rtpcr原理

RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。

逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶，至少具有以下三种活性：

1、依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链

2、 Rnase水解活性：水解RNA杂合体中的RNA；

3、依赖DNA的DNA聚合酶活性：以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA.

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。

试验前注意：

1. 做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug

2. RT按要求做，一般不会出太大问题。

3. PCR如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。

引物合成

1、内参照：

GAPDH正义：5′—ACCACAGTCCATGCCATCAC—3′

反义：5′—TCCACCACCCTGTTGCTGTA—3′

β-actin

正义：5′—CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC—3′

反义：5′—TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT—3′

2、 par-4:

正义：5′—GGGACCTCGGAACTCAAC—3′

反义：5′—TGTATCTGCCTGGGACTG—3′

、退火温度计算

（A+T）+4（G+C）

正反义平均数，再上下波动度（±4℃，或±5℃）

4、引物各合成5 OD，每OD一瓶分装好

5、引物稀释：

加DEPC水量为（μl）= ? nmol / OD × 管上所标OD数×100 稀释为10p mol / μl 浓度的引物溶液

注意事项：

1、逆转录的关键步骤是立即冰水浴。

2、Rt时，先打开PCR预热30分钟。

3、RNA抽提前，打开离心机预冷。

4、在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。

、做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。

6、RT按要求做，一般不会出太大问题。?

7、PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。

8、注意避免有毒、有害试剂伤害自己和他人：氯仿、溴化乙锭（EB）、酚、异硫氰酸胍、紫外线等

中国古代地方行政区划演变知识讲解

历史专题一中国古代地方行政区划的演变 中国古代的行政区划大致可以划分为以下五个时期：萌芽时期（先秦）、郡县制时期（秦、汉）、州制时期（魏晋南北朝、隋）、道（路）制时期（唐、宋）、行省制时期（元、明、清）。 1. 中国古代地方行政机构的发展演变 （1）秦：郡县制。 （2）汉：由郡、县两级制变成了州、郡、县三级。 （3）隋：州、县两级制。 ⑷唐：道、州、县三级。 宋：道（或称路）、州（或称府）、县三级制。 ⑹元：行省之下设路、府、州、县。 ⑺明：承宣布政司（习惯仍称行省）以下设府、县。 ⑻清：省、道、府、县 2. 演变特点： （1）由虚入实;监察机构行政化;变化多发生在混乱时期;一级行政区变化较大;次级行政区变化不大。 （史实：由虚入实，监察机构行政化史实：东汉时期的刺史制度逐渐演化为州一级行政机构。发生在政权交替混乱时期的史实：唐朝的藩镇;元朝的行省制。一级行政区变化大，次级行政区变化不大史实：一级行政区秦汉为郡，元为行省;县级基本未动。） （2）原则：山川形便；犬牙相入；依经济和人口变化不断调整。元代以前与自然环境和经济发展密切相关（或山川形便）；元代以后受政治因素影响较大（或犬牙交错）。 （元以前：与经济区、自然区和文化区相吻合;元后：“犬牙交错”原则， 避免行政区与经济区、自然区和文化区的吻合。各自的优点：与经济区、自然区和文化区相吻合：顺应了封建社会的自然规律和社会发展规律;有利于促进区域内部经济的交流发展和形成独立的经济体;有利于形成文化认同。“犬牙交错”原则：有利于削弱地方经济实力和文化认同感;有利于防止地方割据的出现，强化中央集权。不利于地方经济发展和抗御自然灾害；对内部交通、文化交流产生了不良影响。） （3 ）深层特征：中央集权逐步加强，地方主动性与能动性越来越受到压抑。地方权力越来越集中到中央。 （4 ）整体特征：二级三级制是古代地方管理制度的主体；局部而言：县是中国历史最稳定的一级政区；州的地位不断降低。 3. 对地方行政机构演变的整体评价： ⑴积极：有利于加强了中央集权，维护国家统一；便于征发徭役、兵役，征收赋税，管理地方治安；有利于社会稳定和经济发展。评述：以政治为目的为主，加强中央集权，遏制地方割据；维护了农耕经济的稳定和区域经济的均衡发展；思想上

PCR扩增的原理和操作步骤

PCR 扩增反应的操作 第一节PCR 扩增反应的基本原理 一、聚合酶链式反应（PCR ）的基本构成 PCR 是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA ）的扩增反应，是模拟体内DNA 复制过程，在体外特异性扩增DNA 片段的一种技术，在分子生物学中有广泛的应用，包括用于DNA 作图、DNA 测序、分子系统遗传学等。 PCR 基本原理: 是以单链DNA 为模板，4 种dNTP 为底物，在模板3'末端有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸，多次反复的循环能使微量的模板DNA 得到极大程度的扩增。在微量离心管中，加入与待扩增的DNA 片段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA 膜板、四种dNTP 溶液、耐热Taq DNA 聚合酶、Mg 2+等。反应时先将上述溶液加热，使模板DNA 在高温下变性，双链解开为单链状态；然后降低溶液温度，使合成引物在低温下与其靶序列配对，形成部分双链，称为退火；再将温度升至合适温度，在Taq DNA 聚合酶的催化下，以dNTP 为原料，引物沿5'→ 3'方向延伸，形成新的DNA 片段，该片段又可作为下一轮反应的模板，如此重复改变温度，由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期，反复循环，使目的基因得以迅速扩增。因此PCR 循环过程为三部分构成：模板变性、引物退火、热稳定DNA 聚合酶在适当温度下催化DNA 链延伸合成（见图）。 1．模板DNA 的变性 模板DNA加热到90~95 C时，双螺旋结构的氢键断裂，双链解开成为单链，称为DNA的变性，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。变性温度与DNA 中G-C 含量有关，G-C 间由三个氢键连接，而A-T 间只有两个氢键相连，所以G-C 含量较高的模板，其解链温度相对要高些。故PCR 中DNA 变性需要的温度和时间与模板DNA 的二级结构的复杂性、G-C 含量高低等均有关。对于高G-C含量的模板DNA在实验中需添加一定量二甲基亚砜（DMSO）,并且在PCR循环中起 始阶段热变性温度可以采用97 C ,时间适当延长，即所谓的热启动。 2．模板DNA 与引物的退火 将反应混合物温度降低至37~65C时，寡核苷酸引物与单链模板杂交，形成DNA模板-引物复 合物。退火所需要的温度和时间取决于引物与靶序列的同源性程度及寡核苷酸的碱基组成。一般要求引物的浓度大大高于模板DNA 的浓度 ,并由于引物的长度显著短于模板的长度, 因此在退火时,引物与模板中的互补序列的配对速度比模板之间重新配对成双链的速度要快得多,退火时间一般为1?2min。 3．引物的延伸 DNA 模板-引物复合物在Taq DNA 聚合酶的作用下,以dNTP 为反应原料,靶序列为模板, 按碱基配对与半保留复制原理,合成一条与模板DNA 链互补的新链。重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。延伸所需要的时间取决于模板DNA的长度。在72 C条件下，Taq DNA聚合酶催化的合成速度大约为40?60个碱基/秒。经过一轮“变性-退火-延伸”循环,模板拷贝数增加了一倍。在以后的循环中,新合成的DNA 都可以起模板作用,因此每一轮循环以后, DNA 拷贝数就增加一倍。每完成一个循环需2?4min, —次PCR 经过30?40次循环，约2?3h。扩增初期，扩增的量呈直线上升，但是当引物、模板、聚合酶达到一定比值时,酶的催化反应趋于饱和,便出现所谓的“平台效应”,即靶DNA 产物的浓度不再增加。 PCR 的三个反应步骤反复进行,使DNA 扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩增量可用Y =（1 + X）n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平（Y）均每次的扩增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%,但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期, 靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数

rtpcr(rt pcr)

rt-pcr（rt - pcr） I. Experimental apparatus and materials: 1, transfer guns: 1ml, 200 L, 20 L, 10 L, 2 L 2, suction head: 1ml, 200 L, 20 L 3, homogenate tube: 5ml 4, suction head table: put 1ml suction head one, put 20 l suction head one 5, EP tubes: 1.5ml, 0.2ml, 100 L 6, reagent bottle: 2 60ml Brown reagent bottle (wide mouth, with cover) 1 125ml white reagent bottles (with absolute ethanol) 7, 50ml, 250ml, 500ml: a 8, capacity bottle: 250ml, 500ml, 1000ml 9, test tube rack: 5ml, 1.5ml, 20 L 10, salt water bottles: 250ml, 500ml each 2 spare, one with absolute ethanol, another with DEPC water 11, aluminum lunch box: 4 12, plastic small lunch box: 1

13, large porcelain cylinder: 2 14, tin paper: a roll 15 rolls of paper: 2 rolls 16, triangle flask: with a cap, slightly larger Two, the processing and preparation of experimental equipment 1, plastic products: (including gun head, EP tube, homogenate tube, etc.) The DEPC of water from the flask into the ceramic cylinder, the plastic products by soaking them, which requires a small tip Straw DEPC into the water, and then dried overnight, high pressure, spare, before the experiment will first put the gun suction head, and a high pressure (EP tube) 2, glass products: acid soaking overnight, washed clean, dry spare foil Mongolia (DEPC blister) (wash after the first bubble 1 per thousand DEPC overnight, and then dried) 3, homogenizer: (including scissors, tweezers) first wash, and then high pressure (do not need to bubble DEPC) Three. Reagent preparation: 1, DEPC water: suck 1ml, placed in 1000ml double steamed water, with 1 per thousand DEPC water, placed in the 1000ml capacity

RT-PCR的实验原理与操作步骤

提取组织或细胞中的总RNA以其中的mRN作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCF使测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量 RNA羊品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 （一）反转录酶的选择 1. Moloney 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活 性相对较弱。最适作用温度为37 C。 2. 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和 RNA 酶 H 活性。 最适作用温度为42 C。 3. Thermus thermophilus 、 Thermus flavus 等嗜热微生物的热稳定性反转录 酶：在Mn2存在下，允许高温反转录 RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV 反转录酶的 RNase H- 突变体：商品名为 SuperScript 和 SuperScript U。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一 特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的 m 模板合成较长 cDNA 。 （二）合成 cDNA 引物的选择 1. 随机六聚体引物：当特定 mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝 其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长 mRNA 。 用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了 cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的 cDNA 中 96%来源 于 rRNA。 2. Oligo(dT) ：是一种对 mRNA 特异的方法。因绝大多数真核细胞 mRNA 具有

阿甘正传》中你不知道的地方分析

1。阿甘和对丹中尉说自己要做船长时，丹中尉嘲笑说如果阿甘做了船长自己就会做太空人，这为以后也埋下了一个小伏笔，因为最后丹中尉的假腿就是用造航天飞机的材料做的。

2。阿甘最后和珍妮举行婚礼时，丹中尉是站在最后，其他人都是座着的。 对于失去双腿的人，能够站立着就是幸福。 3。阿甘在住宾馆的时候打电话叫人到对面楼去查看一下,他被楼对面的手电桶光照的眼睛睡不着,这其实就是着名的“水门事件”,导演巧妙安排了甘作为检举人。我们可以在后面马上看到尼克松辞职的一幕。 4。阿甘跑步时被溅了一脸泥水了吗？阿甘用路人递过来的背心擦脸，从此就有了文化衫。要知道在这之前是没有在背心上印字或图案的。 5。丹把赚的钱投资苹果电脑了吗？阿甘居然说是投资水果行业，真是搞笑。 6。这部片子最搞笑的是：阿甘在美式足球比赛中，当他得分后冲向场外时，看台上飘下一张标语：STOP！ 7。一开始阿干还小得的时候他妈指着电视上那个跳摇摆舞的说“少儿不宜”。。之前这个人还在阿甘他们家投宿过。。 这个人就是猫王。。呵呵~ 没想到他也客串了一把。。的确在那个时候，猫王最先引导了扭臀的时尚，不过一开始大部分美国人都觉得这个招牌动作是很下流的。。 8。拿背心擦脸的那个不只是文化衫那么简单。。擦出来的印记就是着名的品牌smile啊，那个人就是创始人。。 呵呵~原来也是阿甘指引他了 9。阿甘在集会上碰到一个黑人在滔滔不绝的演说，以前不知道是什么人，后来看了丹泽尔华盛顿的片子后知道是黑豹党。 10。阿甘到白宫作客，洗手间里有一张梦露的相片。 11。影片中你还可以看到：鲍勃·霍普（Bob Hope），美国喜剧演员，生前得到1500余个奖项，《吉尼斯世界纪录》因此称之为“最受尊重的娱乐界人士”。2003年7月27日去世。另外还有一个大家都熟悉的美国登月宇航员——阿姆斯特朗（Neil Armstrong）。 还有一处大家更熟悉的，阿甘在退伍之后回到家，他妈妈给他准备的球拍是“毛主席”牌的，上面有个很大的毛主席头像。 12。把阿甘带到反战活动现场并推上讲台的女的的名字叫Hillary(希拉里) 不知道是不是在影射什么。。毕竟阿甘上映的时候是克林顿的年代 13。还有一些是我在网上收集的： 介绍丹中尉是军人之家的时候给了他祖辈的四个战死的镜头，分别是独立战争，南北战争，一战和二战．从着装看出来了． 还有阿甘和珍尼在一辆”灰狗”见面,是肯.克西,就是写飞跃布谷鸟巢的作者组织的”merry pra

分子标记的实验原理及操作流程

AFLP分子标记实验 扩增片段长度多态性 Amplified fragment length polymorphism（AFLP 是在随机扩增多态性（RAPD和限制性片段长度多态性（RFLP技术上发展起来的DNA多态性检测技术,具有RFLP技术高重复性和RAPD技术简便快捷的特点,不需象RFLP 分析一样必须制备探针，且与RAPD标记一样对基因组多态性的检测不需要知道其基因组的序列特征，同时弥补了 RAPD技术重复性差的缺陷。同其他以PCR为基础的标记技术相比，AFLP技术能同时检测到大量的位点和多态性标记。此技术已经成功地用于遗传多样性研究，种质资源鉴定方面的研究，构建遗传图谱等。 其基本原理是：以PCR（聚合酶链式反应为基础,结合了 RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增（在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的’接头”用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。 一、实验材料 采用青稞叶片提取总DNA 实验设备 1. 美国贝克曼库尔特CEQ8000毛细管电泳系统, 2. 美国贝克曼库尔特台式冷冻离心机， 3. 美国MJ公司PCR仪,

4. 安玛西亚电泳仪等。 三、实验试剂 1. 试剂:请使用高质量产品，推荐日本东洋坊TOYOBO公司的相关产品 DNA提取试剂盒； EcoRI酶,Msel酶,T4连接酶试剂盒； Taq 酶,dNTP, PCR reactio n buffer; 琼脂糖电泳试剂：琼脂糖，无毒GeneFinder核酸染料替代传统EB染料;超纯水（18.2M ? ? cm 2. 其他实验需要物品 微量移液枪（一套及相应尺寸Tip头,PCR管，冰浴等。 四、实验流程 1、总DNA提取 使用DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA,通过紫外分光光度计检测或用标准品跑胶检测。一般来说，100ng的基因组DNA作为反应模板是足够的。 2、EcoR1酶消化（20ul体系/样品 EcoR1 1ul

位置和坐标A

位置与坐标（A ） 一、选择题 1.若y x =0，则点P （x ，y ）的位置是（ ） A.在数轴上 B.在去掉原点的横轴上 C.在纵轴上 D.在去掉原点的纵轴上 2.如果点P （m +3，m +1）在直角坐标系的x 轴上，P 点坐标为（ ） A.（0，2） B.（2，0） C.（4，0） D.（0，﹣4） 3.若点A （m ，n ）在第二象限，那么点B （﹣m ，|n |）在（ ） A.第一象限 B.第二象限； C.第三象限 D.第四象限 4.点M 在x 轴的上侧，距离x 轴5个单位长度，距离y 轴3个单位长度，则M 点的坐标为（ ） A.（5，3） B.（﹣5，3）或（5，3） C.（3，5） D.（﹣3，5）或（3，5） 5.如图，小明从点O 出发，先向西走40米，再向南走30米到达点M ，如果点M 的位置用（﹣40，﹣30）表示，那么（10，20）表示的位置是（ ） A.点A B.点B C.点C D.点D 6.如果直线AB 平行于y 轴，则点A ，B 的坐标之间的关系是（ ） A.横坐标相等 B.纵坐标相等 C.横坐标的绝对值相等 D.纵坐标的绝对值相等 （﹣3，2）关于y 轴的对称点是B ，B 关于x 轴的对称点是C ，则点C 的坐标是（ ） A.（﹣2，3） B.（﹣3，2） C.（3，﹣2） D.（3，2）

8.已知点A（1，0），B（0，2），点P在x轴上，且△PAB的面积为5，则点P的坐标为（） A.（﹣4，0） B.（6，0） C.（﹣4，0）或（6，0） D.无法确定 二、填空题 9.在电影票上，如果将“8排4号”记作（8，4），那么（10，15）表示 . 10.如图，用（0，0）表示点O的位置，用（3，2）表示点M的位置，则点N的位置可表示为 . 11.点P（a，b）与点Q（1，2）关于x轴对称，则a+b= . 12.已知A在灯塔B的北偏东30°的方向上，则灯塔B在小岛A的的方向上. 三、解答题 13.写出如图中“小鱼”上所标各点的坐标并回答： （1）点B、E的位置有什么特点； （2）从点B与点E，点C与点D的位置看，它们的坐标有什 么特点？ 14.如图所示，是聊城市区几个旅游景点的示意图（图中每个小 正方形的边长为1个单位长度），请以某景点为原点，画出直角坐标系，并用坐标表示出下列景点的位置. 光岳楼、湖心岛、

凯氏定氮仪原理及操作步骤

凯氏定氮仪原理： 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成(NH4)2SO4 反应式为： 2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04 (其中CuSO4做催化剂) 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中 反应式为: (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O 3.用已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量反应式为： (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 凯氏定氮仪操作步骤： (一)消化

1、准备6个凯氏烧瓶，标号。1、 2、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液，样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂，浓硫酸，30%过氧化氢。4、5、6号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。4、5、6号烧瓶中加入蒸馏水代替样液，其余所加试剂与1、2、3号烧瓶相同。 2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置。先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至溶液澄清后，再继续加热使消化液微沸15min。在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部，以保证样品完全消化。消化时放出的气体内含SO2，具有强烈刺激性，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中进行。消化完全后，关闭火焰，使烧瓶冷却至室温。 (二)蒸馏和吸收 蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。 1、仪器的洗涤 仪器安装前，各部件需经一般方法洗涤干净，所用橡皮管、塞须浸在10%NaOH溶液中，煮约10min，水洗、水煮10min，再水洗数次，然后安装并固定在一只铁架台上。 仪器使用前，微量全部管道都须经水蒸气洗涤，以除去管道

常见矿物基本特征

常见矿物基本特征 一、常见白色矿物 (3) 方解石：CaCO3 (3) 白云石:CaMg[CO3] (4) a-石英：a-SiO2 (5) 斜长石：Na[AlSi3O8]—Ca[Al2Si2O8] 架状硅酸盐 (6) 重晶石:BaSO4 硫酸盐 (8) 二、含铜矿物 (8) 黄铜矿:CuFeS2（原生矿） (8) 辉铜矿:CuS2（次生富集带） (9) 斑铜矿:Cu5FeS4（原生矿） (10) 黝铜矿:Cu5Sb4S13（原生矿） (11) 孔雀石:Cu2CO3（OH）2（氧化带） (12) 蓝铜矿:Cu3[CO3]2（OH）2（氧化带） (12) 铜蓝:CuS（斑铜矿的次生矿物，次生富集带） (13) 胆矾:CuSO4.5H2O（氧化带） (13) 赤铜矿: Cu2O（氧化带）cuprite (14) 赤铜矿-产地分布 (15) 三、含铁矿物 (16) 褐铁矿: FeO(OH).nH2O错误！未指定文件名。 (16) 赤铁矿: Fe2O3 (17) 黄铁矿: FeS2 (18)

菱铁矿: FeCO3 (19) 三、稀有金属矿物 (20) 细晶石 (20) 辉钼矿 (22)

一、常见白色矿物 方解石：CaCO3 【化学组成】 CaO56.03%, CO243.97%，常含Mn和Fe,有时含Sr. 【形态】经常可以见到良好的晶体，常见晶形有六方柱[1010]和菱面体[0112]的聚形、复三方偏三角面体[2131]等，三组解理彼此斜交，其夹角为74055′集合体呈粒状、致密块状、钟乳状、结核状等。 【物理性质】透明无色或白色，有时因含杂质而呈灰、黄、粉红、蓝等色；白色条痕；玻璃光泽；硬度3；解理上常见平行长对角线方向的双晶纹；比重2.715. 无色透明的晶体为贵重光学材料，称为冰洲石（因盛产于冰岛而得名）【成因产状】方解石在自然界分布极广。 在浅海或湖泊中常常沉积形成广大的石灰岩（以方解石为主的沉积岩）层。 地下水可溶蚀石灰岩，也可以重新形成方解石，如石钟乳、石笋、石灰华等。在土壤中活动的地下水在潜水面附近常形成沿一定水平分布的方解释结核，地质工作者习惯称为钙质结核。 在热液活动中常形成含矿或不含矿的方解石脉。在晶洞中，常有良好晶体。 在岩浆作用形成的碳酸盐中，方解石常占80%左右。 此外，方解石还作为碎屑沉积岩的胶结物，基性火成岩蚀变后的矿物等参加到各种岩石中去。由于地下水活动，各种岩石的裂隙中也经常充

三国群英传7 特殊地点图解

三国群英传7 特殊地点图解 山寨（一共18个）送礼 编号名称占领者势力城池11 龙王坞管承豫州，鄱阳，南海，鹿耳门 12 百花坞玲玲赤壁，江夏，夏口，南昌 14 洞庭坞区星乌林，赤壁，庐陵，长沙，湘潭 23 百兽寨吐悉泥武陵，交趾，建宁，云南 28 巨熊寨塔郎江陵，零陵，桂林 33 飞凤寨碧月汉中，梓潼，成都 34 虎头寨褚飞燕天水，下卞，祁山，阳平 38 翻江坞雷公临江，白帝，长坂坡，涪陵 43 黑风寨郭大贤长安，洛阳，虎牢关，五丈原，郿 46 天柱山李大目新野，汝南48 大兴山十常侍许昌，汝南，宛 52 偃月坞兰兰淮安，区阿，徐州，盱眙，小沛 55 九里山昌豨谯，陈留，小沛，定陶 59 白狼寨高丽王朱蒙昌黎，南皮，襄平，北平 64 纠云寨申雄邺，界桥，壶关 67 血蛟坞雷绪郿坞，扶风 68 黄沙寨于氐根西凉，街亭，陇右，安定 70 天王寨难楼陇右 妖兽(一共39个) 攻打

编号名称占领者首先攻破可得宝物 01 浮冰岛巨雪熊 UJ好人卡 02 青鬼岛青罗刹童子御守（童子招来） 03 赤鬼岛赤夜叉姬御守（姬招来） 06 沧冥礁青鳞水妖 UJ好人卡 09 大渚泽剑仙八宝灵灯（技回） 10 凤凰岭剑仙行军方略（行军） 13 碧水地穴太岁水龙旗{水龙狂涛（武将计）} 15 映月幽潭地仙回春石（回春） 16 罗刹谷青罗刹玉屑金丹（体力+10） 17 黑泉黑玉妖蟒狮蛮宝带（精武） 18 灭泉噬人巨熊熊骨饰（大熊呼唤） 19 柔泉太岁 UJ好人卡 20 哑泉乌戈战牛翔鹰羽（飞鹰召唤） 21 万蛇坑黑玉妖蟒艾草香囊（专心） 22 豹子林大花豹豹皮腕（花豹召唤） 24 瘴气林瘟神虎面具（猛虎招唤） 29 龙魂井金甲妖龙兽面战甲（刚体） 31 金牛山赤夜叉猛牛角（猛牛呼唤） 35 龙岳剑仙狮蛮宝带（精武） 36 先秦地监秦俑武将 UJ好人卡 37 紫金废矿血焰火蚁 UJ好人卡 39 景山洞窟尖牙鬼虎 UJ好人卡

各种矿物详细图文解析

各种矿物详细图文解析 (Siver) 名字来源：源于古代文明社会； 化学组成：成分中常含Au、Cu、Hg等；类别：自然元素-金属元素-自然铜族晶系和空间群：等轴晶系，Fm3m； 晶胞参数:a0=0.4077nm； 形态：单晶呈立方体和八面体或两者的聚形，但极少见。集合体成树枝状、不规则薄片状、 粒状和块状； 颜色：新鲜断口呈银白色，但表面往往呈灰黑的锖色；条痕：银白色 透明度：不透明

光泽：金属光泽 硬度：2.5 解理和断口：无解理，锯齿状断口； 比重：10.5g/cm3 （纯银） 其他性质：具延展性，是电和热的最良导体；鉴定特征新鲜断口呈银白色，锯齿状断口，比重大，富延展性； 成因和产状：热液成因的自然银见于一些中低温热液矿床，它呈显微粒状分布于铅锌热液矿 床的硫化物中。外生成因的自然银见于硫化物矿床的氧化带。 主要用途：为银的唯一来源； 著名产地：墨西哥和挪威。 (Selenium) 名字来源：来源于希腊语Selene，意思是月之女神； 化学组成：主要成份是硒，含有微量的硫；类别：自然元素-半金属元素-自然硒族；晶系和空间群：三方晶系，P3221；晶胞参数:a = 0.4366nm，c = 0.4954nm；形态：为粒状或浸染状分布于基质中；颜色：灰，灰紫色或微红色；

条痕：红色； 透明度：：不透明； 光泽：亚金属光泽； 硬度：2； 解理和断口：（0112）完全解理；比重：4.81 g/cm3；g/cm3 其他性质：晶体易弯曲，具有挠性；鉴定特征： 成因和产状：自然硒为硒化物的风化产物，常由硒铅矿变来，与褐铁矿共生并被其胶结。 主要用途：硒的最显著性质是它的光电效应，由此它可作光电池，用于电视方面；还可用于 玻璃工业、橡胶工业等部门，玻璃中加入硒可消除铁杂质引起的绿色，再橡胶配料中加入硒， 能提供橡胶的抗热、抗氧化及耐磨性； 著名产地：玻利维亚Potosí，意大利Liguria，美国Nevada。 (Antimony)

图解印刷网点基础知识简介

图解印刷网点基础知识简介 2007-5-16 图解印刷网点基础知识简介 在印刷过程中，连续调和半色调图像都是由网点的疏密来进行调整表现的。而通过将CMYK四色的网点混合，则可以表现出无穷多的颜色。 目前在印刷工艺中使用的网点主要有两种不同的类型：调幅网点（AM）和调频网点（FM）。 调幅网点 调幅网点是目前使用的最为广泛的一种网点。它的网点密度是固定的，通过调整网点的大小来表现色彩的深浅，从而实现了色调的过渡。在印刷中，调幅网点的使用主要需要考虑网点大小、网点形状、网点角度、网线精度等因素。 网点大小 此主题相关图片如下： 网点大小是通过网点的覆盖率决定的,也称着墨率。一般习惯上喜欢用“成”作为衡量单位，比如10％覆盖率的网点就称为“一成网点”、覆盖率20％的网点称为“二成网点”另外，覆盖率0％的网点称为“绝网”，覆盖率100％的网点称为“实地”。 印刷品的阶调一般划分为三个层次：亮调、中间调、暗调。亮调部分的网点覆盖率为10％～30％左右；中间调部分的网点覆盖率为40％～60％左右；暗调部分则为70％～90％。绝网和实地部分是另外划分的。 网点形状 印刷中的网点形状不只是大家想象中的单单圆形一种，以50％着墨率情况下网点所表现出的形状来划分，可以分为：方形、圆形、菱形三种。

此主题相关图片如下： 方形网点在50％覆盖率下，成棋盘状。它的颗粒比较锐利，对于层次的表现能力很强。适合线条、图形和一些硬调图像的表现。 圆形网点无论是在亮调还是在中间调的情况下，网点之间都是独立的，只有暗调的情况下才有部分相连。所以对于的采层次的表现能力不佳，四色印刷中比较少采用。 菱形网点综合了方形网点的硬调和圆形网点的柔调特性，色彩过渡自然，适合一般图像、照片的表现。 网点角度 印刷制版中，网点角度的选择有着至关重要的作用。选择错误的网点角度，将会出现干涉条纹。 常见的网点角度有90度、15度、45度、75度几种。45度的网点表现最佳，稳定而又不显得呆板；15度和75度的的角度稳定性要差一些，不过视觉效果也不呆板；90度的角度是最稳定的，但是视觉效果太呆板，没有美感了。 此主题相关图片如下： 两种或者两种以上的网点套在一起，会有相互的干涉，当干涉严重到影响图像美观时，就出现俗称的“龟纹”了。

原理及操作步骤

3 实验原理 3.1人工抗原的制备原理（以奥沙普秦为例） 奥沙普秦为小分子物质（分子质量小于500），本身不具有诱导产生抗体的能力，必须设法先将奥沙普秦与载体蛋白质偶联制备出相应的人工完全抗原，这是半抗原免疫分析的关键所在。合成人工抗原的机理为：水溶性的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的羟基与奥沙普秦的羧基在脂溶性缩合剂二环己基碳二亚胺（DCC）的作用下，脱水缩合形成活泼酯化奥沙普秦中间化合物，然后载体蛋白在某一PH值下，一般是大于其等电点，是蛋白质中的氨基暴露出来，从而成为提供伯胺的底物，然后亲核进攻活性中间产物活泼酯化奥沙普秦，从而达到小分子化学物偶联到载体蛋白的目的。 3.2 ELISA技术的原理 ELISA 是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色，根据颜色的有无和深浅，定位或定量抗原/抗体。ELISA 法是免疫酶技术的一种，其特点是利用聚苯乙烯微量反应板(或球)吸附抗原/抗体，使之固相化，免疫反应和酶促反应都在其中进行。在每次反应后都要反复洗涤，这既保证了反应的定量关系，也避免了末反应的游离抗体/抗原的分离步骤。在ELISA 法中．酶促反应只进行一次，而抗原、抗体的免疫反应可进行一次或数次，即可用二抗(抗抗体)、三抗再次进行免疫反应。 目前常用的几种ELISA 方法有：测定抗体的间接法，测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。 3.3 ELISA竞争抑制法的原理 包被好的抗原与加入的抗原（标准抗原）形成竞争，如果抗体石特异性抗体，它就会与游离的标准抗原结合，而不与板上的检测

rtpcr注意事项

RT-PCR技术 RT-PCR简介 RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。 RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。） RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。为了与逆转录PCR 相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者 RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。 实时PCR 实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。 real time PCR 的定量使用萤光色素，目前有二种方法。一种是在ds DNA （双链DNA）中插入特异的萤光色素；另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种萤光探针（probe）。 real time PCR 与reverse transcription PCR(反转录PCR) 相结合，能用微量的RNA来找出特定 时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR（quantitative RT-PCR）” RT-PCR技术相关试剂 oligo: 多聚体，相当于mRNA引物 AMV（M-MLV）：逆转录酶 dNTP：脱氧核苷酸 RNase：RNA酶抑制剂

PCR Buffer：RT-PCR缓冲液 MgCl2：2价镁离子 （一）预变性： 破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构。使DNA充分变性，减少DNA 复杂结构对扩增的影响，以利于引物更好的和模板结合，特别是对于基因组来源的DNA模板，最好不要吝啬这个步骤。此外，在一些使用热启动Taq酶的反应中，还可激活Taq酶，从而使PCR反应得以顺利进行。 （二）变性--退火--延伸循环： ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为 反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 （三）PCR仪扩增循环后72度延伸10分钟 用PCR仪扩增时,(变性.退火,延伸)循环完成后,继续72度延伸了10分钟的原因： 1.延伸时间取决于待扩增DNA片段的长度。（当然是在反应体系一定的条件下）例如，使用taqDNA聚合酶，72度时的碱基掺入率为35-100bp/s，因此延伸速率为1kb/min。 2.根据延伸速率推得，扩增1kb以内的dna片段1min即可，而3-4kb 则需要3-4min，依次照推。通常在最后一轮要适当的将延伸时间延长至 4-10min，这样做是使pcr反应完全以提高扩增产量。 3.继续72度延伸了10分钟除了可以使pcr反应完全以提高扩增产量外，还有一个作用是：在用普通taq酶进行PCR扩增时在产物末端加A尾的作用，可以直接用于TA克隆的进行。 RT-PCR的注意事项

流式细胞仪原理及操作步骤

流式细胞仪原理及操作步骤 流式细胞仪（FCM）是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起 来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的 研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断， 对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术 是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的结果。 （一）原理一 活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。 （二）操作步骤 制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用 于本法） 用10% FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5X 106?IX 107/ ml 取40卩1细胞悬液加入预先有特异性McAb（5?50卩I） 的小玻璃管或塑料离心管，再加50卩I 1 : 20（用DPBS （或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇 J 4 C 30mi n 用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右 1000rpmx 5mi n J] 加适量固定液（如为FCM制备标本，一般加入1ml固定液，如制片后在荧光 显微镜下观察，视细胞浓度加入100?500 ^1固定液） FCM检测或制片后荧光显微镜下观察 （标本在试管中可保存5?7天） （三）试剂和器材 1. 各种特异性单克隆抗体。 2. 荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。 3. 10% FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液（见附录）。 4. 玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。

刺客信条 黑旗 藏宝图地图坐标 具体位置图文详解分解

支线收集：藏宝图(共22个，其中3个需要Uplay、XBOXlive、PSN) 注：暂缺联网的3份藏宝图 (1)哈瓦那宝藏 step1.哈玩那最北面的杂货店的左侧花基上有一具骸骨，搜刮它可以获得一份哈瓦那藏宝图。 step2.(哈瓦那)顺着托勒斯的甘蔗田往哈瓦那南部的沙滩走去，走到哈瓦那城墙南部的了望塔与一棵倒卧生长的椰子树之间能够挖掘出一嗰宝藏。

(2)马坦蕯斯宝藏 step1.去到托尔蒂东北面鸟瞰点悬崖下方的海滩上(从这儿起就再没有士兵骚扰了)，在小船旁有具骷髅躺在大石旁，搜刮它便可以获得一份藏宝图(宝藏的地点是在乾龟岛海域的马坦蕯斯)。 step2.按十字键→调出从托尔蒂拾获的藏宝图。从藏宝图的图中看到了马坦蕯斯最让人眼前一辆的水车，图中水车是在水车房的右侧，由此可以得知宝藏是在东面。 穿过水车屋和仓库，去到了马坦蕯斯的玛雅石柱水池中，在玛雅石柱的东面的崖壁中有一个凹陷处，走进去，便能够挖掘该位置的土壤，并获得宝藏。 (3)伯纳维斯塔角宝藏

step1.此时到海湾的沙滩上，搜刮一具骸骨，获得藏宝图。 按十字键→唤出藏宝图，往次海湾草地的西北面走去，会看见一嗰水潭，然而地图上显示水潭位置在更深的位置，而眼前所见水潭就近在眼前，因此水潭内部必定别有洞天。 顺着水潭往西北面走去，便能够挖掘出一嗰宝箱。 (4)拿索宝藏 step1.进入“快速旅行选单”选择前往大伊纳瓜。离大伊纳瓜的码头不远的西面草地上，有一棵倾斜的大树。 登上它后可以登上码头西面的山头上，这山头前有一个洞穴，走进洞穴会因湿滑而倾斜的地面滑到下方去，就在洞的悬崖出口前会发现一副骸骨，搜刮他可以获得一份藏宝图(宝藏地点在拿索)。 step2.按十字键→然后按Y键打开从大伊纳瓜拾获的藏宝图(633，784)。而且地图当中画有拿索标志性的建筑——白色豪宅，因此各位读者不要被地图当中那些水体给迷惑了，此时拿索是伊留塞拉海域拥有沼泽面积最大的岛屿。 因此藏宝位置就在白色豪宅右侧通往沼泽湖的道路与白色豪宅所在的山头直接的泥土上。 (5)盐泻岛宝藏

分析仪操作原理及其操作方法讲解

分析仪操作及原理 注意： 1、标定前请确认标气背景气、标定气含量，保证通入仪器的是对应的标气。 2、百分含量仪器通入标气后需稳定10分钟以上方可标定，微量仪器需稳定时间更长一 些，待数值稳定以后再进行标定。 CO2红外气体分析仪(AIA1203) 这台仪器为ABB生产EL2020系列型号为Uras26，测量范围0~5~20ppm.vol.CO2，精度为±1% 一、测量原理（红外式） 根据不同组分气体对不同波长的红外线具有选择性吸收的特性而工作的分析仪表。测量这种吸收光谱可判别出气体的种类；测量吸收强度可确定被测气体的浓度。 各种多原子气体（CO,CO2,CH4等）对红外线某一段电磁波的辐射都能具有一定的吸收能力，而且这种吸收能力对波长具有选择性，只有当红外光谱中某一段光谱的频率与物质分子本身的频率一致时，该物质分子才吸收这一段红外光谱的辐射能。我们把能吸收的这一段红外线光谱称为该气体的特征吸收波段。气体吸收了红外线光谱的辐射能后，一部分可转变成热能，使温度升高。红外线光谱的辐射又特别显著，这就能让我们利用各种元件，如热电堆、热敏电阻等去测量红外线辐射能的大小。 二、标定 1、选择校准菜单：menu calibrate manual calibration. 2、用箭头键选择zero gas。 3、接通零点气。操作零点气钢瓶减压阀组件，使输出压力控制在20kpa，将操作面板上 多通阀（5MV）切向“零点气”，打开测量流量计，调整“测量”转子流量计旋钮，使进气量控制在30L/H左右。 4、确认零点气连接上并且零点气浓度值输入后。按ENTER键确认。 5、当测量示值显示稳定，按ENTER键开始校准零点。 6、接受校准结果按ENTER键；不接受校准结果返回步骤6按BACK键；不接受校准结 果返回测量状态按MEAS键。 7、用箭头键选择SPAN GAS（零点标定完成后会自动跳到zero 和span的选择窗口。 8、按4步骤接通量程气。

RTPCR原理和实验步骤

RT—PCR原理与实验步骤 一、知识背景： 1、基因表达：DNA RNA Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d,可以合成105个丝心蛋白) 共合成109个丝心蛋白。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2、PCR技术(Polymerase chain reaction）：即聚合酶链式反应。 在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促反应，其特异性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步： A。变性：通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA； B.退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合. C。延伸：在DNA聚合酶和dNTPs及Mg2＋存在下，退火引物沿5’3’方向延伸。以上三步为一个循环,如此反复。 3、逆转录酶和RT-PCR 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶,至少具有以下三种活性： 1、依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链; 2、Rnase水解活性：水解RNA：DNA杂合体中的RNA； 3、依赖DNA的DNA聚合酶活性:以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA。 二、RT—PCR的准备: 1。引物的设计及其原则： 1）引物的特异性决定PCR反应特异性.因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列，同种蛋白的不同亚型,不同的mRNA剪切方式以及可能存在的hnRNA对引物的特异性的影响。尽量选择覆盖相连两个内含子的引物,或者在目的蛋白表达过程中特异存在而在其他亚型中不存在的内含子。 2) 引物设计原则的把握 引物设计原则包括： a、引物长度：一般为15～30bp ，引物太短会影响PCR的特异性，引物太长PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最适温度,也影响反应的特异性。 b、碱基分布:四种碱基最好应随机分布，避免嘌呤或嘧啶的聚集存在，特别是连续出现3个以上的单一碱基。GC含量（Tm值）:40％～60％，PCR扩增的复性温度一般是较低Tm值减去5～10度.