流式常用试剂配制
一、流式细胞术常用试剂
1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。
2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入10％的NaN3。
3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。
4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至，使用前新鲜配制。
5、消化液：％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或％胰蛋白酶与％EDTA的混合液。
6、红细胞裂解液：NH4Cl ，KHCO3 ，EDTA?2Na ，溶于100ml水中，调PH至，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。
7、流式细胞抗体稀释剂：L PBS液（PH ）＋1％BSA＋％Na2N3。
8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH ）＋1％FBS（或BSA）＋％NaN3＋％saponin（Sigma 的效果不错）。
9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、％NaN3的PBS（PH ）。
10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg 无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加～PI染液。
11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）
原液A
NaCl 160g
MgSO4?7H2O 2g
KCl 8g
MgCl?6H2O 2g
CaCl2
溶于1000ml双蒸水
原液B
1）Na2HPO4?12H2O
KH2PO4
葡萄糖
溶于800ml双蒸水
2）％酚红溶液：取酚红置玻璃研钵中，逐滴加入NaOH并研磨，直至完全溶解，约加入NaOH 10ml。将溶解的酚红吸入100ml量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中，
最后补加双蒸水至100ml。
将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml即为原液B。
应用液：
原液A 1份
原液B 1份
双蒸水18份
混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的％NaHCO3调PH至～。
12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）
A液（L NaH2PO4水溶液）：
NaH2PO4?H2O ，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。
B液（L Na2HPO4水溶液）：
Na2HPO4?7H2O 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。
不同PH值PB的配制：
A液xml（参照下表）中，加入B液yml，为L的PB。若再加蒸馏水至200ml，则成L PB。PH x/ml y/ml
13、PBS的配制
配制PBS，只要在相应的PB基液中加入L NaCl即可。
二、常用激活剂
1、激活剂PMA：用DMSO配制成ml，分装20ul/管，－20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：100稀释储存液，终浓度为20ng/ml。
2、激活剂离子霉素：用乙醇配制成浓度为ml的储存液，－20度保存。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液，终浓度为1ug/ml。
3、Staphylococcal enterotoxin B(SEB) ：用无菌无叠氮钠PBS调节浓度mL，4℃储存，SEB 终浓度10ug/mL。
4、CD3：包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存在下活化未稀释的血液细胞。
5、CD28：加速不同刺激剂（包括SEB、CD3等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml。
6、阻断剂Bregeldin A：用DMSO配制成浓度为5mg/ml的储存液，分装20ul/管，－20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液，在激活过程最后4～5小时使用BFA，终浓度为10ug/ml。
7、阻断剂莫能菌素：用DMSO配制成浓度为1mg/ml的储存液，4℃储存至少4个月，实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液，终浓度为2umol/L。
三、常用抗体标记荧光染料的特性及其应用
1、FITC：激发波长488nm，最大发射波长525nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL1通道检测；
3）可用于荧光显微镜技术
4）荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。
2、Alexa Fluor 488：激发波长488nm，最大发射波长519nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL1通道检测；
3）具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术；
4）在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4～10）。
3、Cy3：激发波长488nm，最大发射波长570nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL2通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。
4、Cy5：激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL4通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。
5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。
5、PE：激发波长488nm，最大发射波长575nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL2通道检测；
3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR：激发波长488nm，最大发射波长615nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor 610：激发波长488nm，最大发射波长628nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）荧光强度高；
3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
8、PE-Alexa Fluor 647：激发波长488nm，最大发射波长668nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）不易湮灭；
3)可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
9、PE-Cy5：激发波长488nm，最大发射波长670nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4)可与FITC、PE搭配，荧光干扰小、补偿小，但不宜与APC搭配。
5）与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。
10、：激发波长488nm，最大发射波长694nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4)可与FITC、PE、APC搭配，荧光干扰小、补偿小，是APC比较理想的搭配。
11、PE-Alexa Fluor 700：激发波长488nm，最大发射波长723nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）光淬灭性很强，要绝对避光。
12、PE-Cy7：激发波长488nm，最大发射波长767nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）光淬灭性很强，要绝对避光；
4）可与FITC、PE搭配，与FITC无光谱重叠，与APC搭配荧光干扰小，补偿小，是比较理想的搭配。
13、TR：激发波长595nm，最大发射波长615nm。
1）其标记的抗体适用于配备Texas Red激光器的流式细胞仪；
2）荧光不易淬灭，可用于荧光显微镜。
14、APC：激发波长633/635nm，最大发射波长660nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）在BD细胞仪的FL4通道检测，在Beckman Coulter细胞仪只有配备双激光器的FC500才能检测到。
15、：激发波长633/635nm，最大发射波长668nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）主要用于四色以上的流式细胞术。
16：PerCP：激发波长488nm，最大发射波长677nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；
2）可于FITC、PE搭配，荧光光谱重叠少，对随细胞的特异性结合少，但量子产量较低，适用于较高表达物的检测。
常用试剂配方
常用试剂配方 常用试剂 储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不超过30℃，相对湿度不超过80％。包装必须密封，切勿受潮。 应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存 放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。 操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。使 用后应留意剩余量，注意及时订购。 8M Urea（尿素） 组份浓度：8mol/L Urea（MW：60.07） 配制量： 1L 配制方法： 1.称取尿素480g，置于1L的蓝盖瓶中。 2. 加水至1L，置于磁力搅拌器上充分搅拌。 3. 于棕色瓶中，4℃保存。 4.使用前，先在常温放置，使析出的尿素溶解。 0.25％AgNO （硝酸银） 3 （MW：169.87） 组份浓度：0.25％（W/V）AgNO 3 配制量： 500ml 配制方法: 1.准确称取硝酸银1.25g。 2.加入500ml的去离子水，充分溶解。 3.于棕色瓶中,常温保存。 0.5M EDTA（PH 8.0） 组分浓度: 0.5 mol/L EDTA（MW：372.24） 配制量: 500ml EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。 配制方法: 1．称取93g Na 2 2．加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。 3．用NaOH调节调节pH值至8.0（约需加入20g固体NaOH），当pH 接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。 4．高温高压灭菌后，室温保存半年。 5M NaCl 组份浓度： 5mol/L NaCl (MW：58.5) 配制量： 1L 配制方法： 1.准确称取氯化钠292.5g，置于1L的蓝盖瓶中。 2.用去离子水溶解并稀释至1L。 3.高温高压灭菌后，常温保存。
最详细的流式细胞仪实验方法
流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1．标本制备： 2．最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病
第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 二、最小化非特异性结合的方法 1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。 2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。 3．在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清和作为标记的第二抗体一起培育。这个步骤会减少不必要的第二抗体与第一抗体、细胞表面或胞内结构之间的交互作用。 通过用来自于同样的样品的血清稀释标记过的抗体可以略过此步骤。此步骤适用于很多方面，但有时候它也会导致已标记的第二抗体和正常血清中的免疫球蛋白的免疫复合体的形成。这种复合体会优先与一些细胞结构进行结合，或者它们最终会导致期望得到的抗体活性的丢失。 4．使用F(ab’)2片段会使背景决定于第一或第二抗体与FC受体的全分子结合。大多数的第二抗体的F(ab’)2片段容易利用。而第一抗体的F(ab’)2片段一般是不能利用或很难制作。因此，在NaN3存在的条件下，将新鲜组织或
常用化学试剂的配制方法
常用试剂配制的具体操作 1.HCL（1＋1）：在1000ml棕色瓶或白色瓶中，先倒入用500ml量杯量取的500ml 纯净水，然后再缓慢加入盐酸，摇匀，密封备用。（打开盐酸时，需要用纸，盖在瓶盖上再打开。因为里面可能存在压力，若是直接打开，可能会因为压力过大，造成液体冲出，伤害到眼睛）也可以放置少量在白色滴瓶中待用。 2.抗坏血酸（5%）：用一次性塑料杯，称取抗坏血酸1g，硫脲0.1g，加入20ml 纯净水，在超声器中用玻璃棒搅匀，再倒入30ml小棕色瓶中保存。（在实验前需要看颜色变化，如果颜色变深，则代表试剂过期）。 3.盐酸—硼酸混合酸：用一次性塑料杯称取硼酸25g，500ml量杯分2次量取 900ml纯净水，清洗塑料杯，并倒入1000ml烧杯中，再加入HCL（1＋1）70ml，放置在超声器中，用玻璃棒搅匀溶解，再倒入1000ml的棕色瓶中保存（也可以用500ml白色塑料瓶，插10ml刻度移液管） 4.钼酸钠（6%）：用一次性塑料杯称取钼酸钠30g，500ml量杯量取500ml纯净 水，边清洗塑料杯边倒入500ml烧杯中，然后放置在超声器中，用玻璃棒搅匀，再倒入至500ml白色塑料瓶中，密封保存。（插5ml刻度移液管） 5.H₂O₂（1＋20）：全名为过氧化氢或者双氧水。用1ml刻度移液管，吸取1ml 过氧化氢至一次性塑料杯中，20ml量杯量取20ml纯净水，倒入塑料杯中，摇匀，再倒入至30ml的小棕色瓶中。（容易失效，所以做溶液和检测时都需要速度快） 6.三乙醇胺（TEA）（1＋1）:在1000ml棕色瓶中，先倒入用500ml量杯量取的 500ml纯净水，然后再缓慢倒入500ml三乙醇胺，摇匀备用。（也可以用白色塑料瓶，加黑色外袋保存，插5ml刻度移液管） 7.H2SO4（1＋1）：带橡胶手套及口罩。用500ml量杯先量取300ml纯净水， 在1000ml烧杯内，先倒入300ml纯净水。用脸盆装半脸盆自来水，将烧杯先放入脸盆中，再用500ml量杯量取300ml浓硫酸，缓缓倒入浓硫酸，并用玻璃棒不停搅拌。当自来水发热后，放置在一旁，等待其冷却。中间可以换自来水，加速冷却。（为什么用烧杯而不用棕色瓶？因为烧杯，耐热性能好，其材料不同于一般的玻璃。如果用玻璃瓶，很容易因温度过高而炸裂，导致人体受到伤害。打开浓硫酸时，需要用纸，盖在瓶盖上再打开。因为里面可能存在压力，若是直接打开，可能会因压力过大，造成液体冲出，伤害到眼睛） 8.SI转化剂：在SI转化剂瓶中，倒入200ml三乙醇胺（TEA）（1+1），在超声 器中溶解20—30分钟，用玻璃棒搅匀，直至无颗粒状物体，然后再加入250ml 纯净水，摇匀。倒出一部分存储在塑料眼药水瓶中。
流式常用试剂配制精选文档
流式常用试剂配制精选 文档 TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-
一、流式细胞术常用试剂 1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。 2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入 10％的 NaN3。 3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。 4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至，使用前新鲜配制。 5、消化液：％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或％胰蛋白酶与％ EDTA的混合液。 6、红细胞裂解液：NH4Cl ，KHCO3 ，EDTA?2Na ，溶于100ml水中，调PH 至，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。 7、流式细胞抗体稀释剂：L PBS液（PH ）＋1％BSA＋％Na2N3。 8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH ）＋1％FBS（或BSA）＋％NaN3＋％saponin（Sigma的效果不错）。 9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、％NaN3的PBS（PH ）。
10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加～ PI染液。 11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液） 原液A NaCl 160g MgSO4?7H2O 2g KCl 8g MgCl?6H2O 2g CaCl2 溶于1000ml双蒸水 原液B 1）Na2HPO4?12H2O KH2PO4 葡萄糖 溶于800ml双蒸水 2）％酚红溶液：取酚红置玻璃研钵中，逐滴加入 NaOH并研磨，直至完全溶解，约加入 NaOH 10ml。将溶解的酚红吸入100ml量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml。 将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml即为原液B。 应用液： 原液A 1份 原液B 1份 双蒸水 18份
流式细胞仪检测常用试剂配制
流式细胞仪检测常用试剂配制1．氯化铵溶血剂(Ammonium chloride lysing solution,) 贮存液(10×)： 80.2g NH 4 Cl (1.5M) 8.4g NaHCO 3 (100mM) 3.7g EDTA Na2(10mM) 蒸馏水900 ml 调节pH至7.4 (用1N HCl 或NaOH) 加蒸馏水至1升 4℃保存6个月以内 工作液(1×)：蒸馏水1:9稀释, 新鲜配制, 冷藏保存 注: 1) 贮存液不可小于10×, 否则会形成碳酸铵而失效 2) NaHCO 3可由10g KHCO 3 替代, EDTA Na2可由3.66g EDTA Na4(8.2mM)替代 3) 有些科研工作者习惯采用1/10浓度的EDTA, 即 1mM EDTA Na2或0.32mM EDTA Na4 2．PBS(phosphate-buffered saline, 磷酸缓冲液)配制 0.23 g NaH 2PO 4 (无水; 1.9 mM) 1.15 g Na 2HPO 4 (无水; 8.1 mM) 9.00 g NaCl (154 mM) 加蒸馏水至 900 ml 若需要, 用1M NaOH或1M HCl调节pH至7.2~7.4 过滤除菌, 4℃保存 注: 1) 不调pH值, pH通常约为7.3 2) 有些实验室将PBS配成 10×浓缩液, 用时稀释 3．1% 多聚甲醛(paraformaldehyde)固定液配制 0. 5g 多聚甲醛加至45ml蒸馏水中, 加4ml 10N的NaOH, 加温至65℃. 待粉末完全溶解(通常在30分钟以内)后, 加5ml 10× PBS, 调节pH值至7.4, 0.2mm滤膜过滤除去未溶颗粒. 注: 4℃可保存2周
常用试剂及标准溶液的配制
常用试剂的配制 一、常用试剂的配制： 1、100g/L钼酸铵溶液：称取100克钼酸铵于500毫升烧杯中加水溶液、移入1升，稀释至刻度，混匀。（如溶液浑浊，应过滤）。 2、200g/L硫氰酸钾溶液：称取200克硫氰酸钾于500毫升烧杯中，溶解于水，移入1升容量瓶中，稀释至1升体积。 3、50g/L氯化钡溶液：称取50克二氯化钡于500毫升烧杯中，溶解于水，移入1升容量瓶中，稀释至1升体积。 4、100g/L酒石酸溶液：称取100克酒石酸溶于水中，移入1升容量瓶中，稀释至刻度。 5、150g/L氢氧化钾溶液：称取150克氢氧化钾溶于水中，移入1升容量瓶中，稀释至刻度。 6、20g/L二安替比林甲烷（DAM）溶液：称取出20克二安替比林甲烷于烧杯中加水约200毫升，再加1+1盐酸333毫升，搅拌溶解，继续加水稀至1升，混匀，此溶液酸度为2mol/L。保存于棕色瓶中。 7、氨性缓冲液（PH=10）： 称取67.5克氯化铵溶于200毫升水中，加入570毫升浓氨水、稀释至1升。 8、醋酸——醋酸钠缓冲液（PH=5.2~5.9）。 O）溶解于水，称取无水乙酸钠79克（或称取150克结晶醋酸钠NaAC˙3H 2 加7.7毫升乙酸、稀至1升，用间隔为0.2的PH试纸检验其PH值。 9、硫酸——草酸——硫酸亚铁铵混合液： 称取30克硫酸亚铁铵于1升烧杯中，加150毫升水，缓缓加入166毫升1+1的硫酸，搅拌使其溶解。冷却后移入1升的容量瓶中，再称30克草酸于另一烧杯中，加热水溶解，冷却后移入上述容量瓶中，稀释至刻度、混匀。 10、邻菲啰啉—盐酸羟胺—醋酸—醋酸钠缓冲混合液。 称取100克无水醋酸钠（或150克结晶醋酸钠）和5克盐酸羟胺，分别溶于水，另称0.25克邻啡啰啉溶于15毫升醋酸中，将三溶液混合，用水稀释1升、混匀。 11、酒石酸钾钠—三乙醇胺混合液：
实验室常用试剂配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠 （pH5.2）□配制量100mL □配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加 入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，
常用试剂配制
常用案头试剂 1、二甲酚橙指示剂（0.1％水溶液）：称取0.1g二甲酚橙于200mL烧杯中，加100mL水溶 解完全，移入棕色滴瓶中。 2、乙酸－乙酸钠缓冲溶液（PH＝5.5）：将500g结晶乙酸钠CH3COONa-3H2O溶于适量水 中，加入50mL冰乙酸，溶解后，加水稀释至2500mL，混匀。 3、甲基红－次甲基蓝指示剂：称取0.12g甲基红和0.1g次甲基蓝，溶于100mL无水乙醇 中。 4、钙黄绿素指示剂：称取1g钙黄绿素、50g硫酸钾和50g活性碳，于碾钵中碾磨均匀。 5、氨水－氯化铵缓冲溶液（PH＝10）：称取168g氯化铵，溶于1430mL氨水中，用水稀至 2500mL，摇匀。 6、K－B混合指示剂：称取0.1g酸性铬兰K与0.2g萘酚绿B及2g干燥的硫酸钾，研细， 混匀，保存在磨口瓶中，防止吸水。 7、硫氰酸钾溶液（40％）：称取80g硫氰酸钾溶于150mL水中，加入3g碘化钾，1mL淀 粉溶液（0.5%），滴加碘液使溶液变蓝色，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定至蓝色刚消失为止，加不耗碘的蒸馏水至200mL，摇匀。 8、二氯化锡（100g/L）：称取10g二氯化锡，溶于100mL7mol/L盐酸中，加3g锡粒于溶液 中，放于棕色瓶中保存。 9、钼酸铵-偏钒酸铵-硫酸显色液：称取50g钼酸铵[（NH4）6Mo7O24-4H2O]和2.5g偏钒酸 铵（NH4VO3），溶于400mL除盐水中。取195mL浓硫酸，在不断搅拌下徐徐加入到250mL 除盐水中，并冷至室温。将上述二种溶液混合均匀，并用除盐水稀释至1000mL。 标准溶液 1、EDTA标准溶液（C（EDTA）=0.02mol／L）： 配制： 在托盘天平上称取80g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）于1000mL烧杯中，加800mL 蒸馏水加热溶解完全，冷却。转移至10L试剂瓶中，稀至刻度，摇匀，静置一周。 标定： 1-1、准确称取0.18g纯铅（99.994％）四份于300mL烧杯中，加入1＋3硝酸20mL，低温溶解完全。 1-2、加入10mL硫酸，继续加热至冒白烟2min，取下冷却。用水吹洗表皿及杯壁，加水至50mL，加热煮沸5min，冷却至室温，静置2小时。 1-3、用中速定量滤纸过滤，用硫酸（2＋98）洗涤烧杯两次，沉淀四次，再用蒸馏水洗涤烧杯一次，沉淀两次。 1-4、将滤纸展开，连同沉淀一起移入原烧杯中，加入30mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液。 用水吹洗杯壁，盖上表皿，加热微沸5min，搅拌使沉淀溶解，取下冷却。 1-5、加入蒸馏水至150mL，加0.1g抗坏血酸，0.1g氟化钠，10mL硫脲饱和溶液，搅拌均匀。加4滴二甲酚橙指示剂。用EDTA标准溶液滴定至溶液由紫红色变为亮黄色即为终点。记下消耗EDTA标准溶液毫升数。 计算： T Pb/EDTA(g/mL)= m v 2、氢氧化钠标准溶液（C（NaOH）=0.5mol/L；0.02mol／L）：
常用试剂配置
附录 附录一常用无机试剂的配制 名称浓度（mol/L）配制方法 盐酸 6 浓盐酸496ml，加水稀释至1000ml。 3 浓盐酸250ml，加水稀释至1000ml。 2 浓盐酸167ml，加水稀释至1000ml。 硝酸 6 浓硝酸375ml，加水稀释至1000ml。 2 浓硝酸127ml，加水稀释至1000ml。 硫酸 6 浓硫酸333ml，慢慢倒入500ml水中，并不断搅拌，最后加水 稀释至1000ml。 2 浓硫酸167ml，慢慢倒入500ml水中，并不断搅拌，最后加水 稀释至1000ml。 醋酸 6 浓醋酸353ml，加水稀释至1000ml。 2 浓醋酸118ml，加水稀释至1000ml。 氨水 6 浓氨水400ml，加水稀释至1000ml。 2 浓氨水133ml，加水稀释至1000ml。 氢氧化钠 6 氢氧化钠250g溶于水中，稀释至1000ml。 2 氢氧化钠83g溶于水中，稀释至1000ml。 硫氢酸铵0.5 将38g硫氢酸铵溶于水中，稀释至1000ml。 硝酸银0.1 溶解17g硝酸银于水中，稀释至1000ml。 高锰酸钾0.01 溶解1.6g高锰酸钾于水中，稀释至1000ml。 铁氰化钾0.1 溶解33g铁氰化钾于水中，稀释至1000ml。 亚铁氰化钾0.1 溶解42g亚铁氰化钾于水中，稀释至1000ml。 碘化钾0.5 溶解83g碘化钾于水中，稀释至1000ml。 亚硝酸钴钠溶解150g亚硝酸钴钠于水中，加水至1000ml。 醋酸铀酰锌溶解200g醋酸铀酰锌于水中，加水至1000ml。 氰化钾5% 溶解50g氰化钾于水中，稀释至1000ml。 亚硝酰铁氰化钠溶解10g亚硝酰铁氰化钠于水中，稀释至1000ml。 四苯硼酸钠3g四苯硼酸钠溶于1000ml水中。本液应临用新制。 甲基橙取甲基橙0.1g，加蒸馏水100ml。溶解后，滤过。 酚酞取酚酞1g，加95%乙醇100ml使溶解。 荧光黄取荧光黄0.1g，加95%乙醇100ml溶解后，滤过。 曙红取水溶性曙红0.1g，加水100ml，溶解后，滤过。 铬酸钾取铬酸钾5g，加水溶解，稀释至100ml。 硫酸铁铵取硫酸铁铵8g，加水溶解，稀释至100ml。 铬黑T 取铬黑T 0.1g，加氯化钠10g，研磨均匀。 淀粉取淀粉0.5g，加冷蒸馏水5ml，搅匀后，缓缓倾入100ml沸蒸 馏水中，随加随搅拌，煮沸，至稀薄的半透明液，放置，倾 取上层清夜应用，本液应临用新制。 碘化钾淀粉取碘化钾0.5g，加新制的淀粉指示液100ml，使溶解。本液配 制后24小时即不适用。本液应临用前新制。
化学实验室常用试剂与溶液配制
化学实验室常用试剂与溶液配制化学实验室是进行实验研究的重要场所，各种试剂与溶液的合理配制对于实验结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。本文将介绍化学实验室中常用的试剂和溶液，以及它们的配制方法。 一、酸碱溶液 1. 稀盐酸（HCl）溶液 稀盐酸溶液是化学实验室中最常用的酸性试剂之一，通常用于酸碱中和反应、金属的清洗和腐蚀性实验等。配制稀盐酸溶液时，需要将浓盐酸以适量的去离子水稀释至所需浓度，通常为1mol/L。配制时应注意慢慢加入盐酸到水中，并充分搅拌，避免溶液溅起并产生热量的释放。 2. 氢氧化钠（NaOH）溶液 氢氧化钠溶液是一种常用的碱性试剂，用于酸碱中和反应、沉淀的生成以及一些溶解度实验等。一般情况下，可根据实验需求配制不同浓度的氢氧化钠溶液。配制方法为将一定质量的氢氧化钠固体溶解于去离子水中，并充分搅拌直至完全溶解，在不断搅拌的过程中逐渐加入较少量的水，以避免溶液过于稀释。 二、指示剂溶液 1. 酚酞溶液
酚酞溶液是一种常用的酸碱指示剂，常用于酸碱滴定和pH测试等实验中。其配制方法为将一定质量的酚酞溶解于乙醇-水溶液中，通常浓度为0.1%左右。在配制过程中应注意搅拌均匀，避免溶液中存在未溶解的固体。 2. 甲基橙溶液 甲基橙是另一种常用的酸碱指示剂，常用于酸碱滴定和中和终点的判断等实验。配制方法为将一定质量的甲基橙溶解于适量的去离子水或乙醇中，最终浓度一般为0.05%。在配制过程中应充分溶解固体，并使用滤纸过滤以去除固体残留物。 三、溶液配制 1. 盐溶液 盐溶液常用于溶解度实验、沉淀反应等。配制时，根据实验要求选择所需的盐和溶剂。通常的方法是称取一定质量的盐溶解于适量的去离子水或其他溶剂中，充分搅拌均匀即可。需要注意的是，配制过程中应根据溶解度曲线确定最佳溶液浓度。 2. 铵盐溶液 铵盐溶液在化学实验中常用于制备气体、产生热力学效应等。铵盐溶液的配制方法为称取适量的铵盐固体溶解于去离子水中，并充分搅拌。由于铵盐的溶解会伴随着溶液的变冷，因此在配制过程中需要注意温度的变化。 四、其他试剂
常用试剂及标准溶液的配制解析
常用试剂及标准溶液的配制解析 常用试剂的配制一、常用试剂的配制： 1、100g/L钼酸铵溶液：称取100克钼酸铵于500毫升烧杯中加水溶 液、移入1升，稀释至刻度，混匀。〔如溶液浑浊，应过滤〕。 2、200g/L硫氰酸钾溶液：称取200克硫氰酸钾于500毫升烧杯中，溶解于水，移入1升容量瓶中，稀释至1升体积。 3、50g/L氯化钡溶液：称取50克二氯化钡于500毫升烧杯中，溶解于水，移入1升容量瓶中，稀释至1升体积。 4、100g/L酒石酸溶液：称取100克酒石酸溶于水中，移入1升容量瓶中，稀释至刻度。 5、150g/L氢氧化钾溶液：称取150克氢氧化钾溶于水中，移入1升容量瓶中，稀释至刻度。 6、20g/L二安替比林甲烷〔DAM〕溶液：称取出20克二安替比林甲烷于烧杯中加水约200毫升，再加1+1盐酸333毫升，搅拌溶解，继续加水稀至1升，混匀，此溶液酸度为2mol/L。保存于棕色瓶中。 7、氨性缓冲液〔PH=10〕： 称取67.5克氯化铵溶于200毫升水中，参加570毫升浓氨水、稀释至1升。 8、醋酸——醋酸钠缓冲液〔PH=5.2~5.9〕。 称取无水乙酸钠79克〔或称取150克结晶醋酸钠NaAC˙3H2O〕溶解于水，加7.7毫升乙酸、稀至1升，用间隔为0.2的PH试纸检验其PH值。 9、硫酸——草酸——硫酸亚铁铵混合液： 称取30克硫酸亚铁铵于1升烧杯中，加150毫升水，缓缓参加166毫升1+1的硫酸，搅拌使其溶解。冷却后移入1升的容量瓶中，再称30克草酸于另一烧杯中，加热水溶解，冷却后移入上述容量瓶中，稀释至刻度、混匀。 10、邻菲啰啉—盐酸羟胺—醋酸—醋酸钠缓冲混合液。 称取100克无水醋酸钠〔或150克结晶醋酸钠〕和5克盐酸羟胺，分别溶于水，另称0.25克邻啡啰啉溶于15毫升醋酸中，将三溶液混合，用水稀释1升、混匀。 11、酒石酸钾钠—三乙醇胺混合液：
20几种常用试剂配置方法
20几种常用试剂配置方法 一、常用试剂配置方法的介绍 试剂配置是实验室中常见的一项工作，准确的试剂配置可以保证实 验的准确性和可重复性。本文将介绍20几种常用的试剂配置方法，帮 助实验人员更好地进行实验。 二、体积分配法 体积分配法是常见的试剂配置方法之一，通常使用量较小、浓度较 高的试剂进行配置。该方法可通过使用体积移液器、移液枪等实验设备，根据需要配置所需体积的试剂溶液。 三、质量分配法 质量分配法适用于需要配置具有特定质量浓度的试剂溶液。该方法 通过称量固体试剂，并按照比例配制溶液浓度。 四、摩尔浓度计算法 摩尔浓度计算法是根据化学反应的摩尔比例来计算试剂的浓度。通 过计算反应物的摩尔量和体积，然后以摩尔量除以体积得到摩尔浓度。 五、比例混合法 比例混合法适用于需要按照特定比例混合两种试剂的情况。通常将 两种试剂按照比例称量，然后进行混合。 六、稀释法
稀释法是指将浓度较高的试剂与溶剂按照一定比例混合来降低试剂的浓度。通过稀释法可以得到不同浓度的试剂溶液。 七、溶液配制法 溶液配制法是根据溶液的浓度公式，按照一定的配比计算所需试剂的质量、体积等，并通过称量和混合来配制出所需的试剂溶液。 八、体积比配制法 体积比配制法是指按照特定的体积比例计算所需的试剂体积，并进行混合配制。该方法常用于需要配制特定体积比例的溶液。 九、对数浓度计算法 对数浓度计算法是一种根据试剂的对数浓度来计算所需试剂量的方法。通过计算对数浓度和体积，然后反推得到所需试剂量。 十、酸碱溶液的配制方法 酸碱溶液的配制方法通常是指根据酸碱中和反应的化学方程式，计算所需溶液的质量、体积，并进行配制。 十一、标准溶液配制方法 标准溶液配制方法是指通过称量准确的标准溶液，并按照一定比例配制出所需的标准溶液。 十二、离子稀释法
流式细胞术样品制备技术(完整)
流式细胞术样品制备技术 流式细胞术对细胞的剖析检测一定鉴于单细胞的基础上，这是流式细胞术的基本要求。 所以就一定把实体组织制备成单细胞悬液。在应用FCM 技术中，制备出合格的单分别细胞 是流式细胞术样本制备技术中重要的一环。它要求这类分别细胞方法既要使细胞成为单个细 胞，又能保持细胞的固有生物化学成分及生物学特征。 流式细胞术样品制备大概可分为下边五个步骤：①取材：取手术或活检组织一定拥有 代表性，如取手术肿瘤组织，一定取瘤细胞生长旺盛部位；组织等标本一定在取材后保持样 本的新鲜；一般在室温 1 个小时以内办理好样本或实时用固定剂或低温对组织进行保留；②对细胞的待测生物化学成分进行荧光染色；③依照厂家供给的软件程序对样本进行获取、 检测和储存；④ 再依照软件供给的程序对检测结果进行定量剖析；⑤ 检测剖析结果在生物、医学上的意义进行剖析和评论。 第 1 节样本单细胞悬液的制备方法 一新鲜实体组织样本的制备 FCM 对单细胞快速进行各样参数剖析一定鉴于单细胞基础上，依据各样组织成分的特 点，可选择不一样的分别细胞方法，以期达到单细胞产额高、损害少的目的。只管标本制备已 形成了标准化的程序，但实质操作中总会出现这样或那样的问题。在实体组织分别为单个细胞过 程中，解离的方法可能瞬时地或长久地影响细胞的性质、形态、构造、功能等。所以， 在对各样不一样组织进行分别选择方法时，应尽量减少对细胞的这类影响。当前常用的分别组织 细胞的方法有以下 3 种。 （一）酶消化法 1作用原理： 对实体组织分别的作用原理主要有3 方面：① 能够损坏组织间的胶原纤维、弹性纤维 等；② 能够水解组织间的粘多糖等物质；③能够水解组织细胞间的密切联络装置的蛋白质物质。 酶消化法是实体瘤、培育细胞分别为单细胞的主要方法之一。常用的酶类试剂有：蛋白酶类— —胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链酶蛋白酶和中性蛋白酶等，都能解离组织中的细胞。 胰蛋白酶能水解脂键和肽键；胶原酶能降解几种分子种类的胶原；溶菌酶能水解糖蛋白和肽 的糖苷键；弹性蛋白酶能消化连结组织的糖蛋白和弹性蛋白的纤维。不一样酶对细胞内和细胞间 不一样组分有特异作用，可依据分别组织种类来确立使用的酶类。 2注意事项： ①酶需要溶解于适合的溶液中，而这些溶液不致于造成酶效价降低；②要注意酶的使 用浓度和消化时间；③要注意酶活性的PH值。如胃蛋白酶在碱性环境中失掉活性，胰蛋 白酶在中性溶剂中活性不好等；④ 要随时注意影响酶活性的其余要素，如酶的生产批号等。 3方法学程序 （1）将适合于酶消化的组织置于离心管中； （2）将选好的酶溶液 1-2ml 加入盛有被消化组织的试管中； （3）一般消化 20-30 分钟（恒温 37℃或室温），消化时期要中断振荡或吹打； （4）停止消化，采集细胞悬液，以300 目尼龙网过滤，除掉细胞团块，以低速成离心除掉细胞碎片；
各种化学试剂标准溶液的配制
常用试剂的配制一、标准溶液的配制 1、硫酸（H 2SO 4 ）溶液的配制： 1000mL浓度c（1/2H 2SO 4 ）=0.1mol/L，即c（H 2 SO 4 ）=0.05mol/L的硫酸溶液的配制： 取3mL左右的浓硫酸缓缓注入1000mL水中，冷却，摇匀。 新配制的硫酸需要标定，其标定方法如下： 水中，加102min，冷 式中： m V 1 V 2 M 式中： V 1 V 2 M V：水样的体积， mL。 2、重铬酸钾（K 2Cr 2 O 7 ）溶液的配制 1000mL浓度c（1/6K 2Cr 2 O 7 ）=0.2500mol/L，即c（K 2 Cr 2 O 7 ）=0.0417 mol/L的重铬酸钾溶液的 配制： 称取12.258g于120 ℃下干燥2h的重铬酸钾溶于水中，并移入容量瓶中，定容至1000mL，摇匀，备用。 3、硫酸亚铁铵标准溶液的配制： ——仅供参考
1000mL 0.1 mol/L硫酸亚铁铵标准溶液的配制：称取39.5g硫酸亚铁铵溶于水中，边搅拌边缓慢加入20mL浓硫酸，冷却后移入1000 mL容量瓶中，加水稀释至刻度线，摇匀。临用前，需用重铬酸钾标准溶液进行标定。 标定方法如下： 准确吸取10.00 mL重铬酸钾标准溶液于锥形瓶中，加入100 mL水，缓慢加入30 mL浓硫酸，混匀。冷却后，加入3滴试亚铁灵指示剂，用硫酸亚铁铵溶液进行滴定，溶液的颜色由黄色经蓝绿色编为红褐色即为终点。硫酸亚铁铵浓度的计算公式如下： 式中： V 在测定 式中： COD c V V 1 V 1 称取100mL，2 称取 95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL；分别取50mL亚甲基蓝和100mL甲基红溶液混匀即可。 3、溴甲酚绿-甲基红指示剂 称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL；称取0.2g甲基红，溶于95% 乙醇，用95%乙醇稀释至100mL；分别取30mL溴甲酚绿，10mL甲基红溶液，混匀即可。 ——仅供参考
流动相配制及色谱方法注意事项
流动相配制及色谱方法注意事项 流动相是影响液相色谱的关键因素。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点： a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。 b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。 c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。 d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。 e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作
流式常用试剂配制
一、流式细胞术常用试剂 1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。 2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入0.2ml 10％的NaN3。 3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA?Na22H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。 4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4，使用前新鲜配制。 5、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA的混合液。 6、红细胞裂解液：NH4Cl 4.16g，KHCO3 0.5g，EDTA?2Na 0.02g，溶于100ml水中，调PH 至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。 7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（PH 7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。 8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH 7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma 的效果不错）。 9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、0.1％NaN3的PBS（PH 7.4）。 10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg 无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加0.3ml～0.5ml PI染液。 11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液） 原液A NaCl 160g MgSO47H2O 2g KCl 8g MgCl?6H2O 2g CaCl2 2.8g 溶于1000ml双蒸水 原液B 1）Na2HPO412H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖20.0g 溶于800ml双蒸水 2）0.4％酚红溶液：取酚红0.4g置玻璃研钵中，逐滴加入0.1N NaOH并研磨，直至完全溶
常用分析试剂配制
1.乙醇制氢氧化钾试液可取用乙醇制氢氧化钾滴定液（0.5mol/L）。 2.乙醇制氨试液取无水乙醇，加浓氨溶液使每100ml中含NH39～11g，即得。本液应置橡皮塞瓶中保存。 3.乙醇制硝酸银试液取硝酸银4g，加水10ml溶解后，加乙醇使成100ml，即得。乙醇制溴化汞试液取溴化汞2.5g，加乙醇50ml，微热使溶解，即得。本液应置玻璃塞瓶内，在暗处保存翳学敎育网整理。 一氯化碘试液取碘化钾0.14g与碘酸钾90mg，加水125ml使溶解，再加盐酸125ml，即得。本液应置玻璃瓶内，密闭，在凉处保存。 4.N－乙酰－L－酪氨酸乙酯试液取N－乙酰－L－酪氨酸乙酯24.0mg，加乙醇0.2ml使溶解，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.6ml，混合，pH值为7.0）2ml，加指示液（取等量的0.1%甲基红的乙醇溶液与0.05%亚甲蓝的乙醇溶液，混匀）1ml，用水稀释至10ml，即得。 5.乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液取对二甲氨基苯甲醛1g，加乙醇9.0ml与盐酸2.3ml使溶解，再加乙醇至100ml，即得。 6.二乙基二硫代氨基甲酸钠试液取二乙基二硫代氨基甲酸钠0.1g，加水100ml溶解后，滤过，即得。 7.二硝基苯试液取间二硝基苯2g，加乙醇使溶解成100ml，即得。 8.二硝基苯甲酸试液取3，5－二硝基苯甲酸1g，加乙醇使溶解成100ml，即得。 9.二硝基苯肼试液取2，4－二硝基苯肼1.5g，加硫酸溶液（1→2）20ml，溶解后，加水使成100ml，滤过，即得翳学敎育网整理。 10.二乙基二硫代氨基甲酸银试液取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g，加氯仿适量与三乙胺1.8ml，加氯仿至100ml，搅拌使溶解，放置过夜，用脱脂棉滤过，即得。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。 11.二苯胺试液取二苯胺1g，加硫酸100ml使溶解，即得。 12.二氨基萘试液取2，3－二氨基萘0.1g与盐酸羟胺0.5g，加0.1mol/L盐酸溶液100ml，必要时加热使溶解，放冷滤过，即得。本液应临用新配，避光保存。 13.稀二硝基苯肼试液取2，4－二硝基苯肼0.15g，加含硫酸0.15ml的无醛乙醇100ml使溶解，即得。 14.二氯化汞试液取二氯化汞6.5g，加水使溶解成100ml，即得。 15.二氯靛酚钠试液取2，6－二氯靛酚钠0.1g，加水100ml溶解后，滤过，即得。
实验室常用溶液配制管理规程
实验室常用溶液配制管理规程 一、普通试剂 1、无二氧化碳的水 将水注入烧瓶中,煮沸10min，立即用装有钠石灰管的胶塞塞紧,放置冷却。 2、中性乙醚—乙醇混合试剂 将乙醚—乙醇按2：1的比例混合均匀，加酚酞指示剂，用碱液中和至恰好变为淡红色为止。 3、三氯化碳—冰乙酸混合试剂 将三氯化碳（氯仿）与冰乙酸按2：3的比例混合均匀，置棕色试剂瓶中备用。 4、饱和碘化钾溶液 称取14g碘化钾，溶于10mL水中，保持溶液中有晶体，置于棕色瓶中，须现用现配。 5、0.1mol/L碘液 称取13g碘及35g碘化钾，溶于少量水中，完全溶解后稀释，定容至1000mL，摇匀。 6、0.05mol/L碘液 称取6.5g碘及17.5g碘化钾，溶于少量水中，完全溶解后稀释，定容至1000mL，摇匀。 7、pH≈5.8磷酸二氢钾—磷酸氢二钾缓冲溶液
称取13.6g磷酸二氢钾，溶于蒸馏水中，定容至 1000mL； 称取16.42g磷酸氢二钾，溶于蒸馏水中，定容至 1000mL； 吸取a液50mL、b液4.5mL，混合后用蒸馏水定容至100mL。 8、1.5%乙酸镁乙醇溶液 称取1.5g乙酸镁，溶于100mL95%的乙醇中。 9、铬酸洗液 称取25g重铬酸钾溶于50mL热水中,冷却后,边搅拌边缓慢加入浓硫酸,至总体积为500mL,冷却,置棕色瓶中备用。 10、氨—氯化铵缓冲溶液 10.1pH≈10氨—氯化铵缓冲溶液甲 称取54.0g氯化铵,溶于水,加入350mL氨水,稀释至1000mL。 10.2pH≈10氨—氯化铵缓冲溶液乙 称取26.7g氯化铵,溶于水,加入36mL氨水,稀释至1000mL。 11、氨水溶液 11.12.5%氨水溶液 量取103mL氨水,稀释至1000mL。 11.210%氨水溶液 量取400mL氨水,稀释至1000mL。