%9a抗冻蛋白的分离纯化及其部分性质研究
２００７年８月第４４卷第４期
四
川大学学报（自然科学版）Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
ＳｉｃｈｕａｌｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｍｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）Ａｕｇ．２００７Ｖｄ．４４Ｎｏ．４文章编号：
０４９０—６７５６（２０７）０４．０９１２．０６
沙冬青热稳定抗冻蛋白的分离纯化及其部分性质研究
王维香１，魏令波２，张虎３（１．西华大学生物工程学院，成都６１００３９；２．中科院遗传与发育生物学研究所，北京１０００８０；３．Ｄ印ａ咖１∞ｔｏｆＢｉｏｃｈ帆ｉｃａｌＥｎｇｉｎｅ舐ｎｇ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉ谚Ｃ０ｌｌｅｇｅＩ瑚ｄｏｎ，ＴＩ）ｒｉｒｌｇｔｏｎＰｌａｃｅ，Ｌ０ｎ≯俐ｍ蚕！萎霎≥；妻至；
奏薹ｌ鄙囊薹羹薹薹篓瀵蓄鋈瑟薹崤鐾葡篓薹薹重脓辜墓ｌｉ星ｉ霎笺毒薹妻耋娶；鬻彰妻霍鐾ｉ薹篓羹
霎；蠹量薹蓁妻蠢襄囊蠢翼瓦垒荆羹翔篓慧羹磊§”爹≤蓑瞿苇；萋未雾孽霉娶萋鋈塞擘妻赘羹篓茎虫枝叶，清
水漂洗，在超净工作台上用７５％的酒精浸泡３０
ｓ，
无菌水清洗一次，再用０．１５％升汞加适量吐温消
毒１０～１５ｍｉｎ，并轻微振荡，后用无菌水洗４～５
次．将消毒好的材料褪色部分切除，将幼叶切割成
１０×１０ｍｍ的小块，嫩枝切割成带１～２个节或腋
芽的茎段，接种于诱导培养基：Ｍｓ＋６一ＢＡ０．５ｍｇ／
Ｌ＋№蛆０．１ｍｇ几十３０ｇ几蔗糖＋１．０％琼脂．培
养条件均为光照１６
ｈ５８００肛ｍｏｌ?ｍ一２?ｓ一１左右，２５
±２℃．
２．２．２快繁增殖将已形成的试管苗切割接种在表１的增殖培养基中．
表１增殖培养基
Ｔａｂ．１
Ｃｕｌｔｕｒｅ
ｎ瑚ｉ哪ｆｏｒｂｕｄ
ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
以上均为ＭＳ培养基，添加１．０％琼脂，ｐＨ
５．８，未加标出的蔗糖浓度为３０
ｇ几．
２．２．
３生根培养和驯化移栽将生长获得的较健
壮无根苗转入表２的生根培养基，培养条件同增殖
培养．约
２０～２５
ｄ左右，根生长较健壮时，将瓶苗
移出培养室在室温下炼苗１～２ｄ，再将瓶盖打开使试管苗接受有菌锻炼ｌ～２ｄ，最后用镊子将苗取
出，洗掉根部培养基，移栽到营养土中，浇足定根水，注意
保湿．表２五种生根培养基
Ｔａｂ．２
ＦｉｖｅｋｉｎｄＳｏｆｎ的ｔｍｅｄｉｕｍ
编号
生根培养基
ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／１Ｌ＋３０ｇ／１Ｌ蔗糖＋１．Ｏ％琼脂１／２ＭＳ＋ＮＡＡ
Ｏ．５嘴／Ｌ＋２０ｇ几蔗糖＋１．０％琼脂
第４期王维香等：沙冬青热稳定抗冻蛋白的分离纯化及其部分性质研究９１５
图３ａｍＡＦＰ２８的等电聚焦电泳（银染）
Ｒｇ．３ＩＥＦｏｆＰｕｄｆｉｅｄａｍＡＦＰ２８
ＬａｎｅＭ：ｐＩＳｔａｎｄａｒｄｍａｒｋ日；
Ｌａｎｅｌ：ｐｕ—ｆｉｅｄＡＦＰ
等发生显色反应，是糖类物质专一染色剂，ａ—ｍＡＨ）２８不着色，因而ａｍＡＨ）２８不是糖蛋白．
图４ａｍＡｎ）２８希夫试剂反应的ＰＡＧＥ
Ｒｇ．４ｓｃＫｆｆ’ｓｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｇｌｙ∞ｐ∞ｔｅｉｌｌＳ
１：ｃｏｆｌｔｒｏｌ，５旭ＰＨＡＭ，２：５旭锄Ａ开）２８
３．４ａｍＡＦＰ２８的氨基酸组成
将沙冬青ａｍＡＦＰ２８用浓盐酸水解后在日立８３５．５０氨基酸自动分析仪上分析氨基酸组成，分析结果列于表２．从表可以看出，ａｍＡｍ８由１７种氨基酸组成，分子中ＡＳｐ和Ｇｌｕ等酸性氨基酸残基含量为１８．０６％，Ａｒｇ和Ｌｙｓ等碱性氨基酸残基含量为１２．６７％，酸性氨基酸残基所占比例较大．ａｍＡＦｆ２８分子中心ｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ和Ｔｈｒ等亲水性氨基酸残基含量为３５．３１％，而Ｖａｌ、Ｌｅｕ和１１ｅ等疏水性氨基酸残基含量为１２．０１％，因此ａｍＡＦｆ）２８蛋白亲水性强．另外分子中小分子量氨基酸残基～ａ（９．３１％）和Ｇｌｙ（１０．０１％）含量较多．ａｍＡＦＰ２８分子芳香族氨基酸残基（Ｐｈｅ，Ｔ”）占６．３％，过甲酸氧化后测定含有微量Ｃｙｓ残基．测定过程中Ｔｒｙ被强酸破坏，没有得到结果．
表２ａｒＩ删８的氨基酸组成（ｎ的１％）
Ｔａｂ．２Ａｍｉｎ０－ａｄｄ吲唧｜０ｓｉｔｉｏｎ【ｎｄ％）ｏｆａＩｌ删８
３．５ａｍＡＦＰ２８的二级结构分析
将纯化的ａｍＡＨ】２８用ｄｄＨ２０配成浓度Ｏ．０５×１０－３ｇ／ｍＬ，在５℃用圆二色性仪测定１９０
ｍ～２５０姗的ＣＤ谱，结果如图５所示．纯化的ａ—ｍＡＦＰ２８在２０８ｍ处显示为一较大的负峰，而在２２２ｎｍ处有一明显的肩峰使峰形变宽，而不是表现高口一螺旋蛋白特有的双负峰，正峰出现在１９４ｍ处．由于随机卷曲在１９４～１９８ｎｍ，口一螺旋在２０８～２２２ｍ，口．折叠在２１５～２１８ｍ处有特征峰，ａｍＡＨ）２８在２０８ｍ和２２２ｍ出现负信号峰表明它是含有ａ一螺旋和卢一折叠的混合二级结构单元．用ＣＣＡ程序计算ａｍＡＦｆ）２８蛋白ＣＤ谱的解析数据，输出结果见图６，计算各组二级结构的百分比组成为：口一螺旋１７．２％，平行ｐ折叠和ｐ转角４．１％，反平行ｐ折叠３９．７％，无规卷曲和弘转角３４．４％，ＳＳ和芳香氨基酸４．６％．这说明ａ一￡
窨
？
麓
鼍
２Ｐ
？
§
二
￡
波长（ｎｍ）
图５锄删８在５℃时的正常态和
还原态构象的ＣＤ谱
Ｆｉｇ．５ａｒｃｕｌａｒｄｉｃｈｍｉｓｍｓｐｅｃｎ＿：ａｏｆａｌ】鹕用Ｐ２８ａｔ５℃ｉｎｎａｔｉｖｅａｎｄｒｅｄｕｏｅｄ五）ｎｎｓ．！受）ｌｉｄ
Ｌｉｎｅ：ｎａｔｉｖｅａｒＩ删８：ｄｏｔｔｅｄＬｉｎｅ：ｒｅｄｕｏｅｄ
ａｍＡＦＰ２８
９１６四川大学学报（自然科学版）第４４卷
ｍＡＦＰ２８属于口一螺旋和反平行ｐ折叠的含量都较多的蛋白质．
￡
ｏ
昙
●
屯
鼍
∞
岂
苦
里
２
１９５２００２０５２ｌＯ２１５２２０２２５２３０２３５２４０
波长（ｎｍ）
目６５℃时龇删８ＣＤ谱的ＧＣＡ分析结果
Ｆｉｇ．６Ｃｂｎｖｅ】ｃｏＤｎＳｔｒａｉｎｔ锄ａｌ姆ｓｏｆＣＤｄａｔａｏｎ
ａｍＡＦＰ２８ａｔ５℃
口－ｈｅｌｂ【（△），ｐａｒａｕｅｌ卢－ｐｌｅａｔｅｄｓｈ∞ｔａｎｄ卢一ｔ啪（◇），ａｎｔｉｐ啪ｌ—ｌｅｌ争ｐｌｅａｔｅｄｓＩｌｅｅｔ（口），ｒａｎｄｏｍ００ｉｌ锄ｄｙ—ｔ岫（×），ＳＳａｒｌｄ棚：ｏｍａｔｉｃ锄岫ａｃｉｄ（ｏ）
二硫键是蛋白质分子中重要的侧链基团，在维系蛋白质分子中的各级结构，以及在发挥生物学活性中都起着重要作用．ａｍＡＦＰ２８分子中含有半胱氨酸，会形成二硫键．当加入过量Ｄ］陌后，ａ—ｍＡＦ睨８的二硫键被打开还原成巯基，用碘乙酸保护巯基，使之不再重新氧化成新的二硫键，从ＣＤ谱看，２０８ｎｍ负峰极值稍微下移，图谱没有发生明显变化（图５）．这表明二硫键的拆合对ａｍＡＦｆ，２８蛋白的二级结构不会造成太大的影响．
４结语
通过热处理以及随后的弱阴离子交换层析（ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏＳｅＡ５２）、凝胶过滤层析（Ｓ印ｈａｃｒｙｌＳ３００）、疏水高效液相层析（Ｐｏｒ０Ｓ２０卸Ｐ２）和强阴离子高效液相交换层析（Ｓｏｕｒｃｅｌ５Ｑ），从冬季沙冬青叶中分离到一种新的抗冻蛋白ａｍＡＨ）２８．ａ—ｍＡＦＰ２８能修饰冰晶正常生长形态．ａｍＡＦＰ２８的表观分子量约为２８ｋＤａ，不含碳水化合物，富含亲水性氨基酸，二硫键对维持抗冻活性不重要．ａｍＡＦＰ２８与已经分离纯化的其它植物抗冻蛋白相比，从分子量、氨基酸组成、糖基含量、分子中二硫键在抗冻蛋白活性中的作用，以及溶液冰晶正常生长形态来看，与冬黑麦抗冻多肽非常相似．研究表明，冬黑麦非质体抗冻多肽与三种植物ＰＲ蛋白，即ＰＲ一２、ＰＲ－３和ＰＲ．５高度同源，其中有一种抗冻肽还同时具有抗病原菌和抗冻双重功能［６］．
此外研究发现，其它分离的植物抗冻蛋白也与植物的一些病原防御蛋白有密切联系，如胡萝卜抗冻糖蛋白Ｄｃ：；６与ＰＧＩＰ［７｜、千年不烂心抗冻蛋白Ｓ１ＨＰ．６４与ｗＲＫＹ（调控ＰＲ蛋白表达的转录因子）都高度同源［８１．ａｍＡ聊８可能也具有其它植物病原防御蛋白的抗病特性．但是一些研究结果也显示，从低温敏感植物烟草和非冷驯化冬黑麦中纯化的ＰＲ．３和ＰＲ一２不具有抗冻活性【９Ｊ，胡萝卜抗冻蛋白也没有ＰＧＩＰ的催化活性［７１．因而植物抗冻蛋白可能是植物病原防御蛋白在低温下的同工蛋白，或是植物病原防御蛋白翻译后的修饰产物．从ＣＤ谱结果来看，ａｍＡＨ）２８二级结构含有口一螺旋１７．２％，平行ｐ折叠和ｐ转角４．１％，反平行ｐ折叠３９．７％，无规卷曲和弘转角３４．４％，一ＳＳ和芳香氨基酸４．６％．在抗冻蛋白中高含量口一螺旋和ｐ折叠结构是普遍的．鱼类抗冻蛋白的二级结构包括从无规线团的伸展型（脚）、双亲口一螺旋（ＡＦＰＩ和ＡＦＰⅣ）、口一折叠（√６胛Ⅲ）到口一螺旋和卢．
折叠的混合结构（ＡＦＰⅡ）．而几种昆虫抗冻蛋白的二级结构都是特殊的平行ｐ螺旋，左手ｐ螺旋和右手ｐ螺旋．目前，植物抗冻蛋白的高级结构了解仍然较少，但现有的研究结果显示，植物抗冻蛋白的二级结构似乎与昆虫抗冻蛋白的二级结构相似，也有卢一螺旋［１０，１１１；分离的另一种热稳定抗冻蛋白ａｍＡ劂０的二级结构也含有较多ａ一螺旋
（１１％）、反平行卢一折叠（３４％）以及大量的随机无规卷曲（５５％），但不含有转角和芳香氨基酸残基【”］．沙冬青ａｍＡＦＰ２８蛋白是口＿螺旋和ｐ折叠组成的混合结构，其中以ｐ折叠为主．鱼√帅Ⅱ也是口一螺旋和肛折叠的混合结构，因此ａｍＡＦＰ２８与趾甲Ⅱ在二级结构上有一定相似性．但鱼趾、ＰⅡ含丰富ＣｙＳ，二硫键是抗冻活性所必须的，这与ａ．删气ＦＰ２８不同．从欧洲油菜中分离的低温诱导蛋白ＢＮ２８也是一种沸点可溶蛋白，它的ＣＤ谱显示其二级结构由１３．５％ａ一螺旋、２２．５％转角和６４％的无规卷曲组成，但不含卢。折叠［”］．活性检测结果表明ＢＮ眨８不具有抗冻活性．许多热稳定低温诱导蛋白质和脱水素即ＬＥＡ蛋白的结构内部缺少折叠区，受热难于聚集，同时含有丰富的双亲口一螺旋，在稳定膜结构和功能方面发挥重要作用［１４］．作为一种沸点可溶的抗冻蛋白质，ａｍＡｍ８在二级结构上既含有鱼类和其它抗冻蛋白具有的口一折叠，又含有一些低温诱导蛋白质或脱水素具有的双亲口一螺旋，这种结构特性使ａｍＡＦＰ２８既具有抗冻功
加∞∞∞｛毒胁ｍｏ
ｍ∞鲫
第４期王维香等：沙冬青热稳定抗冻蛋白的分离纯化及其部分性质研究９１７
能又具有耐高温的特性，其Ｊ９一折叠有利于ａ．ｍＡＦＰ２８形成与冰相互作用的立体结构模式［”】，而双亲口一螺旋可以一方面与冰晶结合，阻止其他水分子与冰晶结合，从而抑制冰晶生长，另一方面与其它蛋白质或膜结合，稳定膜功能防止膜低温损伤．对沙冬青沸点可溶抗冻蛋白结构作进一步研究将会全面揭示其抗冻机制．
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ｔｉ访ｌ茎茸｜茎鎏蓦呈ｉ登ｉ；蚕蠹蓍｜；藿呈霎｜萱耋ｉ雩ｊ；黾ｉ瞿主霎嚣主！
薰霎瞳薹ｊ
荔翼薹，鎏并配成一定的浓度，然后加入到定量的灭菌后冷却至５０℃的ＰＤＡ培养基中，充分摇匀，并以等体积的对应溶剂加人到ＰＤＡ培养基中作对照，然后倒人直径９０ｍｍ培养皿内制成平板，备
用．待培养基凝固以后，在每个培养基中央用接菌
针接入已制备好的供试病原菌菌饼（直径为６ｍｍ），菌丝面向下，每处理设３个重复，置２８℃下恒温箱培养４ｄ后，用十字交叉法测量茵落的两个直径，取其平均值作为代表菌落的直径，用下式求出抑菌率：
菌落净生长直径（ｍｍ）＝测量直径一６ｍｍ
抑菌率（％）＝（对照菌落直径一处理菌落直径）尉照菌落直径×１００
２．２．３化合物结构鉴定利用Ｎ豫和ＭＳ等波谱方法和参考文献对照法，对化合物进行结构鉴
沙冬青热稳定抗冻蛋白的分离纯化及其部分性质研究
作者：王维香， 魏令波， 张虎， WANG Wei-xiang， WEI Ling-bo， ZHANG Hu
作者单位：王维香,WANG Wei-xiang(西华大学生物工程学院,成都,610039)， 魏令波,WEI Ling-bo(中科院遗传与发育生物学研究所,北京,100080)， 张虎,ZHANG Hu(Department of
Biochemical Engineering,University College London,Torington Place,London WC1E
7JE,UK)
刊名：
四川大学学报（自然科学版）
英文刊名：JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
年，卷(期)：2007，44(4)
被引用次数：2次
参考文献(15条)
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[目的]从Genbank数据库中选择与新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)亲缘关系最近的同属蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)抗冻蛋白(AFP)基因AY590122、AY843521、AY843522的mRNA序列,设计扩增新疆沙冬青AFP基因保守区引物.[方法]以新疆沙冬青为研究材料,提取其总RNA,利用RT-PCR技术克隆出新疆沙冬青AFP基因的保守区域.[结果]序列分析表明,新疆沙冬青与蒙古沙冬青的保守区域同源性达98.15%.[结论]得到新疆沙冬青的抗冻
2.期刊论文尉姗姗.尹林克.牟书勇.鲁春芳.赵峰侠.YU Shan-Shan.YIN Lin-Ke.MU Shu-Yong.LU Chun-Fang.ZHAO
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抗冻蛋白被发现于低温环境下生存的生物体中,它能够吸附在冰晶表面并改变冰晶的生长形态,对于增加植物的抗低温胁迫能力有重要作用.用纤维素DE-52离子柱层析提取分离出了冬季新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)叶片中的抗冻蛋白(AFPs).差示扫描量热法(DSC)测定结果表明,当蛋白浓度为20 mg/ml时,抗冻蛋白的热滞活性(THA)为0.46℃.经SDS-PAGE电泳分析,此抗冻蛋白的分子量为119.24 kDa.
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抗冻蛋白(AFPs,Antifreeze Proteins)是一类能吸附到冰晶表面并抑制其它水分子与冰晶结合的蛋白质.吸附到冰晶上的抗冻蛋白具有热滞活性和修饰冰晶形态功能,有利于降低组织细胞的冰冻损伤.测定热滞活性和观察冰晶形态是鉴定抗冻蛋白的两个重要指标.利用改进的显微镜冰晶形态观察法,从豆科植物沙冬青(A.Mongolicus)冬季叶中分离纯化到两个抗冻蛋白:amAFP28和amAFP37,并对amAFP28的一些理化性质进行分析,为通过基因转化手段提高农作物抗冻性奠定基础.用缓冲液Ⅰ(50mmol/L Tris-HCl,pH8.0,10mmol/L EDTA,20mmol/L Vc)提取的冬季沙冬青叶粗提液,经一系列层析技术包括DEAE-cellulose A52弱阴离子交换层析、Superdex 75 prep grade分子筛层析和POROS20HP2灌注疏水层析,分离到具有抗冻活性的复合物:SDS-PAGE为
34.7kDa和37.1kDa两条蛋白带.对SDS-PAGE电泳条带进行回收,活性检测表明,37.1kDa蛋白带具有修饰冰晶形态功能,其热滞活性在5mg/mL蛋白浓度时为0.24℃(渗透压法),此为amAFP37.用缓冲液Ⅱ(25mmol/L Tris-HCl,pH7.4,0.1mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,0.1mol/L KCl)提取的冬季沙冬青叶粗提液,在100℃加热15分钟后,经DEAE-cellulose A52弱阴离子交换层析、Sephacryl S300 HR分子筛层析、POROS20HP2灌注疏水层析和Source 15Q强阴离子交换层析,纯化得到热稳定抗冻蛋白amAFP28.amAFP28经SDS-PAGE测定分子量约为28kDa,其热滞活性在蛋白浓度为10mg/mL时为0.15℃(渗透压法).amAFP28的pI为6.68,不含碳水化合物,其最大的紫外吸收值是278nm,最小的紫外吸收值是250nm.二硫键不是amAFP28抗冻活性所必需的.amAFP28富含亲水性氨基酸残基Asp,Thr,Glu以及小分子量氨基酸残基Ser,Ala和Val.圆二色谱(CD)显示amAFP28的二级结构组成为:α-螺旋17.2%,平行β-折叠和β-转角4.1%,反平行β-折叠39.7%,无规卷曲和γ-转角34.4%,-S-S-和芳香氨基酸4.6%.二硫键拆合对amAFP28的二级结构没有影响.amAFP28分子的N-端焦谷氨酰化封闭,测定的N-端氨基酸部分序列是GKSINHLPGQND.冬季沙冬青叶非质体中有抗冻蛋白.
4.期刊论文费云标.魏令波.高素琴.陆漫春.王保怀.李芝芬.张有民.舒念红.江勇.王维香沙冬青抗冻蛋白的分离
、纯化及其理化特性分析-科学通报2000,45(20)
用DEAE-纤维素DE-52,丙烯葡聚糖S300柱层析,热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白(AFP),获得了电泳纯的分子量约为50ku的AFP,经Shiff试剂检验为含糖的AFGP.显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法(DSC)测定了该蛋白热滞活性(THA),用DSC测定THA在
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2007,25(5)
提取并纯化了新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)叶片总蛋白,得到了适合新疆沙冬青叶片总蛋白提取的最佳缓冲体系;用DEAE52-C分离了各蛋白质组分,并用SDS-PAG测定了纯度和分子量(14～90 kD之间);氨基酸组成分析显示了新疆沙冬青属内种遗传的一致性.对抗冻活性分析讨论证实了与蒙古沙冬青同属的新疆沙冬青中也含有抗冻蛋白(AFPs).
6.会议论文陈滔滔.周晓蕾.王保怀.李芝芬.费去标.魏令波.高素琴沙冬青抗冻蛋白热滞活性的DSC研究2000
7.学位论文詹彬新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)抗冻蛋白基因的克隆2009
新疆沙冬青源于第三纪，为亚洲中部荒漠地区唯一的常绿阔叶灌木，已被列为国家二级濒危保护植物。四季常绿，非常抗寒和耐旱，能耐-30℃以下的低温，是我国特种植物化学成分(如抗冻蛋白AFP)研究、提取和转接的珍贵材料。
实验利用反转录PCR(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)策略，克隆获得新疆沙冬青AFP基因开放阅读框(ORF)全长序列。所得结论如下：
1.以新疆沙冬青幼苗为研究材料，利用RT-PCR为基础克隆手段，结合RACE策略得到新疆沙冬青AFP基因的ORF。此序列全长为609bp，编码203个氨基酸。同源性分析结果表明，该ORF与其同属的蒙古沙冬青AFP基因序列同源性为65.7％，其编码的蛋白质氨基酸序列同源性为76.68％。
2.利用新疆沙冬青幼苗的基因组DNA，设计扩增AFP基因的ORF引物，所获片段的测序结果与利用其cDNA为模板获得的ORF序列完全一致，说明新疆沙冬青AFP基因无内含子，其基因是连续的。同时也说明该基因在植物进化过程中高度保守，可以作为研究植物进化历程的一个分子标尺。
3.利用相关分子生物学软件对新疆沙冬青AFP的二级结构进行分析，结果表明AFP中存在许多无规则卷曲，占72.9％，同时β-折叠结构的比例(19.21％)明显高于α-螺旋(7.88％)。说明这些无规则卷曲与β-折叠可能与该蛋白的抗冻性能有关。
8.期刊论文周晓蕾.陈滔滔.王保怀.李芝芬.费云标.魏令波.高素琴沙冬青抗冻蛋白热滞活性的DSC研究-物理化
学学报2001,17(1)
Differential scanning calorimetry （DSC） was used to measure thethermal hysteresis activity(THA) of plant antifreeze
proteins(AFPs). The results reveal that DSC is a good method to screen and study AFPs. In the sixteen components extracted from Ammopipanthus mongolicus leaves, one(P3S1) was found to have apparent thermal hysteresis activity by DSC. As the amount of ice nuclei in the sample decreased, the THA of P3S1 increased from 0.01 ℃ to 0.65 ℃ . It is notable that the two-peak thermal hysteresis
effect was observed. Two endothermic peaks appeared in the melting process of P3S1, while the freezing peak also consisted of two peaks. The peaks appeared antecedently showed larger thermal effect. This phenomenon shows P3S1 has two different kinds of
interaction with water and ice crystal. It is probably an important property of a class of AFPs.
9.会议论文费云标.舒念红强抗冻植物的一种抗冻作用机制--沙冬青抗冻蛋白的分离纯化与检测1997
10.期刊论文魏令波.江勇.舒念红.高素琴.费云标沙冬青叶片热稳定抗冻蛋白特性分析-植物学报1999,41(8)
引证文献(2条)
1.翟彩宁.贺静.毛新焕.张义正.曾成鸣金属离子对牛胰岛素淀粉样纤维形成的作用[期刊论文]-四川大学学报(自然科学版) 2008(6)
2.张峰.蔡宇杰.廖祥儒.刘尚.王臻.张大兵一种具有热滞活性的女贞叶质外体过氧化物酶[期刊论文]-植物生理学通讯 2008(1)
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