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大鼠结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性测定

大鼠结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)

活性测定

通过测定大鼠结肠组织髓过氧化物酶MPO活性来评估大鼠结肠组织中性粒细胞的浸润程度,采用分光光度法,根据Bradley的方法略加修改。操作过程简述如下:

1、用电子天平称取50mg大鼠结肠组织进行匀浆,匀浆液为磷酸缓冲液(50mM,pH6.0,内含0.5%十六烷基溴化胺),在冰上操作,为保证匀浆充分,每个标本匀浆10min;

2、将大鼠结肠组织匀浆液超声粉碎10sec;

3、将大鼠结肠组织匀浆液进行冻融(-80℃/37℃),反复冻融3次;

4、4℃14,000*g离心20min;

5、取离心上清液100μl,再加入2.9ml(50mM,pH6.0,内含0.167mg/ml邻联茴香胺和0.0005%过氧化氢);

6、立即在460nm处观察记录吸光度的变化,25℃时每分钟降解1μmol的过氧化氢为1个单位髓过氧化物酶活性。

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