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中关村在线

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中关村的管理模式

1、企业文化

中关村在线是最具商业价值的经销商平台,注重企业文化的建设,并在其发展过程中不断完善丰富。中关村在线正式把文化理念渗透到每一个员工的心里,逐步形成了具有中关村在线特色的企业文化————专业、团队、坚韧、激情、感恩。

2、频道管理

ZOL根据受众特点将整个网站分为几个大的部分,即六大频道:

资讯类频道:又分为数码频道、商用频道、DIY硬件、企业版、娱乐生活、软件频道;

IT产品库:包括手机、数码相机、MP3、笔记本、GPS等;

论坛:拥有2万多个IT产品板块,2千版主,平均每日发帖超万贴,500万人次在线交流,采购用户最佳的交流讨论平台;对产品的购买、使用、售后、技巧等热点问题上进行深入的全面地沟通;

经销商:经销121个产品种类;共有35000家注册经销商;

二手市场:提供方便快捷免费发布供求二手产品信息的平台;

视频:平均每天推出大量原创内容,视听产品内容丰富,资讯广泛。

3、产品报价管理

ZOL最重要最核心的功能就是它的报价查询,所以ZOL特地设计了产品报价查询系统,该系统通过详细的分类进行管理。它把所有的产品分为:(1) 手机·通讯产品(2)笔记本·超级本·台式电脑(3)平板电脑·MID(4)装机硬件·硬件外设·模拟攒机(5)大家电·影音家电·游戏机(6)服务器·网络·无线·布线(7)苹果专区·iPhone5S (8)数码相机·单反·数码摄相机(9)数码产品·MP3·移动电源(10)办公打印·投影·监控·LED(11)厨卫电器·小家电·生活家电·个人护理(12)车载导航·车载电子·车载配件;并且产品可按类别、品牌、首拼字母进行检索。

4、电子商务的管理流程

在ZOL的电子商务中,顾客可通过经销商在网上进行产品的购买,其购买流程如下:

5、企业电子商务的资源管理

ZOL通过不断发展壮大其编辑队伍,从而让网站的文章数量和质量都得到了质的提高,同时,ZOL通过对新员工进行培训,对老员工定期举行外出旅游等活动来灵活地管理企业的人力资源,从而让员工感受到企业的关怀,增强员工的归属感。

6、企业电子商务的风险管理

ZOL拥有庞大的产品数据库和IT资讯,这些都是靠众多的服务器来为用户提供访问服务的,所以ZOL应定期对服务器进行检查,以避免不必要的服务器故障;同时,还应不断提高网站访问宽带,让用户能以更快的速度访问网站。

ZOL现在已经在国内积累了一定程度的用户,但是ZOL必须不断提高自己的创新力,通过创新的服务和及时的资讯来提高自己的竞争力,从而避免被同类网站超越。

在ZOL的电子商务中,ZOL还应加强已登记注册经销商的诚信管理,及时处理用户的投诉,防止欺骗用户购买产品的行为发生。对不够诚实守信的经销商,应及时进行清理,并列入经销商黑名单,对其行为进行曝光。

中关村的技术模式

1、技术建设模式

中关村在线的建设模式主要是自主开发模式。

2、通信系统

ZOL有注册登陆系统,用户注册后会有一个账号,而此账号可用于ZOL注册用户之间的通信,比如用户可以向其他注册用户留言,发站内消息,并可对留言进行回复。

同时,这一通信功能也可用于用户和经销商之间,用户可对就自己想买的产品向经销商进行留言或发站内信件询问价格及相关问题。当然,为了方便用户,ZOL也将页面与QQ和新浪微博进行了对接,使用户也可使用QQ或新浪微博登陆ZOL。

3、计算机硬件系统

服务器、路由器、交换机等硬件基础设施在中关村在线中起着举足轻重的作用,它们承担着用户对IT产品信息及其报价的查询、IT资讯或新闻的发布、ZOL视频观赏、软件下载等网站主要功能。

4、计算机软件系统

ZDC(ZOL数据研究中心):作为国内首家基于互联网的IT产品消费研究机构,占据本土互联网调研市场75%份额。卓越职能涵盖:即时监控最新IT产品动态;海量积累消费行为资讯(拥有用户行为信息量超过7000万条);精准预测IT产品消费趋势。

IT产品数据库:ZOL产品数据库每周提供200多条产品线,近12万款产品的最新准确信息。

专业硬件论坛:ZOL论坛是业内网友关注度最高的专业硬件论坛,成为主流消费群体不可缺少的IT产品咨询专家。将近70万注册用户,每天超过5000人同时在线,问题回复率93%,问题解决率64%。树立了真正的专业形象,更是深得网友的拥护。

二手IT产品C2C交易平台:为用户创造最好的个人电子商务机遇,超过25万的注册用户,被誉为业内最活跃的个人网上交易的二手市场。

5、其他专用系统

ZOL IT厂商资料库:提供超过1300家的IT厂商资料,完全专业细分条目,及时优化信息检索,保证行业客户的最新资讯传播,及对于终端消费群体的最优信息搜索。

同时方便用户在ZOL查询商品信息后查询商品报价或直接在ZOL所提供的经销商上进行购买。

DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号:DN26 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍: DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟,DNA 回收率可达70-100%,得到的DNA 不需再纯化,可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存: 室温保存至少一年。 注意事项: DNAzol 有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 1.裂解,匀浆 a.组织:25-50mg 组织加1ml DNAzol ,使用匀浆仪处理5-10 次。少量 (5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打

混匀,室温放置5-10 分钟。 b.细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol 用取样器吹 打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 c.细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复 吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。 2.离心 4 -25℃,10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA 的DNA 时,可加此步骤。其他样品可省略此步。 3.沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8 次,混匀样品至出现DNA 沉淀,室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上,仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug),无法缠绕到枪头上,可在4 -25℃,4000g 离心1-2分钟沉淀DNA,弃上清。 4.漂洗 用0.8-1ml 75%乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时,将DNA 悬浮在乙醇中,颠倒离心管3-6 次,然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底,尽可能吸弃上清。 如果需要,可在4 -25℃,1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时,如需去除其他内含物,第一次漂洗可用70%DNAzol 和30%乙醇的溶液代替75%乙醇。

【实战!图解双硬盘安装】-希捷7200转 SATA台式机硬盘论坛-ZOL中关村在线

【实战!图解双硬盘安装】-希捷7200转SATA台式机硬盘 论坛-ZOL中关村在线 实战!图解双硬盘安装 此帖对"希捷"的评论 实战双硬盘安装 一、确定连接方案 大家都知道,IDE设备(例如硬盘、光驱等)上都会使用一组跳线来确定安装后的主盘(Master,MA)、从盘(Slave,SL)状态。如果在一根IDE数据线上接两个IDE设备的话,还必须分别将这两个IDE设备设置为一个为主盘,另一个为从盘状态。这样,安装后才能正常使用。 小提示:如果一根IDE数据线上只接惟一的IDE设备,不管这个IDE设备原先是设置为主盘还是从盘状态,都不需要对这个惟一的IDE设备重新设置跳线。 通常都是将性能较好的新硬盘接在第一条IDE数据线上,设为主盘,作为开机引导硬盘。至于旧硬盘,有几种接法: 1.两个硬盘接在同一根硬盘数据线上,则第二硬盘应设为从盘。笔者就以此方案为例。 2.第二硬盘接在第二个IDE接口上,如果该接口的数据线上只有一个硬盘,也没接光驱,那么第二硬盘就不用跳

线;如果这根数据线上还挂有光驱,一般将第二硬盘和光驱的其中一个设为主盘,另一个设为从盘,这由你自己决定。 二、设置硬盘跳线 确定好硬盘的连接方案后,就要设置硬盘跳线了。一般我们可以在硬盘的IDE接口与电源接口之间找到由3~5列跳线。不管是什么硬盘,在跳线设置上,大致可分成主盘、从盘与电缆选择(Cable Select)三种。硬盘的出厂预设值都是设为主盘,所以如果你将硬盘设为主盘,一般就不用设置跳线了。 硬盘跳线大多设置在硬盘的电源插座和数据线接口之间,如图1所示。 笔者曾经看到一块三星硬盘的跳线是设置在硬 盘背面的电路板上。然后根据硬盘正面或数据线接口上方标示的跳线设置方法,如本例的希捷4.3GB硬盘正面就有跳线设置图,如图2所示。 根据图中标示的设置方案,取出所有跳线帽就是从盘了,如图3所示。EXIF版本:0210 设备制造 商:NIKON 摄影机型号:E995 光圈:f/4.3 快门:10/40 感光度ISO:227 拍照时 间:2004:06:27 00:06:16 [

盘点九大新奇又实用的科技产品-ZOL科技频道

盘点九大新奇又实用的科技产品-ZOL科技频道 科技的发展日新月异,十五年前,还是随身听、传呼机的时代,五年前,就成了P3、彩屏手机的天下,而如今,平板电脑和智能手机称霸我们的生活,那么再过五年抑或十年,什么又会变成我们生活中不可或缺的东西?盘点当下九大新奇又实用的科技产品,畅想未来多姿生活。 刷脸支付 该支付系统由芬兰的初创公司Uniqul发明,现已完成测试。在Uniqul的系统中,你的脸就是密码,免去了消费者在商店内进行支付时的很多安全隐患。 该系统会把你的ID以及你的支付方式等细节储存到服务器上整个过程无需支付卡、钱包、手机。在对交易进行确认支付时,用户仅需把脸对着摄像头,等着他们的ID显示出来,然后在平板显示屏上点击"OK"便可完成支付确认。 用户想在1-2km半径范围内的地区使用这项技术,需要月付0.99欧元。若每月支付6.99美元的话,则可以不受距离限制地在任何地点使用这项支付技术。 点击查看更多高清图 便携超声扫描仪 美国科学家最新研制一种便携式超声波扫描仪,只需连接智能手机或者平板电脑,便能在其屏幕上显示扫描图像,随时随地对患者进行超声波检查。 最典型的实例就是对孕妇进行检查,观察子宫中胎儿的情况,同时,也可用它来扫描心脏、肺、肝脏、胆囊和乳房等器官组织。 该超声波扫描仪操作非常简单,仅在几分钟之内便能熟练掌握,该设备形成的网络连通性使人们更容易分享和存储照片,征求其他人意见或者进行远程诊断。 目前,MobiUS售价为10570美元,对比之下常规超声波扫描仪的售价为90607美元。

发电鞋垫 “发电鞋垫”的设计者是马特-斯坦顿(Matt Stanton)和哈娜-亚历山大(Hahna Alexander),这是一种可以放置在任何鞋中的鞋垫,使用者仅需将鞋垫放入鞋中,充电电线通过鞋带孔连接至固定在脚踝或者鞋前端一个电池组,行走3.2-4公里产生的能量足以完全对一部iphone手机充电。 该研究小组正在测试这个动力鞋垫,并希望于2014年上市销售。这款鞋垫零售价为140美元。 用尿液充电的手机 英国科学家最新研究表明,利用尿液作为动力源,可作为微生物燃料手机电池,能够发送手机短信,网页浏览,短暂手机通话。

中关村在线(ZOL)电子商务模式分析报告

江苏科技大学苏州理工学院 商学院课程设计报告 课程名称:电子商务课程设计 专业:工商管理 报告题目:中关村在线(ZOL)电子商务模式分析报告学号:12457161-22、27、29、31、31;12457162-21 姓名: 姓名分工 曹颜浩资源配置、合作伙伴网络 康慎涛价值主张、消费者目标群体 荣志崴企业内涵、目前面临的发展障碍和发展 机遇、总结与展望 袁建祥核心能力、ZOL优劣势分析 朱旭ZOL简介、收益来源 鲍威垂直式B2C电商模式介绍、分销渠道

目录 1、中关村在线(ZOL)简介 (1) 2、垂直式B2C电商模式概述 (1) 3、ZOL电商模式分析(8要点分析) (1) (1)价值主张 (1) (2)消费者目标群体 (1) (3)分销渠道 (1) (4)收益来源 (2) (5)资源配置 (2) (6)核心能力 (2) (7)合作伙伴网络 (2) (8)企业内涵 (3) 4、ZOL优劣势分析 (3) (1)优势 (3) (2)劣势 (4) 5、目前面临的发展障碍和发展机遇 (4) (1)障碍 (4) (2)机遇 (4) 6、总结与展望 (4)

中关村在线(ZOL)电子商务模式分析报告 1、中关村在线(ZOL)简介 中关村在线(ZOL)是中国第一科技门户,是一家资讯覆盖全国并定位于营销促进型的IT互动用户,被认为是大中华区最具有商业价值的IT专业门户。中关村在线是集产品数据、专业资讯、科技视频、互动行销为一体的复合型媒体,也是美国哥伦比亚广播集团互动媒体公司CBS Interactive在中国区的旗舰媒体。 2、垂直式B2C电商模式概述 中关村在线(ZOL)属于典型的垂直式B2C平台。B2C电子商务指的是企业针对个人开展的电子商务活动的总称,而垂直式B2C则是其中在核心领域内继续挖掘新亮点的一种,通过积极与知名品牌生产商沟通与合作,化解与线下渠道商的利益冲突,扩大产品线与产品系列,完善售前、售后服务,提供多样化的支付手段。 3、ZOL电商模式分析(8要点分析) (1)价值主张 中关村在线(ZOL)作为一个国内领先的资讯平台,其专业且新颖的资讯可以使客户更快更准确的了解IT界的最新动态。不仅如此,中关村在线更是一个完备的电子产品交易平台,客户不仅可以了解到产品的最新市场价格并进行比较,还能发表评论直议优劣,给后来者以或多或少的借鉴。中关村在线还是一个专业的电子产品交流平台,其下属的论坛包含了时下各大电子产品,客户们可以在这里共享使用心得,解答疑问,为菜鸟们创造出了一个相对友好的环境。 (2)消费者目标群体 中关村在线(ZOL)作为一个以电子产品为主的资讯、交易、交流平台,面对的客户群体主要是新兴的IT界精英、追求时尚的年轻人、具有潜力的经销商,小至家庭主妇,大到各类型的公司,甚至作为竞争对手的各式销售网站等等,都能成为其消费者,中关村在线的目标群体范围之大,涉及之广,专业之精,其体现的包容精神由此可见一斑。 (3)分销渠道 中关村通过在线经销商,使用在线交易平台,为用户提供各种服务,利用现代通信技术开展网上交易,效率更高,服务范围广泛。中关村的主要客户是个人,中小企业和从事IT 行业的经销商,而个人以学生和白领为主,网上交易比例较高。移动互联平台针对移动设备访问需求设计了移动应用客户端,向客户提供IT产品资讯,这一平台使中关村在线W AP 站成为用户寻找IT资讯最方便快捷的网站。电子商务平台向用户提供各种资讯,电子商务解决方案。中关村的“Z团”是聚集大量厂商推出的诚信可靠的IT产品团购平台,不仅为

Redzol一步法总RNA提取试剂

Redzol(一步法总RNA提取试剂) 使用说明 用户请自备以下试剂 1. 氯仿 2. 异丙醇 3. 75%乙醇(用DEPC处理的水) 4. DEPC水或0.5%SDS溶液 操作方法 1. .. 准备 估算Redzol或组织细胞的用量。每1ml Redzol的组织用量为50~100mg;细胞用量为5~10×106个细胞。 2. 组织或细胞的裂解 a、贴壁细胞 吸尽培养液,加入Redzol,用枪反复吹打数次,确保全部裂解,然后转移至新的离心管中。裂解10cm2细胞需要1ml Redzol。 注:Redzol的加入量不是根据细胞数目来决定,而是根据细胞培养皿的面积(10cm2/ml)来决定。 b、悬浮细胞 离心收集细胞,吸尽液体,加入Redzol用枪吹打数次,确保全部裂解(某些酵母和细菌要用匀浆器匀浆才能全部裂解),然后转移至新的离心管中。按1ml Redzol可裂解5~10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞的比例加入Redzol裂解细胞。 注:应避免在Redzol加入前洗涤细胞,这样会增加mRNA降解的几率。 c、组织 先将新鲜组织剪成小块,放入匀浆器内,加入Redzol用匀浆器匀浆,然后转移至新的离心管中。或者将组织在液氮中研磨成粉末后,加入Redzol中。每

50~100mg的组织加入1ml Redzol进行裂解。 注:样品总体积不要超过所用Redzol体积的10%。 3. 分相 a 将匀浆液15~30℃静置5分钟使其充分裂解。 b 每1ml Redzol中加入0.2ml的氯仿,震荡混匀后15~30℃静置2~3分钟。 c 2~8℃ 12,000g离心15分钟。离心后混合物分成三相(下面的酚/氯仿相、中间的白色界面、上面的无色水相)。RNA全部在无色的水相中。 注:对于含有高浓度蛋白、脂肪、多糖或纤维素(肌肉、脂肪组织、植物的微管组织)的样品,在分相前可以附加一个分离步骤:匀浆后2~8℃12,000g 离心10分钟弃沉淀。RNA溶解在上清液中,纤维素、多糖、大分子量的DNA以不溶的形式沉淀从而与RNA分离。对于脂肪组织的样品,上面一层脂肪组织可以被清除掉,将清澈的匀浆液转移到另一新管中,继续进行第3步分相。 4. 沉淀RNA 转移上层水相到另一新离心管中,按0.5ml异丙醇/1ml Redzol比例加入异丙醇,充分混匀后15~30℃静置10分钟,然后2~8℃ 12,000g离心10分钟,RNA 形成白色的小团沉淀在离心管的底部和侧面。 注:一定不要吸取中间界面;若同时提取DNA和蛋白质,于4℃保留下层酚相。 5. 洗涤RNA 弃上清,RNA沉淀于管底。按1ml 75%乙醇/1ml Redzol加入75%乙醇,漂洗2~3次RNA沉淀,2~8℃ 7,500g离心5分钟,尽量弃上清。 6. 溶解RNA O、TE 在无菌工作台中干燥RNA沉淀5~10分钟。可用DEPC处理的50μl H 2 buffer 或0.5% SDS溶解RNA样品,55-60℃温育10分钟使RNA完全溶解。 注:RNA样品不要过于干燥,否则很难溶解。 常见问题解答

【人像对焦不实的后期通道调整】-尼康D7000论坛-ZOL中关村在线

简单搜索、快速寻找,找帖子、找人、找版块 搜索 每日精选 | 影人旅途 | 摄影教程 | 精华 | 热帖 数码摄影论坛 >人像对焦不实的后期通道调整 12345 (20) 下一页 去第页确定返回列表切换到窄版热门板块: 佳能(651901) 尼康(475004) 西安(10866) 镜头(120327) 索尼(307988) 安阳(16606) 人像对焦不实的后期通道调整 10397浏览 / 292回复 楼主 尼康数码特约商家 发布于 2013 一键看图 快速回复 只看楼主 收藏本帖 私信楼主 Andyandy 把此帖设为精华,作者+50经验辛苦好友了 感谢分享 前几天太平洋摄影论坛D5200版块,我的好友自得其乐用定焦拍了两张人像,结果发上来我一看都虚了,一般来说这样的片子都 是由手抖或安全快门低,导致对焦不实造成的。这种情况是我们在拍摄过程中经常遇到的,出了这样的片子我们会觉得挺可惜的,有人会说:锐化下就可以了,但这里我想说的是:如果直接用USM 滤镜锐化,是不能识别图像的真正轮廓的,这时就需要我们利用通道的后期调整来解决,这个方法不仅简单而且还实用,我现在就分享给大家。它和普通加锐是完全不同的,它即能完全保留照片的层次及细节,还能让照片真正的清晰锐利。这也是这节课我要给大家所讲的内容,希望大家能够喜欢。此帖子在D7000版块首发,因为它是本村最火的版块,这样的话能让更多的人了解跟掌握这种方法,图片选自D3100版块的帖子: 如需转栽,请注明出处,谢谢合作。 图片调整前 股票息,T+0 www 沪深3以操作以买涨杠杆资 加好友私信 好运即到 数码摄影认证用户帖子:89精华:32影币:4126城市:黑龙江注册:2013-10-14登录:2013-12-26所有帖子>> 尼康 D5200版主:榜眼 尼康论坛 >尼康D7000论坛 >发表新帖ZOL 首页 产品报价 ZOL 论坛首页 论坛帮助快速登录申请认证 请 [注册]|[登录]更多论坛签到

最新金士顿内存真假鉴别方法(ZOL)

造假成"砖家" 假条超频力压正品 尔必达破产导致内存价格疯涨,内存的火爆交易,大家都想趁着内存没有涨到高位,赶紧购买给自己心仪的主机加大内存容量,不但是普通用户,就是众多JS 的囤条对象,也是首选金士顿内存。一根假冒金士顿4GB DDR3-1333内存的成本不过50-70元,如今正品售价为145元,假内存的利润超过100%,庞大的商机加上超高的利润,假冒金士顿内存层出不穷。 情何以堪假条超频潜能力压正品内存 树大招风,世界排名第一的金士顿内存是众多不法厂家争相假冒生产的对象,这可愁怀了网友们。网友“菠菜”是ZOL硬件交易论坛的忠实拥趸,最大的乐趣就是在里面掏二手宝贝硬件。眼下便宜的二手内存炙手可热,金士顿内存更是红得发紫。只见论坛里真假金士顿内存同在,如何分辨让人煞费苦心。 金士顿频频推出窄版内存,网友惊呼假条都比正品内存的做工好,此话当然偏颇,但是造假厂家熟能生巧,造出经验来的时候,假条品质未必就比正品内存差,它的超频潜能甚至力压正品内存。下面就由笔者来为大家介绍真假金士顿内存的分辨方法,首先上场的是N个版本的金士顿DDR3内存。

版本之乱金士顿堪称博物馆 假冒金士顿内存固然可恶,也许不劳假货出场,就是金士顿旗下的内存,也足以让网友眼花撩乱。在北京中关村卖场存在多个版本的金士顿DDR3内存:窄版和宽版、蓝色和绿色,就算是绿色窄版的金士顿内存,也有多个版本。 一、金士顿4GB DDR3-1333内存盘点 1、绿色宽版PCB板 绿色宽版PCB板的金士顿4GB DDR3-1333内存 绿色宽版PCB板的金士顿4GB DDR3-1333内存,采用尔必达内存芯片,做工最为强悍,属于可遇不可求的类型。目前市场上有两个以上版本的该类型内存:深绿、浅绿色。 2、蓝色宽版PCB板

DNAzol protocol

1. Lysis of cells and nuclei: ?Cells grown in monolayer: Add 0.75-1.0 ml of DNAzol? Reagent per 10 cm2 culture plate area. Lyse the cells by agitating the culture plate and gently pipet the lysate into an assay tube. ?Cell Pellets or Suspensions: Add 1 ml of DNAzol? Reagent to 1-3 × 107 cells, either in pellet or in suspension (volume < 0.1 ml). Lyse the cells by gently pipetting. For whole blood up to 100 μl, add 1 ml of DNAZOL to the blood and pipet up and down gently to lyse the cells. For whole blood (>100 μl), pellet the cells and wash them with 0.9% NaCl. Pellet the cells again and resuspend them in one volume of cold (4°C) hypotonic solution [20 mM Tris HCl (pH 8.0), 10 mM EDTA]. Pellet the cells at 4,000 rpm for 10 min (4°C). Discard the supernatant and add 1 ml DNAzol? per 1-3 × 107cells. Lyse the cells by gently pipetting. ?Cell Nuclei: Add 1 ml of DNAZOL Reagent to 1-3 × 107 cell nuclei, either in pellet or in suspension (volume < 0.1 ml). Lyse the nuclei by inverting the assay tube or by gently pipetting the mixture. ?To minimize shearing of the DNA molecules, pipet DNA solution using wide-bore pipette tips. Prepare wide bore pipette tips by cutting 2-3 mm from the ends of plastic pipette tips. Mix DNA solutions by inversion; avoid shaking or use of a Vortex for mixing. 2.Centrifugation (optional): Sediment the homogenate for 10 min at 10,000 × g at 4°C or room temperature. Following centrifugation, transfer the resulting viscous supernatant to a fresh tube. This step removes insoluble tissue fragments, RNA, and excess polysaccharides from the lysate/homogenate. It is required only for the isolation of DNA from tissues such as liver, muscles, and most plant tissues containing a large amount of cellular and/or extracellular material. This process is recommended in order to minimize RNA carry-over into the DNA. 3.DNA Precipitation: Precipitate DNA from the lysate/homogenate by the addition of 0.5 ml of 100% ethanol per 1 ml of DNAzol? Reagent used for the isolation. Mix samples by inversion and store them at room temperature for 1-3 min. DNA should quickly become visible as a cloudy precipitate. Remove the DNA precipitate by spooling with a pipette tip. Swirl the DNA onto the tip and attach it to the tube wall near the top of the tube by gently sliding the DNA off the tip (alternatively, transfer the DNA to a clean tube). Carefully decant the supernatant, leaving the DNA pellet near the top of the tube. Place the tubes upright for 1 min and aspirate the remaining lysate/homogenate from the bottom of the tubes. If extensive pipetting is used to facilitate lysis/homogenization before precipitation with ethanol, the resulting sheared DNA will not spool. The same is true for small quantities of DNA (< 15 μg). In this case, centrifugation at 4,000 × g for 1-2 min at room temperature or 4°C will pellet the DNA.

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