超滤法提取纳豆激酶的技术参数优化解析

食品科技

2010年第35卷第5

期FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY提取物与应用

超滤法提取纳豆激酶的技术

参数优化

陈景鑫，刘妍妍，沙维，张丽萍*

(黑龙江八一农垦大学食品学院，大庆163319)

摘要：目的：研究超滤系统中超滤压力、超滤温度、料液pH值主要参数对膜通量的影响，确定超滤分离纳豆激酶的最佳工艺条件。方法：以实验室制备的纳豆激酶粗酶液为原料，经超滤分离，层析分离确定纳豆激酶的比活力、纯化倍数及回收率。结果：最佳超滤压力为0.25MPa、料液温度为37℃、料液pH为7；可得到比活力为9610.46IU/mg、纯化倍数为2.36、回收率为92.3%的酶液，酶液经HPD-400树脂洗脱得到单一蛋白峰，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，表现为单一蛋白条带，相对分子质量约为28000u。结论：采用超滤技术对纳豆激酶进行分离提纯，可提高酶活性及回收率，技术参数可行。

关键词：纳豆激酶；超滤；比活力；纯化倍数；回收率

中图分类号：TQ925文献标志码：A文章编号：1005-9989(2010)05-0225-05 Studyontechnologyforextractingnattokinasebyultrafiltration

CHENJing-xin,LIUYan-yan,SHAWei,ZHANGLi-ping* (TheFoodScienceofHeilongjiangBayiAgriculturalUniversitiy,Daqing163319) Abstract:Objective：Studyedtheimpactofmembranefluxonutrafiltrationsystempressure,ultrafiltrationtemperat ureandpH,determinedtheoptimumconditionsofnattokinaseseparation.Methods:therawma terialswaspreparedfromcrudenattokinaseliquid,byultrafiltrationandchromatographydeter minedthespecificactivity,purificationmultiplesandrecoveryrate.Results:Theoptimizedco nditionswereasfollowing:reactionpressure0.25MPa,liquidtemperature37℃,liquidpH7,th especificactivity9610.46IU/mg,thepurificationmultiple2.36andtherecoveryrate92.3%,the purifiedenzymewasdemonstratedbySDS-

PAGEtobeahomogeneousprotein,molecularmasswasabout28000u.Conclusion:Itisfeasibl etoseparateandpurifynattokinasebyusingultrafiltrationtechnology,anditcanelevateactivity andtherecoveryrate.

Keywords:nattokinase;ultrafiltration;enzymeactivity;purificationmultiple;recovery

纳豆激酶(NK)是纳豆在发酵过程中由纳豆菌产增的具有潜在药用价值的物质。

生的一种丝氨酸蛋白酶，可水解纤维蛋白成小肽近年来国内外纳豆激酶分离纯化的相关研究和氨基酸，和蚯蚓纤溶酶、蛇毒纤溶酶一样可直很多，主要有层析法、磁性微球分离法、集成化接溶解血栓[1]。研究表明，纳豆激酶是一种溶栓效分离技术，包括双水相亲和分配技术、扩张床吸果十分显著，并且能够预防和抑制血栓产生与扩附技术、混合模式扩张床吸附技术等。以上分离收稿日期：2009-08-31*通讯作者

基金项目：黑龙江省农垦总局课题(HNKXIV-06-05a)。

作者简介：陈景鑫(1982—)，女，硕士研究生，研究方向为食品科学。·225·

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方法虽然工艺简单，实验条件容易控制，在纳豆激酶分离纯化中得到了广泛应用，但至今都停留在实验室研究阶段，而且总产率较低，多为间歇操作，生产效率难以提高，从而造成纳豆激酶分离纯化的成本很高，难以实现工业化生产[2]。超滤是以压差为驱动力的膜分离技术。按照截留分子量的大小，可分离300～1000ku的大分子物质。比膜孔小的物质和溶剂一起透过膜，而较大的物质则被截留[3]。李立民等[4]通过加入CaCl2和Na2CO3对发酵液进行盐析处理、离心过滤、超滤浓缩、离子交换层析等操作之后，得到了较纯的酶，活力为

3528IU/mg，酶回收率为61.74%。但是，结果表明，该方法中的盐析处理降低了酶的活力；另一方面，其利用的超滤只是进行了浓缩，并未达到分离的目的。由于超滤技术在操作过程中无相变化，因此不会改变产品的性能和活性，是一个简单的过程。超滤设备和工艺较其他分离方法简单，耗能低，滤膜可以反复多次使用；处理量大，处理时间短，样品残留小，产品收率高[3]。因此，本研究将液体深层发酵后的纳豆激酶经过滤、离心处理后，拟直接采用超滤技术对其进行提取，达到分离纯化的目的。但是超滤膜在使用过程中的一个主要问题是由于浓差极化、膜孔堵塞及凝胶层出现等因素的影响，导致膜通量随运行时间的延长而降低，因此本实验重点研究超滤系统的操作压力、料液温度、料液pH值对膜通量的影响，使超滤系统能高效稳定运行，提高产品得率。11.1

材料与方法材料

发酵第2天产生的发酵液以4000r/min、20min离心分离，得到上清液，再将得到的上清液进行抽滤，可得到滤液。抽滤的目的是防止杂质堵塞滤膜。1.3.2

纳豆激酶的膜分离方法

将抽滤后得到的

纳豆激酶液通过截留分子量为30000u的超滤膜，再将其透过液通过截留分子量为10000u的超滤膜，收集中间分子量段的纳豆激酶滤液。分别采用不同的操作压力、不同料液温度、不同料液pH进行超滤，考察其对超滤膜膜通量的影响并进行方差分析，以确定最佳技术参数。1.3.3

膜通量的测定

超滤系统运行稳定后，按

试验设计控制压力、料液温度、料液pH等操作参数,，取样，记录一定时间内的透过液，重复3次求平均值,，按下式计算膜通量。

J=V/T×A

式中：J为膜通量，L/m2·h；

V为取样体积，L；T为取样时间，h；

1.3.4

A为有效膜面积。

纳豆激酶层析分离为了得到单一分子量

的纳豆激酶，将超滤分离后的酶液进行进一步的层析分离，分别考察纳豆激酶在SephadexG-75、SephadexG-50和HPD-400中的分离效果，通过活性测定及分离效果分析，最终确定采用HPD-400做为层析分离的填料。

其操作步骤如下：

(1)树脂的预处理：称取一定量的树脂，加质量分数为2%的NaOH浸泡过夜，用蒸馏水洗至中性，再加体积分数为95%乙醇浸泡2h，然后用蒸馏水洗至乙醇完全除尽，置于50℃恒温烘箱中烘干备用。

(2)装柱：用玻璃棒搅拌均匀后引流灌入内径1.6cm的柱子中，让树脂自然沉积，打开出水口，待树脂自然沉积完毕后，关闭出水口。灌好后的柱子应表面平整，柱体无气泡，以免影响分离。(3)平衡：灌好的柱子胶面上用洗脱液加满直至进样口，并确保没有气泡进入，然后进行2～5柱床体积平衡。

(4)上样：等洗脱液液面距离胶面2mm时将样液延柱壁缓慢加入，防止加样时将胶面冲起影响分离，上样量1mL。

(5)洗脱：上样后待样液进入柱床，并与柱床基本平齐时加入40%体积浓度的乙醇溶液进行洗脱。

纳豆激酶发酵液：由实验室纳豆菌发酵制得；凝血酶：中国药品生物制品检定所；纤维蛋白原：北京奥博星生物技术责任有限公司；尿激酶：中国药品生物制

品检定所；琼脂糖：台湾MDbio公司；考马斯亮蓝：sigma公司；其他试剂：分析纯。1.2

仪器

切向超滤装置：PN33349，PALL；超滤泵：7518-00，MASTERFLEX；层析柱：Ф1.6×50cm，上海精科实业有限公司；紫外可见分光光度计-T6新世纪：北京普析通用仪器有限责任公司；台式离心机：北京京立离心机有限公司；SHB-3循环水多用真空泵：郑州杜甫仪器厂。1.3方法

1.3.1纳豆激酶粗酶液的制备将经过深层液体

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(6)收集：以0.8mL/min的速度进行洗脱，分部响的差异显著性及各因素水平之间的差异显著性。收集，每管收集2mL并对其进行活性及纳豆激酶

含量测定。2结果与分析

1.3.5纳豆激酶活性的测定纳豆激酶纤溶活力

2.1不同操作压力下纳豆激酶料液的膜通量的测定采用纤维蛋白平板法，即依照Astrup[6]等报准确称取处理后的酶液，将超滤压力分别设道的纤维蛋白平板法，测定方法如下：将琼脂糖、定在0.1、0.15、0.2、0.25、0.3MPa，试验设置5个血纤维蛋白原(Fibrinogen)溶液和凝血酶溶液按一定水平(n=5)，超滤温度根据一般蛋白质的超滤数据比例混合，制成人工血栓平板。取纳豆激酶样品设为37℃，超滤过程中料液pH7，测定膜通量及点样于平板上，37℃恒温孵育，测溶解圈直径，纳豆激酶含量，实验结果见表1。根据所得数据绘并以尿激酶作标准品对照绘制标准曲线，以测得制出超滤压力与膜通量及纳豆激酶含量的关系曲纤维蛋白溶解圈面积来表示纳豆激酶的活性。线图，见图1。

1.3.6纳豆激酶含量的测定纳豆激酶含量的测60

2.5定采用考马斯亮蓝法(Braford)[7-8]，方法如下：取一50

定量的纳豆激酶样品，用0.15moL/LNaCl配成1002.0

)

40)L

2·h

mL样品溶液。取4支试管，其中一支加入0.15moL/mm

/

/

L1.5g

(m

/(

LNaCl溶液1mL(空白对照)，另3支中加入样品1量30/

通量

mL，然后每支试管加入5mL考马斯亮蓝试剂，立膜20含

膜通量1.0KN

即混匀，1h内以1号管为空白对照，在波长595nm10NH含量0.5处比色，并通过标准曲线确定纳豆激酶含量。0

1.3.7数据统计分析方法通过超滤单因素实验，0.10.150.20.250.30

压力/MPa

确定超滤压力、料液温度、料液pH对膜通量的影图1不同操作压力对膜通量的影响响，采用SAS8.2软件系统，分析各因素对膜通量影在表1超滤压力的因素分析中，F值为276.87，

表1超滤压力的方差分析及多重比较

压力y1y2y3平均值变异来源SSdfMSF值Pr＞F5%水平0.2552.551.153.052.2处理间1151.484287.87276.98＜0.0001A0.349.548.250.049.2处理内

10.393101.0393B0.246.545.047.346.3总变异

1161.8814C0.1538.037.039.038.0D0.128.029.027.028.0EP值＜0.0001，R=0.9911，说明超滤压力对膜通量的量下运行，提高膜分离效率，减少膜污染，确定变化有显著差异，且压力各水平之间也存在显著最佳操作压力为0.25MPa。

性差异；由图1可以看出，膜通量随着操作压力的2.2不同料液温度下纳豆激酶料液的膜通量

增加先增加后下降，在直线上升阶段，随着压力准确称取处理后的酶液，将超滤温度分别设的增大，膜两侧压差增加，膜通量呈直线迅速上定在20、25、35、40、45℃5个水平(n=5)，超滤升，此时膜通量较小，其流动可近似地看作与膜压力为0.25MPa，料液pH值为7，测定膜通量及纳两侧压差成正比；随着压力的继续增加，膜表面豆激酶含量，实验结果见表2。根据所得数据绘制开始形成凝胶层，随着带到膜面的大分子溶质的出超滤压力与膜通量及纳豆激酶含量的关系曲线增加，凝胶层厚度逐渐增大，此外，高压加速了图，见图2。

纳豆激酶酶液中大分子物质在膜孔中的沉积，造在表2料液温度的因素分析中，F值为1096.09，成膜孔减小甚至堵塞，减小了膜的有效面积，所P值＜0.0001，相关系数R=0.9985，采用SAS统计系以此时膜通量随操作压力的上升呈下降趋

势。同统对其进行相关性分析，说明料液温度对膜通量时由图1可看出随着膜通量的增加纳豆激酶含量也的变化有显著差异，且料液温度各水平之间也存相应的增加，当膜通量达最大时，纳豆激酶含量在显著性差异；根据超滤膜产品说明书显示，其也达最大值，因此为了使超滤系统能在较高的通耐受最高温度为50℃，而纳豆激酶在温度超过45

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FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY表2料液温度的方差分析及多重比较

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温度/℃4540352520

y164.159.552.527.824.5

7060膜通量/(L/m2·h)

50403020100

20

25

y263.758.753.028.123.6

y362.560.051.229.025.0

平均值63.459.452.228.324.3

2.0

1.81.61.41.21.00.80.60.40.20

变异来源处理间处理内总变异

SS3907.805.76003913.56

df41014

MS976.950.5760

F值1096.09

Pr＞F＜0.0001

5%水平ABCDE

度，结合料液特性与膜材料的特性要求，超滤时的最佳料液温度设定在37℃。NK含量/(mg/mL)

2.3不同料液pH时纳豆激酶料液的膜通量

膜通量NH含量3540温度/℃

45

准确称取处理后的酶液，将超滤pH分别设定在6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，5个水平(n=5)，超滤压力为0.25MPa，料液温度为37℃，测定膜通量及纳豆激酶含量，实验结果见表3。根据所得数据绘制出超滤压力与膜通量及纳豆激酶含量的关系曲线图，见图3。

4540膜通量/(L/m2·h)35302520151050

6

7

8

pH

9

10

膜通量NH含量

1.41.21.00.80.60.40.20

NK含量/(mg/mL)

图2不同温度对膜通量的影响

℃时，酶活性受温度影响较大。因此选择20～45℃为考察范围。由图2表明，膜通量随着料液温度的升高而呈上升趋势，且在超滤过程中，温度高的料液的通量始终大于低温料液，但由纳豆激酶含量曲线可知，在35～40℃之间时纳豆激酶含量最高，当温度超过40℃时蛋白变性，纳豆激酶含量有所损失；温度过高也会导致超滤膜的老化，影响膜的寿命，还要消耗过多的能量。此外，由液体深层发酵可知，纳豆激酶的最适产酶温度是37℃，此时酶的活性最高。因此，为了加快超滤速

pH876910

y141.734.727.820.819.8

y240.035.028.121.020.0

y341.834.829.021.621.6

平均值41.234.828.321.119.5

变异来源处理间处理内总变异

SS1005.944.36671010.3

图3不同料液pH对膜通量的影响

表3料液pH的方差分析及多重比较

df41014

MS251.480.4367

F值575.92

Pr＞F＜0.0001

5%水平ABCDE

在表3pH的因素分析中，F值为575.92，P值＜0.0001，相关系数R=0.9957,采用SAS统计系统对其进行相关性分析，说明料液pH对膜通量的变化有显著差异，且料液pH各水平之间也存在显著性差异；由图3可看出，由于料液中大分子蛋白质含量较多，其膜通量受pH值影响较大，当pH值在6～7之间时，膜通量较低，这是因为纳豆激酶的等电点在此pH范围内；当pH值为8时，膜通量达最大值；当pH值大于9时，膜通量迅速下降，因为在较强的碱性介质中纳豆激酶发生变性，从而沉积在

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膜表面，降低了膜通量。同时由图中可看出纳豆

激酶含量在pH6～7范围内逐渐增加，当pH为7时，纳豆激酶含量达最大值，因此料液pH值应控制在6.0～7.0范围内较适宜。实际操作中，发酵液的pH值为7.0，因此直接采用发酵液本身的pH即可。2.4

超滤液测得的纳豆激酶层析图谱

采用上述实验确定的超滤最佳值进行试验，将得到的酶液过HPD-400色谱柱，得到层析谱图，如图4所示，层析谱图为单一酶峰，料液不同方法处理后的检测结果见表4。

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0.60液pH值为7。

0.50经过超滤处理后的酶液过HPD-400色谱柱后，A度0.40其比活力达到9610.46IU/mg，纯化倍数为2.36倍，光

吸0.30回收率为92.3%，经电泳检测，得到单一条带，其0.20分子量与纳豆激酶分子量相同，为28000u。0.10由于未采用盐析处理，克服了传统方法中由

于盐离子的加入而使酶活性降低的缺点，与李立

00:0000:5101:4302:3503:2604:18民先盐析处理，再经过超滤浓缩后得到的纳豆激图4纳豆激酶HPD-400层析图谱酶相比，活性提高了6082.46IU/mg，回收率提高表4料液不同方法处理后的检测结果了30.56%；

方法总酶活/总蛋白/比活力/回收(IU/mL)(mg/mL)(IU/mg)纯化倍数率/%超滤法能够有效地除去料液中相对分子质量粗酶液

5621241384073.36-100较大和较小的组分，且避免了盐析方法中的高渗超滤5378321055122.211.2695.7作用，减少了酶蛋白的损失，提高了产品中纳豆层析518965549610.462.3692.3激酶的含量及活性。因此，超滤法应用于纳豆激

2.5超滤液纳豆激酶纯度鉴定酶的分离提纯是一种效率较高的方法，超滤法具

有处理量大，分离效果好和操作简便的特点，此

97400u

66200u方法的实验结果可为纳豆激酶的大规模生产提供43000u技术支持。31000u参考文献：

[1]ChenHM,GuanAL,MarklandFS.Immunologicalprop－

20100uertiesofthefibrinolyticenzyme(fibrolase)fromsouihem14400ucopperhead(Agkistr odencontortrixcomortrix)venomanditspuri-ficationbyimmunoaffinitychromatogragh[J].Toxicon,

标准粗酶液超滤层析

蛋白1991,29(6):683-694

图5纳豆激酶电泳图[2]HuHB,ZhangXH,MeiLH,etal.ChemicalEngineer－对超滤液

进行SDS-PAGE电泳，结果如图5ing(China),2005,33(4):1-4所示。由图5看出，经过超滤之后，酶液中基本[3]张笑颜,等.超滤技术在蛋白质纯化中的应用[J].中国药

师,2004,7(3)

上只有两种蛋白，其中一种的分子质量在28000[4]李立民,惠洪文,王明芳.纳豆激酶分离提纯方法中试研u，说明超滤达到了纯化纳豆激酶的目的；图中究[J].内蒙古农业大学学报,2003,24(4):52-53最右边的泳道为经过吸附树脂后的酶液，电泳[5]刘茉娥.膜分离技术[M].北京:化学工业出版社,1998显示为单一的蛋白带，其分子质量在28000u，[6]AstrupT,MullertzS.Thefibrinplatemethodforestimat－与纳豆激酶的分子质量相同，说明纯化后的酶液

ingfibrinolyticactivity,Arch.BiochemBiophys,1952,40:成分比较均一。346-351

[7]李建武,余瑞元,袁明秀.生物化学实验原理和方法[M].北

3结论京:北京大学出版社,1994:174-175

通过考察工艺参数对超滤过程中膜通量及纳

[8]BradfordMM.Arapidandsensitivemethodforthe quanlitationofmicrogrramquantitiesofproteinwti1izing豆激酶含量的影响,确定超滤分离的最适工艺条件theprincipleofprotein-dyebinding[J].AmBiochem,1976,

是：操作压力为0.25MPa，料液温度为37℃，料72:1105-1112

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纳豆激酶的作用

纳豆激酶的作用 The latest revision on November 22, 2020

适应人群：适用于心脑血管障碍及高血脂，高粘血症，高血压，动脉硬化，冠心病，脑血栓，心脑供血不足，中风后遗症等人群服用。 我国心脑血管疾病患者人数逐步上升，仅高血压患者就达一亿多，全国每年新发生的脑猝死病例约300万人，心肌梗塞60万人。，心脑血管病造成的死亡人数约为260万，占人口总死亡率40％，平均每小时死亡300人。高于多数欧美国家及日本。已成为心脑血管病高发国。 在日本纳豆是人们日常不可缺少的健康产品，在日本民间有“纳豆顿顿有”活到九十九的口头禅。纳豆是日本保持“世界第一长寿国的秘制佳肴。纳豆是将蒸煮后的大豆，接种纳豆菌，经微生物发哮而成的一种豆制品．发酵成熟后的纳豆，表面粘稠，附着一层白色的纳豆菌膜。 纳豆激酶胶囊的保健功效 防止骨疏松 纳豆辅助补钙的机理是：骨质是由维生素K2和优质蛋白质先形成骨元蛋白，再与钙生成骨质，蓄积骨中，增加骨密度这三大要素缺一不可。纳豆中包含大豆异黄酮和维生素K2。大豆异黄酮能防止骨中钙的溶解，而维生素K2则能够将钙固定于骨中。也就是说，大豆异黄酮和维生素K2的组合能相互协力，起到强骨的作用。 抗菌作用 卫生公害研究所进行的实验表明，纳豆的提取液可将3万个0-157致病性大肠杆菌减少到40个以下。最近的科学实验也已确认，纳豆菌对抑制0-157同类的0-111、0-144病原性大肠杆菌以及其它病原菌诸如，、沙门氏杆菌、李斯特菌等同样有抑制作用。抗菌机理在于纳豆菌能够产生杀菌物质吡啶二羧酸

调节肠胃润肠通便排毒养颜 纳豆菌不受胃液的强酸影响，并很快在肠道内定植。纳豆菌所产生的吡啶二羧酸，有效杀灭、抑制肠道内的有害菌和病毒。使肠内菌群达到一个有利健康的动态平衡，迅速解决便秘、肠炎、腹泻问题，还你一个健康的肠道。为此，纳豆菌的润肠通便效果是立竿见影的。我们都知道大便中有50%到80%是肠内细菌及 其尸体。肠内细菌活跃，大便就能顺畅。这就是润肠通便的理由。一天一次大便,可以清除宿便排除毒素。再加上纳豆激酶可以溶解毛细血管里的血栓、脂肪等，因而可以保证面色光泽红润。 明显改善女性更年期综合症 大豆异黄酮是主要的植物雌激素之一，具有弱的雌激素样作用。纳豆中 30mg异黄酮相当于大豆中100mg异黄酮的效果。妇女更年期症状和绝经后妇女 易发的骨质疏松，主要是由于体内雌激素水平下降造成的。大豆类黄酮可以补充体内雌激素不足，不但可以明显改善更年期症状，而且可以防治女性骨质疏松。再考虑到纳豆排毒养颜和减肥作用，纳豆对女性来说是非常重要的保健食品。 缓型减肥直观降低餐后血糖 纳豆菌在肠内大约能坚持1周左右，可以促进其它有益菌增殖。肠内细菌，重量约为1公斤。当然它需要饵食供给。人体吸收的营养就成为肠内细菌的饵食而被吞噬，再加上纳豆激酶可燃烧脂肪,由此就能减肥。还有纳豆粘物质发挥了 浸溶、包裹的作用。因而纳豆减肥是缓型有效的,不会反弹。然而餐后血糖值出 现明显下降趋势，是非常直观的。一是纳豆菌吞噬葡萄糖和粘物质的作用,二是 纳豆中的高弹性蛋白酶（或称胰肽酶E，Elastase）,抑制了血糖增加。它具有 与猪胰脏所含的这种酶的作用，而猪胰腺的弹性蛋白酶已用于高血糖的治疗药物。 解酒、保护肝脏

纳豆激酶溶栓临床研究

納豆激酶溶栓的临床研究 现代社会普遍认为血液流动得勤快即佳。因此凝固系往往被视为对健康有害的物质。但这其实是种误解。凝固系并非有害物质。对人体健康来说，凝固系和线溶系保持平衡是至关重要的。凝固系最终产生了纤维蛋白，线溶系则合成了Plasmin。两者间保持平衡则为健康状态。如果纳豆仅有线溶系在工作，则应该出现止血能低下等不健康状态。但事实上此类现象并没有产生。这个原因也许是纳豆中含有维他命K2 。通常即使线溶系处于优势，在需要凝固系工作之时，它也会发挥作用的。比如说，平时我们不太会用灭火器。它只是被预备着以防火灾发生。因为预先准备了灭火器，所以能够安心地灭火。 开车时需要脚踩加速器才能前行。我们能够安心地脚踩加速器开车是因为有预防意外发生的刹车。刹车仅仅只是在停车时才使用。而纳豆正是一种预先已经预防了意外发生的食品。 纳豆激酶没有药品常有的副作用。这是因为大自然的平衡力帮助了它们。纳豆中有随时待机以便使凝固系工作的维他命K2。

在介绍纳豆和血液的关系之前，先简单说明一下纳豆凝固血液的情况。血液中既有凝固血液（凝固系）也有促使血液溶解（线溶系）的两种机能。两者之间保持着微妙的平衡。 血液凝固作用对健康是非常重要的。有时候我们受了伤，但血却很快止住。这就是凝固系在起作用。凝固系不仅能够止血，而且能保护血管内的皮细胞或是血管修复等保证血管正常的机能。血液的凝固工作是非常复杂的。13种凝固因子一个接着一个起着连锁反应，最终产生一种纤维蛋白的物质。这一连串的反应就象瀑布的水逐段飞落，因此这一过程常被称为血液凝固阀门。 生物体内在凝固血液时，将凝固的血液溶解的机能也同时工作着。在体内产生一种称为Plasmin的物质，监视着凝固系使血液不至于凝固。此一机能称为线溶系。

纳豆激酶生产工艺

纳豆激酶生产工艺 纳豆知识1、纳豆和纳豆激酶的生产工艺 (1)、纳豆的生产过程：精选小粒黄豆→浸泡→清洗→蒸煮→沥干→降温至70度→无菌接种(纳豆菌)→35-52度培养24-36小时→分装→冷冻保存→纳豆 纳豆是日本的传统食品，是选用优质黄豆经纳豆菌生物发酵而成。纳豆的外表 带有一层白霜，用筷子搅拌时，会拉出粘丝，拉丝越多越好。纳豆常配入海鲜 酱油、芥末等调味料直接食用，也可烹制各类菜肴。纳豆需要冷藏保鲜，保质 期一般在7~10天。近几十年来，随着纳豆的有益健康的功能不断被发现，纳豆在日本风靡全国，不断掀起"纳豆热潮"。目前，日本纳豆产业的年销售额已达2000亿日元(折合150亿人民币)。 (2)、纳豆激酶的生产工艺： 1：生产纳豆激酶有两种做法。一是考虑到纳豆激酶属于高分子物质，所以只要将高分子物质抽取出来即可。但是用这种方法纳豆中的维他命和纳豆菌也 会一起被舍弃掉。另一种方法是有选择地抽取纳豆菌和纳豆菌的副产物。用这 种方法的话，纳豆菌中所包含的全部的物质都有可能抽取出来。两种抽取方法 谁优谁劣可谓一目了然。生产的纳豆激酶粉末含有纳豆菌所能生成的全部物质。正因为如此，能够生产自然的、稳定性高的纳豆激酶粉末。详细请登陆 https://www.wendangku.net/doc/7012953107.html, 2、纳豆激酶纳豆中的纳豆激酶是直接分解血栓的纤维蛋白酶。具有强大的溶栓作用，比尿激酶的能力还要强，每克湿纳豆溶栓效果相当于尿 激酶1600FU，在胃肠中不失活。纳豆激酶对血栓的作用时间长，与尿激酶3~5 分钟作用时间相比，纳豆激酶作用长达8小时，而且安全、无副作用。食用纳 豆后，测定血液中形成血栓的物质会慢慢减少，溶解血栓的物质会越来越多， 达到动态平衡。常吃纳豆还会将毛细血管中的血栓溶解掉，有效改善微循环障碍。A、人体实验结果发现纳豆激酶有以下作用：(1)缩短血栓溶解时间(2)增加血栓溶解面积 (3)增加血栓溶解产物上图(https://www.wendangku.net/doc/7012953107.html,)是：纳豆消除体内血栓的临床实验(西村《视膜中心静脉闭塞症的治疗效果》)。实验用量为每日纳豆的服用

纳豆的神奇功效

纳豆的神奇功效 纳豆可以溶血栓，非常适合心脑血管病人服用。科学家还发现，纳豆具有很多神奇功效。 纳豆神奇功效之一：纳豆激酶可以安全高效地溶解血栓，有效预防和改善心脑血管疾病 纳豆激酶能直接分解血栓，具有强大的溶栓作用。每克湿纳豆溶栓效果相当于尿激酶1600FU，在胃肠中不失活。纳豆激酶对血栓的作用时间可长达8小时。纳豆是唯一口服有效的溶栓食品。 纳豆激酶还有抑制血小板凝固的作用，有预防高血压和动脉硬化，降低胆固醇，使血流顺畅的功能。 纳豆最好在晚饭后食用。因为血栓类疾病，如心肌梗塞往往是在夜间或上午发作，而食用纳豆后2—8小时血栓溶解的速率比较高。所以晚上吃纳豆可有效预防此类疾病的发作。 纳豆“预防心脏病”的效果已经得到美国FDA的认可。 纳豆神奇功效之二：丰富的小分子蛋白质可有效抗疲劳、延缓衰老、预防老年痴呆症。 纳豆中富含小分子蛋白质，不仅易于人体吸收，还具有多种生物活性，调整肌体平衡，延缓衰老，保持健康。 纳豆中含有非常丰富的卵磷脂、皂甙、以及不饱和脂肪酸等活性营养素，对于提高生理基础代谢、改善生理机能、预防血管老化、抑制脂肪沉积等方面都非常有帮助。 纳豆神奇功效之三：活性VK2可以强壮骨骼，有效预防和改善骨质疏松。 国际最新研究成果证明：VK2是治疗骨质疏松症不可缺少的要素。因为骨质是由VK2和优质蛋白质形成骨元蛋白后，再与钙结合而生成的。并且，VK2还有防止骨质流失的作用。 现代人们的饮食中，钙含量丰富，缺乏的是VK2这种活性物质。日本曾对6万名骨质疏松患者和骨折患者进行测试，发现他们血液中VK2的含量仅为正常人的一半，日本让骨质疏松患者多吃纳豆，很好的解决了中老年人骨质疏松问题。 纳豆中富含活性VK2，每100克纳豆中含有870微克VK2，是其他食品的数百倍，纳豆是国际上公认的解决骨质疏松的有效的食品。 日本厚生省认定成年男子每天VK2的需要量为体重每1公斤1微克。服用湿纳豆5克后，血中VK2浓度为食用前的10倍。已能满足一天的需求。

纳豆激酶分离纯化及体外溶栓和溶血作用研究

纳豆激酶分离纯化及体外溶栓和溶血作用研究 纳豆是日本的传统大豆发酵食品，由纳豆芽孢杆菌发酵而成，在日本已食用近千年。1987年，须见洋行等经过对上百种食物的筛选，首次发现纳豆含有溶解血栓纤维蛋白的成分，并命名为纳豆激酶(nattokinase,NK)。研究表明，NK 是纳豆发酵过程中纳豆芽孢杆菌分泌的一种丝氨酸蛋白酶[1]。进一步的研究表明，NKc具有很强的体内外溶栓作用，与传统的容栓剂相比，NKc具有易提取、成本低廉和能口服吸收溶栓等优点，因而可能成为新一代的溶栓药物[2-4]。为了对NKc的开发提供理论依据，本实验室在研究NKc纤溶活性之后，进一步对其 体外溶栓和溶血作用进行研究。 1 材料与方法 1.1 材料 菌株：为本实验室自日本纳豆分离纯化菌种，保存于养琼脂斜面，营养琼脂配方为：细菌培养用胰蛋白胨(bacto-tryptone)，1%；细菌培养用酵母抽提物(b acto-yeast extract)，0.5%；NaCl,0.5%；细菌培养用琼脂粉(bacto-agar powd er)，1.5%PH7.2。 纳豆、纳豆提取液：按文献[5]介绍方法制备。 血平板：用生理盐水配制1%琼脂，加入新鲜脱纤兔血，混匀倾注平板，冷却凝固即成。

主要试剂：凝血酶、纤维蛋白原、标准尿激酶（中国药品生物制品检定所）；蚓激酶(30×104 U?粒-1，北京百奥药业有限责任公司)；牛血清白蛋白(上海生化试剂公司)；低相对分子质量标准蛋白质(兔磷酸化酶：Mr97.4×103,牛血清白蛋白：Mr66.2×103,兔肌动蛋白：Mr43.0×103,牛碳酸酐酶：Mr31.0×103,胰蛋白酶抑制剂：Mr20.1×103,鸡蛋清溶菌酶：Mr14.4×103)（上海生化试剂公司）；其他试剂均为国产分析纯。 1.2 方法 1.2.1 NKc分离纯化纳豆提取液经35%～75%饱和度硫酸铵分段盐析，离心收集沉淀，用50mmol?L-1磷酸缓冲液（PH 7.4）溶解，充分透析后获得纳豆激酶粗酶（NKc），再经Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱（1.0cm×60cm）层析，分管收集纤溶活性较高部分，脱盐，冷冻干燥后获得层析纯纳豆激酶（NKc），SDS-PAGE电泳检测纯度。 1.2.2 纤溶活性测定按Astrup等[6]方法并改进制备血纤维蛋白平板。10m L 1%的琼脂糖溶液于50℃时加入10mL 0.3%的纤维蛋白原溶液及100μL凝血酶，快速混合并倒入9cm平板中，静置冷却凝固为乳白色半透明的纤维蛋白平板。尿激酶标准品配成25.875，51.75，103.5，207.415U?mL-1 5个浓度，各取5μL加在制备好的纤维蛋白平板上，37℃孵育18h，计算水解圈面积，以酶活力的尿激酶单位数的对数为横坐标，水解圈面积的对数为纵坐标做标准曲线。取样品5μL 3份加在纤维蛋白平板上，37℃孵育18h，求得样品水解圈面积的平均值，从标准曲线上求出样品的酶活力。

纳豆激酶活性测定

纳豆激酶检测方法 目前行业内流行的纳豆激酶检测大致有三种方法，其原理、利弊简介如下： 一、 IU纤维蛋白平板法： 以尿激酶为对照，与纳豆激酶样品同时在纤维蛋白平板特定条件下所形成水解圈，测量各自水解圈直径，通过计算取得相应纳豆激酶活力。由于对水解圈直径的认定的认定存在经验人员视觉差异，导致测定粗放，数据波动性强，重复性差，不具权威依据。 二、 FU紫外分光法： 纳豆激酶与纤维蛋白在一定条件下作用会产生可溶性低分子物质，通过紫外分光技术检测其浓度，通过计算取得相应纳豆激酶活力，数据稳定，重复性强。测定硬件条件苛刻，测定成本高，不具权威性依据。 三、 U中性蛋白酶法： 纳豆激酶与酪蛋白在一定条件下作用会产生可溶性低分子物质，通过普通比色计检测其浓度，计算取得相应纳豆激酶活力，数据稳定，重复性强。测定简单，检测成本低，有国家标准为依据。 1）琼脂糖一纤维蛋白平板法是，是目前最常用的纤溶酶溶栓活力测定方法，此法的原理是用琼脂糖作为固体支持，以凝血酶和纤维蛋白

原制做人工血栓平板，注入NK，用溶解圈垂直直径的乘积(mm2)表示纤溶活力，以标准UK或纤溶酶为标准品作标准曲线，计算出NK的活性相当于标准品的单位数。此法简便易行，并可同时测定多个样品，但由于溶解圈面积受恒温反应时间的影响很大，所以对恒温时间的控制十分重要，且恒温时间对粗制酶活性测定的影响比对NK精制产品活性测定的影响大。 2）在直径15mm的硅化试管中依次加入pH值为7.7的咪唑缓冲液、纳豆激酶收集液、凝血酶和纤维蛋白原，立即振摇数秒，使之产生絮状物，置38℃水浴30 min，置冰水中终止反应。用100目尼龙网过滤试管中未溶解的纤维蛋白，滤纸吸干，用蒸馏水漂洗，再用滤纸吸干，放入小试管中，再加3mL浓度为O．2 mol/L的NaOH溶液，在沸水中煮15min，冷却。用分光光度计测定溶液在280nm处的吸光值，并根据活力计算公式计算纤溶活力。 纳豆激酶活力= A对照?A样 0.5ml×30min ×3×1000ug

纳豆激酶“溶栓”遭质疑 LVCI专家提醒如何选择很关键

纳豆激酶“溶栓”遭质疑LVCI专家提醒如何选择很关键 对保健品有所关注的朋友，相信对纳豆激酶一定不陌生。随着人们生活水平的提高，健康保健意识逐渐增强，对健康产品的需求越来越大，国内保健品市场正如火如荼的上演着一场没有硝烟的战争，号称能溶解血栓、降低血压血脂的纳豆，一度成为中老年人心脑血管保健追捧的“圣品”，被炒成了心脑血管疾病的特效药。然而记者调查发现，市面上某些宣成能治百病的纳豆产品其实名不副实。 家住西城区的张老太告诉记者，自己在小区遛弯时被一推销小伙子“忽悠”买了6盒纳豆胶囊，说是降血压降血脂，对心脑血管有效果，可是每天按照包装上的说明坚持吃了一个多月，却一直不见效，并没有达到所谓“溶血栓、降血脂”的作用，反倒是睡不好还失眠，身体还不如以前了。 记者发现像张老太这样的例子并不少见，在淘宝、京东等各大销售平台上用户对于纳豆产品的评价也是褒贬不一。一场纳豆热潮袭来，我们也应该冷静下来，理性分析，纳豆这种东西是否真的有溶栓、保护心脑的保健功效，是否真的值得广大消费者去追捧？对此，记者采访了台湾研究纳豆激酶多年的LVCI研发实验室心脑专家。 专家指出，纳豆提取的纳豆激酶具有溶解血栓的作用，这一结论在1980年日本须见洋行博士的“两点半实验”便已证实，至于现在市面上销售的纳豆激酶产品是否达到了能溶栓的保健效果，我们首先还得从以下几个方面纠正消费者的认知错误： 纳豆机能否自制纳豆激酶？ 纳豆激酶的提取工艺是一个复杂的过程，用纳豆机自制纳豆，不仅环境、技术达不到要求，纳豆激酶的活性更没法保证。 专家解释道，纳豆发酵非常有讲究，泡豆的水要用纯净水，时间和水温也是有讲究的，有的家庭泡豆子的时候豆子就变质了，就是时间和水温没控制好的原因。蒸煮必须在沸腾后保持5～10分钟，否则尿酶没有失活，会引起食物中毒。接种必须是纯纳豆菌，保证每粒大豆外分布有1万个纳豆菌的浓度。接种、计量、充填、包装、后熟都必须在无菌环境中进行。如果这些条件没控制好，杂菌如霉菌等有害菌、致病菌过量繁殖，食用后是有危险的。 另外自制纳豆还有嘌吟、大豆异黄硐、维生素K2等杂质，而这几种杂质对于一些特定人群是禁忌服用的，如果服用不当有可能会发生危险。因此，专家不建议大家在家用纳豆机自制纳豆激酶，还是应该选择专业的纳豆产品。 纳豆就是纳豆激酶？ 纳豆中起决定作用的是“纳豆激酶”,普通的纳豆产品不等于纳豆激酶，两者虽有联系，但更有本质区别。纳豆激酶是通过纳豆菌培养液发酵产生纳豆激酶，再将这种激酶提纯制成的产品。而现在，中国内地生产的纳豆产品一般是新鲜的纳豆经冷冻干燥碾碎而成，也就是最初级的原料纳豆冻干粉制成的胶囊，跟功效成分纳豆激酶没有半点关联，毫无提纯技术和营养活性可言，可想而知服用后没有效果也很正常。 因此，专家提醒消费者在购买纳豆产品时，一定要辨别纳豆和纳豆激酶产品。只有像LVCI纳豆复合片这种经过高科技超声superx?萃取提纯的纳豆激酶，才是真正的纳豆激酶产品，能保证活性达到48000FU， 实现快速溶栓的效果。 好纳豆产品就一定能被吸收利用？ 一款高纯度、高活性的纳豆激酶，就一定能被人体吸收利用吗？专家回答不一定。纳豆激酶进入胃部后，很快就会被胃酸侵蚀失去活性，作用时间非常有限。这也是为什么专家会对网上流行的纳豆激酶溶栓实验所呈现的效果产生质疑的原因。实验模拟的环境与人体胃肠吸收环境最大的出入就在于，前者忽略了人体消化液呈酸性的特质。所以，只有使纳豆激酶进入人体后仍能保持活性才能延长作用时间，达到溶栓的效果。 值得提出的是，目前LVCI研发实验室将纳豆激酶添加极大螺旋藻成分，打造弱碱性配方，实现了中和胃酸、保证纳豆激酶活性和延长作用时间的效果。

第一章 发现纳豆激酶

第一章发现纳豆激酶 天哪!两小时血栓竟然溶解掉！ 1980年的一天下午，当时在芝加哥的罗宾斯研究所从事血栓症和酶领域研究的我，像往常一样观察浅底盘，让我惊讶不已、一辈子都不会忘记的事情发生了：浅底盘中的血栓竟然溶解了!短短的两个小时! 天哪!只有短短的两个小时! 而在这以前我们进行的近二百多种天然食物的各种溶栓实验中，持续到第二天早上，能融化到一至二厘米就是最理想的了；可是这次居然是在两个小时之内，就达到了这样的效果!真的是很吃惊!真的是很激动! 血栓，诚如字面意思，就是血液块。 血栓是脑血管阻塞引起的脑梗塞、心血管堵塞而引起的心肌梗塞等威胁生命的血栓症的最根本的起因。而这些疾病就算不会夺取人们的生命，也会留下诸如严重语言障碍或运动障碍的残疾后遗症。 然而，这个发生在芝加哥罗宾斯研究所的“两点半实验”，划时代地改变了血栓威胁人类生命的历史，开创了不使用药物就可以溶化血栓的新时代。 现在，被称为t一：PA的药剂已经在美国以及加拿大被视为标准药物使用了(尽管让人遗憾的是，对药品审批程序比较迟缓的日本，到2 001年为止，也未被通过)。但在1980年，由人的尿液中提取可以溶解血栓的酶还没有被研究出来。 那时候从事血栓症研究的我，正同世界一流的生物学家K·C·罗宾斯老师一起，探索寻找可以将血栓溶化的食物。 在异国他乡，我们每天都在同血栓进行着抗争。 困惑迷局中的一线光明 在这里，仅就我个人的学习过程和经历过的曲折，简单地向大家介绍一下。 最早，我在大学的工程部进行有关生物酶的研究。就是那段时间，我对生物酶的研究兴趣逐渐变得强烈起来。为了进一步的从事研究，我转进了医学部。 在医学部取得了医学博士后，不擅长人际关系的我，觉得与做医生相比，研究工作对我来说更具吸引力、更合适。那时，我有一个特别强烈的信念：不管自己将来遇到什么困难，也绝不会放弃关于酶的研究。在欧洲，有着“生理学是学中之王”一说。生理学的研究空间大、奥秘深，对于人类来说是永久的命题。几年的研究经历，使我已经深切地感受到了这个世界里的无尽魅力，它值得我为之奋斗终身。但是这个研究课题需要很长时间的工作，并需要具备一定的实验室条件。这在当时的日本，还没有具备这样条件的机构。

纳豆功效

【什么是纳豆】 纳豆，大豆经纳豆菌发酵而成，是盛产于日本的一种保健食品。目前，全世界，尤其是整个东南亚的人们对纳豆的作用高度认可，食用者众多。 研究表明，纳豆的保健功能主要与其中的纳豆激酶、纳豆异黄酮、皂青素、维生素K2等多种功能因子有关。纳豆中富含皂青素，能改善便秘，降低血脂，预防大肠癌、降低胆固醇、软化血管、预防高血压和动脉硬化，抑制艾滋病病毒等功能；纳豆中含有游离的异黄酮类物质及多种对人体有益的酶类，如过氧化物歧化酶、过氧化氢酶、蛋白酶、淀粉酶、脂酶等，它们可清除体内致癌物质、提高记忆力、护肝美容、延缓衰老等有明显效果，并可提高食物的消化率；摄入活纳豆菌可以调节肠道菌群平衡，预防痢疾、肠炎和便秘，其效果在某些方面优于现在常用的乳酸菌微生态制剂；纳豆发酵产生的粘性物质，被覆胃肠道粘膜表面上，因而可保护胃肠，饮酒时可缓解酒醉的作用。 最新的研究还表明，纳豆对引起大规模食物中毒的“罪魁祸首”——病原性大肠杆菌O157的发育具有很强的抑制作用。 【纳豆功效】 溶解血栓 1980年的一天，正在美国芝加哥罗宾斯研究所从事血栓研究工作的日本须见洋行教授在比较230多种食品後，赫然发现仅有纳豆菌食品含高浓度的血栓溶解成份。他将脑血栓患者常服用的溶血栓药物放在定量的人造血栓上，结果耗费一个晚上的时间才能完全溶解，而以同样方法换上一粒纳豆菌食品则只需3小时便可完成。纳豆在日本已食用1000年，是一种安全的食用血栓预防剂。调节血脂、血压及预防粥状动脉硬化 动物实验证实，纳豆菌食品可以抑制血中的LDL氧化，有效降低总胆固醇以及三酸甘油酯的浓度，进而减少粥状动脉硬化的发生。 降血脂和减少动脉硬化的发生，均可以达到调节血压的目的。同时，抑制和减少血管紧张素II的合成，减轻血管外周阻力，同样可以调节血压。对遗传性高血压的老鼠，对照组（大豆）血压逐渐升至33.3Pa(250mmHg),合用纳豆的老鼠维持正常的18.7kPa(140mmHg)。这是因为纳豆菌食品中含有angiotensin converting enzyme(ACE)的inhibitor，它会阻止angiotensin变成active form。 调节血糖 纳豆菌在肠内大约能坚持1周左右，可以促进其它有益菌增殖。肠内细菌，重量约为1公斤。当然它需要饵食供给。人体吸收的营养就成为肠内细菌的饵食而被吞噬，再加上纳豆激酶可燃烧脂肪，由此就能减肥。还有纳豆粘物质发挥了浸溶、包裹的作用。因而纳豆减肥是缓型有效的，不会反弹。然而餐后血糖值出现明显下降趋势，是非常直观的。一是纳豆菌吞噬葡萄糖和粘物质的作

纳豆与纳豆激酶如何溶解血栓——福达平安

纳豆对人体的作用 纳豆是由黄豆经豆菌发酵而成的一种微生态、有机健康食品。发酵成熟后的纳豆，表面附着一层透明的纳豆菌膜，具有很强的粘性，用筷子挑起，可拉出长长的丝，丝中含有其他任何食品都不能替代的传统的特殊营养成分，并形成特有的风味纳豆。 纳豆是纳豆菌将黄豆分解后的产物，它和黄豆有本质的区别。纳豆中富含纳豆菌、优质蛋白质（肽）纳豆激酶、超氧化物歧化酶、皂甙、卵磷脂、纳豆多糖等上百种对人有益的生理活性物质，很多都是黄豆中没有的。虽然黄豆中也有蛋白质、异黄酮、皂甙、卵磷脂等物质，但没有经过纳豆菌的分解，由于没有活性，其吸收、功效都和纳豆中的活性物质有天壤之别。由于其营养成分的特殊和多种功能，被誉为“跨营养科学和医药科学的营养食品”，具有提高人体分解排除血栓能力和调整肠道的功能。 日本食用纳豆已有1000年的时间，纳豆在日本创造了四个奇迹： 1、世界第一长寿国的奇迹。1996年日本掀起了全民食纳豆的热潮，一个一亿多人的国家，在不到十年的时间内，使百岁以上的老人占了世界的三分之一。 2、人均长高15厘米的奇迹。由于日本幼儿园的儿童、学校的学生，每天坚持食用纳豆，营养均衡，身体发育正常，人均长高了15厘米。 3、成功抑制0-157病毒流行的奇迹。由于纳豆优异的抗菌、抗病毒功效，日本政府号召全民吃纳豆，有效抑制了0-157大肠杆菌病毒流行。现在日本已经用纳豆来预防、抑制各种病毒的流行。 4、日本大约90％的人食用纳豆的奇迹。1.35亿人的国家有90％的人食用纳豆，大大超过食用牛奶的人，这在世界上也是一个奇迹。 纳豆的营养成分： 1、种类齐全的氨基酸 纳豆中的蛋白质几乎占到35％。蛋白质是由20种不同的氨基酸组成的，其中12种可以由人体自行合成，称为“非必需氨基酸”；另外8种人体则无法合成，只能从每天的饮食中加以补充，这部分氨基酸称为“必需氨基酸”。纳豆蛋白质几乎包含了所有的必需氨基酸，这在其它植物类食物中是十分罕见的。 2、保健功效突出的B族维生素 纳豆中含有大量的维生素，尤其是B族维生素，其品种之全、功效之多是其它植物性食物不可相比的。如能够营养神经中枢、神经系统的维生素B1，燃烧脂肪的维生素B2，防止动脉粥样硬化的维生素B6，以及维生素PP、叶酸维生素等。 3、机体不可缺少的活性矿物质 纳豆的营养结构十分完美，不仅拥有保健功能突出的维生素B族，而且还拥有大量人体健康不可缺少的矿物质，其中钙、磷、钠、钾、铁的含量尤为丰富，为人体提供了丰富而有益的矿物质来源。 4、纳豆含有的活性物质 〃纳豆激酶——溶解血栓、抗凝血、抗血小板凝聚、改善微循环 〃纳豆菌——调整肠道、抗菌消毒、提高消化吸收率 〃优质小分子蛋白质（多肽）——抗衰老、扩张血管、促进血液循环，修复受损细胞 〃超氧化物歧化酶——防御和消除氧代谢毒害；分解、清除自由基沉着斑块

纳豆保健作用及临床意义

纳豆的保健作用及临床意义 纳豆是由大豆接种纳豆菌发酵后制成的豆类发酵食品，2000多年来一直作为日本传统保健食品为民众所喜爱。纳豆不但富含蛋白质、不饱和脂肪酸、多种维生素及矿物质、大量的人体必需氨基酸和脂肪酸，而且在其周围的粘性物质中还含有多种活性物质，包括各种蛋白酶(如具有溶解血栓作用的纳豆激酶).λ-多聚谷氨酸、a-异黄酮和生育酚。纳豆的许多保健作用具有临床意义。 1.溶解血栓作用 日本学者须见洋行于1987年发现纳豆中有一种具有强溶栓作用的功能因子——纳豆激酶[1]，其溶解血栓能力比尿激酶和纤溶酶原激活因子(PA)等治疗血栓症的药都要强，而且该酶具有无毒副作用、使用安全、体内半衰期长、提取工艺简便及价格低廉等优点，弥补了现在常用的同类药品毒性较强、副作用较大、体内半衰期较短及造价较高等缺点。特别引人注意的是，纳豆激酶属食源性激酶，经口服进人血液循环可直接作用血栓，还可诱导肝脏或血管内皮产生纤维蛋白的溶酶原激活剂(t-PA )，活化自身纤溶酶系统，从而提高血液的纤溶活性。因此，许多学者认为其极有可能成为新的溶栓药物。 纳豆激酶是一种中性丝氨酸蛋白酶，可以有效分解血栓的主要成分——纤维蛋白及纤溶酶底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA(S-2251)，而且纳豆激酶直接作用于交联纤维蛋白，对纤维蛋白原并不敏感，所以不易引起出血倾简[2-4]。 纳豆激酶在体内和体外都具有很好的溶解血栓功能，通过在纤维平板上滴加纳豆激酶提取液使平板不透明的圆圈变成透明，从而发现并证明了其体外溶

栓作用[5]。以后通过动物血栓模型也证明无论是静脉注射还是口服，纳豆激酶都有溶栓作用，而且其效果远远大于纤溶酶和弹性蛋白酶[6]。另外，健康人口服纳豆或纳豆激酶肠溶胶囊后1～8天，明显缩短了优球蛋白的溶解时间(ELT)和提高了优球蛋白的纤溶活性(EFA)，而且血浆纤溶活性的提高可持续2～8小时，在第4天之后，纳豆激酶还可促进和增强肝脏及静脉内皮细胞产生t-PA，增加溶栓活性。这些结果证明了纳豆激酶可提高血浆的纤溶活性，而且该酶的作用可以长时间维持。 纳豆中除含有纳豆激酶外，还具有尿激酶、弹性蛋白酶、尿激酶原激活剂以及加速纤维蛋白溶解作用的物质(FAS),FAS不仅提高直接纤维降解酶(如纤溶酶等)的活性，对纤维酶原激活剂也起作用[7]。 2.发挥维生素K的作用 纳豆含有丰富的维生素K2[8]，从而间接发挥维生素K的作用:参与骨盐的代谢及促进凝血因子的合成。 有学者调查了日本东、西部及英国共三个地区绝经妇女血清中维生素k2 (MK-7)的浓度，发现三者间有明显的地理差异:日本东部地区绝经妇女血清中M K-7的浓度最高(5.26±6.13ng/mL)，而英国绝经妇女最低(0.37±0.20 ng/mL)。造成这种差异的原因是：食用纳豆在日本较为常见，而且东部地区较西部更为普遍，纳豆的摄人导致了血清中MK-7浓度明显持续升高。这种差异也证明了纳豆中的确含有丰富的维生素K2。进一步调查还发现，日本各个地区绝经妇女骸骨骨折发生率与纳豆的消耗率在统计学上呈明显负相关。其原因可能是由于骨及骨化组

纳豆激酶的溶栓实验

纳豆激酶的溶栓实验 人工血栓试验简介：1987年，纳豆博士须见洋行实验证明纳豆激酶（NK）具有溶解血栓的药作用。 这个试验是须见洋行教授在美国芝加哥某血液研究所进行担任研究员时进行的试验。 试验的原理是因为血栓的主要成分是蛋白质；另外在人体中凝血酶可以促使纤维蛋白原形成纤维蛋白，也就是我们常说的血栓的主要组成物质，所以须见洋行博士采用了纤维蛋白原＋凝血酶来制作人工血栓，也就是类似于人体的蛋白质然后将从超市买来的纳豆放入人工血栓中观察，这就是大家知道的两点半试验．两点半试验表明，纳豆具有体外溶解人体血栓的作用。之后的大量动物试验和人体试验都证明纳豆中含有的纳豆激酶不但能够体外溶栓，还能够通过口服就能达到体能溶栓的效果。 体外溶栓试验是最好的，也是能够简单操作的试验．纳豆都可以达到体外溶栓效果，如果是纳豆激酶的提纯物，溶解速度就更加快速，通常正常人体体温３７度下，只需要十几分钟就能看到很明确的溶栓效果． 反之如果一个产品连体外溶栓效果都没有，我们应当质疑它是否是有活性的纳豆产品．鲜活纳豆具有体外溶栓功能，但是如果没有活性的纳豆或者纳豆加工食品，那么是没有任何溶栓效果的．通过试验我们应该能验证该产品是否是有活性的纳豆产品。 该产品是否具有体外溶栓的效果。该产品是否具有持续体外溶栓效果。（常温放置时间越长，溶解范围越大）为什么不用人血进行试验首先只有医疗机构、科研单位等才有资格采血、化验，且必须由经过专业技术培训的医务工作者进行，未取得医疗机构执业许可证不得开展血压测量、血液检测的诊疗行为。现场进行抽血、化验是非法的，涉嫌非法行医．另外，人体每天都会生成血栓，这是人体的一个正常生理现象．血栓形成后抗凝系统作用于血栓，这个平衡机制维系着我们的健康．随着年龄的增长，压力，或疾病的出现，身体的抗凝能力都会下降，这个时候就不能及时溶解血栓，因而发生血栓类疾病．因此，不是光靠一滴血，或一时的检测，就能说明什么问题．血栓的形成有着合理的行程过程和诸多因素，也不是说身体里有血栓，就要恐慌，只要明白人体的机制，就能明白血栓检测是没有实际意义的．纳豆激酶溶解血栓实验步骤； ①制作人工血栓在人提取纤维蛋白原内加入凝血酶，数分钟后即可形成人工血栓，为白色固体状。 ②在人工血栓上放置纳豆激酶产品（胶囊内含物） ③模拟人体温度37度，将人工血栓的器皿放置于热水杯之上。 ④10分钟左右，纳豆激酶周围的血栓逐渐融化。 ⑤30分钟，1个小时分别观察纳豆激酶周围血栓溶解情况，血栓溶解：白色固状的血栓溶解为液体。

吃纳豆的作用是什么

吃纳豆的作用是什么 很多人不知道纳豆是什么，其实纳豆就是一种保健食品，主要的食物是大豆，经过纳豆菌发酵后形成了纳豆激酶，吃了对身体有益处，但是很多人对纳豆的作用不了解，也很少接触纳豆食品，因此我们就要对纳豆的作用进行讲解，那么吃纳豆的作用主要有哪些呢?其作用有很多，下面就一起来详细了解。 1、在保肝护肝、解酒方面效果显著：我们知道纳豆激酶进入人体后，会通过三重渠道构建酒精防护屏障，一是进入人体肝脏系统，二是进入人体消化道系统，三是进入人体血管系统。实践证明，纳豆对于原来不能饮酒、酒精过敏人群有明显的提高酒量，减少饮酒后不适反应的作用，同时还可以预防隔日醉的情况发生。这些都充分体现了纳豆激酶对酒精的分解及保肝护肝作用。 2、对胃肠道疾病的调整作用：特别是对于便秘、腹泻的效果见效快，纳豆中含有纳豆菌和优质膳食纤维，可以抑制肠内病原菌生长，清理肠道，调节肠道菌群平衡，改善消化系统，从而改善和提升胃肠道健康状态。 3.肌肤美白效果明显：纳豆中含有大豆异黄酮，年轻人服用后有很明显的肌肤美白效果;对于老年人来讲，会有老年斑、黄褐斑淡化现象发生。除此之外，对很多老年人来说，以前血管堵塞引起的头痛、头晕症状没有了，身体健康状况明显提升。 4、瘦身效果：吃纳豆瘦身有成功案例，瘦身速度虽然不会特别快，但是长时间坚持下来一定会见效，更让人兴奋的是瘦身成

功不会反弹。吃纳豆瘦身尤其明显的就是人的耐饿能力提高，这是因为纳豆菌在分解人体赘肉，为人体提供了额外的营养。 5、预防飞蚊症：纳豆菌不仅能净化血液，溶解阻塞在眼球微血管当中的血栓，并且可以减少胆固醇在血管壁的蓄积;此外，对白内障的预防的也有益处。 6、其他作用：纳豆中富含纳豆菌和优质缮食纤维，可以抑制肠内病原菌生长，清理肠道，防止便秘，改善消化系统;还具有除皱、抑制雀斑的美容功效。纳豆中富含的优质蛋白和卵磷脂极易被人体吸收，有效补充人体所需营养。纳豆含有人体所必需的22种微量元素、18种氨基酸、10种矿物质，对小儿挑食厌食，对高血压、高血糖等多种病症都用一定的食疗保健作用。 吃纳豆的作用是非常多的，文章中介绍了主要的六种作用，我们在生活中要多吃纳豆食物，对身体好同时也能预防各种疾病，并且想要皮肤美白的人群更要多吃，能美白，还能瘦身，是非常好的一种食物，当然吃纳豆的习惯在国内很少，此物主要产地是日本，如果人们要购买可到大型的商场选购。

纳豆激酶的功能与作用及服用纳豆激酶的好处

纳豆激酶的功能与作用及服用纳豆激酶的好处 纳豆激酶是人类至今发现的最具溶栓能力的食物酵素，其溶栓能力可能超过当今世界已经发现的所有的溶血栓药物，而且安全、无毒副作用。曾有医学研究表明，其溶栓能力是尿激酶的19倍。 纳豆激酶的发现开辟了食物溶栓的新途径，开启了抗击血栓防治心脑血管疾病的新纪元。英国科学家诺贝尔医学奖获得者约翰·文教授说：“谁掌握了溶解血栓的方法，谁就找到了慢性病防治的金钥匙。”所以说，纳豆激酶的发现是带给人类福音，堪比诺贝尔医学奖的伟大发现。 纳豆激酶作用机理 简单的说纳豆激酶除了可以直接溶解血栓外，还能激活人体自身的溶栓功能，即让没有活性的酶原变成能够溶解纤维蛋白的有活性的酶，没有活性的酶包括纤溶酶原和尿激酶原。 这个“原”相当于套在钢笔上的笔帽，只有将笔帽取下，钢笔才能写出字来。 科学的讲，如下： 1）刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，将纤溶酶原激活为纤溶酶，溶解纤维蛋白，降解血栓； 2）将体内的尿激酶原激活为尿激酶，尿激酶与t-PA一同激活纤溶酶原，溶解血栓； 3）纳豆激酶本身是一种激活纤溶系统的丝氨酸蛋白酶，具有直接水解交联纤维蛋白的作用；

纳豆激酶的作用过程不仅直接溶栓，而且还能提高人体自身的溶栓能力，因而是恢复血液系统凝固与抗凝两种体系重归平衡的过程。 血液凝固系统强势于血液抗凝系统血栓形成，血流不畅血液抗凝系统强势于血液凝固系统身体内外呈出血倾向。 服用纳豆有哪些好处？ 曾对坚持服用清血纳豆激酶的患者进行为期一年的跟踪回访。发现：心脑血管疾病患者如能坚持服用6个月以上，病情会大为减轻，避免发生中风和心梗，提高生命质量，延长寿命。 1、纳豆激酶改善中风、脑梗 血栓是在血管中形成的血块，会使血流缓慢，甚至会使血管堵塞引发中风等脑血管疾病。纳豆独含的纳豆激酶，具有双向溶解血栓的作用，溶栓力强劲、快速、作用持久。根据日本人常年吃纳豆的研究显示：脑血栓的治疗和预防可使用纳豆激酶。坚持吃纳豆激酶，可以改善血液环境，清理血管内多余的垃圾，各种血栓引起的不适症状会渐渐减轻，从而使病情好转。 2、纳豆激酶预防冠心病 冠心病包括缺血性心脏病，常伴有心悸、气短、头晕、眼花等不适症状，同时会有血压高、高血脂、高血糖等。纳豆激酶等长寿因子能保护血管内皮细胞，促使血液中的多余脂肪排出体外，避免发生动脉硬化，从而保证心脏足够的供血供氧。 3、吃了纳豆激酶后，血压平稳了！ 研究发现，纳豆激酶可以从血管内壁开始调节，显著降低全身血管阻力，阻止心肌及血管壁肥厚，致使血压下降。

纳豆五大功效

纳豆五大功效 一、降血脂：净化血液、溶解血栓、软化血管、预防心脑血管疾病 纳豆富含:纳豆激酶、卵磷脂、亚油酸、皂角苷、超氧化物岐化酶，被喻为“血管清道夫五大高手” 1．纳豆激酶：高效溶栓，有效时间长达8小时，无副作用。 2．卵磷脂：清洗胆固醇，有利于活性脑细胞。 3．亚油酸：软化心脑血管、促进新陈代谢、延缓衰老。 4．皂角苷：清洁血管壁上血脂、杂质，消退动脉硬化。 5．超氧化物岐化酶：抗血管老化，特别是细小动脉。 二、通便：养胃，通便，清肠毒，给肠道补充有机菌 纳豆对胃肠道的四个益处 1. 纳豆所含数以亿计的纳豆菌，可迅速解决便秘，清肠毒。 2. 纳豆含有抗菌消炎物质，防治肠炎，腹泻。 3. 纳豆含有木质素等膳食纤维预防肠癌。 4. 纳豆可以调节肠道菌群微生态平衡，保证肠功能正常。 三、健脑：健脑益智补钙壮骨促进儿童生长 1. 纳豆中所含的维生素K2，能够将钙固定于骨中，增加骨密度。 2. 纳豆所含的维生素B6、铁、叶酸、卵磷脂可以补血，增强智力。 3. 纳豆所含的维生素A、D、钙、锌、硒可以补钙、促进生长。 4. 纳豆所含的维生素B2、卵磷脂可以营养大脑细胞，使孩子聪明有活力。 四、护肝：护肝补肾醒酒防醉解除酒后不适

1. 保护肠胃不受刺激，预防肠胃疾病。 2. 减少胃肠道对酒精的吸收，分解酒精。 3. 保护肝脏和大脑，增强肾脏功能。 4. 增强肾脏功能，减轻酒后不适。 五、美容：美容养颜抗衰老推迟女性更年期 1. 抗衰老，抗辐射，护肤祛痘，美容养颜。 2. 预防肥胖，改善月经不调，预防乳腺癌。 3. 快速调节免疫力，消除疲劳，增强记忆力。 4. 减轻产后抑郁，促进乳汁分泌，利于产后身体恢复。 5. 补充植物雌激素，改善、缩短更年期不适。

纳豆激酶介绍

纳豆激酶 纳豆激酶(nattokinase简称NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilisl natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶。具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。 1980年在纳豆中被发现，由275个氨基酸按照固定排列方式组成，分子量是27724，有分解血栓的独特功能，活性效果用固有单位FU表示。 发现历程 纳豆激酶的发现来自著名的"两点半实验" 须见洋行博士 须见洋行博士 1980年的一天，从事溶解血栓药物研究工作的日本心脑血管专家须见洋行博士，他突然想起纳豆不是纤维蛋白发酵的吗？而血栓最顽固的部分就是纤维蛋白，于是，下午两点半时，须见洋行博士把纳豆中提取的物质加入到人工血栓中。 原本准备第二天看结果的，但5点半的时候，一次偶然的察看，奇迹发生了，血栓居然溶解了2厘米，而平常用尿激酶做溶血栓的实验溶解2厘米需要近两天的时间，也就是说纳豆发酵物溶解血栓的速度是尿激酶的19倍之多。于是，就将纳豆的这种强力溶栓物命名为纳豆激酶Nattokinase，简称NK，这就是震惊世界的溶血栓药物研究史上有名的“下午两点半”实验。 医学实验 株式会社日本生物科学研究所与韩国首尔延世大学研究院心脑血管疾病中心共同研究关于纳 “总之，纳豆激酶会导致收缩压和舒张压下降。豆激酶对高血压的效果。该研究报告的结论是： 这个结果表明增加纳豆激酶的摄入，可能对于预防和治疗高血压起着重要的作用。”该研究报告被国际权威学刊SCI收录(《Japanese society of hypertension》 VOL.31NO.8.August，2008ISSN0916_9636)。 株式会社日本生物科学研究所与印度孟买市TNMC&BYLNair医院共同进行的急性脑中风患者应用纳豆激酶+低分子肝素+抗凝药物治疗的综合临床研究。试验结论表明：纳豆激酶经口服摄取+低分子量肝素+抗血小板凝集药对于急性缺血脑中风的治疗效果显著。该研究报告也被国际权威学刊SCI收录(Jpn pharmacol ther vol.32 No 7 2004 TNMC&BYLNair 医院脑神经外科)。 株式会社日本生物科学研究所和日本圣玛丽安娜医科大学疑难疾病治疗研究中心共同进行关于纳豆激酶抑制血小板凝固和预防血栓形成的研究。该项研究的结论是：证实了纳豆激酶不但能溶解血栓，还能抑制血小板凝固，起到防范血栓形成的作用。这项试验结果于2003年3月在日本药学会发表。 此外，株式会社日本生物科学研究所还进行过纳豆激酶摄取后血液形态学的研究，手指血液流动变化试验对视网膜静脉塞栓试验、以及纳豆中维生素K2对华法令拮抗作用

纳豆激酶的功效与副作用哪些人不适合服用纳豆激酶

纳豆激酶的4种功效及副作用和哪些人不能吃纳豆激酶 纳豆激酶(Nattokinase)是什么？ 纳豆是由黄豆加入特殊菌种所发酵而成的健康食品，在日本已有数千年的历史，由于近代医学发展，发现纳豆中含有的酵素（纳豆激酶）具有溶血栓，并预防心肌梗塞及中风的功效，因此在全世界开始流行。 纳豆激酶是一种纤溶蛋白溶解(纤溶)酶，最初发现于日本发酵豆制品纳豆中。纳豆这道菜由大豆和枯草芽孢杆菌发酵而成，口感粘滑，酸味强烈，对有些人来说实在不易接受。 尽管纳豆的味道令人怀疑，但在许多研究中都显示它对健康有很多益处，尤其在预防心脑血管血栓，高血压、高血糖、高血脂及其并发症方面都有着非常不错的表现。据百度百科中描述纳豆激酶的功效是：防止血栓形成、降低血液黏度，软化血管，增加血管弹性。 纳豆激酶对交联状态的纤维蛋白(已形成血栓的纤维蛋白)尤其敏感，可以将其直接降解，对血浆纤维蛋白无影响，不易引起出血。加上纳豆激酶具有多元化的溶栓机制，除上述直接溶栓效果，还有少量的间接溶栓效果。 纳豆激酶比药物还有效？ 更特别的是纳豆激酶比起医生常用的的溶血栓药物尿激酶（Urokinase）来的更安全且效用更高，一般心肌梗塞发作而处于危险状态的患者，会立即使用尿激酶（约20万单位），但在体内只有半小时的溶血栓效果，但只要吃一盒（约100公克的纳豆），就可发挥约8到12小时的溶血栓功效，是药物的20多倍。 而且纳豆激酶只溶解血栓造成的纤维蛋白，不会有药物造成的出血等多种副作用，是非常完美的药物天然替代品。

纳豆激酶经科学验证的功效 1．预防及溶解血栓 现代人饮食西化，常吃下过多的高脂肪及碳水化合物，蔬菜水果又吃太少，造成血管出现血栓提早老化，甚至有10多岁就发现血管硬化，20岁就中风的案例。 血栓虽然被视为坏东西，但其实在体内它有修复血管及止血功能，而任务完成时就会被血栓溶解酵素给分解掉，一旦这种酵素减少分泌或失去功能，体内血栓便会快速增加，并引起心肌梗塞、脑中风及血管型失智等疾病。 NutritionResearch期刊曾于2009年发表研究指出，针对心血管疾病的高风险患者，每日服用2,000FUs的纳豆激酶两次，两个月后抽血发现血栓大幅下降，对于心血管有保护作用，能避免心肌梗塞、脑中风的发生。 2．降血压 高血压常被认为是要一辈子吃药控制的疾病，但现在临床研究发现纳豆激酶就有显着的降血压功效，而且还没有西药带来的诸多副作用。 HypertensionResearch期刊于2008年曾刊载一则研究，指出高血压患者连续八周服用 2,000FUs的纳豆激酶，能让血压显着下降，这是由于纳豆激酶能抑制让血压提升的酵素，因此纳豆激酶能预防甚至治疗高血压的发生。 3．预防老年失智症 失智．痴呆，我想是你我到老年都会害怕得到的疾病，不仅会渐渐遗忘熟悉的人，在生活上还会失去自理能力，而老年失智症或是痴呆不外乎是脑血管老化、阻塞导致氧气及养份无法输送至脑部而发生。