药物分析最终

10级药物分析复习题 10100927张天缘

选择题15分，填空题15分，简答题4X5’=20分，论述题4X7’=28分，计算题2题22分

1药典的主要内容是什么？

凡例：解释和使用要点的基本原则、规定正文、附录共性问题

正文：药品质量标准，制剂质量标准，生物制品质量标准

附录：制剂通则、通用检测方法、指导原则。

索引：中文索引、英文索引

2什么是鉴别试验？ --意义鉴别已知药物与名称的一致性

鉴别试验是根据药物的分子结构，理化性质，采用物理，化学或生物学方法来判断药物的真伪。

3什么是药品标准物质？其内涵是什么？

是指供药品标准中物理化学测试及生物方法试验用，具有确定特性量值，由于校准设备，评价测量方法或者给供试药品赋值的物质，包括：标准品，对照品，对照药材，参考品。

内涵：①标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或ug）计，以国际标准品进行标定。

②对照品：化学药品的标准物质称为对照品，除另有规定外，均按干燥品（或无水物）进行计算后使用。

③标准物质：对照药材、对照提取物主要为中药检验中使用的标准物质。

④参考品：用于生物制品检验中使用的标准物质。

4什么是恒重？

除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量

5什么是空白试验？

系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得的结果；

6药物含量测定与效价测定有什么不同？

凡采用理化方法对药品中特定成分的绝对质量进行的测定称为含量测定。凡以生物学方法或酶化学方法对药品中特定成分以标准品为对照，采用量反应平行线测定法等进行的生物活性（效力）测定称为效价测定。7鉴别试验须验证的项目有哪些？专属性，耐用性

8什么是特殊杂质？指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，也称为有关物质

9杂质包括哪些种类，来源途经有哪些？

杂质种类有：一般杂质（有害杂质，信号杂质），特殊杂质（工艺杂质，降解杂质）

杂质来源有：

1）生产过程中引入的杂质：来源于制备——原料、溶剂、试剂、中间产品、副产品、器械等等。

2）贮藏过程中引入的杂质：来源于外界条件——包装、运输、保管不妥（受光线、温度、空气、微生物的影响等等）

10药物中氯化物检查为什么要硝酸酸性下进行？

加硝酸可避免弱酸银盐，如碳酸银，磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加快氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。

11铁盐检查法ChP采用什么方法？【选择题】

采用硫氰酸盐法：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。

12 ChP2010规定重金属检查法有哪些？各适用什么药物中的重金属检查？

Chp2010中规定了三种重金属检查方法：第一法：硫代乙酰胺法适用于溶于水、稀酸、乙醇的药物，最常用方法。第二法：炽灼后检查法适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸及乙醇的有机药物,苯佐卡因、甲硝唑第三法：硫化钠法适用于难溶于稀酸但能溶于碱性溶液药物，巴比妥类、磺胺类

13用硫代乙酰胺法检查重金属，丙管要加入哪些药品和试剂，如何判定？【判定说清楚】

丙管加入与甲乙同量的标准品和供试品和2ml硫代乙酰胺。当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管的颜

色不能比甲管深，若丙管颜色浅于甲管，应按第二法重新检查。

14 古蔡氏法的原理是什么？加氯化亚锡和碘化钾试液各有什么作用？【论述（加入溶液）】

原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的标准砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。（醋酸铅棉花作用：吸收杂质H2S，防止生成硫化汞色斑干扰结果。溴化汞试纸作用：与砷化氢作用生成砷斑）

a. KI的作用——还原剂：五价砷生成AsH3的反应速度比三价砷速度慢, 加入KI 使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应, 以增大AsH3的生成速度.

酸性SnCl2的作用- ①还原剂(表现在3方面)Ⅰ. 将五价砷还原为三价砷(As5+→As3+)

Ⅱ. 将KI被氧化生成的I2再还原为I-，能与锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢生成

Ⅲ. SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐——起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生.

二者可以抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。

15 Ag-DDC（二乙基二硫代氨基甲酸银法）法原理是什么？

原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，还原二乙基二硫代氨基甲酸根，产生红色胶态银，同时在相同条件下使一定量标准砷溶液呈色，用目视比色法或510nm波长处测定吸光度进行比较。

2.加入吡啶的作用：吸收反应中产生的二乙基二硫代氨基甲酸。

16色谱系统适用性试验的内容是什么？

(1)色谱柱的理论板数n：

222

2 ()16() 5.54() R R R h

n t t W n t W

===

或

(2)色谱峰的分离度R：

1212

121222

2()2()

1.70

R R R R

h h

t t t t

R R

W W W W

--

==

++

，，

或

（）

，分离度应大于1.5

(3)色谱系统的重复性：连续进样5次，峰面积测量值的RSD应不大于2.0%

(4)色谱峰的拖尾因子T：

0.05h

1

2d

W

T=

，应在0.95~1.05之间

17试述氧瓶燃烧法测定药物的原理及实验过程？

原理：将分子中含有待测元素的有机药物在充满氧气的密闭燃烧瓶中，充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为二氧化碳和水，而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，以供待测元素的检查或定量测定用。

实验过程：(1)仪器装置：燃烧瓶为500ml、1000ml、2000ml的磨口、硬质玻璃锥形瓶、瓶塞底部溶封铂丝一根。(2)称样：称取样品、置无灰滤纸中心，按要求折叠后，固定于铂丝下端的螺旋处，使尾部漏出。(3)燃烧分解：在燃烧瓶内加入规定吸收液、小心通入氧气约1分钟，点燃滤纸尾部、迅速吸收液中，加盖水封，放置。(4)吸收液的选择：使燃烧分解的待测吸收使转变成便于测定的价态。

吸收液： F用水，Cl用氢氧化钠，溴和碘用水，氢氧化钠和二氧化硫

18氧瓶燃烧法所必需的实验物品有哪些，原理是什么？

燃烧瓶，铂丝，定量滤纸，吸收液，样品，氧气

19 ChP2010凯氏定氮法采用什么硝解剂，主要用于测定哪些药物？

消解剂是硫酸中加硫酸钾或无水硫酸钠，硫酸盐的作用是提高硫酸沸点，提高消解温度。

主要用于测定含有氨基或酰胺结构的药物的含量。加入硫酸铜催化剂，加快消解速度

20常用的生物样品有哪些？

血液（血浆、血清），尿液，唾液这三种

21生物样品分析方法进行验证包括哪些内容？（每项认真答）

①特异性（专属性、专一性）：内源性物质的干扰，配伍用药物的干扰，参比方法的相关性

②标准曲线与定量范围：标准曲线的建立，限度要求r≥0.9900，至少6个浓度，不许外延

③最低定量限LLOQ（符合准确度、精密度要求的最低药物浓度）

④精密度和准确度：RSD小于等于15%，LLOQ附近20%，回收率85-115%

⑤样品稳定性：室温，冻融，冷冻长期

⑥提取回收率：一般低于（高）100%，（中）70%，（低）50%可用

⑦分析过程的质量控制⑧未知体内样品浓度超出定量范围的处理

⑨作为外源性药物使用的内源性物质测定⑩微生物学和免疫学方法的验证

22生物样品分析过程中质控样品与标准样品的作用有什么不同？

标准样品:在空白生物介质中加入已知量的待测物的标准物质制成的样品。主要用于建立标准曲线，计算质控样品和未知样品的浓度。

质控样品：在空白生物介质中加入已知量待测物的标准物质制成的样品。用于监测生物分析方法的效能和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性

23试论述生物药物分析全过程的质量控制。【大题】

每个未知样品一般测定一次，必要时进行复测，每批生物样品测定时应建立新的标准曲线，并随行测定高中低3个浓度的质控样品。质控样品数应大于未知样品总数的5%。质控样品的测定结果的RSD一般应小于15%。低浓度点的RSD应小于20%。最多允许1/3质控样品超限，不能出现在同一浓度质控样品中。

质控样品的功能：用于监测生物分析方法的效能和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性24糖类对片剂的含量测定有哪些干扰，如何消除？【影响因素】

答: 淀粉、糊精、蔗糖水解产生的葡萄糖具有还原性，乳糖是还原糖，均可能干扰氧化还原测定。

消除方法：不应使用高锰酸钾法、溴酸钾法等以强氧化性物质为滴定剂的容量分析方法，同时，应采用阴性对照品（空白辅料）进行阴性对照试验，若阴性对照品消耗滴定剂，须改用其他方法测定。

25硬脂酸镁对片剂的含量测定有哪些干扰，如何消除？

答: 镁离子可能干扰配位滴定法，硬脂酸根离子可能干扰非水溶液滴定法。消除方法：加入掩蔽剂排除镁离子干扰。对于脂溶性药物，可用适当的有机溶剂提取药物，排除硬脂酸镁的干扰后，再用水溶液滴定法测定。或改用其他方法测定。

26注射剂的剂型检查和安全性检查项目有哪些？【只列项目即可】

包括:装量、渗透压摩尔浓度、可见异物不溶性微粒、无菌、细菌内毒素或热源

27论述凝胶限度试验法检查细菌内毒素的方法及判定规则。【论述】

凝胶限度试验：

①配制：A供试品溶液+鲎作为供试品2份

B供试品溶液+2λ细菌内毒素+鲎作为供试品阳性对照2份

C检查用水+ 2λ内毒素溶液+鲎作为阳性对照 2份

D检查用水+鲎作为阴性对照 2份

②判定：A保温60分钟观察。若阴性对照D两管均为阴性，供试品阳性对照B均为阳性，阳性对照液 C均为阳性，试验有效。

B若供试品A两管均为阴性，判供试品符合规定；若供试品A两管均为阳性，判供试品不符合规定。

28如何排除注射剂中抗氧化剂对测定的干扰？

答: 1)加掩蔽剂：加入丙酮或甲醛，与亚硫酸氢钠等发生亲核加成反应，以消除干扰；

2)加酸分解法：加入强酸使这些抗氧化剂分解，所产生的二氧化硫气体经加热可全部逸出；

3)加弱氧化剂：利用主药与抗氧剂的还原性差异，加入弱氧化剂，选择性氧化抗氧剂（不氧化被测药物，

亦不消耗滴定液），以排除干扰；

4)紫外吸收光谱消除：避开了有干扰的最大吸收，而选择无干扰的最大吸收。(5)萃取后uv

29简述阴离子表面活性剂滴定法原理、方法？

原理：滴定在水与氯仿中进行，水相一般为酸，性利于药物溶解和解离。滴定时滴，定剂与药物离子形成离子对而转入有机相；终点时，滴定剂与有机染料形成离子对进入有机相，使有机相变色而指示终点。

方法：药物+氯仿+指示剂+水+硫酸+（二甲基黄-溶剂蓝19），用磺基丁二酸钠二辛酯试液滴定。

30什么是联合疫苗？【定义】

指两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。

31什么是重组DNA制品？重组DNA制品分为哪些类别？【定义】

系采用遗传修饰，将所需制品的编码DNA通过一种质粒或病毒载体，引入适宜的微生物或细胞系，DNA经过表达和翻译后成为蛋白质，在经提取和纯化而回收所需制品而制得。

包括细胞因子、生长因子、激素、酶、重组疫苗以及单克隆抗体等。

32试述免疫印迹法的基本原理？

（供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体结合，通过酶学反应显色，对供试品的抗原特异性进行鉴别。）是定义

原理：采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过SDS-PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的待检的蛋白成分。

免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。

33试述酶联免疫吸附剂测定法原理？

将特异性抗原（或抗体）与固相载体连接形成固相抗原（或抗体）。加入供试品，使供试品中的抗体（或抗原）与固相载体上的抗原（或抗体）结合，形成固相抗原抗体复合物。加入酶标抗原（或抗体），使固相免疫复合物上的抗体（或抗原）与酶标抗原（或抗体）结合。加入底物，复合物中的酶催化底物反应成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原（或抗体）的定性或定量。

3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物

ELISA法是目前广泛应用于临床检测和生物制药等领域的免疫学技术，具有微量、特异、高效、经济、方便和安全等特点。

34 ChP2010收载的生物制品免疫学鉴别方法有哪些？

免疫双扩散法，免疫电泳法，免疫印迹法，免疫斑点法，酶联免疫法

35定量免疫定量攻击法的内涵是什么？【定义】

先以定量制品（抗原）免疫豚鼠或小鼠2—5周后，再以相应的定量毒种或毒素攻击，观察动物的存活数或不受感染的情况，以判定制品的效力

36 论述生物制品安全检查的对象和内容。

1.安全检查对象：1）菌毒种和主要原材料 2）半成品（包括原液3）成品

2.安全检查内容

（1）过敏性物质检查：1）过敏性试验2）牛血清含量测定3）血型物质检测

（2）杀菌、灭活和脱毒检查：无菌试验、活毒检查和解毒试验。

（3）残余毒力和毒性物质检查：1）残余毒力检查2）无毒性检查（一般安全性试验） 3）毒性检查4）防腐剂检查

（4）外源性污染检查：1）野毒检查2）热原试验3）乙型肝炎表面抗原（HbsAg）

进行生物制品安全检查是为使产品安全、有效、可接受

37预测免疫双扩散法抗原抗体形成沉淀的形状。【形成的几种形状怎么说明，原因是什么】

简述双向免疫扩散法的主要实验步骤,并对可能出现的沉淀线形状进行解释。【2004厦大微生物】

反应的基本类型有下列几种：

1. 当抗原与相应抗体相互扩散即形成一条沉淀线

2. 两种抗原相同时表现为融合沉淀线

3. 两种抗原完全不相同时形成独立的沉淀线，同时两条沉淀线可出现交叉，属非同一性反应

4. 两种抗原有部分相同时，与相应抗体进行扩散后，可形成两条既相互联接又有其中一条多出一小段的沉淀线

5. 抗体与含有多种及部分相同的两种抗原相互扩散后，除形成一条同一性的弧形融合沉淀线外，又形成两条非同一性反应的沉淀线

38如何用化学法鉴别对乙酰氨基酚、阿司匹林和丙磺舒？

丙磺舒---直接与三氯化铁反应（米黄色↓）（PH5.0-6.0）

阿司匹林--水解后三氯化铁反应（紫色）

对乙酰氨基酚--水解后可发生重氮化反应，可与三氯化铁发生反应的药物

答案：先用重氮化偶合反应：分别取三种物质加入盐酸和亚硝酸钠，最后再加入碱性β–萘酚，生成红色偶氮化合物的是对乙酰氨基酚；然后用三氯化铁反应：取另外两种物质加入NaOH溶解后，再加入FeCl3，生成米黄色的是丙磺舒，另一种则是阿司匹林，

39在未知体内样品分析过程中，对于浓度高于ULOQ的样品应如何处理？

用空白生物介质稀释，依法重新测定；制备相适应的质控样品，同法稀释测定，确认稀释的有效性。

低于：增加未知样浓度，制备样品浓度高于LLQQ，应同条件制备，。验证方法特异性不降低，准确度精密度符合要求，增加体积后进行空白试验确认方法特异性。

40如何用化学法区别乙酰水杨酸（阿司匹林）、对氨基苯甲酸和苯甲酸？

先用重氮化偶合反应：分别取三种物质加入盐酸和亚硝酸钠，最后再加入碱性β–萘酚，颜色变为红色的为对氨基苯甲酸；

然后用三氯化铁反应：取另外两种物质加入FeCl3，生成赭色沉淀的为苯甲酸，另一种是乙酰水杨酸。41阿司匹林片剂测定为什么采用两步法？本法中，中性乙醇对什么显中性，如何制备？

(1)因为片剂中除加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，制剂工艺过程中又可能有水解产物(水杨酸、醋酸)产生，为了消除供试品中共存的酸性杂质的干扰，降低了酯键水解干扰

（2）中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差。

（3）制备：在乙醇中加入酚酞，滴加氢氧化钠至溶液显粉色

42阿司匹林片剂测定为什么用中性乙醇作溶剂？

中性乙醇可增加阿司匹林的溶解度又能防止酯键水解

计算题

1.巴比妥中重金属的检查：取本品2g，加水32ml溶解后加1mol/LHCl溶液8ml，摇匀。取此溶液20ml，依法检查重金属，不得超过百万分之十，应取多少毫升浓度为10μg/ml的标准铅溶液？

杂质限量（L）=

2.对乙酰氨基酚中对氨基酚的检查：取对氨基酚4.0g，加甲醇100ml溶解后，取此溶液25ml,加碱性亚硝基铁氰化钠1ml摇匀，放置30分钟显色，与对氨基酚50μg用同法制成的对照液比较，不得更深，计算对氨基酚的限量。

3.维生素B12注射液规格为0.1mg／m1，含量测定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸馏水

稀释至刻度，混匀，置lcm石英池中，以蒸馏水为空白，在361±1nm波长处吸收度为0.593，按为207，计算维生素B12标示量的百分含量。

4.维生素C片（规格100mg）的含量测定：取20片，精密称定，重量为2.2020g，研细，精密称取0.4402g 片粉，置100ml量瓶中，加稀醋酸 10ml,用新煮沸的蒸馏水稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液50ml,加淀粉2ml ，用0.1003mol/L的碘滴定液滴定至终点。消耗22.6ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C片相对标示量的百分含量%。

5.阿司匹林原料药含量测定：取本品精密称定2.0631g ，加中性乙醇10ml 与酚酞数滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/l ）至显粉红色，再精密加入氢氧化钠滴定液（0.5mol/l ）20ml ，加热回流1hr 至油珠完全消失，放冷，加酚酞指示剂数滴，用盐酸滴定液（0.5mol/l, F=0.995）滴定，消耗盐酸滴定液 3.36ml ，将滴定结果用空白校正（消耗盐酸20.34ml ）。每1ml 氢氧化钠滴定液（0.5mol/l ）相当于121.4mg 氯贝丁酯。已知：1分子氯贝丁酯消耗1分子氢氧化钠。计算原料的百分含量，并判断此原料药是否合格？ (97％~103％为合格）

5.阿司匹林片的含量测定：取本品10片精密称重为5.3681g 研细，精密称取细粉0.3131g ，加中性乙醇20ml 振摇使阿司匹林溶解，加酚酞数滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/l ）至显粉红色，再精密加入氢氧化钠滴定液（ 0.1mol/l ） 40ml ，加热15分振摇，迅速放冷至室温，用硫酸标准溶液（0.05mol/l ，F=1.049）滴定至粉红色，消耗硫酸滴定液24.03ml ，将滴定结果用空白校正（消耗硫酸39.93ml ）。 已知：M(C9H8O4）=180.16g 本片剂规格为0.5g ，计算 其标示量。(答案103.0％） )/(ml mg B a b M T ??=

T=180.16×0.1×

1/1=18.016mg/ml