX C 18柱(150mm ×416mm ,5μm ),流动相为乙腈2水(0105%磷酸和0105%三乙

胺)(20∶80),流速为110mL ?min -1

,检测波长为286nm ,柱温为室温。结果 本方法线性范围491875~7980ng ?mL -1,r =0199954,最小检出浓度为491875ng ?mL -1。绝对回收率均在70%以上,相对回收率在98%~102%,日内、日间RSD 均<15%。结论 本方法简便、灵敏、准确,可用于氟罗沙星血药浓度检测和药物动力学研究。

作者简介:谭志荣(1977~),男,研究生,主要从事临床药理学研究 3通讯作者:周宏灏(1939~),男,教授,博士师导师,主要从事临床药理学研究 Tel :(0731)4805379 E 2mail :hhzhou2003@http://www.wendangku.net/doc/781ab823aaea998fcc220ec2.html

中南药学2005年8月第3卷第4期 Cent ral Sout h Pharmacy.August 2005,Vol 13No 14