血涂片和骨髓图片制备

血涂片及骨髓涂片的制作与读片

潘志强

2006-3-30

实验准备

一．器材：

载玻片：每只动物一块

盖玻片：每只动物一块

滴管：4个

橡皮吸头：4个

中号镊子：4把

大剪刀：4把

眼科镊：4把

玻璃棒：4根

烧杯：1000 ml，2个

量筒：100ml、500 ml、1000 ml各一

蜡笔

棕色小口瓶

碾钵

载玻片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，用流水冲洗，再经清洁液浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入95%酒精浸泡约1小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边缘擦干备用。

二．试剂：

瑞氏染液240ml

瑞氏染料粉剂0.1g

纯甲醇（AR）60ml

将粉剂放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染料倒入洁净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为止。新配制的染液需密封保存，室温放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。

磷酸盐缓冲液

1%KH2PO4 30ml

1%Na2HPO4 20ml

，定容至1000ml。

甲醇

鸡蛋清：蒸馏水与鸡蛋清按1/1的比例稀释。

中性树胶：如果中性树胶过于粘稠，可将中性树胶与二甲苯按7/3的比例稀释。

二甲苯

实验步骤

一．涂片

（一）血液涂片的制作

（1）需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片）。

（2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。

（3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1保持30°角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。

（4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血液铺完血膜为止。

（5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。

（6）每只动物涂片一张。

（7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。

（8）置30min～1hr后较利于观察红细胞的形态。

注意事项：

●如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端2cm地方涂抹为宜。

●载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不

是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。

●如用力过猛白细胞容易破损。

（二）骨髓涂片的制作

用手术剪刀剪掉大腿部的肌肉，充分暴露股骨，再用大剪刀从上端剪断第2股骨，用中号

镊子夹股骨以挤出骨髓，如果骨髓不易取出，可用直头眼科镊插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于

一载玻片上，由于骨髓液的纤维蛋白原含量较高，易于凝固，可先在骨髓液内加5~10倍的稀

释后鸡蛋清，充分混匀，取1滴至另一载玻片上，涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并

迅速使之干燥。每只动物涂片一张。

二．染色

（一）血液涂片的染色

（1）将待染涂片平放于染色架上。

（2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1～3分钟。

（3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5～10分钟（白细胞数多或骨

髓标本时间应长一些，如20～30min）。

（4）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。

（5）再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。

（6）甩干或晾干玻片。

（7）封片。

（二）骨髓涂片的染色

同血液涂片。

附1：【染色原理】

1．瑞氏染料

是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。美蓝（又名亚甲蓝mehyleme blue）为四甲基硫堇染料，通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红（又名曙红eosin）通常为钠盐即伊红化钠。美蓝和伊红水溶液混合后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即瑞氏染料。瑞氏染料溶于甲醇后重新解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

2．细胞的染色

既有物理性的吸附作用又有化学的亲和作用，各种细胞和细胞的各种成分化学性质不同对各种染料的亲和力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以看见不同的色彩。

例如：

血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合染成粉红色称为——酸性物质。

细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色或紫色称为——碱性物质。 中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合，染紫红色称为——中性物质。

3．PH对细胞染色的影响

细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝，因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须清洁，配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗水应近中性，否则各种细胞染色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至造成错误。

附2：【血细胞发育规律】

血细胞在分化成熟过程中，其形态和大小的变化基本上有一个共同的规律：

1．胞体：随着血细胞的发育成熟，胞体由大逐渐变小，但巨核细胞系统则由小变大，原始粒细胞至早幼粒细胞也逐渐由小变大。

2．胞核

（1）大小：由大变小，但红细胞系统例外，成熟红细胞核消失。

（2）形状：圆形变为不规则形；粒细胞核呈分叶状；淋巴与浆细胞系统变化不大。

（3）染色质：细致、疏松逐渐变为粗糙、紧密。

（4）核膜：不明显变为明显；原淋巴细胞核膜最厚；原幼粒细胞核膜最薄；原始单核细胞介于两者之间。

（5）核仁：由有至无。清楚的核仁是原始和比较原始细胞的重要标记，呈淡蓝色，随着细胞的成熟而消失。

3．胞浆

（1）量：有少到多。

（2）颜色：深蓝到浅蓝，见于淋巴细胞与浆细胞。红细胞与粒细胞的胞浆各逐渐变成桔红和粉红色。（3）颗粒：一般从无到少并逐渐增多。粒细胞系统由少量的嗜天青颗粒逐渐代之以大量中性、嗜酸和嗜碱颗粒。

（4）胞核与胞浆体积之比：由大到小。

血涂片的观察方法

1．肉眼观察

在观察染色标本时，首先用肉眼对颜色进行观察。如果是正常的末梢血液则呈粉红色，白血病时白细胞高度增加或骨髓瘤的高γ球蛋白血症等情况下，血涂片会带有蓝色（如下图1-4-1），此时应意识到为异常标本。

2．高倍镜下观察

首先观察血涂片制备和染色是否良好、细胞分布是否均匀，同时可估计白细胞数量增减情况。最后对血涂片的体尾交界的区域进行观察，选择细胞分布均匀不重叠、标本不太厚容易观察的地方进行油镜观察（如图1-4-2）。

3．油镜下观察边移动视野边观察下列各项：

1）染色是否良好：如果血涂片染色确实不好，应重新染色。

2）观察红细胞形态：

（1）有无人为造成的变形，此外有时载玻片上的碱性物质的溶出（玻璃效应）会导致红细胞呈严重的棘形红细胞。如固定不良（固定液中含有水分时）会导致呈面包圈形红细胞，从而无法观察红细胞的形态。

（2）大小如何，是大细胞还是小细胞，有无红细胞大小不一。

（3）形态如何，注意有无畸形红细胞、球形红细胞、椭圆新红细胞、靶形红细胞、口形红细胞（唇形红细胞）、中心淡染色红细胞、棘形红细胞、胆状红细胞、皱缩红细胞、泪滴状红细胞、破碎红细胞及镰状红细胞等。

（4）是否有染色性的变化，有无嗜多色性红细胞，中心淡染红细胞。

（5）红细胞内有无异常。观察是否有嗜碱性点彩、豪-乔小体、卡波环状体红细胞、幼红细胞、帕彭海姆氏小体和疟原虫的出现。

（6）有关大小不一，畸形和嗜多色性，可分为轻度±、中度++、高度三个级别。

3）观察白细胞形态

（1）与红细胞比较，判断白细胞数是否正常，是否增加或减少。红细胞数/白细胞数约为500：1。

（2）有关白细胞的种类，要观察大量的白细胞后才可判断是否异常，然后计算白细胞的百分率。在日常检查中，一般只计算100个，但是发现异常或白细胞有增加时，尽量增加到200个。计算的白细胞数越多，白细胞百分率的可信度越高。

4）观察血小板形态

（1）通过与红细胞的比较，判断血小板数量是否正常，是增加或减少。正常情况下每15～20个红细胞中有1个血小板。

（2）注意大小的变化。

（3）观察未加抗凝剂而直接从毛细血管采集的标本时，要注意血小板的凝集性（观察由若干血小板凝集的现象。如果呈散在状，则怀疑为血小板无力症）。

（4）观察有无寄生虫，当白细胞减低或白细胞分类中单核细胞增多时，应注意观察红细胞内有无疟原虫。

实验结果

1．数码拍照

（1）依次在低倍（×10）、高倍（×40）、油镜（×100）下观察红细胞、白细胞以及血小板正常与异常的变化。

（2）用数码相机拍摄不同倍数下的细胞照片。

（3）输入电脑，比较分析各组间的差异。

红细胞呈桔红色，白细胞核紫色，嗜酸颗粒细胞鲜红色，嗜碱颗粒细胞蓝紫色，中性颗粒细胞紫或紫红色，淋巴细胞及单核细胞浆蓝灰色，血小板紫色。

2．注意事项：

1．染色涂片水冲洗后，应在空气中自然干燥或风干，不可用火烤干。

2．染液量要充足，勿使染液蒸发干燥。

3．细胞染色过浅或过深，待标本干燥后，立即用瑞氏染液或甲醇重新染色数秒或数分钟。4．保存过久的细胞涂片，细胞染色会退色，可重新染色。

5．新鲜涂片应立即染色。

参考文献

1．杜卓民主编.实用组织学技术.第二版,北京.人民卫生出版社,1998

2．徐叔云,卞如濂,陈修主编.药理实验方法学.第三版.北京.人民卫生出版社,2002

3．丛玉隆,乐家新,秦小玲,等主编.血细胞分析技术与临床.天津:天津科学技术出版社,2002.4

附3：血液涂片和骨髓涂片的观察内容

血液涂片：选择10个视野，每个视野内红细胞的数量大致相同，观察红细胞的排列、分布及形态，白细胞的数量及核的变化。

附4：各种典型血细胞的照片（油镜下）

1．血小板

2．红细胞

3．正常白细胞

进一步规范恶性血液病骨髓和外周血涂片血细胞形态学检查

进一步规范恶性血液病骨髓和外周血涂片血细胞形态学检查 中国医学科学院北京协和医科大学血液病医院肖志坚 1887年，Ehrlich（德国）建立血细胞染色法，开包了血细胞分析的新纪元。20世纪20年代，经May，G1emsa及Wright等对Ehrlich的血细胞染色法进行改良后，成功建立May-Grunwald和Wright血细胞染色法后，血细胞染色法才在临床得到广泛应用。20世纪30年代前后，逐渐形成现代骨髓象检查的基本方法和报告模式。1976年，法、美、英( French-American-British，FAB)协作组在推出对急性白血病，骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS)，慢性粒细胞白血病相关性疾病及慢性B，T淋巴细胞白血病等的诊断标准及修订标准时，对血细胞形态辨认和计数方法先后提出很多细化规定，从而提高了对恶性血液病诊断的准确性。2001年（第3版）和2008年（第4版）世界卫生组织(World Health Organization，WHO)颁布的<造血和淋巴组织肿瘤分类方案》中，对相关恶性血液疾病的诊断标准做出全面界定，成为国际统一的现行诊断标准。尽管2008年版以细胞形态学和组织病理学结合免疫表型、细胞／分子遗传学、生物学及临床特征的分类方法，取代FAB协作组对于恶性血液病诊断的分型标准，但外周血涂片的血细胞形态学分析依然是恶性血液病诊断、分型的基础。 这是因为，其一，关于外周血涂片的形态学描述术语的统一。最近欧洲白血病网(European leukmianet，ELN)形态学组发表的关于欧洲血细胞确认的共识报告，包括外周血涂片血细胞形态学使用的名词和确认的标准，在FAB协作组和WHO已有规定的基础上做了进一步细化，值得国内借鉴。其中，特别应引起重视的是血细胞形态学对于发育异常( dysplasia)的界定。发育异常是指血细胞形态学上异常发育，但并不与MDS同义，这一名词只能用于3个髓系系别，其他系别细胞表现相似形态学异常发育者（如淋巴细胞和浆细胞），应依照惯例冠以“不典型(atypical)”，“不典型”也适用于对肥大细胞形态学异常的描述。造血细胞发育异常可产生细胞学异常的红细胞（如异形红细胞或异常二形性红细胞组群）或异常血小板（如巨型，少颗粒或有异常颗粒）。然而，“发育异常”这一名词应限用于有核细胞；对正在接受生长因子治疗的患者，不能进行发育异常评估。

血涂片及骨髓涂片的制片与读片

血涂片及骨髓涂片的制作与读片 潘志强 2006-3-30 实验准备 一．器材： 载玻片：每只动物一块 盖玻片：每只动物一块 滴管：4个 橡皮吸头：4个 中号镊子：4把 大剪刀：4把 眼科镊：4把 玻璃棒：4根 烧杯：1000 ml，2个 量筒：100ml、500 ml、1000 ml各一 蜡笔 棕色小口瓶 碾钵 载玻片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，用流水冲洗，再经清洁液浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入95%酒精浸泡约1小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边缘擦干备用。 二．试剂： 瑞氏染液240ml 瑞氏染料粉剂0.1g 纯甲醇（AR）60ml 将粉剂放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染料倒入洁净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为止。新配制的染液需密封保存，室温放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。 磷酸盐缓冲液 1%KH2PO4 30ml 1%Na2HPO4 20ml ，定容至1000ml。 甲醇 鸡蛋清：蒸馏水与鸡蛋清按1/1的比例稀释。 中性树胶：如果中性树胶过于粘稠，可将中性树胶与二甲苯按7/3的比例稀释。 二甲苯

实验步骤 一．涂片 （一）血液涂片的制作 （1）需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片）。 （2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。 （3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1保持30°角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。 （4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血液铺完血膜为止。 （5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。 （6）每只动物涂片一张。 （7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。 （8）置30min～1hr后较利于观察红细胞的形态。 注意事项： ●如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端2cm地方涂抹为宜。 ●载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不 是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。 ●如用力过猛白细胞容易破损。 （二）骨髓涂片的制作 用手术剪刀剪掉大腿部的肌肉，充分暴露股骨，再用大剪刀从上端剪断第2股骨，用中号 镊子夹股骨以挤出骨髓，如果骨髓不易取出，可用直头眼科镊插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于 一载玻片上，由于骨髓液的纤维蛋白原含量较高，易于凝固，可先在骨髓液内加5~10倍的稀 释后鸡蛋清，充分混匀，取1滴至另一载玻片上，涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并 迅速使之干燥。每只动物涂片一张。 二．染色 （一）血液涂片的染色 （1）将待染涂片平放于染色架上。 （2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1～3分钟。 （3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5～10分钟（白细胞数多或骨 髓标本时间应长一些，如20～30min）。 （4）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。 （5）再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。 （6）甩干或晾干玻片。 （7）封片。 （二）骨髓涂片的染色 同血液涂片。

临床血液学骨髓报告单样本

临床血液学骨髓报告单样本 一、缺铁性贫血（IDA） 骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生活跃，粒系占35.5%，红系占54.5%，粒红比值为1.54:1。 3、红系增生明显活跃，以中晚幼红增生为主，晚幼红增生尤其明显，细胞体积小，胞浆蓝染，胞浆量少，边缘不整齐，成熟红细胞中心淡染区扩大，可见嗜多色性红细胞。 4、粒系增生活跃，各阶段比值形态无异常改变。 5、淋巴系统正常，均为成熟淋巴。 6、单核细胞正常。 7、其他非造血细胞未见。 8巨核细胞易见，血小板成群分布，形态正常。 9、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 血片：1、涂片、染色可，白细胞分布正常。 2、白细胞分类正常，成熟红细胞同骨髓样改变。 3、血小板易见，三五成群分布，形态正常。 4、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 组化染色：铁染色：内铁（一），外铁（一） 网织红计数：正常 结合骨髓象、血象、组化染色，提示为缺铁性贫血。 二、再生障碍性贫血（AA） 骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生减低，粒系占26.8%，红系占10%，粒红比值为2.68:1。 3、红系增生减低，幼稚红细胞形态无异常改变，成熟红细胞形态正常。 4、粒系增生减低，各阶段幼稚粒细胞形态正常。 5、淋巴系统比值相对升高，均为成熟淋巴。 6、单核细胞正常。 7、其他非造血细胞可见。 8巨核细胞未见，血小板分布减少，体积小。 9、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 血片：1、涂片、染色可，白细胞分布减少。 2、白细胞分类正常，成熟红细胞形态正常。 3、血小板分布减少，呈散在单个分布。 4、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 组化染色：铁染色：内铁升高，外铁正常 网织红计数：减少 结合骨髓象、血象、组化染色，提示为再生障碍性贫血。 三、急性髓细胞白血病部分成熟型（M2a型） 骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生极度活跃，粒系占60.8%，红系占13.2%，粒红比值为4.61:1。

实验四 血涂片的制备与染色

实验四血涂片的制备与染色 【目的】掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。 【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。 【器材】 1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。 2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm 宽度的推片。 3．吸耳球。 4．显微镜。 5．酒精灯或Bunsen灯。 6．采血针。 7．注射器和针头。 【试剂】 1．瑞氏（Wright）染液 （1）Ⅰ液：包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油密闭保存。 （2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。 2．吉姆萨染液包含吉姆萨染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。 3．瑞-吉复合染液 （1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。将瑞氏染料和吉姆萨染料置洁净研钵中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各摇3min，共5d，以后存放1周即能使用。 （2）Ⅱ液：即磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）。包含无水磷酸二氢钾6.64g、无水磷酸氢二钠2.56g，加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml。 【标本】 EDTA抗凝静脉血或末梢血。 【操作】 1．采血 （1）静脉采血法：用EDTA·K2抗凝1～2h内的标本，使用玻棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血，直径约4mm。 （2）皮肤采血法：选择第三、四手指，并先采红细胞、白细胞计数，再采血1滴置洁净玻片上用于血涂片制备。

骨髓涂片结合活检对血液病诊断的价值评估

骨髓涂片结合活检对血液病诊断的价值评估 目的通过在诊断血液病中采取的骨髓涂片及骨髓活检两种方式各自的优缺点进行探讨，进一步指出骨髓涂片结合活检在诊断血液病中的价值。方法选取2012年1月～2013年1月120例血液病患者的临床资料，分析该120例患者中采取骨髓涂片和活检诊断与最终诊断的负荷率。结果采用骨髓涂片与活检相结合的方法进行诊断，其平均诊断符合率为99.38%。具有统计学意义（P＜0.05）。结论在诊断血液病过程中，骨髓活检可是充当骨髓涂片的补充，将两者有效的结合起来在提高诊断符合率上有着非常重要的价值，值得临床推广应用。 标签：血液病诊断；骨髓涂片；骨髓活检；价值评估 在诊断血液病中最常用传统方法之一就是骨髓穿刺涂片法，但是在临床中会受到骨髓增生活跃或纤维组织增多的影响，而导致骨髓穿刺发生干抽或者稀释的情况，从而无法获取理想的标本，对疾病的正确诊断率有所降低[1] 。然而将骨髓涂片同活检有效的结合起来，进行同步分析就可以弥补骨髓涂片检查中存在的不足，能够将骨髓造血细胞的增生程度以及结构变化情况真是的反映出来，有效的提高了诊断血液病的正确率，具有较高的临床价值。 1资料与方法 1.1一般资料随机选取自2012年1月～2013年1月120例血液病患者，其中有66例男性患者，54例女性患者，年龄在10～73岁，平均年龄（47.3±5.6）岁。所有病例均采取骨髓涂片诊断、活检诊断以及涂片结合活检三种方式进行诊断。最终取得临床诊断，主要包括：多发性骨髓瘤8例，骨髓增生异常综合征46例，急性白血病30例，再生障碍性贫血18例，慢性骨髓增殖性疾病15例，骨髓转移瘤3例。且所有诊断都符合现行的血液病诊断标准[2]。 1.2方法对该120例6类血液病患者同时采取骨髓涂片诊断、骨髓活检诊断以及骨髓涂片结合活检诊断进行诊断，采用回顾性方法来分析此120例患者诊断的符合情况，并对诊断符合率作出针对性对比。 1.3统计学处理采取SPSS15.0统计软件对所得数据进行处理，采取骨髓涂片结合活检法的符合率明显高于其余两种方式（P＜0.05），具有差异统计学意义。 2结果 观察结果显示，在120例血液病患者中，骨髓涂片诊断相符的为98例，所占比例为81.67%，骨髓活检符合诊断的数量为112例，所占比例为93.33%，骨髓涂片与活检相结合的确诊数量为119，所占比例为99.16%，见表1。 通过此表可知，骨髓结合活检法在诊断血液病上确诊最高，三种诊断方式显示差异具有统计学意义（P＜0.05）。

正常骨髓象

正常骨髓象 由于正常骨髓内各细胞系及其各阶段百分率范围较大，因此凡分类符合下列情况者均可视为正常骨髓象。 1、骨髓增生活跃。 2、粒细胞系约占有核细胞的40%～60%，其中原粒细胞<2%，早幼粒细胞<5%、中、晚幼粒细胞各<15%，杆状核粒细胞多于分叶核细胞，嗜酸粒细胞一般<5%，嗜碱粒细胞<1%，细胞大小、形态、染色基本正常。 3、幼红细胞总百分率约占有核细胞的20%左右，其中原红细胞<1%，早幼红细胞<5%，中、晚助红细胞约各占10%，细胞形态、染色基本正常。 4、粒、红比值正常约为2～4:1。 5、淋巴细胞百分率约为20%(小儿可达40%)，均为成熟淋巴细胞。 6、单核细胞一般<4%，浆细胞<3%，均为成熟阶段者。 7、巨核细胞系通常于1.5×3cm2骨髓片膜上可见巨核细胞7～35个，多为成熟型。 8、可见少量网状细胞、内皮细胞、组织嗜碱细胞等。虽然它们各占百分率很低，但却均为骨髓成分的标志. 9、核分裂细胞不易见到，仅约为1‰。 10、成熟红细胞大小、形态、染色大致正常。

二、 1、骨髓有核细胞计数：参考值为10——10*109/L。 （1）增多：见于骨髓增生时（如白血病、溶血性贫血、脾功能亢进等）。 （2）减少：见于造血组织功能减退（如再生障碍性贫血等）。 2、骨髓增生程度，分五级： （1）增生极度活跃：成熟红细胞有核细胞的比例为2：1，常见于各类白血病。 （2）增生明显活跃：成熟红细胞有核细胞的比例为5：1——10：1，见于增生性贫血和各类白血病。 （3）增生活跃：成熟红细胞与有核细胞的比例为27：1，见于正常骨髓及某些贫血。 （4）增生减低：成熟红细胞与有核细胞的比例为90：1，见于再生障碍性贫血。 （5）增生极度减低：成熟红细胞与有核细胞的比例为200：1，见于再生障碍性贫血或取材不良。 3、粒细胞系统与有核红细胞的比例：参考值为2：1——5：1。 4、巨核细胞计数：参考值为单位面积（1.5*3cm），有7——35个巨核细胞。 （1）增高：见于原发性血小板增多症，真性红细胞增多症，慢性粒细胞白血病，骨髓纤维化症，脾功能亢进和大出血后。 （2）减低：见于再生障碍性贫血，急性白血病。

临床血液学检验骨髓报告单(样例)

临床血液学检验骨髓报告单样本 一、缺铁性贫血(IDA) 骨髓片： 1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生活跃，粒系占35.5%，红系占54.5%，粒红比值为1.54:1。 3、红系增生明显活跃，以中晚幼红增生为主，晚幼红增生尤其明显，细胞体积小， 胞浆蓝染，胞浆量少，边缘不整齐，成熟红细胞中心淡染区扩大，可见嗜多色性 红细胞。 4、粒系增生活跃，各阶段比值形态无异常改变。 5、淋巴系统正常，均为成熟淋巴。 6、单核细胞正常。 7、其他非造血细胞未见。 8、巨核细胞易见，血小板成群分布，形态正常。 9、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 血片： 1、涂片、染色可，白细胞分布正常。 2、白细胞分类正常，成熟红细胞同骨髓样改变。 3、血小板易见，三五成群分布，形态正常。 4、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 组化染色：铁染色：内铁（—），外铁（—） 网织红计数：正常 结合骨髓象、血象、组化染色，提示为缺铁性贫血。 二、再生障碍性贫血（AA） 骨髓片： 1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生减低，粒系占26.8%，红系占10%，粒红比值为2.68:1。 3、红系增生减低，幼稚红细胞形态无异常改变，成熟红细胞形态正常。 4、粒系增生减低，各阶段幼稚粒细胞形态正常。 5、淋巴系统比值相对升高，均为成熟淋巴。 6、单核细胞正常。 7、其他非造血细胞可见。 8、巨核细胞未见，血小板分布减少，体积小。 9、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 血片： 1、涂片、染色可，白细胞分布减少。 2、白细胞分类正常，成熟红细胞形态正常。 3、血小板分布减少，呈散在单个分布。 4、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 组化染色：铁染色：内铁升高，外铁正常 网织红计数：减少 结合骨髓象、血象、组化染色，提示为再生障碍性贫血。 三、急性髓细胞白血病部分成熟型（M2a型） 骨髓片：

血涂片制作

血涂片制作 将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上，经染色后在显微镜下检查，这是血细胞形态学检查的基本方法，临床应用很广，特别是对各种血液病的形态学诊断很有价值。但是，如果血徐片制备不良，染色不佳，常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难，甚至导致错误的结论。如血膜过厚，细胞重叠缩小；血膜太薄，白细胞多集中于边缘。因此，制备厚薄适宜、分布均匀的血涂片是血液学检验的基本技术之一。 一、载玻片的清洁 新载玻片上常有游离碱质，必须用约lmol／L HCI浸泡24h 后，再用清水彻底冲洗，干燥备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或合成洗涤剂的清水中煮沸20min，再用热水将肥皂和血膜洗净，用清水反复冲洗，干燥备用。如急用载玻片，可将其置0、9乙醇中浸泡lh，用蒸馏水洗净后，擦干或烘干备用。使用载玻片时，只能手持玻片边缘，切勿用手触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。 二、制作血涂片的标本 血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备，也可由

EDTA抗凝血制备。EDTA抗凝血中，钙离子被螫合后，能阻止血小板聚集，推片时血小板均匀平铺，显微镜下易于对血小板进行观察评价。但有时可观察到因EDTA引起的红细胞皱缩及白细胞丛集现象。但随着血液分析仪的逐步普及，血标本多为EDTA抗凝血，除作全血细细胞计数及多参数分析外，制备血涂片也非常方便，虽有上述弊端，但显微镜下易于发现。 三、血涂片的制备 血涂片的制备方法很多，如手工推片法、自动推片法、载（盖）玻片压拉法、旋转涂片法、棕黄层（buffy－coat）涂片法及厚血膜涂片法等，现介绍如下。 1、手工推片法取血标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持25～30o的平面夹角，平稳地将血向前推动，血液即在载玻片上形成一薄层血膜。将制成的血膜在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。 一张良好的涂片，要求厚薄适宜，头体尾分明，边缘整齐，两侧应留有空隙。玻片的一端应留有贴标签的地方。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时的速度有关。血滴大、角度大、速度快，则血膜厚；反之则血膜薄。血膜分布不匀，主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁

实验一 血涂片的制备

实验二、血涂片的制备和血细胞的观察 目的要求 1.掌握血涂片的的制备方法 2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态 基本原理 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。 实验用品 1.器材：医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片； 2.试剂：Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。 方法与步骤 1．采血采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核白细胞较多）。 2．涂片挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以45°为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（图2-2）。推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀，初学者可把玻片放在桌上操作。 3．染色待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色1～3 min。然后滴加等量的缓冲液（pH6.4）或蒸馏水，使其与染液均匀混合，静置2～5 min。用蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干。 4．镜检显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核，淡红色，缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。白细胞数目少，为圆形。 颗粒白细胞（1）嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5叶，直径10-12微米；（2）嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色，直径10-15微米；（3）嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色，直径10-11微米。 无颗粒白细胞（1）淋巴细胞：可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成深紫色。周围仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较大，核圆形。直径6-8微米。（2）单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20微米。 血小板为不规则小体，直径2 - 3微米。其周围部分浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒，聚集成群。 实验报告内容 绘制人血涂片镜下图

骨髓象的分析常识

骨髓象的分析常识 一、骨髓增生程度意义按增生程度分5级： Ⅰ级：增生极度活跃，主要见于急性和慢性白血病，偶见某些增生性贫血。 Ⅱ级：增生明显活跃，常见于各种增生性贫血，如缺铁性贫血、巨幼红细胞性贫血、溶血性贫血等，或某些白血病。 Ⅲ级：增生活跃，见于正常人骨髓象，某些代偿增生较差的贫血，也见于因骨髓取材时受部分血液稀释。 Ⅳ级：增生减低，常见于再生障碍性贫血及骨髓被部分血液稀释。 Ⅴ级：增生极度减低，见于典型再生障碍性贫血。 二、粒细胞与幼红细胞比例（粒/红比例）意义 比例增加见于：⑴粒系细胞增多，如急性或慢性粒细胞性白血病、感染尤其是化脓性感染、类白血病反应等⑵红系细胞生成抑制，如纯红再障。 比例正常见于：⑴正常人骨髓；⑵两系细胞同时或成比例增多或减少，如再生障碍性贫血、骨髓纤维化、内髓瘤、骨髓转移癌等。 比例减低见于：⑴粒系细胞减少，如粒细胞减少或缺乏症、化疗、放射病等；⑵红系细胞增多，如溶血性贫血、缺铁性贫血、巨幼红细胞性贫血、真性红细胞增多症、脾功能亢进等。 三、粒系细胞改变 粒系细胞增多意义 1．以原粒细胞增多为主，见于：⑴急性粒细胞性白血病，常伴有早幼粒细胞增多，⑵慢性粒细胞性白血病急性变，常伴有粒系的细胞核和细胞质发育不平衡及嗜碱性粒细胞增多。2．以早幼粒细胞增多为主，见于：⑴急性粒细胞性白血病；⑵粒细胞缺乏的恢复期。3．以中性中幼粒细胞增多为主，见于：⑴慢性粒细胞性白血病，可伴核、质发育不平衡及嗜碱性粒细胞增多；⑵粒细胞性类白血病反应，病因解除后恢复正常。 4．以中性晚幼粒、杆状核粒细胞增多为主，见于：⑴慢性粒细胞性白血病，常伴嗜酸、嗜碱粒细胞增多；⑵类白血病反应；⑶代谢障碍，如尿毒症、糖尿病酮症；⑷中毒，包括药物、毒物及异种蛋白注射；⑸其他，如严重创伤、急性失血、大手术后等。 5．嗜酸性粒细胞增多，见于：⑴某些血液病，如慢性粒细胞性白血病、嗜酸性粒细胞白血病、淋巴瘤等；⑵寄生虫感染；⑶某些变态反应性疾病及皮肤病；⑷家族性嗜酸性粒细胞增多症。 6．嗜碱性粒细胞增多，见于：⑴慢性粒细胞性白血病；⑵嗜碱性粒细胞白血病；⑶放射反应。

临床血液学骨髓报告单样本

临床血液学骨髓报告单样本 一、缺铁性贫血(IDA) 骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生活跃，粒系占35.5%，红系占54.5%，粒红比值为1.54:1。 3、红系增生明显活跃，以中晚幼红增生为主，晚幼红增生尤其明显，细胞体积小，胞浆蓝染，胞浆量少，边缘不整齐，成熟红细胞中心淡染区扩大，可见嗜多色性红细胞。 4、粒系增生活跃，各阶段比值形态无异常改变。 5、淋巴系统正常，均为成熟淋巴。 6、单核细胞正常。 7、其他非造血细胞未见。 8、巨核细胞易见，血小板成群分布，形态正常。 9、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 血片：1、涂片、染色可，白细胞分布正常。 2、白细胞分类正常，成熟红细胞同骨髓样改变。 3、血小板易见，三五成群分布，形态正常。 4、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 组化染色：铁染色：内铁（—），外铁（—） 网织红计数：正常 结合骨髓象、血象、组化染色，提示为缺铁性贫血。 二、再生障碍性贫血（AA） 骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生减低，粒系占26.8%，红系占10%，粒红比值为2.68:1。 3、红系增生减低，幼稚红细胞形态无异常改变，成熟红细胞形态正常。 4、粒系增生减低，各阶段幼稚粒细胞形态正常。 5、淋巴系统比值相对升高，均为成熟淋巴。 6、单核细胞正常。 7、其他非造血细胞可见。 8、巨核细胞未见，血小板分布减少，体积小。 9、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 血片：1、涂片、染色可，白细胞分布减少。 2、白细胞分类正常，成熟红细胞形态正常。 3、血小板分布减少，呈散在单个分布。 4、未见血液寄生虫及其他异常细胞。 组化染色：铁染色：内铁升高，外铁正常 网织红计数：减少 结合骨髓象、血象、组化染色，提示为再生障碍性贫血。 三、急性髓细胞白血病部分成熟型（M2a型） 骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。 2、骨髓有核细胞增生极度活跃，粒系占60.8%，红系占13.2%，粒红比值为4.61:1。 3、粒系极度增生，比值明显增大，以原粒增生为主，原粒38.9%，NFC86.8%，白

实验 血涂片的制作与血细胞的观察

实验血涂片的制作与血细胞的观察 一、引言 血涂片显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对各种血液病的诊断有很大价值，但血涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论，因此，制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。 二、实验目的 掌握血涂片的制作，观察血细胞的形态及在不同环境下的反应。 三、实验器材与试剂 器材：显微镜、医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、盖玻片等。 试剂：瑞氏染液、0.9%Nacl溶液、蒸馏水等。 四、实验步骤 1、消毒与采血 先按摩采血部位（人的指腹），使血流通畅，采血前用70%酒精消毒人的指腹，干燥后用采血针刺破指腹，使血液自然流出（第一滴血不要）。取干净载玻片，让血滴在离玻片一端中4-5mm处，注意手指持载玻片的边缘，不触电及表面，也不能使载玻片接触取血部位的皮肤。 2、推片 取一块边缘光滑的载玻片做推片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散在推片与载玻片呈30-40o角，向另一端平稳地推出（图1）。涂片推好后，迅速在空气中摇，使之自然干燥。 图1 推片示意图 3、染色 用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染色液（伊红-亚甲基蓝）滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染30秒。加等量蒸馏水与染色液混合后再染5分钟。最后用蒸馏水把染色液洗掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。 4、封片 经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶封片保存。 五、结果观察 显微镜下观察血涂片结果如图2所示。血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。

1、红细胞： 小而圆，没有细胞核，血涂片中最多，常被染成淡红色，细胞的边缘厚，中间薄，使细胞边缘的颜色比中间的深。 2、白细胞： 分为有粒白细胞和无粒白细胞，有粒白细胞包括嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞和嗜中性白细胞；无粒白细胞包括淋巴细胞和单核细胞。 （1）嗜酸性白细胞： 数量较少，但在血涂片中可以找到。细胞质中存在粗大的嗜酸性颗粒，胞质常被染成红色或玫瑰花色，细胞核分叶形，染成紫红色。 （2）嗜碱性白细胞： 数量最少，在血涂片中很难找到。细胞质中存在粗大的嗜碱性颗粒，胞质常被染成兰紫色，细胞核分叶形，染色较深，但常被粗大的兰紫色颗粒掩盖。 （3）嗜中性白细胞： 在有粒白细胞中，它的数量最多，很容易找到。细胞质染成淡红色，胞质内含有细小的颗粒，一般不易看清，细胞核为兰紫色，核分杆状、蹄形和分叶形。 （4）淋巴细胞： 在白细胞中数目是最多的，大小不等，可分为大淋巴细胞、中淋巴细胞、小淋巴细胞。大淋巴细胞较少，占中小淋巴细胞的1/4～1/18。细胞质所占的比例较小，但随细胞体积增大而相应增多，核周围细胞质，染成天兰色，细胞核大，圆形，染成紫兰色。 （5）单核细胞： 数目不多，是血细胞中最大的细胞。核为肾形或马蹄形，颜色比淋巴细胞较淡，细胞质为淡灰兰色。 3、血小板： 为不规则的细胞质小块或碎片，形状象雪花，在血小板中有细小的紫兰色颗粒。血小板常聚集在红细胞之间（注意：在观察过程中注意染料、渣子和细胞及血小板等的区别）。 图2 血涂片中血细胞观察结果 五、注意事项： 1、载玻片的清洗：新玻片有游离碱质，因此应用10%盐酸浸泡24小时，然后再清水和蒸 馏水清洗。2、使用玻璃片时只能手持边缘，切忌触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥，无油腻。3、血涂片制好后，立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。3、血

血涂片的制备及染色

血涂片的制备及染色 摘要 血涂片是世界上使用最广泛的实验室检测方法之一，应用于疾病的筛查，发现，诊断以及监控。本文提供了在临床检验中制备及染色出优质血涂片的一种参考。虽然在如何人工制备血涂片上仍存在某些“工艺”，但是已尽可能采用了客观标准使得临床实验室能准备和染色出优质血片。本参考中包含固定和染色手工工艺中的问题解决方法。 关键词：血涂片制备，染色 前言 血涂片是世界上使用最广泛和最频繁的检测方法之一，但似乎没有关于血涂片制备要求，程序及潜在问题等的综合性文献。虽然血涂片的制备是个简单的过程，但作为一种检测方法，有很多因素可导致检测失败或比其预期低效。本文应国际血液学标准化委员会的请求所写，并作为实验室血细胞计数板的指导方针。本文旨在提供临床检验中用于形态评价的血涂片制备及其染色的指导和标准化。显微镜分析过程和解释不在本文的范围内。 列举的方法中包括最先进的技术以及发展中国家实验室的适用方法。发展中国家不具备最高水平的指标，但应在所有条件下可达到其规定的指标，以确保诊断测试的质量，以免降低病人护理。这点尤其重要，因为无论对于病例发现，诊断或疾病监测，血涂片显微镜分析所得数据通常在临床情况中起最终和决定性的作用。 为了方便参考使用，本文采用一种特殊的格式来描述涉及血涂片制备和染色的各个步骤。 血涂片制备 载玻片 载玻片应由最高纯度的耐腐蚀玻璃制成；通常不可接受其他材料如塑料。典型玻片为75×25mm，约有1mm厚度，必须平整，无扭曲和波痕，而且必须澄清无色（“水白，无色透明”）。荧光显微镜检测必须使用无自发荧光的玻片。 最好使用预洗过的载玻片，但至少实验室必须确保载玻片无划痕，干净无尘、绒线，油脂（指纹），而且必须干燥。这就意味着在潮湿环境中，载玻片必须能抗水。在所处密闭容器开启后，载玻片必须保存于干燥器或装有无水（甲基）乙醇或乙醇与丙酮混合液（3:1）的容器内直至被使用。 载玻片需一直保存于密闭容器中，只能在立即使用前开启。载玻片可以是平面的或有磨砂或涂层面以供书写。与有直角边缘的载玻片相比，圆边或有破口的载玻片使用上更安全，降低了皮肤和手套割破或刺破的几率。 载玻片的清洗 脏的载玻片需浸透在60℃的清洁剂中清洗15-20分钟，然后用热水冲洗并干燥。新载玻片需置于重铬酸钾洗涤液中（20g Cr 2 K 2 O 7 溶于100mL水并加入900mL浓硫酸）48小时。之后用流动自来水彻底冲洗。载玻片应保存于95%甲醇中，使用前小心擦拭干净并干燥。 血涂片制备方法 典型的血涂片制备方法是：人工（楔入，盖玻片），半自动（楔入，旋转），以及自动（楔入）。 楔入法（“推”） 人工、半自动及自动化环境中常用此法。若正确使用楔入法，可有足够大的区域供显微镜检测使用：这种区域中所有的细胞彼此几乎不接触或分离（单层部分）。对于显微镜检查来说，涂片上距推动起始处最远的部分会很薄（导致产生形态改变），然而距推动起始处邻近的部分会很厚。 自动化装置能够制得优质的血涂片，比通过人工方法得到的血涂片相比更具一致性。楔入法制备的主要问题是不同类型细胞的不均匀分布。特别是单核细胞（以及其他大的白细胞）被推向铺展膜（“羽状”边缘）底部以及两侧。与以单克隆抗体为基础的流式细胞术分类计数仪相比，

正常骨髓象

正常骨髓象 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998

正常骨髓象 由于正常骨髓内各细胞系及其各阶段百分率范围较大，因此凡分类符合下列情况者均可视为正常骨髓象。 1、骨髓增生活跃。 2、粒细胞系约占有核细胞的40%～60%，其中原粒细胞<2%，早幼粒细胞 <5%、中、晚幼粒细胞各<15%，杆状核粒细胞多于分叶核细胞，嗜酸粒细胞一般<5%，嗜碱粒细胞<1%，细胞大小、形态、染色基本正常。 3、幼红细胞总百分率约占有核细胞的20%左右，其中原红细胞 <1%，早幼红细胞<5%，中、晚助红细胞约各占10%，细胞形态、染色基本正常。 4、粒、红比值正常约为2～4:1。 5、淋巴细胞百分率约为20%(小儿可达40%)，均为成熟淋巴细胞。 6、单核细胞一般<4%，浆细胞<3%，均为成熟阶段者。 7、巨核细胞系通常于×3cm2骨髓片膜上可见巨核细胞7～35个，多为成熟型。 8、可见少量网状细胞、内皮细胞、组织嗜碱细胞等。虽然它们各占百分率很低，但却均为骨髓成分的标志. 9、核分裂细胞不易见到，仅约为1‰。 10、成熟红细胞大小、形态、染色大致正常。 二、

1、骨髓有核细胞计数：参考值为10——10*109/L。 （1）增多：见于骨髓增生时（如白血病、溶血性贫血、脾功能亢进等）。 （2）减少：见于造血组织功能减退（如再生障碍性贫血等）。 2、骨髓增生程度，分五级： （1）增生极度活跃：成熟红细胞有核细胞的比例为2：1，常见于各类白血病。 （2）增生明显活跃：成熟红细胞有核细胞的比例为5：1——10：1，见于增生性贫血和各类白血病。 （3）增生活跃：成熟红细胞与有核细胞的比例为27：1，见于正常骨髓及某些贫血。 （4）增生减低：成熟红细胞与有核细胞的比例为90：1，见于再生障碍性贫血。 （5）增生极度减低：成熟红细胞与有核细胞的比例为200：1，见于再生障碍性贫血或取材不良。 3、粒细胞系统与有核红细胞的比例：参考值为2：1——5：1。 4、巨核细胞计数：参考值为单位面积（*3cm），有7——35个巨核细胞。 （1）增高：见于原发性血小板增多症，真性红细胞增多症，慢性粒细胞白血病，骨髓纤维化症，脾功能亢进和大出血后。 （2）减低：见于再生障碍性贫血，急性白血病。

血涂片与分类流程

血涂片与分类流程Revised on November 25, 2020

血涂片和分类计数的质量控制流程1、目的： 规范血涂片评价和分类计数的质量控制管理流程，确保检验质量。 2、适用范围： 检验科门诊化验室、细胞室 3、职责： 检验科门诊化验室、细菌室检验人员均须熟知并遵守本程序。 4、质量控制流程： 血涂片的制备 玻片：保持中性、洁净、无油腻 制备血涂片：血涂片外观应头、体、尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血膜外观应厚薄适宜。血膜厚度、长度和血滴的大小、推片与玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。一般血滴大、角度大、推片速度快则血膜厚；反之，则血膜薄。血细胞比容低于正常时，血液粘度高，宜保持较小的角度，可得满意结果；相反，血细胞比容低于正常时，血液较稀，则需用较大的角度和较快的推片速度，才可得满意的血涂片。良好的血涂片的“标准”为血膜由厚到薄逐渐过渡。 染色：血涂片应在1h内完成染色，或在1h内用无水甲醇固定后染色。 血涂片分类计数质量控制流程

血涂片白细胞分类计数方法：是有血涂片经瑞氏染色后，在油镜下根据白细胞形态特点逐个分类计数（一般计数100-200个白细胞），并观察其形态变化，然后求各种白细胞的比值。 血涂片分类计数注意事项：血涂片进行白细胞分类科稳定6-8h，但2h后粒细胞形态即有变化，故需要镜检分类应及早分血片：正确判断是否需要人工显微镜复查，凡出现以下情况之一者，都应当进行显微镜复查。（1）血细胞计数结果明显异常（WBC<×109/L，WBC>×109/L，Hb<50g/L，PLT<50×109/L）。（2）血细胞直方图异常：红细胞、白细胞、血小板任何一项直方图的峰值出现偏移。（3）出现警示信号。这需要我们操作人员在日常生活中严格执行，注意分析检验结果各参数之间的关系，才能对异常结果做出正确判断。加强与医护人员的联系：对在检测中出现的异常和阳性结果，要及时主动和临床医生取得联系，与临床资料进行相关性分析，对有疑问的做到合理解释。 1 、目的：

常见血液病骨髓象诊断要点

常见血液病骨髓象诊断要点 F3.1 缺铁性贫血(IDA) 成熟红细胞体积偏小，幼红细胞呈现核固缩和胞浆量少及着色偏蓝等核老、浆幼的核浆发育不平衡现象。外铁阴性，含内铁细胞减少。此类贫血最常见，临床上常有胃病、痔疮和月经多等病史。 F3.2 巨幼细胞性贫血(MA) 成熟红细胞体积偏大，可见巨大的红细胞，幼稚红细胞常呈核染色质疏松、浆量增多、着色偏红等核幼、浆老的核浆发育不平衡现象。且可找到巨大晚幼粒和杆状核粒细胞，分叶核粒细胞分叶也偏多。巨核细胞核分叶增多，但不出现多个小核的巨核细胞，巨核细胞浆内易见由核染色质脱落下来的核小体(该类细胞约占巨核细胞20-30％)。临床上常有胃肠手术、营养不良和妊娠等情况。外周血象常出现3系减少。 F3.3 溶血性贫血(HA) 骨髓幼红细胞显著增生，其总比例常大于50％，但以中、晚幼红细胞增生为主，并可见球形红细胞、椭圆形红细胞等特殊形态的变化。此病临床资料对诊断尤为重要，病人常出现黄疽、尿胆原和间接胆红素增高，网织红细胞常大于5％。急性溶血时，外周血象可出现幼红细胞。抗人球蛋白试验和酸溶血试验常出现阳性。

F3.4 再生障碍性贫血(AA) 骨髓小粒呈空架状，脂肪球增多。粒、红、巨三系细胞减少，其中以巨核细胞减少更为明显，成熟淋巴细胞比例相对增高，网状细胞、浆细胞、嗜碱组织细胞常偏多。血象3系减少，但脾脏不肿大。 F3.5 骨髓增生异常综合征(MDS) 红细胞可见多核、核碎裂及巨幼样变，成熟粒细胞分叶减少(或增多)，粒细胞胞浆颗粒减少或无或过大而多，核浆发育不平衡。易见多个小核的颗粒巨核细胞和微小型巨核细胞。此类病人外周血象易见幼稚红细胞和幼稚粒细胞，成熟单核细胞常增多。临床抗贫血治疗效果差。诊断MDS后，按骨髓和外周血象中原始细胞多少，有否环状铁粒幼红细胞可分为难治性贫血(RA)、难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞增多(RAS)、伴原始细胞增多的难治性贫血(RAEB)、转化中原始细胞片增多的难治性贫血(RAEB-T)4型，至于慢性粒单细胞性白血病(CMML)已属白血病可不再列入MDS。 RA:外周血原始细胞无或＜1％，骨髓原始细胞＜5％。 RAS:同RA，但骨髓中环形铁粒幼细胞，为铁粒细胞的15％以上。 RAEB:外周血原始细胞＜5％，骨髓原始细胞5-20％。 RAEB-T:外周血原始细胞＞5％，骨髓原始细胞20-30％。F3.6 纯红细胞再生障碍性贫血（PRAA）

血涂片的制备

实验二血涂片的制备 Preparation of Blood Smear 实验原理 使用推片将血液在载玻片制成血膜。 试剂器材 载玻片（清洁、干燥、无尘、无油脂、25cm×75cm，厚度0.8mm~1.2mm）、推片。 操作步骤 （1）采血静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴（约0.05ml）抗凝血，如果使用手指采血则直接用洁净玻片蘸 1 滴血。 （2）推片左手平执载玻片，或放在类似桌子等平 坦地方，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿 推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈 30。~45。角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血 涂片（图1-6），血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。 （3）干燥将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅 速干燥。天气寒冷或潮湿时，应于37 ℃温箱中保温促 干，以免细胞变形缩小。 图1-6 推片（4）标记在载玻片的一端用记号笔编号。 注意事项 1．要制备良好的血细胞涂片，玻片必须干净。新购置的载玻片常带有游离碱质，必须用约1mol/L HCl浸泡24h后，再用清水彻底冲洗，擦干后备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20min，洗净，再用清水反复冲洗，蒸馏水最后浸洗后擦干备用。边缘破碎、玻面有划痕的玻片不能再用。使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。 2．最好使用非抗凝血制备血涂片，也可用EDTA抗凝血制备。使用抗凝血标本时，应充分混匀后再涂片。抗凝血标本应在采集后4h内制备血涂片，时间过长可引起中性粒细胞和单核细胞的形态学改变。制片前标本不宜冷藏。涂片的厚度、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞比容有关。一般认为血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。故针对不同病人应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的病人应采用小血滴、小角度、慢推；而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。 3．血膜应厚薄均匀适度，头尾及两侧有一定的空隙。如血膜面积太小，可观察的部分会受到局限，故应以在离开载玻片另一端2cm的地方结束涂抹为宜。一些体积特大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此画线应注意保存血涂片尾部细胞。 4．血涂片必须充分干燥后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。 实验评价 血涂片制备是血液学检查的重要基本技术之一。一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。 血涂片制备时手工推片法用血量少、操作简单，是最广泛应用的方法。除可

血液病骨髓MRI 表现

血液病骨髓MRI 表现 发表时间：2016-07-18T14:14:28.960Z 来源：《中华临床医师杂志》(电子版)2016年4月第7期作者：朱旭瑶[导读] 血液和造血系统疾病的诊断与疗效观察主要依靠骨髓穿刺涂片或( 和) 穿刺活检。 朱旭瑶 【摘要】目的探讨血液和造血系统疾病的MRI 表现。方法选择经骨髓穿刺或活检证实的血液和造血系统疾病13 例, 其中急性白血病( acute leukemia , AL) 7 例, 慢性淋巴细胞白血病( chronic lymphocyt iceukemia , CLL) 1 例, 非霍奇金淋巴瘤( non- Hodgkin lymphoma , NHL) 2 例, 巨幼细胞性贫血2 例, 原发性血小板增多症( essential thrombocytosis , ET ) 1 例。12 例行胸腰椎骨髓MRI, 1 例行左胫腓骨MRI。4 例先行MRI 示信号异常, 提示血液疾病, 后经骨髓穿刺及活检确诊。MRI 检查使用0. 5T 超导型磁共振成像系统, 进行自旋回波( spin echo, SE) 序列T1 加权像( T1WI) 、快速自旋回波( furbo spin echo, TSE) 序列T2 加权像( T2WI) 、梯度回波( gradient echo, GRE) 序列T2加权像( T2* WI) , 3 例行短时反转恢复( short time inversion, ST IR) 序列。结果 13 例患者受检骨髓MRI 均表现为T1WI 均匀低信号, T2WI 10 例呈高信号, 3 例呈等信号, GRE 序列T2* WI 均表现为高信号, 2 例AL 和1 例NHL 行STIR 序列表现为高信号。1 例AML- M2 化疗达完全缓解后受检骨髓信号恢复正常, 且髓外软组织浸润病灶消失。结论 MRI 能为血液和造血系统疾病提供影像学依据, 并有助于临床诊断和疗效的评价。 【关键词】血液病；骨髓疾病；磁共振成像血液和造血系统疾病的诊断与疗效观察主要依靠骨髓穿刺涂片或( 和) 穿刺活检。骨髓呈弥漫性病变时, 这种方法准确可靠。但骨髓侵犯并非均匀一致, 骨髓穿刺的部位可能为非病变区, 不能真实反映骨髓受累程度及治疗后的骨髓反应。近年来, 有关白血病、淋巴瘤、贫血等血液和造血系统疾病骨髓MRI 研究取得了很大的进展。MRI 已成为评价骨髓疾病的最佳影像学方法, 能够无创地观察全身骨髓变化。本文分析多种血液病的骨髓MRI 表现特点, 探讨骨髓MRI 在诊断及疗效预测中的应用价值。 资料与方法1．一般资料收集2008 年~ 2014年我院收治的血液及造血系统疾病13 例, 全部经骨髓穿刺涂片或活检检查确诊。年龄11~ 63 岁, 男7 例, 女6 例; 其中急性髓细胞白血病( acute myeloblast ic leukemia , AML) 3 例,形态学分型: AML- M2 1 例, AML- M3 2 例, 急性淋巴细白血病( acute lymphocyt ic leukemia , ALL) 4例, 慢性淋巴细胞白血病( chronic lymphocy tic leukmia, CLL) 1 例, 非霍奇金淋巴瘤( non -Hodgkinlymphoma, NHL) 2 例, WHO 分型为B 细胞性淋巴细胞白血病/ 小淋巴细胞淋巴瘤( chronic lymphocytic leukemia/ small lymphocytic lymphoma, CLL/SLL ) , 原发性血小板增多症( essent ial thrombocy to??is , ET ) 1 例, 巨幼细胞性贫血2 例。13 例患者全部经骨髓穿刺涂片活检检查确诊,其中2 例NHL 行淋巴结活检确诊。3 例患者行胸腰椎MRI, 1 例行左胫腓骨MRI 检查时发现信号异常, 提示血液疾病, 后经血象、骨髓细胞学检查及淋巴结活检确诊, 这4 例分别为NHL 上1 例, ET 上1例, 巨幼细胞性贫血2 例。其余9 例为骨髓检查及淋巴结活检确诊为血液病后行MRI 检查。1 例AML- M2 以大小便异常费力、发热入院, 化疗前后分别行MRI。 2．检查方法使用GE 公司的Signa 0. 5T 超导型磁共振成像仪。检查部位: 12 例为胸腰椎, 1 例为左胫腓骨。所用序列包括: 自旋回波( spin echo , SE) 序列T1WI( TR / T E= 500/ 20) , 快速自旋回波( furbo spin echo, FSE) 序列T2WI ( TR/ TE = 4000/ 100) , 梯度回波( gradient echo , GRE) 序列T 2* WI, 3 例还采用了短时反转恢复( short t ime inversion recovery , ST IR)序列。化疗后MRI 检查方法同上。MRI 结果由两位经验丰富的影像学医生采用双盲法多次阅片, 意见不一致时经讨论取得一致结论。MRI 观察内容包括骨髓的信号强度改变、椎体浸润方式、椎体形态及周围组织的改变。急性白血病化疗采用标准方案, 化疗缓解标准参照血液学诊断及疗效标准[ 2] 。 结果 1．初诊白血病及化疗后MRI 表现7 例初诊急性白血病( acute leukemia, AL) 和1例初诊CLL 胸腰椎骨髓都表现为弥漫均一浸润,T1WI 呈均匀低信号, T2WI 表现为等信号( 3/ 8) 、稍高信号( 4/ 8) 或高信号( 1/ 8) , GRE 表现为高信号,椎体形态未见异常。1 例AML- M2初诊MRI 见L5 椎体水平对应椎管内及骶管内条形异常等T1 稍长T2 信号, 骶椎椎体前方弧形异常软组织信号影。该患经化疗达完全缓解后6 个月复查腰椎MRI: 椎体信号未见异常, 骶椎椎体前方弧形异常软组织影及骶管内异常信号消失2．NHL MRI 表现1 例行胸腰椎MRI, 表现为T1WI 均匀低信号, T2WI 稍高信号, GRE 明显高信号。另1 例行左胫腓骨MRI 示左侧胫腓骨骨髓腔内信号均匀异常,T1WI 呈均匀低信号, T2WI 呈稍高信号, ST IR 呈高信号3．巨幼细胞性贫血MRI 表现2 例均表现为T 1WI 均匀低信号, T2WI 不均匀高信号, GRE 高信号。 4．ET MRI 表现1 例原发性血小板增多症MRI 示T1WI 低信号, T2WI 稍高信号, GRE 明显高信号。 讨论 1．正常骨髓转化及其MRI 表现骨髓依据它的造血功能可分为红骨髓和黄骨髓。前者以造血组织为主, 其中水占20% , 脂肪占40% , 蛋白质等占20% ; 后者以脂肪组织为主, 其中水占15%, 脂肪占80%, 蛋白质等占5%[ 2, 3] 。红骨髓在骨髓腔内的分布与解剖部位、年龄等因素有关。胎儿期几乎均为红骨髓, 出生后按一定规律由红骨髓向黄骨髓进行生理性转换。25 岁以后, 红骨髓主要集中在中轴骨及四肢长骨近端, 其余为黄骨髓[ 4] 。在T1WI 黄骨髓表现为高信号, 红骨髓表现为中等偏高信号, 在T2WI 红黄骨髓信号相差不大。在成人骨髓中由于部分红骨髓的残留以及在骨髓病变时T1 相对延长, T1WI 呈低信号, 而T2WI 在正常和病变骨髓中信号强度无明显差别, 所以在骨髓病变中, T1WI 比T 2WI 的意义大。MRI 检测骨髓病变的敏感性高, 但特异性较低[ 5] 。本组13 例MRI 均表现为信号异常。其中12 例胸腰椎MRI 呈T 1WI 低信号, T2WI 等或稍高信号, 1 例胫腓骨MRI 呈T1WI 低信号, T2WI 稍高信号, 2 例ST IR 表现为明显高信号。其中4 例先经MRI 检查提示血液疾病, 后经骨髓穿刺及淋巴结活检证实。 2．病变骨髓的MRI 表现骨髓增生活跃的血液病, 如白血病、淋巴瘤、巨幼细胞性贫血、ET 等, 骨髓中异常增生的细胞代替了正常的骨髓, 由于这些异常增生的细胞具有延长T 1 驰豫时间的特性[ 6] , 因此骨髓MRI 表现为T1WI呈均匀低信号, T2WI 呈高信号, 脂肪抑制呈高信号。本组8 例白血病, 2 例NHL, 2 例巨幼细胞性贫血和1 例ET 骨髓的MRI 变化均为T1WI 均匀低信号, T2WI 高信号或等信号, 这与文献报道一致[ 7] 。