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法医鉴定试剂盒Profiler及COfiler中文操作手册

亲子鉴定简明实验操作

Profiler Plus & COfiler Kits

（仅供参考，请阅读英文原版手册。）

1. 血样DNA制备

剪下大约3 mm x 3 mm的纱布血样或取2 uL新鲜血，在1 mL dH2O中室温浸泡0.5 h，浸泡过程中可以不时震动；15000 rpm离心4 min，尽量去净上清液，但可以视情况适当保留10 uL左右的溶液，以免白细胞损失太多；加200 uL 10% (w/v) Chelex (50-100目；如200目用5%)，56 C 保温0.5 hr，充分震荡；然后100

C 煮沸8 min，离心，取6-20 uL上清液作PCR。

2．PCR

试剂用量 (uL)

Reaction

mix

Gold Taq (5 U/uL) 1

Set

Primer

DNA (1-2.5 ng) 20

总体积 50

PCR循环条件为：

95 C 11 min → (94 C 1 min → 59 C 1 min → 72 C 1 min) × 28循环→ 60 C 45 min → 4 C

3．310电泳样品制备

试剂用量 (uL)

甲酰胺10

[ROX] 1

GS-500

PCR产物 / Ladder 1.5 / 1.5

95 C变性5 min →迅速冰冷5 min。

4．310 Data Collection

1. 样品表填写注意事项：每组电泳(Project)需要包含至少一个Ladder；将Sample Name栏的内容复制到

Sample Info栏，GenoTyper软件需要这些信息；请勿忘指定内标的颜色，用R。

List：Module用GS STR POP4 (1 ml) F。

2. Injection

3. 大约2500-2900点之间出现染料峰，3000点左右出现第一条红色分子量标记35 bp带，6000点数据收集

完毕；电泳时间24分钟，每个样品约需时半小时。

5. 310 GeneScan分析

1. 在File下拉菜单中选New，再选Project ，建立一个新Project；在Project下拉菜单中选Add sample

files，然后依据样品文件所在路径找到并导入样品文件，包括Ladder；

2. 点击栏标题全选Sample files, 在sample下拉菜单中选Install new matrix，然后依据Matrix文件所在的路

径找到并导入与Dye Set F相匹配的Matrix文件，点击OK；

3. Size Std / Define New / 输入各片段的bp数：50、75、100、139、150、160、200、250、300、340、350

、400、450、490、500，其中250 bp不定义，取名保存；所有样品均分别指定内标或共用该Project内电泳质量比较好的样品的内标；

4. 点击Analysis，软件自动完成计算；在Window下拉菜单中选择Results Control，选定欲看的样品，点

击Display显示结果。先看内标(R)，通过比较不同样品之间250 bp带的计算结果是否相互接近，确认实验的重复性；再看其他颜色。保存Project。

6. 310 GenoTyper分析

1. 启动Profiler Plus或Cofiler Template，Template启动后会自动启动GenoTyper软件。注意：如果启动

的是GenoTyper本身，还要再启动有关Template才能进行基因自动分型。

2. 在File下拉菜单中选择Import，再选择From GeneScan File，选择所要分析的样品文件或GeneScan

Project文件，点击OK。注意：每个Project中一定要有一个Ladder；Ladder文件必须在Sample sheet中的Sample Info栏中注明“Ladder”字样；同时在Edit / Set Preferences / Import colors中选中Red；

3. 双击Check GS 500以运行该Macro，显示各个样品的内标；不同样品的250 bp带的计算结果一般在

245 bp左右，相差不超过1 bp，据此确认不同样品之间的可比性；如果差别太大，则需要重作实验；

4. 双击Kazam (20% filter) 以运行该Macro，软件开始计算等位基因的基因型。计算完成后显示图谱；双

击B、G、Y、R等不同颜色按钮，可以切换不同颜色的数据。

5. 双击Make CODIS Table运行Macro，软件以表格的形式显示分析结果。表格和图谱都可以打印输出。

7. 作Matrix

1. Filter Set F包含的4种荧光染料为：蓝色5-FAM、绿色JOE、黄色NED和红色ROX。

2. Matrix标准品制备

310 377

甲酰胺 10

Matrix标准品 1

1.5

上样量 11

95 C 5 min →冰冷5 min。

3. 填样品表，内标(Std)均不选，特别注意ROX是Matrix标准品而不是分子量内标；四色各只选对应一种

颜色；Sample Info：复制Sample Name。377请隔道上样。

4. GeneScan / File / New / Matrix / 在“HD / ABI310 / Runs”中选择B、G、Y、R各自对应的Matrix标准品

电泳文件/ 设置参数：Start：3300 (请根据实际样品电泳的原始数据调整到引物峰之后), Points： 2500 / OK / Save。

8. 常用技巧

1. 图谱上显示的峰标记的转换：等位基因→ Bp数：双击该峰即可；如果再单击，即无任何标记；

Bp数→等位基因：选定该峰，在Analysis / Change labels 中选择Category’s name，OK；

2. 填写样品表时忘记指定内标：GeneScan：在Analysis Control中，苹果+点击R标题框。

3. 填写样品表时忘记在Sample Info栏指明Ladder：Genotyper：点击Views / Show Dye/lanes Window，分

别单击选中ladder的B、G、Y文件，并在Sample Info栏填入Ladder，关闭Dye/lanes页面，重新运行宏命令。

9. 相关试剂

1. 4303326 AmpFlSTR Profiler Plus PCR Amplification Kit 100 tests

2. 4305246 AmpFlSTR COfiler PCR Amplification Kit 100 tests/kit

3. 4305979 AmpFlSTR Profiler Plus and COfiler PCR Amplification Kit 100 tests/kit

4. Matrix Standard for Filter Set F (DS-32)：5-FAM, JOE, NED, ROX

NT systems:

3xx: 4312131 3100: 4323018 3700: 4322317

Mac systems:

401114 Dye Primer Matrix Standard kit, 选用其中的5-FAM，JOE，ROX；

402996 NED Matrix Standard；

5. 401734 GeneScan-500 [ROX] Internal Lane Size Standard kit；

6. 4303501 AmpFlSTR Profiler Plus Kit User’s Manual；

7. 4305469 AmpFlSTR COfiler Kit User Bulletin

8. 402838 POP-4；

9. 4311320 Hi-Di Formamide, 25-mL bottle；

10. 毛细管： 47厘米，绿色标记；

11. Chelex 100 (100-200 mesh, sodium form, biotech grade. 一种离子螯合剂，Sigma产品)。以H2O配成20%贮

存液，理想的贮存液pH 10-11；如果pH < 9，将影响PCR效率。

10. Profiler Plus试剂盒的成分

注意：试剂盒到货后，请立即打开，将不同的成分分开保存到不同条件下。荧光成分4℃保存，忌冰冻。不适当的保存温度会严重损坏试剂。

ADP含量试剂盒使用说明

ADP含量试剂盒使用说明产品简介： ADP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ADP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。 ADP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。试验中所需的仪器和试剂：高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水产品内容：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周；试剂四：ADP标准品5mg×1支，-20℃保存。临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL溶液，配好后-20℃可保存1周；操作步骤：一、实验前的准备工作： 1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。 2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。

3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。二、ADP的提取： 1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取ADP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 2、细胞处理：收集约30mL细胞，离心菌体经干燥后，加入1mL试剂一，超声破壁细胞(950 W，30%，15min，工作1s间隔2s)，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。三、ADP含量测定操作步骤： 1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开empower软件，在方法组中设置进样量20μL，流速1mL/min，保留时间10min，检测波长254nm,设置完毕保存方法组。 2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。 3.用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。 4.加入标准品20μL，在10min内可分离ADP，ADP的保留时间在4min左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的ADP标准品的峰面积。 5.加入样品20μL，在相应保留时间处检测ADP的峰面积。 ADP含量的计算：将5mg/ml的ADP标准品用双蒸水分别稀释成100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml和20μg/ml的ADP标准品溶液，以标准品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算ADP标准曲线。注：标准品的稀释倍数要根据样品中ADP浓度确定，样品中ADP的峰面积必须落在不同浓度的ADP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。

KlippelQCsystem操作说明书

FOSTER ELECTRIC (PANYU) FACTORY
ENG1/HHJZ—20100117 1/25
Klippel QC system 操作说明书
第一章生产线使用指南
一、开机注意事项： 1．开机：必须先开电脑，再开分析仪，避免电脑开启时冲击电流损坏分析仪内部精密部件； 2．关机：必须先关分析仪，再关电脑； 3．平时机器不使用时，要用毛巾或者棉布盖好测试箱，避免灰尘落入 MIC，影响测试结果。
二、使用手顺： 1．从桌面上双击“QC Engineer”，打开使用界面，选择要测试的机种，按“Start” 开始进入测试窗口。此时，系统会弹出要求输入用户名与密码的小窗口，输入正确才能进入设置。
双击这里
选择要测试的机种名
输入用户名与密码

FOSTER ELECTRIC (PANYU) FACTORY
ENG1/HHJZ—20100117 2/25
2．进入测试界面后，系统会弹出下图所示的设置窗口,如果这个窗口关闭了，可以点击界面左上角的手形工具箱重新打开，在这里主要是设置测试数据保存位置，以方便查找。
在 Tasks 任务栏内选择第四行 “Finish”.
点击这里新建保存目录路径
点击这个手形工具可打开以上窗口

FOSTER ELECTRIC (PANYU) FACTORY
ENG1/HHJZ—20100117 3/25
3．点击“Limits”设定测试标准，此时需要点击一下“Activate Limit Calculation Mode”打开激活，如下图所示。
点击这里激活，再次点击为关闭激活
注意：设定标准请在生产线都开 LINE 的情况下进行设定，那样才能设定需要的环境噪音！

土壤试剂盒操作手册和常见问题

FastDNA Spin Kit for Soil实验步骤 1.Add up to 500 mg of soil sample to a Lysing Matrix E tube. 在裂解介质管E中最多加入500mg土壤样品。注意：推荐最多加入500mg土壤样品，含水量比较多的土壤或者碎屑多的土壤可适量减少样品量。 2.Add 978 μL Solution Phosphate Buffer to sample in Lysing Matrix E tube. 在裂解介质管E中加入978μl Sodium Phosphate Buffer 3.Add 122 μL MT Buffer. What’s happening: Begin to solubilize membrane proteins with detergents as well as extra-cellular proteins and contaminations in soil. 加入122μl MT Buffer 发生的反应：用洗涤剂溶解细胞膜蛋白以及细胞外蛋白和土壤中的污染物。注意：为了得到更好的样品处理效果，加入土壤样品及两个缓冲液后，在裂解介质管中仍能保留有250-500μl空间。 4.Homogenize in the FastPrep Instrument for 40 seconds at a speed setting of 6.0 What’s happening: mechanical disruption of cell walls of soil organisms and releasing nucleic acids into the protective buffer. 将样品置于FastPrep?仪器上匀浆40s，速度为6.0m/s 发生的反应：机械破碎土壤微生物的细胞壁，将核酸释放入保护缓冲液中。 5.Centrifuge at 14,000×g for 5-10 minutes to pellet debris. 14,000 x g离心5-10min至沉渣注意：如果把离心时间延长到15min，可以更好地使样品量较大的，或者细胞壁结构较复杂的细胞碎片沉降到管底。 6.Transfer supernatant to a clean 2.0 ml microcentrifuge tube. Add 250μL PPS (Protein Precipitation Solution) and mix by inverting the tube 10 times. What's happening: Separate the solubilized nucleic acids from the cellular debris and lysing matrix. Flocculation of protein-containing micelles 将上清液转移至一个干净的2.0ml离心管中。加入250μL的PPS溶液（蛋白质沉淀溶液），用手颠倒10次，使之充分混合。发生的反应：将溶解的核酸与细胞沉渣以及裂解介质分离。产生絮状蛋白。

TPPA试剂盒说明书

T P P A试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

梅毒TPPA试书剂盒说明书 1、试验原理：梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下：将梅毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（TP）抗体，并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存：血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。标本用量最少50ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。 3、安全防范： 3．1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 3．2移液过程禁止用口。 3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3．6试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂： 4．1 储存与稳定性：试剂应在2-10℃保存。冻干试剂必须在复溶后的当天使用，如果保存在2-10℃最多可使用7天。 4．2 试剂盒组成：（由富士瑞士欧公司出产）（1）溶解液（液体） 8mL×1瓶用于调制致敏粒子和未致敏粒子。（2）血清稀释液 29mL×1瓶用于样品的稀释。（3）致敏粒子（冷冻干燥）

KLIPPEL 操作手册

KLIPPEL 测试系统的简单操作手册检查激光：Enter----Main menu 选择Displacement meter----选择D（对校准器第二格，距离复0）----激光对准第一格（距离显示在9.7mm-10.3mm之间）----激光对准第三格,距离显示在-9.7mm—10.3mm之间----OK 固定喇叭，将雷射激光对准喇叭中间反射面（可用涂改液涂在雷射光束照射喇叭位置，增强反射强度，白色贴纸也可），距离调至绿灯及黄灯皆连续亮，不闪动，将连接线正确接上喇叭正负端子。 LPM小信号线性参数测试 1.点选第一行黄色资料夹图示，点选“open project”, 然后点选“new folder”, 输入文件名后按OK。 2.点选第一行蓝色测试图示（new operation），点选测试模式“LPM linear parameters”, 点先“LPM Logitech”设定，按OK。 3.点选第一行灰色喇叭图示“properties”,选“info可于name”栏重新命名， “comment”栏输入备注说明。然后点“Driver”，于“Diaphragm Area”栏输入有效振动面积（cm2）,或于“Diameter”栏输入有效振动直径（cm）,于“Material of voice coil”点音圈材质。在于“Power”栏，输入额定功率（W），额定阻抗（ohm），按OK确认，按Close关闭。 4.点选第一行绿色启动图示开始测试。结果可以得下列小信号线性参数 Electrical Parameters Re electrical voice coil resistance at DC 直流电阻 Le frequency independent part of voice coil inductance L2 para-inductance of voice coil R2 electrical resistance due to eddy current losses Cmes electrical capacitance representing moving mass Lces electrical inductance representing driver compliance Res resistance due to mechanical losses Fs driver resonance frequency 共振频率 Mechanical Parameters (using laser) Mms mechanical mass of driver diaphragm assembly Including air load and voice coil 有效振动质量（含空气负载） Mmd mechanical mass of voice coil and diaphragm without Air load 有效振动质量（不含空气负载） Rms mechanical resistance of total-driver losses Cms mechanical compliance of driver suspension 顺性 Kms mechanical stiffness of driver suspension 钢性 Bl force factor (Bl product) 磁力因数

加A试剂盒使用说明书

编码品名规格单位北京华越洋生物加A试剂盒50次盒GX9133 北京华越洋生物加A试剂盒100次盒GX9133 产品及特点本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。 1.简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。 2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。 3.产物可以直接用于与T载体的连接。规格及成分成份50 次包装 2 X Tailing Buffer 1.25 mL Taq DNA olymerase(5U/uL) 50 uL 使用手册1份运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。自备试剂PCR片段使用方法一：反应前纯化处理：用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的 DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1 ug/uL为宜。二：加A反应

在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入下列成分：回收的DNA片段(0.2-2 ug) 25 uL 2 X dA Tailing Buffer 1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL）补水到50 uL 72℃保温2小时三：反应后处理加A反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于T载体的连接反应。疑难解答Q：Taq DNA polymerase加尾有特异性吗？ A：在有四种核苷酸存在的反应体系中，Taq DNA polymerase加尾特异性跟DNA的3’末端的核苷酸有关。如果要加T，要加尾的 DNA片段最好末位为T。如果要加A，要加尾的DNA片段最好末位为C。其关系具体见下表： 3’末端核苷酸加尾核苷酸 A A,但效率极低 C A>C G G>A>C T T>A --DNA & Cell Biol. 12:763, 1993 关联产品加T试剂盒（dT Tailing Kit）、一站式T载体制备套装

人MyoDELISA试剂盒使用说明书

人Myo-DELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人Myo-D含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Myo-D水平。用纯化的人Myo-D抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Myo-D，再与HRP标记的Myo-D抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Myo-D 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Myo-D浓度。样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书

Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒说明：细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。产品组成（50／25次反应）： · Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml） · Binding Buffer 40ml／20 ml · Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml）保存条件: 2-8℃储存，有效期一年。注意事项： 1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项； 2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落； 3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用； 4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断； 5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。操作注意要点： 1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作； 2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变；

试剂盒使用说明书

牛气肿疽(symptoinatic anthrax)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)水平。用纯化的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入牛气肿疽(symptoinatic anthrax)，再与HRP标记的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：1800pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分

BCA试剂盒操作说明

INSTRUCTIONS Warranty: Pierce products are warranted to meet stated product specifications and to conform to label descriptions when used and stored properly. Unless otherwise stated, this warranty is limited to one year from date of sale for products used, handled and stored according to Pierce instructions. Pierce’s sole liability for the product is limited to Number Description 23225BCA? Protein Assay Kit , sufficient reagents for 500 test tube or 5,000 microplate assays 23227 BCA? Protein Assay Kit , sufficient reagents for 250 test tube or 2,500 microplate assays Kit Contents: BCA? Reagent A , 1,000 ml (in Product No. 23225) or 500 ml (in Product No. 23227), containing sodium carbonate, sodium bicarbonate, bicinchoninic acid and sodium tartrate in 0.1 M sodium hydroxide BCA? Reagent B , 25 ml, containing 4% cupric sulfate Albumin Standard Ampules, 2 mg/ml , 10 x 1 ml ampules, containing bovine serum albumin (BSA)at 2.0 mg/ml in 0.9% saline and 0.05% sodium azide Storage: Upon receipt store at room temperature. Product shipped at ambient temperature. Note: If either Reagent A or Reagent B precipitates upon shipping in cold weather or during long-term storage, dissolve precipitates by gently warming and stirring solution. Discard any kit reagent that shows discoloration or evidence of microbial contamination. Table of Contents Introduction..................................................................................................................................................................................1Preparation of Standards and Working Reagent (required for both assay procedures)................................................................2Test Tube Procedure (Sample to WR ratio = 1:20).....................................................................................................................3Microplate Procedure (Sample to WR ratio = 1:8)......................................................................................................................3Troubleshooting...........................................................................................................................................................................4Related Pierce Products...............................................................................................................................................................5Additional Information................................................................................................................................................................5Cited References..........................................................................................................................................................................6Product References. (6) Introduction The BCA? Protein Assay is a detergent-compatible formulation based on bicinchoninic acid (BCA) for the colorimetric detection and quantitation of total protein. This method combines the well-known reduction of Cu +2 to Cu +1 by protein in an alkaline medium (the biuret reaction) with the highly sensitive and selective colorimetric detection of the cuprous cation (Cu +1) using a unique reagent containing bicinchoninic acid.1 The purple-colored reaction product of this assay is formed by the chelation of two molecules of BCA with one cuprous ion. This water-soluble complex exhibits a strong absorbance at 562 nm that is nearly linear with increasing protein concentrations over a broad working range (20-2,000 μg/ml). The BCA?method is not a true end-point method; that is, the final color continues to develop. However, following incubation, the rate of continued color development is sufficiently slow to allow large numbers of samples to be assayed together. The macromolecular structure of protein, the number of peptide bonds and the presence of four particular amino acids (cysteine, cystine, tryptophan and tyrosine) are reported to be responsible for color formation with BCA.2 Studies with di-,tri- and tetrapeptides suggest that the extent of color formation caused by more than the mere sum of individual color-producing functional groups.2 Accordingly, protein concentrations generally are determined and reported with reference to standards of a common protein such as bovine serum albumin (BSA). A series of dilutions of known concentration are 3747 N. Meridian Road P.O. Box 117 Rockford, IL 61105 BCA? Protein Assay Kit

试剂盒使用说明书

人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)水平。用纯化的人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)，再与HRP 标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)含量。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：18ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/

IFN-试剂盒使用说明

1.原理: 1）单克隆抗体IFN-γ已经包被在PVDF-微孔板中 2）刺激的细胞被移入孔中,37℃ 5%CO2 孵育特定时间.在孵育过程中,抗体与分泌的IFN-γ结合 3）孵育后,所有的细胞以及未结合的物质被洗掉,加入生物素标记的IFN-γ抗体与细胞分泌的IFN-γ结合 4）孵育后,未结合的抗体被洗掉,加入链霉亲和素-HRP与生物素标记的IFN-γ抗体结合5）孵育后,未结合的链霉亲和素-HRP被洗掉,加入AEC显色底物,颜色建立一部分取决于最初IFN-γ的结合的数量 6）细胞因子存在的地方会形成红色斑点 2.材料与方法提供的试剂 IFN-γ抗体包被板,96孔生物素标记的IFN-γ浓缩物(1小瓶) 分析溶液 (25ml/瓶) HRP浓缩物（200倍）（60μL/小瓶）清洗浓缩液（200倍）（50ml/瓶） AEC发色体（250μL/小瓶） AEC底物(25ml/瓶) 3.补充 1）显微镜或ELISpot读取器 2）移液枪和枪头 3）蒸馏水或去离子水 4.注意事项 1）样品和试剂在使用前需要在室温（20-25℃）准备。使用后冷藏。 2）IFN-γ抗体包被板应该在打开锡箔纸前达到室温 3）对照和重复实验的设置 4）每个孔要保证孵育时间一致 5）注意换枪头，避免交叉 6）不要将不同孔中的试剂混合 7）残余的清洗液必须用滤纸吸干，不要将纸直接深入孔中 5.试剂准备 A．用一个干净的塑料tube将生物素标记的IFN-γ浓缩物(1小瓶)1:250稀释（为最佳效果，稀释后直接使用） B.将清洗浓缩液（200倍）（50ml/瓶）温度达到室温，轻轻混合。一个干净的塑料tube 将其用蒸馏水稀释。用后冷藏，2周内用完。 C．将HRP浓缩物（200倍）（60μL/小瓶）稀释，稀释后30min用完。 D．20μL AEC发色体加入到1.0 mL AEC底物混合到干净的塑料tube。 6.步骤

罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒操作说明书一、原理： TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HR P；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7. 5，10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。三、实验步骤操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加c

小鼠SP检测试剂盒使用说明

小鼠SP检测试剂盒使用说明货号：SP0011 产品内容：封闭液（正常山羊血清）3ml6ml18ml 3%H2O23ml6ml18ml Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液30ul60ul180ul 链酶亲和素-POD浓缩液30ul60ul180ul 稀释液10ml20ml60ml 20×DAB显色液A0.3ml0.6ml 1.8ml 20×DAB显色液B0.3ml0.6ml 1.8ml 保存：如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。产品说明：小鼠SP检测试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。 SP试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。操作步骤:（以石蜡切片为例） 1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯，三次乙醇)。 2.3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

3.可选步聚： a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。 b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2-3次。 c、跳过此步，直接进入下一步。 4.滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。 5.用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS （pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。） 6．根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG 工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。 7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。 8．DAB显色：根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS加入50ul20×DAB显色液A，加入50ul20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。 9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Triton X-100室温孵育20分钟，