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Primer Premier使用手册中文版--教你如何使用软件设计引物

Primer

PREMIER

Version 5.0 for Windows and Power

Macintosh

使用说明书

PREMIER

Biosoft International

3786 Corina way,

Palo Alto, CA 94303-4504

电话650 856-2703

传真650 843-1250

电子邮件sales@https://www.wendangku.net/doc/7016575967.html,

目录 (2)

简介 (6)

新版更新 (6)

基础指南 (6)

GENETANK 序列编辑 (7)

GeneTank Window 序列编辑窗口 (7)

查看序列 (7)

打开已有序列 (7)

创建新序列 (7)

保存序列 (8)

编辑序列 (8)

查找 (8)

查看不同链 (8)

语音校读 (8)

编辑序列比较结果 (9)

序列粘贴窗口 (9)

参数设置 (9)

Rating Parameters 评分参数 (10)

序列比较 (10)

Alignment Parameters 序列比较参数设置 (10)

序列翻译 (12)

Edit Codon Table 窗口 (12)

PRIMER 引物设计 (14)

Primer Premier 引物设计窗口 (14)

Direct Select 即点即选框 (14)

在序列比较中应用即点即选功能 (14)

性状列表 (15)

二级结

构. . . . . . .. . . . .. . . . . .. . .. . . . . . . .. . . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . . . . .. . .. .. . . . . .. . . . . (15)

Edit Primer 引物编辑窗口 (16)

Search Criteria 搜索标准窗口 (16)

Search Parameter 搜索参数窗口 (17)

Automatic Search 自动搜索 (17)

Manual Search 手动搜索及引物设计原理 (18)

Search Results 搜索结果窗口 (20)

Multiplex/Nested Primer 复式及巢式PCR反应引物窗口 (21)

Database 引物数据库窗口 (21)

Reports 分析报告 (22)

Synthesis Order Form 合成订单 (22)

Optical Activity 比吸光度 (22)

Degeneracy 多义性 (23)

Graphs 图表 (23)

Restriction Enzyme Analysis 限制性内切酶分析 (24)

Restriction Enzyme Analysis 限制性内切酶分析窗口 (24)

Restriction Sites 酶切位点窗口 (24)

Edit Enzyme 限制内切酶编辑窗口 (24)

Filter 特征筛选窗口 (25)

Motif Analysis 基序分析 (26)

Motif Analysis 基序分析窗口 (26)

Motif Sites 基序位点窗口 (26)

Edit Motif 基序编辑窗口 (26)

Menu Commands 菜单命令 (27)

GeneTank 主菜单 (27)

File (27)

Edit (27)

View (27)

Search (27)

Function (27)

Translate (28)

Window (28)

Help (28)

Primer 主菜单 (28)

File.....................................................................................................

Edit .................................………………........................................... Function.......................…………………..................................................... Report.................……………................................................................................ Graph..............………….................................................................................. Window...........……………….....................................................................................

Help ...........………….......................................................................................

Enzyme Results Menu 主菜单..........………………..................................... File...........................…………........................................................................... Function..............……………................................................................................ Window.........................…………….....................................................................

Help ............................…………........................................................................

Motif Menu 主菜单.................................................................................. File...........................……………........................................................................... Function..................………………......................................................................... Window.....................……………….........................................................................

Help ........................................………………..........................................................

附录 (30)

附录A 公式法则…………….…………………………………………..........

附录B 多义碱基表.………………..…………………………......................

附录C 氨基酸缩写代码……….….………………………………..................

附录D 软件上限...…………….…………………………….......................

附录E 参考文献 (36)

附录F 系统要求 (37)

务与技术支持.............…………………………….............................................

他信息...................…………………….....................................................

者后记...................……………………….....................................................

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The software described in this manual is provided by PREMIER Biosoft International under a License Agreement. The software may be used only in accordance with the terms of the agreement.

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软件的使用必须在授权范围之内该软件及相关文档作为一项未公开发表的工作其版权归Premier所有对版权的声明并非意味放弃其他权利该软件及相关文档是Premier的机密与财

产除非有Premier的书面授权任何的使用检查再生产复制分割传递或/和解密行

为均被禁止

译者声明

本软件说明书著作权归PREMIER Biosoft International 所有译者则保留中

文翻译的相关版权并授权生物软件网https://www.wendangku.net/doc/7016575967.html, 共享发布该说明书的

中文翻译本中文翻译仅限于软件使用者参考其内容如有歧义应以原英文说明书为准译者及生物软件网不承担由翻译打印网页等错误带来的直接和间接损失

译者Wenkelly

电子邮件wenkelly163@https://www.wendangku.net/doc/7016575967.html,

简介

PRIMER PREMIER 是一种用来帮助研究人员设计最适合引物的应用软件利用它的高

级引物搜索引物数据库巢式引物设计引物编辑和分析等功能可以设计出有高效扩增能

力的理想引物也可以设计出用于扩增长达50kb以上的PCR产物的引物序列

该软件主要由一下四个主要功能板块组成

GeneTank 序列编辑

Primer 引物设计

Align 序列比较

Enzyme 酶切分析

Motif 基序分析

新版更新

种间交叉引物设计利用来自多个物种的序列设计扩增引物

病理检测引物设计可用来在高保守区域设计引物

等位基因特效引物设计专用于扩增某一类相关序列中特定成员的引物

基础指南

这段指南并非详细的说明仅为使用者对PRIMER PREMIER的菜单选项有一个直观的了

解四个功能板块都有各自的窗口和菜单正在使用中的窗口就是您所见到的窗口以下列出了各功能板块的主要菜单选项

GeneTank File, Edit, View, Search, Function, Translate, Window,Help.

Primer File, Edit, Function, Report, Graph, Window, Help.

Enzyme File, Function, Window, Help.

Motif File, Function, Window, Help.

使用功能菜单时该菜单所属的窗口就会被激活利用各菜单中的window选项记录的所

有打开的窗口可以方便的在各个窗口之间进行切换

所有的列表都有复选功能对于windows或Power Mac系统而言在点击同时按住CTRL

键即可将当前的选择加入选单按住SHIFT键同时点击可以选择两次点击之间范围内的所有选项

GeneTank

利用GeneTank您可以打开DNA或者蛋白质序列也可以选择不同的阅读框架共三种

将DNA翻译成蛋白质或利用蛋白序列反推出DNA序列为方便使用软件已经提供了普通密码子列表和几种线粒体密码子列表您也可以输入您自己的其他线粒体密码子列表序列编辑器提供了包括多媒体语言校读在内的完整的序列编辑功能

这一功能板块包括以下部分

GeneTank 打开浏览编辑及翻译序列

Translation 将打开的序列翻译或反推成其他序列

Edit Codon Table 编辑翻译所依据的密码子列表

GeneTank窗口

GeneTank的窗口用来显示序列及其文件题头信息序列可以3碱基10碱基一组显示您

可以将打开的序列翻译或反推成其他序列您也可以使用通常的拷贝剪切和粘贴命令编辑当前序列GeneTank的窗口上也有启用Primer Align Enzyme Motif功能板块的快捷键

查看序列

点击相应按钮或从View菜单中选择您可以查看文件题头改变5 末端序列起始位置

选择3碱基或10碱基一组的显示方式文件题头是指存在于序列文件中位于序列信息上游的

文字内容点击header按钮或从View菜单中选择可以显示文件题头信息改变5 末端序列起

始位置默认为1 序列将从您指定的5 位置开始显示序列

可选操作

View >Show Header

View >Grouping

View > 5’ Seq No 某些版本没有这一项

打开已有序列

使用菜单File >Open 可以激活文件选择对话框用来打开您希望处理的包含特定序列的

文件

如果序列文件是GenBank的标准格式PRIMER PREMIER会自动识别打开文件中的序列起始位置或是您曾经使用本软件菜单中File > Save命令以PRIMER PREMIER默认格式保存过该文件序列将自动打开如果打开其他格式的序列文件将出现一个可卷动的Import Sequence 窗口并显示全部序列在序列第一行的起始处双击则双击处以前的所有信息将被认为是文件题头然后PRIMER PREMIER会自动剔除非序列字符并将序列在GeneTank里打开

创建新序列

该项功能可以让您手动键入一个新的序列您可以键入任何DNA或蛋白序列并存在您指定

的文件夹内并可以象其他如GenBank格式的文件一样进行操作

Windows用户请注意默认设置的DNA序列文件后缀为SEQ 蛋白序列文件后缀为PRO 当然

您可以使用其它的任何序列文件类型

使用提醒如果您选错文件发现并没有您所希望的序列只需要关闭Import Sequence 窗口

重来一次即可

保存序列

使用本软件保存的序列可以被软件自动识别而无需让您指出序列起始位置建议您在诸

如以下情况保存序列

您需要经常使用同样的序列

您已经编辑完一段序列并希望保存结果

您已经输入一段新序列

编辑序列

只需在GeneTank窗口内您就可以方便的编辑DNA或蛋白质序列而编辑翻译或原始序列

十分方便在任一序列上的改变将会正确的反应到与之相关的其他序列例如如果你在一

段蛋白序列上无论该序列是被翻译的或是用来反推DNA的原始序列删除一个氨基酸残基

在相应DNA上的对应三位密码子将同时被删除但如果您改变一段翻译出的序列这一改变将仅仅在另一段由此翻译出的序列而不会出现在原始序列上编辑序列可以使用直接键入或利用剪贴板

通常的剪切拷贝粘贴同样可以方便的在此使用其快捷键分别是CTRL-X, CTRL-C和

CTRL-V

软件提供三碱基一组的显示方式以利于蛋白相关的工作

在键入DNA序列时可以使用A C G T或者附录B所列出的多义碱基在键入蛋白序列

时可以使用附录C中所列出的氨基酸单字母记号

可以从任何文本编辑器如记事本中的剪贴板中拷贝一段序列并将其粘贴进来当您完成编

辑后请注意保存序列

查找

利用GeneTank窗口上的Find 按钮您可以从指针起始位置开始查找序列中一段特定

字符查找到第一个后您也可以使用Find Next 按钮在余下的序列中继续查找使用Search 菜单选择Go To Position可以将指针移到您指定的位点

可选操作某些版本在Edit菜单下

Search >Find

Search >Find Next

Search >Go To Position

查看不同链

要查看该序列的互补链您只需要点击GeneTank窗口上的A按钮就会显示该序列的互

补链此时互补而点击S按钮就能恢复成原来的序列您亦可点击dsDNA按钮以双链形

式显示

可选操作

View > Sense Strand

View > Anti-sense Strand

View > ds DNA

语音校读

在GeneTank打开一段序列后您可以按下语言按钮启用语音校读功能序列将从指针所

在的位置开始被依次朗读序列再次按下语音按钮将停止朗读按下键入朗读键将在键入的同

时朗读输入的序列再次按下该按钮可以停止键入朗读

可选操作

Function > Speaker

编辑序列比较结果

当一项多序列比较完成后比较结果可以通过编辑来获得更准确的配对通常ClustalW法

则能够给出一个准确的比较结果因而手工编辑并非必要但对于个别情况或出于特殊要求可能有这种需要所以本软件也提供这一功能将点击指针指向的碱基可以实施改动按下空格键可以插入一个空隙按下Delete键则可以删除一个空隙一旦比较结果被改动最大和最小同源性参数也会自动改变

粘贴序列窗口

这一窗口使得一段核酸序列通过选择以四种不同的方式粘贴上去

分别为正向As is 反向reversed 互补complemented 以及反向互补reverse complemented 这样便于从其他程序中粘贴序列而无需考虑其序列保存的方向

参数设置

Preferences 参数设置窗口可以改变本软件所使用的多种默认参数也可以允许您查

看及更改引物评分参数设定二级结构在引物评分中所占的权重系数

默认引物长度默认值为25

默认引物长度在Primer Premier窗口使用即点即选功能时得到的引物长度该项参数也是Primer Premier窗口启动时的初始默认值这项数值可以设定为1到70个碱基

引物对搜索最大值默认值为100

在自动搜索引物时得到的结果数量可以很多由于该软件按照引物评分来衡量引物效率

有些引物虽然合乎标准但评分较低可能没有全部列出的必要尽管我们设置了100对引物这一较大的数值您仍然可以改变该项参数为10到1000之间的任意值

核酸浓度默认值为250 pM

根据文献7 Freier等提供的计算公式这是没有自身配对时退火的寡聚核苷酸的总浓

度它即不是引物浓度也不是起始模板浓度而是PCR产物的浓度由于在PCR过程模板的

浓度变化很大很难确定具体数值根据文献11的建议Rychlik等一般经验公式在普通PCR 反应中将其当作250 pM 这项数值被用来计算引物的退火温度

单价离子浓度默认值为50 mM

这项数值是指反应混合液中所有单价离子的总浓度

游离Mg2+离子浓度默认值为1.5 mM

这项数值是指反应混合液中充当辅基的Mg2+离子浓度

总Na+当量

这项数值是根据单价离子浓度和游离Mg2+离子浓度计算得来计算公式如下Sprt即取平

方根

总Na+当量单价离子浓度4 Sqrt 游离Mg2+离子浓度1000

这项数值用来计算引物的退火温度

自由能计算设置温度默认值为25 °C

这项数值用来计算自由能G 自由能计算公式为G= H T S.

评分参数

Rating parameters 评分参数窗口是用来设定二级结构在引物评分中的权重系数二

级结构越稳定引物评分就会越低相对于在引物中间形成的二级结构来说3 末端的二级

结构对PCR扩增的影响会更大为了将这一效应计算在内软件将3 末端的二级结构的自由能数值G减去1 这一修正会使3 末端的二级结构显得更加稳定

这一修正值是根据未公开实验结果制定的您可以根据自己的需要来更改

软件只标注是引物二级结构中最稳定的一个自由能数值G 如果没有检测到二级结构

则该数值为0

序列比较

这一部分仅在Primer Premier的Windows版本中使用对于Macintosh系统序列比较是

提交到网上完成并下载比较结果在Primer的教程中有关于这方面的完整信息

Align 序列比较窗口让您将已经打开的序列进行比较序列选择框显示所有将要比较

的序列使用Add 和Delete 按钮可以增加一个序列或移除一个序列

使用Options 按钮可以打开序列比较的参数设置窗口

序列比较参数设置

您可以利用Alignment Parameters 序列比较参数设置窗口来修正ClustalW法则用来优

化比较结果的各项参数序列比较可以用两种模式完成一种准确但较慢slow/accurate

一种快速但较粗略fast/approximate 选择不同的模式将会得到不同的结果

SLOW/ACCURATE模式的序列比较参数

这些参数无法改变序列比较的运行速度它们被用来对序列比较评分然后换算为百分比数值即最后显示的百分数并转化为进化树上的进化距离

1 Gap Open Penalty 比较结果中一个空隙的罚分

2 Gap extension penalty 比较结果中一个空隙每延长一碱基的罚分

3 Protein weight matrix 这是描述氨基酸之间的相似性的评分标准

4 DNA weight matrix 为核酸配对制定的评分标准包括IUB多义密码子

FAST/APPROXIMATE模式的序列比较参数

这种同源性评分是由一种快速粗略的通用比较方法计算得来的它包括4项参数有两种

方法用以快速获得序列比较结果

1 只计算准确配对的部分k-tuples

2 只计算最佳配对的情况

K-TUPLE SIZE 这是默认的准确配对的片段长度增加这一数值可以提高运行速度对

于蛋白序列最大值为2 对于DNA最大值为4 减少这一数值则可以增加灵敏度对于较长的

序列例如大于1000字符您可能需要增加默认值

GAP PENALTY 这是快速比较种每个空隙的罚分若非设定成很大的值对比较的速度

影响不大

TOP DIAGONALS 在一个虚拟的点划分分析法中需要计算的在每个对角线上使用的ktuple 配对数量在比较中只有最佳配对的情况才会被使用由这项参数指定其数量增加

这一数值可以提高运行速度减少这一数值则可以增加灵敏度

多序列比较参数

这些参数控制最终的多序列比较每个多序列比较包括多个双序列比较的过程按照预定

顺序依次进行相应的基本控制参数有两种空隙罚分gap penalty 以及位置同源或替代的

权重系数scores for various identical/nonidentical residues

1 和

2 GAP PENALTY由菜单选项1和2控制

它们设定空隙以及空隙长度造成的罚分增加空隙罚分可以减少比较结果中空隙的数量增

加空隙长度的罚分可以使空隙更短末端的空隙不会被罚分

3 DELAY DIVERGENT SEQUENCES 打开这一选项将会先比较同源性高的序列后

比较同源性较低的序列该项数值即将特定同源性百分数设定为阀值低于该同源性的序列将会推迟比较

4 The TRANSITION WEIGHT 为碱基转换A< >G或C < >T即嘌呤之间和嘧啶之

间的替换设定从0到1的权重系数系数0意味将碱基转换看作一个完全的错配系数1意味

将其看作一个完全的配对对于远源序列建议将其设置为0 而对于同源性较高的序列将

这一系数适当增加会有好处

5 PROTEIN WEIGHT MATRIX 该选项可以打开一个让你选择权重矩阵weight

matrices 的菜单对于蛋白质分析默认的矩阵是由Jorja和Steven Henikoff 创建的BLOSUM 系列矩阵请注意是使用一系列矩阵因为到底使用哪一个矩阵取决于序列之间的同源程度

进化差异不同所使用的矩阵也不同

6 DNA WEIGHT MATRIX 该选项打开一个菜单选择一个而不像蛋白分析那样是一

系列核酸权重矩阵默认的一个是BESTFIT用来比较核酸序列的矩阵

7 在权重矩阵中如果您愿意可以使用正值也可以使用负值如果不使用NEGATIVE MATRIX 负值权重矩阵选项系统将默认使用正值

8 PROTEIN GAP PARAMETERS 蛋白序列空隙参数选项可以打开一个菜单让您可

以设置蛋白序列比较结果的空隙罚分参数该选项仅在蛋白序列比较中可用

更多信息

如果您想得到关于设置参数和ClustalW法则的更多信息请从以下网址获取由原作者提供

的完整文件www-igbmc.u-strasbg.fr/BioInfo/ClustalW/clustalw.html

序列翻译

激活序列

在GeneTank窗口的一个列表框内显示了原始序列以及由它翻译出的其他序列

产生翻译序列的机制如下

Translated DNA 从原始的蛋白序列推导DNA序列或由原始DNA翻译出蛋白序列再

由蛋白序列反推出的DNA序列

Translated Protein 从原始DNA翻译而成蛋白序列或原始蛋白序列翻译出DNA序列

再由DNA序列反推出蛋白序列

推导DNA按钮

当前序列为原始或推导DNA时该按钮不可用当前序列为蛋白序列时点击该按钮将会

激活一个Codon Table Selection窗口您可以选择密码子列表和阅读框架翻译结果中的多义碱基请参照说明书的附录

可选操作

Translate > To DNA

翻译蛋白质按钮

当前序列为原始或推导蛋白序列时该按钮不可用当前序列为DNA序列时点击该按钮

同样将会激活Codon Table Selection窗口您可以选择密码子列表和阅读框架如果原序列中存在的多义碱基使密码子无法翻译成为蛋白残基该残基位点会用*号代替

可选操作

Translate > To Protein

Edit Codon Table窗口

使用这一窗口您可以创造新的密码子列表删除或编辑已有的密码子列表但PRIMER PREMIER 提供的标准密码子列表是不能编辑的使用ADD 按钮创建新的密码子列表会

使用标准列表并初始命名为使用Edit Codon Table Name对

注意如果您多次翻译一段序列只有最后一次的翻译结果才能被保留而以前的翻译结果将被

忽略

话框可以编辑列表名称使用DELETE 按钮则删除当前列表要改变某一密码子对应的氨

基酸只需要用鼠标将其拖放到相应位置就可以点击密码子时鼠标指针会发生变化提示您

正对其操作任何拖放操作会改变两行内容一行即某种氨基酸得到一个密码子的同时

另一行失去这个密码子

Primer 引物设计

Primer功能板块包括了设计引物的搜索引擎软件包含了强大的自动搜索法则只需要简

单的操作就可以得到合适的引物PRIMER PREMIER也提供了人工控制搜索引擎的方法便

于根据您的特殊要求制定标准输出的引物通过全面的即时分析工具计算出引物的多种参数和二级结构关键参数如T m值GC含量和自由能G还能以图形显示还有另一个窗口来显示

引物的比吸光度activity 单位nmoles/OD和ug/OD 及引物的分子量还可以将当前引物输

入数据库打印或填写引物合成定购单

为设计用于定点突变的引物该项功能板块也提供包括即使分析和限制性酶切位点分析的

引物编辑工具您可以通过输入碱基或氨基酸残基来手动修改引物

为分析多对反应引物如在复式及巢式PCR中使用function菜单下Multiplex/Nested选项

您可以分析所有想用到的引物可以选择事先搜索的引物或手动添加引物软件提供将引物储存到数据库的功能也提供填写引物合成定购单的功能定购单上会自动填入引物序列和其他重要信息

该项功能板块由以下部分组成

Preferences 参数设置窗口

Primer Premier 引物设计窗口

Edit Primer 引物编辑窗口

Search Criteria 搜索标准窗口

Search Parameter 搜索参数窗口

Search Results 搜索结果窗口

Multiplex/Nested Primer 复式及巢式PCR引物设计窗口

Database 引物数据库窗口

Synthesis Order Form 生成引物合成订单

Reports 结果报告

Graphs 图表

Primer Premier 引物设计窗口

Primer Premier 引物设计窗口是分析引物的关键该窗口包括以下功能即点即选Direct Select 引物性状列表和二级结构显示具体介绍如下

Direct Select 即点即选框

当您将鼠标指针移至该框中指针将变为铅笔型点击框中任何一处会产生一条起始位

置最接近点选位置并与原序列互补的引物所有引物性状将即时更新引物5 和3 末端也会标记上以区分引物的扩增方向

如果点选一组序列比较结果引物序列将依据保守序列来确定这使得您很容易知道引物

与某一特定序列有哪些错配位点

在序列比较中应用即点即选功能

在利用高保守序列区域设计引物时Primer Premier会在引物窗口显示序列比较这样您

很容易知道引物与每一特定序列有哪些错配位点点击序列任一地方将根据保守序列产生一条引物并加以分析引物也可以被编辑以便同某一特定序列匹配这些可以用来设计针对等位基因的引物通过View 菜单选项可以切换显示多数倾向和少数分歧碱基Majority or Minority Consensus 切换到显示少数分歧碱基可以看出哪些核苷酸不能很好的与所有序列匹配

性状列表

这一列表显示了当前引物对的各种性状您可以通过以下三种方式选择一对引物作为当前

引物对

Direct Select框根据上述使用Direct Select的方法选择一条引物切换到另一条互补链

选择反向引物得到一对引物对

在Search Results 搜索结果窗口里选择一对引物对

使用输出命令在数据库窗口里选择一对引物对.

性状列表能自动更新正反引物的长度起始位置融链温度T m GC含量GC% 多

义性比吸光度Optical Activity 单位ug/OD 对于引物对来说长度条显示了PCR产物的

长度而T a Opt项显示了PCR反应适宜的退火温度各种引物性状计算公式请参阅附录A

二级结构

PRIMER PREMIER能即时分析引物二级结构在左下的两排按钮可以想您显示发现了哪

些二级结构而按下的按钮表明相邻的图框里显示的是何种二级结构除了二级结构图框里

也显示二级结构的自由能数值G 单位kcal/mol

在PRIMER PREMIER窗口内的图框里显示的是最稳定的二级结构连续碱基配对用实线

显示而不连续碱基配对用虚线显示按下按钮All 就会给出当前二级结构的报告您选

择正向引物的发卡结构并点击All 就会显示以下内容

注意如果您想使用上述方法选择一条例如如正向引物而不是一对引物您需要手动回复原来的

反向引物来和新引物配对

注意如果有至少连续三个碱基配对就会被认为能形成发卡二聚体或错配之类的二级结构

可能出现的二级结构按照稳定性大小自动排序最稳定的一种排在最前使用卷动条可以

看到未显示的部分

除了上述功能这一板块还具有激活以下功能的快捷按钮Search Criteria 搜索参数

窗口Search Results 搜索结果如果已经实施过搜索窗口以及Edit Primer 引物编辑

窗口点击按钮可以使相应部分伴随引物对以图形显示

Edit Primer 引物编辑窗口

Edit Primer 引物编辑窗口可以用来设计用于定点突变的引物或分析一条已有引物序列

在windows系统或Power Mac的Command-X Command-C 及Command-V系统中您可以使用CTRL-X CTRL-C和CTRL-V快捷键来实施剪切拷贝和粘贴删除当前引物序列并从

剪贴板上粘贴是分析一条已有引物的好方法进行粘贴时Paste 粘贴窗口会激活用以

将引物序列转化为反向互补或反向互补形式您也可以手工键入引物序列一旦引物被编辑发生变化Analyze 按钮就可以使用点击Analyze 按钮即可分析编辑后的引物

您可以修改实际序列或是翻译后的氨基酸残基如果您修改氨基酸残基相应位置可能出现多义密码子

除了上述的引物性状和二级结构资料具体参阅PRIMER PREMIER窗口的章节该窗

口也提供了限制性酶分析功能您可以通过点击Enzyme 按钮通过手动或软件提供的筛

选方案来选择一组限制性酶

您可以使用Prime 按钮来将引物移动到更合适的结合位点通常这项功能可以让您确

认是否有其它比当前位点更稳定更适合的结合位点存在

其他信息如果您希望改变阅读框或使用其它密码子列表请关闭本窗口从主菜单上选

择Function >GeneTank激活GeneTank窗口再选择Translate > Change Parameters打开Select Codon Table窗口来改变阅读框或选择其它密码子列表然后重新打开本窗口

可选操作

Function > Edit Primer

Search Criteria 搜索标准窗口

以下是基本搜索标准的详细信息

根据PCR引物测序引物或杂交探针的不同要求选择不同的搜索标准是很有必要的

PRIMER PREMIER 会根据您的选择来调整自动搜索的标准某些用以优化引物扩增能力的标准不一定也适合测序引物或杂交探针的设计这两者需要的是较高的退火温度因此当您选择不同的搜索标准PRIMER PREMIER将对相关标准作出调整以适应不同的要求搜索公式中使用的具体参数请参看后面的Automatic Search Parameter 自动搜索参数章节

Search Type 搜索类型框将指定您要搜索的是单个引物两条单独引物引物对或为

当前引物找寻合适的反向引物

默认设置下Search Range 搜索范围是当前序列的全长默认PCR产物长度为100 bp

到500 bp 如果您是搜索单个引物该数值将不会起作用您也可以为搜索设定Primer Length 引物长度您将会在下一章节了解该项设定的具体作用

最后您可以设定Search Mode 搜索模式为自动或手动除非您有很特殊的要求或想完

全控制特定的搜索参数建议您使用自动搜索利用PRIMER PREMIER找到多条引物再从

中通过详细分析来挑选合适的使用

可选操作

Function > Search

Search Parameter Windows 搜索参数窗口

搜索可以使用其它的自动搜索方法或者手动搜索

当您希望搜索的引物不会与其它存在与反应中序列发生错配您可以在激活False Priming 选项后利用Files 按钮选择这些序列文件

Automatic Search 自动搜索

尽管PRIMER PREMIER已经自动设置了一些数值您还是可以选择在自动搜索中需要使

用哪些参数点击去掉相应参数左边框中的则该参数在搜索中不会被考虑

自动搜索开始的标准很严格但如果没有找到合适的引物则标准会自动降低直到找到合

适的引物下列图表中显示了在PCR引物设计中自动搜索初始的严格参数其中Tm值范围是根据指定搜索范围中所有可能引物的Tm平均值确定的

Manual Search 手动搜索及引物设计原理

在过去十年中为获得高效扩增PCR方法得到的很大发展我们对引物稳定性二级结

构和适宜长度的了解使得我们在保证引物特异性的前体下大大提高了引物的扩增效率而

PRIMER PREMIER 软件的搜索法则很好的维持了高效性和特异性之间的平衡

引物长度

引物的长度控制着引物的特异性和在PCR反应中的退火温度对越多数实验适宜引物长

度为18到24个碱基等于或少于15碱基的短引物有时用于简单的基因作图或特殊的文库构建library protocol 28到35碱基的长引物对于从一系列高度相关的分子中扩增序列和特殊样

本的克隆能起到重要作用长PCR引物能给扩增带来更好的特异性长引物也允许您通过降低

退火温度来能提高反应的灵敏度不过长引物通常更易于形成包括发卡结构二聚体自身互

补等二级结构

理论上在合适的融链温度范围内最短的引物能在特异性和高效性间获得较好的平衡PRIMER PREMIER 已经包含了合适的引物长度范围如果您改变了它们软件将会自

动记录并在下次使用直到您再次改变它们因此您最好根据不同实验的特殊要求输入合适

的长度范围

PRIMER PREMIER 以最短的指定长度开始搜索引物如果找到的引物的T m值小于设定

范围或GC含量不符合要求它将给引物增加一个碱基长度并重新计算T m值和GC含量看其是否符合要求如果引物长度达到最大值还不能符合要求则该引物将会被剔除这种搜索机制保

证找到的引物是符合T m值和GC含量要求的最短引物

为设计一条高效引物有几个参数必须考虑PRIMER PREMIER搜索所考虑的参数依次

如下

Tm 融链温度

PRIMER PREMIER根据相邻二碱基对作用理论nearest neighbor theory 来计算融链

温度请参看附录A中关于公式的说明选择的T m范围应该为退火提供足够的热度在自动搜

索中PRIMER PREMIER使用的范围选择机制如下

首先计算出指定搜索范围中所有可能引物的Tm值得出平均值后按照不同的严格度

要求确定的波动值根据这一平均值来计算出T m范围

根据已发表的实验数据文献8 PCR反应的合适T m范围为56到63°C 以上机制是被设

计用来保证能在指定的范围内找到合适数量的引物

GC% GC含量

对于PCR反应来说GC含量在50%左右比较合适而对于测序引物和杂交探针来说GC

含量至少应为50% 请参看上文Automatic Search章节中的图表标明的各种搜索方法使用的具体参数

Degeneracy 多义性

当设计多义引物时应尽量减少引物多义性这样会带来更好的特异性应尽量避免3

末端的多义性因为这里即使一个碱基的错配都能阻止引物延伸详情请参看本说明的Degeneracy 多义性章节

3’ End Stability 3 末端稳定性

引物稳定性影响它的错配效率一条理想的引物应该有一个稳定性较强的5 末端和相对

稳定性较弱的3 末端如果引物3 稳定性强有可能在即使5 末端不配对的情况下造成错

配形成非特异性扩增条带secondary bands 而3 末端稳定性低的引物较好的原因是

在引物发生错配时由于3 末端不太稳定引物结合不稳定而难以延伸

GC Clamp GC钳

引物与目的位点的有效结合需要有稳定的5 末端这一段有较强稳定性的5 末端称为GC

钳它保证引物与模板的稳定结合选择有合适稳定性的引物能在确保不产生非特异性条带的

前提下尽量降低退火温度使用菜单Report > Internal Stability选项可以看到象下图所显示的

一个引物的内部稳定性曲线表

请注意上图就显示一个好的引物3 末端稳定性较弱而5 末端有一个较强的GC钳

Repeats and Runs 重复和循环

PRIMER PREMIER自动剔除任何有三个及以上的重复或循环碱基的引物例如引物包含ATATAT这样AT被重复三次那么这个引物将被剔除您可以设定可以接收的碱基重复的数量Secondary Structures 二级结构

二级结构是引物设计中必须考虑的一个重要因素二级结构能显著影响反应中能与模板正

确结合的引物数量发卡结构的存在能限制引物与目的位点的结合能力从而降低扩增效率形成发卡环的引物则不能在PCR扩增中发挥作用

Hairpin 发卡结构

发卡结构的形成是由于引物自身的互补碱基分子内配对造成引物折叠形成的二级结构并

由于发卡结构的形成是分子内的反应仅仅需要三个连续碱基配对就可以形成发卡结构的稳定性可以用自由能衡量自由能大小取决于碱基配对释放的能量以及折叠DNA形成发卡环所需要的能量如果自由能值大于0 则该结构不稳定从而不会干扰反应如果自由能值小于0 则

该结构可以干扰反应按下按钮All 可以使用PRIMER PREMIER软件中的Hairpin Report

功能帮助您回避类似二级结构

Dimer 二聚体

引物之间的配对区域能形成引物二聚体它是相同或不同的两条引物之间形成的二级结

构它造成引物二聚体扩增并减少目的扩增产物二聚体可以在序列相同的两条引物或正反向引物之间形成如果配对区域在3 末端问题会更为严重3 末端配对很容易引起引物二聚

体扩增使用Dimer Report功能可以预测二聚体的形成

False Priming 错配

如果引物可以结合除目的位点外的其他区域扩增效率将明显降低目的产物带将减少或

出现涂布smear PRIMER PREMIER会检查每一条引物是否会与整个序列的其他位点形成

局部的错配3 末端连续几个碱基配对形成错配的倾向要高于引物上游区域同样数量的碱基配对您可以分别设定确认为错配的3 末端或引物全长形成连续碱基配对的数量

Pair Rating 匹配度评分

匹配度低的引物对常常不太有效是因为在同样退火温度下T m低的引物决定扩增的特

异性而T m高的引物更易于形成非特异性结合而造成错误的起始PRIMER PREMIER会计算

每一对引物的匹配度100分为满分并按照分数按降序排列计算引物对匹配度以及单个引

物评分的公式请参看本说明的附录

Search Results 搜索结果

当您点击搜索程序窗口的OK 按钮接受搜索结果后Search Results 搜索结果窗

口将会打开它显示了搜索中找到的所有引物或引物对如果您选择了一条引物或一对引物对在PRIMER PREMIER窗口上将即时显示引物的分析结果与当前的序列配对的引物的位置和序列也会在Direct Select框上显示

可选操作

Function > Search Results

其他信息Search Results窗口的位置和大小是可以调节的这样在其他窗口里您感兴趣的显示

内容如引物分析结果就不会被遮住了

Multiplex/Nested Primer 复式及巢式PCR反应引物窗口

巢式PCR反应通常能大幅提高灵敏度同时又减少非特异性扩增产物通常在模板DNA浓

度太低或不纯时采用您可以使用自动搜索或按您实验的需要搜索然后从中选择一系列合乎要求的引物PRIMER PREMIER可以确认它们是否会形成二聚体来帮助您选择巢式PCR反应引物

当您接受搜索结果选择菜单Function >Multiplex/Nested Primers选项即可打开该窗口

所有引物与全序列以图形显示在窗口顶部序列上的框架代表窗口中间放大显示的部分序列所在的位置通过拖动横行滚动条可以改变放大显示的区域所有提供的引物以竖线形式在顶部的图框显示以蓝色三角形或红色三角形在下面的放大框中显示蓝色代表正向引物红色代

表反向引物

点击三角形即选定一条对应的引物应用于您的巢式PCR反应同时三角形由空心变为实心

表明已被选中选中的引物会在下面的图框中以图表形式显示您会看到在您选择引物的同

时已选引物间可能存在的交叉二聚体也同时显示出来PRIMER PREMIER能即时分析所有

的已选引物并显示它们之间间可能存在的交叉二聚体结构您可以继续选择引物直到您找到一组没有或很少有稳定的交叉二聚体的引物要剔除一条已选引物非常简单再次点击对应的实心三角形就可以了您也可以手动添加一条引物这样便于您使用已有的引物或通用引物您

也可以手动添加所有的引物并分析它们之间的能否形成交叉二聚体您可以指定输入的寡聚核酸作为正向引物还是反向引物它们的起始位置和序列如果不指定起始位置则默认为5

末端第一个碱基如果想删除一条引物只需选定并点击Delete 按钮

您可以打印模板序列及所有的引物已选引物显示为实心三角形未选引物显示为空心三角形列表包含的引物以及所有可能的交叉二聚体结构也同样被打印出来

Database 引物数据库窗口

引物数据库可以用来保存引物序列您可以为每一条引物命名并保存在一个原有的或新

建的数据库中在数据库窗口中您可以使用Order Primers按钮来定购引物有两种主要方

法可以将已选的引物输入到数据库中您可以在Search Results窗口中标记想选择的引物然

后在引物数据库窗口中使用Get Marked Primers按钮将标记的引物全部输入到数据库另一种方法是您直接选择一条或一对引物再利用Current Primer Pair 当前引物对图框将其输入

数据库引物数据库可以保存引物的起始位置序列对应链和引物名称选择一条引物使

用菜单的编辑选项或点击本窗口的快捷按钮可以编辑引物的起始位置序列对应链即方向

和引物名称

从下拉菜单里选择一个引物数据库您可以使用Import 按钮输入以往保存的引物并在

当前序列上进行分析在引物被选择后您可以使用PRIMER PREMIER窗口对其进行编辑和

分析您可以使用Edit Primer窗口上的prime 按钮在当前上序列寻找最佳的结合位点

您可以添加一个新的数据库并命名区分这样便于您依照不同的项目或模板序列将保存引

物信息您也可以同样便利的删除一个数据库

使用Add Primer 按钮可以添加一条新引物同时激活一个窗口用来填写引物名称起

始位点对应链和引物序列如果不指定起始位置则默认为5 末端第一个碱基

Reports 分析报告

使用Reports菜单可以提供多种分析报告除了在PRIMER PREMIER窗口下也可以直接

打开的二级结构报告也可以提供当前引物的内部稳定性图表和比吸光度报告选择Reports

菜单下的Optical Activity选项能打开一个报告窗口显示当前引物对的分子量和比吸光度activity 单位nmoles/OD和ug/OD

当您在内部稳定性图表上移动鼠标指针将会显示一条贴近最近的序列的分界线而数据

输出窗口也会即时更新而相应五聚体会高亮显示该图表窗口可以调整大小以便看清细节

当您选择Reports菜单下的Hybridization Time 杂交时间选项您可以输入引物的长度和

浓度点击Analyze 按钮可以得到杂交时间

Synthesis Order Form 合成订单

在搜索及分析完引物后如果您决定定购合成该引物您可以使用软件生成订单为方便

您使用软件已经有一个现成的模板您可以创建一个新订单并输入您的地址和其他信息

并命名保存您可以使用这个订单作为今后的订单模板Database window 数据库窗口可

以用来选择您想合成的引物只需选择您想合成引物点击Order Primer 的快捷按钮PRIMER PREMIER 将在合适的位置自动添加您选择的引物并附上地址及其他信息生成一张订单您可以加上您的注释并将其打印送出您可以保存该订单便于以后查看

Optical Activity 比吸光度

引物对于260nm波长紫外光的吸光度即A260与其浓度成正比1mg/mL的DNA吸光度为

0.02 软件也能计算引物的分子量以便计算如何稀释新合成的引物

Molecular Weight 分子量正反引物分子量均以grams/mol 克/摩尔为单位这是根据

分子量列表计算得出的

nmol/A260 在260nm波长紫外光下每单位吸光度代表的引物的纳摩尔数量这是根据吸光

系数和分子量列表计算得来的

ug/A260 在260nm波长紫外光下每单位吸光度代表的引物的微克数量这是根据吸光系数

列表计算得来的

Degeneracy 多义性

某些PCR实验需要引物结合到不确定的序列例如下列情况

知道表达蛋白的序列但是不知道DNA序列

模板DNA测序结果不准确或不完全

利用其他生物体已确认的序列来扩增某一编码区

利用模板的同源序列设计引物

在设计多义引物时除了在上述搜索参数章节提及的一般参数外也要考虑引物的多义性

多义性尽可能低的引物有更高的特异性因而更为理想尽量避免3 末端的多义性也很关键

因为3 末端即使一个错配也会抑制延伸PRIMER PREMIER 能自动搜索模板序列设计出

在3 末端多义碱基比例和数量都较少的引物参见文献13

有报道说PCR程序能显著改变多义引物扩增的成功率该种优化程序开始的2 5个循环

采用不严格的退火温度然后的25到40个循环使用更为严格退火温度宽松的退火条件可以

允许部分配对的引物与模板结合在两个循环后扩增产物的5 末端就与引物一致并能很

好的作为以后扩增的模板了此时提高退火温度能得到更高的特异性

Graphs 图表

通过Graph菜单可以获得整个序列T m 融链温度GC% GC含量和Internal stability

内部稳定性的图表T m是所有可能的引物的融链温度引物长度是由Preferences 默认

参数设定的GC%则是所有可能引物的GC含量Internal stability 内部稳定性则是在每

一序列位点起始的五聚体的稳定性自由能当您在内部稳定性图表上移动鼠标指针将会显示一条贴近最近的序列的分界线而数据输出窗口也会即时更新而相应五聚体会高亮显示

Restriction Enzyme Analysis 限制性内切酶分析

PRIMER PREMIER 为您提供的限制性内切酶的分析功能包含约900种酶同时也提供工

具让你您方便的添加其他酶通过从默认群组中选择或剔除限制性内切酶您可以创建一个新的群组使用此外您可以根据限制性内切酶特性使用特征筛选来创建新的群组并作为当前群组来进行限制性内切酶分析限制性内切酶分析可以采用以下几种格式显示列表图谱或序

列

这一功能板块有下列几个部分

Restriction Enzyme Analysis Window 限制性内切酶分析窗口

Filter Window 特征筛选窗口

Edit Window 编辑窗口

Restriction Enzyme Analysis 限制性内切酶分析窗口

PRIMER PREMIER 为您提供的限制性内切酶分析功能包含约900种酶您可以启用群组编辑从All Enzymes 全部酶中添加或删除一些酶作为当前使用的群组Selected Enzymes 框显示了当前使用的群组包含的酶它是全部酶的子集被用来做限制性内切酶的分析有两种方法可以用来选择当前群组

1 从All Enzymes 框中选择您想添加的酶添加到当前群组中对于windows或Power

Mac系统而言在点击同时按住CTRL键即可选择多个酶按住SHIFT键同时点击可以选择

两次点击之间范围内的所有酶使用Add 按钮将选中的酶加入到当前群组在Selected Enzymes 框中选择酶并点击Delete 按钮可以从当前群组中剔除特定酶同样在All Enzymes 框中双击某个酶即为添加在Selected Enzymes 框中双击某个酶即为剔除

2 使用特征筛选窗口根据某些特征来选择当前群组具体请看下面的Filter window 特

征筛选窗口的章节

Restriction Sites 酶切位点窗口

在Restriction Enzyme Analysis窗口点击OK 按钮可以打开Restriction Sites窗口可

选显示方法有

Table 列表以表格形式列出酶识别序列和切割位点以及在待分析序列上的切割位

置

Sequence 序列显示所有酶在分析序列上的实际切割位点

Map 图谱以长条形式显示序列在其中使用竖线表示所有的酶切位点

Non-cutters 无切点酶列出所有在序列上没有切点或不符合预设参数的酶

您通过指定切点数量限制来有选择的显示酶切分析结果例如您点选4 数字框切

点多于或等于5个的酶将不会被显示

使用菜单的File >Print 您可以打印以Table Sequence 或Non-cutters 形式的分析结果Edit Enzyme 限制内切酶编辑窗口

想要在All Enzymes群组中修改某一种酶选择该酶并点击Edit 按钮可以激活Edit Enzyme 限制性内切酶编辑窗口在这里酶的名称识别位点和热稳定性都可以修改

注意如果某个酶的切点多于50个将只显示前50个其余的则被忽略

点击Add 按钮可以激活新内切酶窗口其名称和识别位点采用默认设置点击Delete

按钮则可删除选定的酶点击OK 按钮则保存所有修改并返回Restriction Enzyme Analysis Window 限制性内切酶分析窗口

注意您无需每次修改都点击OK 按钮软件能记住您这一次的所有修改点击OK 按钮

可以保存所有修改而点击Cancel 按钮则放弃所有修改

Filter 特征筛选窗口

您可以使用特征筛选窗口根据酶的特征来选择当前群组进行分析

当您点击OK 按钮后Selected Enzymes框内包含的内切酶列表将成为酶切分析使用

的当前群组并将使用该群组进行限制性内切酶分析

Motif Analysis 基序分析

软件为您提供了包括约165种常用基序的分析功能同时也提供工具让你您方便的添加其他基序通过从默认群组中选择或剔除基序您可以创建一个新的群组使用并作为当前群组来进行基序分析基序分析可以采用以下几种格式显示列表图谱或序列

这一功能板块有下列两个部分

Motif Analysis Window 基序分析窗口

Edit Window 编辑窗口

Motif Analysis 基序分析窗口

PRIMER PREMIER 为您提供的基序分析功能包含约165种基序您可以启用群组编辑从All Motif 全部基序中添加或删除一些基序作为当前使用的群组Selected Motif 框显

示了当前使用的群组包含的基序它是全部基序的子集被用来做基序分析可以用下述方法来选择当前群组

从All Motif 框中选择您想添加的基序添加到当前群组中对于windows或Power Mac

系统而言在点击同时按住CTRL键即可选择多个基序按住SHIFT键同时点击可以选择两次点击之间范围内的所有基序使用Add 按钮将选中的基序加入到当前群组在Selected Motif 框中选择基序并点击Delete 按钮可以从当前群组中剔除特定基序同样在All Motif

框中双击某个基序即为添加在Selected Motif 框中双击某个基序即为剔除

RB说明书中文版

新型环保制冷剂 R415B (原THR01b) 产品说明书目录 1. R415B产品的理化指标 2. R415B产品的主要物性参数 3. R415B产品的环境性能 4. R415B产品的热工性能 5. R415B产品的安全性能 6. R415B产品的直接充灌性能

7. R415B产品的使用技术和充灌指南 8. 技术协助附表1、充注用R415B的饱和性质表附表2、充注用R134a的饱和性质表说明：此版本说明书，系根据近年来实际应用需要，对原说明书作相应的修订和补充。使用R415B时，请以此版本为准。今后还将根据实际需要，不定期地出版新版本说明书。

R415B（原THR01b）可直接充灌于汽车空调中替代R134a。 R415B是美国制冷供暖空调工程师学会（ASHRAE）授予THR01b的国际编号。 R415B于1998年获美国国家环保局“重要的新替代物”（SNAP）项目的认可。 R415B被我国国家环保总局评为“1999年A类国家重点环境保护实用技术”，是2004年国家环保总局推荐的消耗臭氧层物质（ODS）替代品。 R415B的主要特点是：⑴环保性能好；⑵安全性能好。无毒、不易燃；⑶热工性能好。节能，制冷性能好，降温速度快；⑷直接充灌性能好。不必改动原R134a 制冷空调系统的部件和生产线，可直接充灌，转轨费用低。 1．R415B产品的理化指标外观：无色透明，不混浊气味：无异臭纯度：≥99.8% 水份：≤10mg/kg 酸度（以HCl计）：≤0.1mg/kg 蒸发残留物：≤50mg/kg 2．R415B产品的主要物性参数 R415B为近共沸的二元混合物。表1比较了R415B与R12和R134a的主要物性参数，可知R415B的相变汽化潜热大、临界温度高、导热系数大和粘度小等几个特征使R415B的制冷系统充装量更少、制冷速度更快、换热和流动效果更好。表1 R415B与R12和R134a的主要物性参数

PyroSiM中文版用户说明书

第1章安装准备安装PyroSim 为了工作，通过本教程，您必须能够运行PyroSim。您可以从互联网下载PyroSim，将可获得免费试用。。单位除非另有说明，在本教程中所给予的指示，将承担PyroSim的现行SI单位制。如果PyroSim 是使用不同的单位系统，模拟不会产生预期的结果。为了确保您使用的是SI单位： 1、在View菜单上，单击Units。 2、在Units的子菜单，确认SI是选定的。你可以在任何时候，SI和英制单位之间切换。数据存储在原有存储系统，所以当你切换单位时，不会损失精度。操作的三维图像 ?为了旋转（spin）三维模型：选择然后在模型上单击左键并移动鼠标。该模型会旋转，就像您选择球体上的一个点。 ?放大zoom：选择（或按住ALT键）和垂直拖动鼠标。选择然后按一下拖动以定义一个缩放框。 ?移动move模式：选择（或按住Shift键）并拖动来重新定位模型窗口。 ?改变重点：选择对象（S），然后选择定义一个较小的“查看选定对象周围的领域。选择将重置，包括整个模型。 ?在任何时候，选择（或按Ctrl+R），将重置模型。您还可以使用Smokeview和以人为本的控制。请参阅用户手册为PyroSim说明。 FDS的概念和术语材料用于定义材料热性能和热解行为。表面表面是用来定义在您的FDS模型的固体物体和通风口的属性。在混合物或层表面可以使用先

前定义的材料。默认情况下，所有的固体物体和通风口都是有惰性的，一个固定的温度，初始温度。障碍物障碍物的根本在火灾动力学模拟的几何表示（FDS）[FDS-SMV的官方网站]。障碍物两点定义在三维的矩形固体空间。表面特性，被分配到每个面对的阻挠。设备和控制逻辑可以定义创建或删除在模拟过程中的一个障碍。当创建一个模型，障碍物的几何形状并不需要相匹配的几何网格的解决方案中使用。然而，产品安全的解决方案将配合所有几何解决方案网状。在FDS分析，阻塞所有的面转移到对应最近的网状细胞。因此，一些障碍物有可能成为在分析厚;其他可能成为薄，对应于一个单细胞的脸，这有可能引入不必要的到模型的差距。这些含糊之处，可避免使所有的几何对应网格间距。通风口有一般使用上的通风口FDS集团来描述二维平面物体。从字面上理解,一个用于排气模型组件通风系统的建筑,如扩散或回报。在这些情况下,排气坐标定义为一个平面形成的边界风管。你也可以使用通风口作为一种手段,应用到某一特定边界条件下的矩形表面。例如一堆火,可由指定一个排气口或者网边界或固体表面上产生。通风口表面定义了火所需要特性的。计算网格在FDS集团直线域内进行的计算称为网格。每个网格划分为矩形。当进行选择时必须考虑这两个因素。矩形尺寸达到了所需要的分辨率定义对象模型(障碍)和理想的流量动力学分辨率解决方案(包括当地消防诱导的影响)的要求。虽然几何对象(障碍)在一个FDS场模拟分析中可以指定试样尺寸不落在矩形所处的坐标,但在FDS解决方案中,所有的阻力都转向了最近的矩形。如果一个阻塞是非常小,两个面可以近似为相同的矩形。FDS用户指南[McGrattan,克莱恩,Hostikka、弗洛伊德、2009]建议,全功能、障碍物应指定至少一层矩形的厚度。作为一个结果,矩形大小必须足够小,但能够合理地代表问题的几何形状。另外,矩形块应该尽可能接近立方体。矩形尺寸是否足以解决水流动力条件方案只能由网格敏感性研究确定。关于网格大小的模型敏感性将在章节5验证，对于核能电厂的火灾模型选择的的应用[美国:2007)。它的职责是进行灵敏度分析,以研究作为部分任何仿真。第二章 ExampleProblemsProvidedwithFDS5 如果你想要觉得有趣并能很快的进行一些实例分析，你可以导入包含了NIST的FDS5输入文件。在PyroSim2009\SAMPLES\FDS5文件夹的PyroSim分布中提供了这些例子。本章我们列举几

苹果最新iPad2中文版使用说明书(完整超详细)

本人整理很长时间后在分享的.希望大家喜欢首先我先说下，源于网上个人整理后分享的,整理也要花费时间和精力，这几个币下载也不算贵的，购买别人的劳动成果也是对别人的一种肯定。如果你不下可以去网上自己去找，请不要骂人。暂时免费，果断时间我会改过来收费苹果iPad2平板电脑新手使用教程有需求请下载，因为超详细最近关于苹果最火的无非就是iPad2的发售，之前用过iPhone的朋友对iPad2的使用还算了解，但也有没用iPhone但入手iPad2的朋友，这样对苹果官方的套件iTunes就不是很熟悉了，小编有幸入手了一台iPad2，这里给刚入手iPad2但又不是很熟悉不太会用的朋友一个简单的初级入门iPad2使用教程。什么是iTunes

iTunes是苹果所有移动设备的PC套件，不管是iPod、iTouch、iPhone还是今天要说的iPad2，都要使用iTunes来安装应用程序。下载完毕后，安装好下载的iTunes，把iPad2用数据线连上电脑，iTunes就会识别了。同步程序因为现在iPad2的越狱还没有高人放出，大家只能花钱购买正版或者是免费的试玩版的游戏或者软件了。注册好了之后，找到你喜欢的一个应用程序，比如我选的这个点开之后是这个界面，然后点击这里的免费字样

然后就会显示正在下载下载好了之后，在应用程序选项卡，就会看到刚刚下载的游戏。

这时点击设备中的应用程序选项卡，然后选中要同步的程序接着点击右下角的同步字样，等待同步完毕即可。这样就同步完毕之后就会在iPad2的桌面上看到刚刚下载的网球游戏了，QQ等其他一些免费的软件也是一样的道理。下面是我用iPad2专用的QQ上的一些截图，看着确实很过瘾。

Apache 用户手册(中文版)

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Apama中文版用户手册

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E4_XShow软件_说明书(中文版)

异步LED 显示屏控制卡客户端应用软件 X show 图文编辑软件使用说明书南京卡乐光电技术有限公司 2014年7月文件状态：【】草稿【】正式发布【√】正在修改项目名称文档名称使用说明书文件标识当前版本 X0.1 作者林其俊完成时间 2014- 页数密级

文档控制修改记录 * 审阅人存档

目录 1 概述 (1) 2 控制卡种类 (1) 3 启动软件 (2) 4 连接控制卡 (6) 4.1串口通讯 (6) 4.2网口通讯 (8) 4.3 GPRS或互联网通讯 (10) 4.4 U盘通讯 (11) 5 屏幕参数与单元板类型 (12) 5.1 如何修改STR极性和数据极性 (12) 5.2 单元板参数 (12) 5.3 屏体参数 (15) 5.4 通讯和显示效果参数 (16) 6 编辑内容并发送 (17) 6.1 添加屏幕 (17) 6.2 添加节目 (17) 6.5 添加字幕 (17) 6.4 如何添加图文区域 (18) 6.6 添加炫动字区域 (19) 6.7 添加时钟区域 (20) 6.8 添加表盘区域 (21) 6.9添加计时区域 (21) 6.10 添加温度 (22) 6.11预览及发送 (23) 6.12 串口和网口控制操作 (23) 6.12.1 校时 (23) 6.12.2 亮度调节 (23) 6.12.3 请求型号 (24) 6.12.4 定时开关机 (24) 7 集群管理 (25) 7.1 网口集群 (25) 7.2 GPRS集群 (25) 8 文件菜单 (25) 3.9.1 常规内容操作 (25) 3.9.2 特殊内容操作 (27) 9 常规问题处理办法 (27) 9.1 X卡各种常见STR极性和数据极性错误的现象 (27) 9.2 显示屏不显示 (27) 9.3 如何立即显示不闪烁 (28) 9.4 图文字体周围有毛边如何处理 (28)

Pulldownit使用手册(中文版)

Pulldown It 1.7 使用手册（第一版）官方网站：https://www.wendangku.net/doc/7016575967.html, 么是Pulldownit? Pulldownit是一个全新的将破碎视作大规模刚体解算的动力解算器。通过它的数字技术，艺术家能快速的模拟大量物体的场景、建筑物倒塌或者是各种易碎的物体。快速准确的刚体解算器内置Pulldownit的RBD解算器是CG动力学多年的研究成果。它在对模拟对象的数量没有限制，能够在几秒钟内计算数百人的碰撞。它克服了其他解算器具有的的所有典型问题。它精确的节省资源，计算正确物理摩擦（PCF）。所有这些，保证了稳定，准确的模拟，而不是让物体飞走！破碎 Voronoi-based pre-cutting破碎，一个Pulldownit的新型预切割工具。它是基于Voronoi图的，因为这是最好的最精确的破碎图案。这个功能能在很短的时间能将3d物体预切割上百块碎片。此外，生成的碎块在Pulldownit结算其中很容易的进行快速和准确的模拟。破碎的能力 Pdi内置的破碎能力是全新的，开创性的。它可以打破任何易碎材料类似于石材，玻璃或水泥。通过使用它的数字艺术，能够模拟在几分钟内模拟建筑物倒塌，如建筑物拆除。它的易用性和强大的计算工具可以控制模拟完成创建的裂纹和控制器。有好的动画设置 Pdi集成了最优秀的3d套件。它能获取集合体最终的视口计算结果作为最终的动画。它允许重置模拟或者是重新计算任何一帧的参数更改和恢复模拟，此外，已经制作动画的物体或者角色也能模拟互相影响。

Pulldownit官方网站效果展示：一、破解方式： 1，网上下载Pulldown it 1.7破解安装包，内部详细解压如下：

MongoDB_使用手册-中文版

MongoDB 使用手册-中文版

目录第1章MONGODB简介 (4) 1.1功能特点 (4) 1.2适用范围 (4) 第2章MONGODB下载及安装 (5) 2.1下载地址 (5) 2.2安装方法 ............................................................................................................ 错误！未定义书签。第3章MONGODB语法.. (6) 3.1基本命令 (6) 3.1.1.启动mongodb (6) 3.1.2.停止mongodb (6) 3.2SQL语法 (7) 3.2.1.基本操作 (7) 3.2.2.数据集操作 (8) 第4章JAVA操作MONGODB (10) 4.1正在整理中 (10) 第5章其它 (10) 5.1正在整理中 (10)

第1章MongoDB简介 1.1功能特点官方网址：https://www.wendangku.net/doc/7016575967.html,/ MongoDB是一个基于分布式文件存储的数据库开源项目。由C++语言编写，旨在为WEB应用提供可护展的高性能数据存储解决方案。它的特点是可扩展，高性能，易使用，模式自由，存储数据非常方便等，主要功能特性有： ◆面向文档存储：(类JSON数据模式简单而强大)。 ◆高效的传统存储方式：支持二进制数据及大型对象（如照片和视频）。 ◆复制及自动故障转移：Mongo数据库支持服务器之间的数据复制，支持主-从模式及服务器之间的相互复制。 ◆Auto-Sharding自动分片支持云级扩展性（处于早期alpha阶段）：自动分片功能支持水平的数据库集群，可动态添加额外的机器。 ◆动态查询：它支持丰富的查询表达式。查询指令使用JSON形式的标记，可轻易查询文档中内嵌的对象及数组。 ◆全索引支持：包括文档内嵌对象及数组。Mongo的查询优化器会分析查询表达式，并生成一个高效的查询计划。 ◆支持RUBY，PYTHON，JA V A，C++，PHP等多种语言。 1.2适用范围适用场景： ◆适合实时的插入，更新与查询，并具备应用程序实时数据存储所需的复制及高度伸缩性。 ◆适合作为信息基础设施的持久化缓存层。 ◆适合由数十或数百台服务器组成的数据库。因为Mongo已经包含对 MapReduce引擎的内置支持。 ◆Mongo的BSON数据格式非常适合文档化格式的存储及查询。不适用场景： ◆高度事务性的系统。 ◆传统的商业智能应用。 ◆级为复杂的SQL查询。

(整理)使用说明书(中文版) 中英对照.

生物颗粒燃料熔炼炉使用维护、保养说明书Operation and Maintenance Instruction of Bio-mass Pellet Fuel Smelting Furnace 泰州杰利瑞节能科技发展有限公司Taizhou Jie Lirui Energy Technology Development Co., Ltd 敬告！ Attention! 请用户使用前详细阅读产品使用维护、保养说明书，并请在使用过程中严格遵循产品使用维护、保养说明书，若由用户使用不当引起的损坏制造商将不承担责任，碳化硅石墨坩埚属易耗件，不在质保范围。 Please read the product operation and maintenance instruction carefully before use, and strictly follow the product operation and maintenance instruction during the operation. In case of any damage caused by improper use, the manufacturer will not be liable; the silicon carbide graphite crucible is subject to vulnerable part and excluded in the warranty scope. 精品文档

目录Catalog 1 概述Introduction 2 组成Components 3 主要技术参数Main technical parameters 4 主要用途及适用范围Main applications and applicable scopes 5 配电要求Power distribution requirements 6 安装Installation 7 启动前检查Check before start-up 8 烘炉Dry-off operation for furnace 9 使用与维护Operation and maintenance 10 碳化硅石墨坩埚使用注意事项 Precautions for using silicon carbide graphite crucible 11 常见故障与排除Common faults and troubleshooting 12 运输及开箱检查Transportation and out-of-box inspection 13 技术支持Technical support 1 概述Introduction 生物颗粒燃料熔炼炉（以下简称“熔炼炉”）采用半气化复合燃烧技术，具有低碳环保、高效节能、操作维护简单的特点，是替代燃油炉、燃气炉、焦碳炉、电炉的最佳产品，可以降低30%～60%的能耗成本。 Based on the semi-gasification composite combustion technology, bio-mass pellet fuel smelting furnace (hereinafter referred to as the “smelting furnace") is and characterized by the low-carbon environmental protection, high efficiency, energy conservation, simple operation and maintenance. It is the best product to replace the oil-fired furnace, gas-fired furnace, coke furnace and electric furnace; and the cost of energy consumption can be reduced by 30% ~ 60%. 2 组成Components 熔炼炉主要由炉壳、炉膛、坩埚、燃烧室、风机、电控箱、送料器、装料器、炉盖、埚盖、保温层、烟囱、除尘器、扒灰口等组成。The smelting furnace is mainly composed of the furnace shell, hearth, crucible, combustion chamber, fan, electric cabinet, feeder, charger, 精品文档

使用说明书(中文版) 中英对照

生物颗粒燃料熔炼炉使用维护、保养说明书 Operation and Maintenance Instruction of Bio-mass Pellet Fuel Smelting Furnace 泰州杰利瑞节能科技发展有限公司Taizhou Jie Lirui Energy Technology Development Co., Ltd 敬告！ Attention! 请用户使用前详细阅读产品使用维护、保养说明书，并请在使用过程中严格遵循产品使用维护、保养说明书，若由用户使用不当引起的损坏制造商将不承担责任，碳化硅石墨坩埚属易耗件，不在质保范围。 Please read the product operation and maintenance instruction carefully before use, and strictly follow the product operation and maintenance instruction during the operation. In case of any damage caused by improper use, the manufacturer will not be liable; the silicon carbide graphite crucible is subject to vulnerable part and excluded in the warranty scope.

TFCalc说明书中文版

Contents目录Introduction The Model Capabilities Menus File Menu Edit Menu Options Menu Modify Menu Environment Stack Formula Layers-Front/Back Groups Targets-Discrete Targets-Continuous Comments Variable Materials Environments Materials Substrates Illuminants Detectors Distributions Run Menu Analyze Only Optimize Design Global Search Compute EFI Compute Sensitivity Compute Cone-Angle Average Compute Monitor Curve Compute Layer Sensitivity Set Analysis Parameters

Set Optimization Parameters Set Global Search Parameters Set EFI Parameters Set Sensitivity Parameters Set Cone-Angle Parameters Set Monitoring Parameters Results Menu Show Table Show Plot Show EFI Plot Show Color Chart Show Monitor Chart Saving Results Save as Illuminant Miscellaneous Menu Realitives Distribution Windows Set Table Parameters Set Plot Parameters Layer Window Options Compute Equivalent Index Compute Equivalent Stack Target(Discrete) Window Configuring TFCalc

hydrus说明书部分中文版

This tutorial considers water flow and solute transport in a simple three-dimensional transport domain. The transport domain is a relatively simple hexahedral domain with a slope in the X-direction. Dimensions of the transport domain are 1000 * 250 * 200cm and there is a groundwater 100 cm below the soil surface. There is a source of water and contaminant at the soil surface. The problem is divided into two parts. In the first part, the geometry of the transport domain and its discretization is defined and initial and boundary conditions are specified. In the second part, final pressure head profile from the first run is imported as an initial condition, and pulse of solute is added into the surface source. The example thus again demonstrates how results of a previous simulation can be used in follow-up calculations with different boundary conditions or having additional features. Users will learn how to define a simple threedimensional transport domain and how to use Sections when defining initial and boundary conditions. Users will also learn various ways of viewing transport domain and simulation results. 本教程认为在一个简单立体交通领域的水流，传送域是一个在X方向有斜角的相对简单的六面体，传送域的尺寸是1000* 250 *200厘米，100厘米以下的土壤表面有一个地下水。问题被分为两个部分，在第一个方面，传送域及其离散化的几何形状被确定，初始条件和边界条件被指定。这样的例子再次证明了先前模拟的结果如何被应用于后续计算不同的边界条件，或具有其他的附加功能。用户将学习如何定义一个简单的三维传输域，以及如何使用章节定义初始条件和边界条件。用户也将学习各种方式查看运输域和仿真结果。

H.264详细使用说明书中文版_

P2P H.264网络摄像机详细用户使用指南

目录第一章产品介绍 (1) 第二章安装 (2) 第三章搜索设备并登陆 (3) 第四章视频属性设置和云台控制操作 (4) 第五章系统设置选项 (5) 第六章报警设置 (6) 第七章前段录像 (6) 第八章控制面板 (7) 第九章诊断工具 (8) 第十章注销 (9) 第十一章通过广域网访问网络摄像机 (10) 第十二章通过手机访问网络摄像机 (11) 第一章产品介绍 IPCAM 是一种通过网络传输动态视频的设备，它可以将本地的动态视频通过网络传输到世界各地有网络连接的地方，通过互联网，用户可以随时看到想监控的地方，拓展了人类的视野范围。 IPCAM 的视频传输基于TCP/IP协议. 内置Web服务器支持Inertnet Explore,用户可以通过Web页面管理和维护您的设备,实现远程配置，启动和升级固件。 P2P协议的使用减少了用户设置路由器的过程，插上网线，在客户端软件上输入摄像机的UID即可看到图像，真正做到即插即用。您可以使用IPCAM监控家庭，办公室，工厂，连锁店，幼儿园等需要监控的场合，通过网络监控，可以对想监控的地方一览无余，在时间和空间上都大大方便了用户。 1.1系统配置需求：在电脑上观看网络摄像机的图像，您的机器需要的最低配置： 1．奔四以上CPU，2GHz或更高主频； 2．至少有1内存； 3．windows xp,windows7操作系统，安装internet explorer 6.0以上浏览器，建议使用internet explorer 8.0观看。 1.2产品特征：安装简易：网络摄像机安装非常简单，不需要专业的布线，只需要电源和网络络连接，如果是采用WIFI无线连接，则只需要提供电源即可，此设备支持WPS功能，用户可以通过WPS 按键和带WPS功能的无线路由器进行连接而不需要密码设置的过程。P2P协议的使用，可以减少用户设置路由器的麻烦，做到即插即用。适用范围：适用于家庭、办公室、企业、超市、学校以及其他需要监控的公共场所；多协议支持：内置嵌入式操作系统，支持TCP/IP 网络协议、SMTP (简单邮件发送协议),HTTP，UPNP，P2P等；配置简单——管理配置界面使用标准的Web浏览器，用户能够通过局域网或者因特网控制和管理网络摄像机；视频观看和录像：提供简洁的用户界面以观看实时图像，并可以录在你的电脑上，以备随时查阅。报警监测：通过移动侦测来侦测用户选择的区域来进行布防，在有非法侵入时，也可以实

DEV C 中文版使用手册

Dev-C++简明使用手册 Dev-C++是一个可视化集成开发环境，可以用此软件实现C/C＋＋程序的编辑、预处理/编译/链接、运行和调试。本手册中介绍了Dev-C++常用的一些基本操作，每一位同学都要掌握。一.启动Dev-C++ 方法一: 1.鼠标点击任务栏中的“开始”按钮，选“程序”菜单项，然后选“程序”下的子菜单项 “Bloodshed Dev-C++”项，显示该项下的子菜单。 2.单击”Dev-C++”菜单项，即可启动Dev-C++集成开发工具。（如图1所示）图1 方法二: 直接单击桌面上的Dev-C++的图标。二.新建源程序 1.从主菜单选择“File”—〉“New”—〉“Source File”(“文件”—〉“新建”—〉“源代码”)即可（如下图2所示）。

图2 如果大家看到界面上的字是中文的，则可以根据以下操作将界面改为英文。点击主菜单“工具”－>”环境选项”，在弹出的对话框中选择“界面”页，在Language （语言）下拉列表中选择English 即可，如下图所示。此时界面上的菜单、工具条等全部以英文命名。 2.此时屏幕右下侧出现一片白色区域，可以在此输入程序。如下图3所示。英文界面中文界面

图3 源程序编辑区域菜单工具栏输出标签页

3.保存源程序到硬盘一个好的习惯是创建了一个新程序后，在还未输入代码之前先将该程序保存到硬盘某个目录下，然后在程序的编辑过程中经常性地保存程序，以防止机器突然断电或者死机。要保存程序，只需从主菜单选择“File（文件）”—〉”Save（保存）”就可以将文件保存到指定的硬盘目录。如图4所示。图4 此时会弹出一个对话框，如图5所示。在此你需要指定文件要存放的目录（此处为F:\temp），文件名称(此处为test)以及保存类型。需要注意的是，在保存类型处一定要选择C source files(*.c)，意思是保存地是一个C文件。在点击右下脚的保存按钮后，在temp目录下将会出现一个名为test.c的源文件。

iphone4完全中文版使用手册[1]

首先我先说下，源于网上个人整理后分享的, 整理也要花费时间和精力，这几个币下载也不算贵的，购买别人的劳动成果也是对别人的一种肯定。如果你不下可以去网上自己去找，请不要骂人。 iphone4使用手册菜鸟使用iPhone4入门教程_iphone4基本操作指南_iphone4 使用教程菜鸟使用iPhone4入门教程开始：第一章：iphone的硬件按键 QUOTE: 3GS的各种功能按键

2010-10-15 12:22 上传下载(93.17 KB) iphone4基本操作 4代的各种功能按键

2010-10-15 12:22 上传下载(110.95 KB) iphone4基本操作锁定iPhone：按下“开/关”和“睡眠/唤醒”按钮。解锁iPhone：按下主屏幕按钮HOME键或“开/关”和“睡眠/唤醒”按钮，然后拖移滑块。完全关掉iPhone：按住“开/关”和“睡眠/唤醒”按钮几秒钟，直至出现红色滑块，然后拖移该滑块开启iPhone：按住“开/关”和“睡眠/唤醒”按钮，直至出现Apple 标志音量按钮：当您正在接听电话或欣赏歌曲、影片或其他媒体时，iPhone 侧面的按钮可以调节音量。其他情况下，这些按钮可以控铃、提醒和其他声音效果的音量。响铃/静音开关：扳动响铃/静音开关以让iPhone 在响铃模式或静音模式之间切换。（注：当iPhone 处于静音模式时，“时钟”闹钟频相关应用程序（如iPod）和许多游戏仍会通过内建扬声器播放声音。）技巧提示：默认情况下，无论是处于响铃模式还是静音模式，有电话拨入时iPhone 均会振动。如果iPhone 已设定为响铃模式，以通过按一次“开/关”和“睡眠/唤醒”按钮或一个音量按钮，使来电静音。按下第二次会将电话挂断！ ======================================================================= 第二章：iphone的各种状态图标