【CN109957008A】水蛭素突变体的提取纯化方法及其应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910301614.6

(22)申请日 2019.04.16

(71)申请人 广东双骏生物科技有限公司

地址 515071 广东省汕头市汕头保税区C03

地块双骏生物科技园

(72)发明人 陈杰鹏　段丽丽　陈鸿锐　胡留松　

陈煜藩　洪琳　许志锴　叶红林　

纪烨瑜　蔡春丽　

(74)专利代理机构 北京安信方达知识产权代理

有限公司 11262

代理人 凌翠　张奎燕

(51)Int.Cl.

C07K 14/815(2006.01)

C07K 1/36(2006.01)

C07K 1/34(2006.01)

C07K 1/16(2006.01)C12P 21/02(2006.01)A61J 1/05(2006.01)A61J 1/14(2006.01)C12R 1/19(2006.01)

(54)发明名称

水蛭素突变体的提取纯化方法及其应用

(57)摘要

本申请公开了一种从大肠杆菌发酵生产水

蛭素突变体HV2-Lys47的发酵液中提取纯化水蛭

素突变体HV2-Lys47的方法，所述方法采用膜技

术及一次柱层析技术，从而获得高纯度的水蛭素

突变体HV2-Lys47。本申请还公开了由此制备的

水蛭素突变体HV2-Lys47在抗凝采血管中的应用

及包含水蛭素突变体HV2-

Lys47的抗凝采血管。权利要求书2页 说明书15页 附图2页CN 109957008 A 2019.07.02

C N 109957008

A

权　利　要　求　书1/2页CN 109957008 A

1.一种从大肠杆菌发酵生产水蛭素突变体HV2-Lys47(SEQ ID NO.:1)的发酵液中提取纯化水蛭素突变体HV2-Lys47的方法，包括以下步骤：

在升高的温度下处理大肠杆菌发酵液，以灭菌且去除杂蛋白；

通过陶瓷膜或通过离心机来处理灭菌的发酵液，以去除菌体；

可选地，通过超滤膜来处理通过陶瓷膜或离心机的发酵液，以去除杂蛋白；

通过纳滤膜来处理通过陶瓷膜或离心机的发酵液、或通过超滤膜的发酵液，以获得粗分离的浓缩液；

将盐添加到所述粗分离的浓缩液中作为辅料，喷雾干燥，得到干粉；

将所述干粉溶解在水中并过滤除杂，可选地通过滤纸、砂芯漏斗或膜设备来进行过滤；

使滤液仅通过分子筛柱层析1次，用水洗脱，浓缩收集液，得到水蛭素突变体HV2-Lys47粗品；

将所述水蛭素突变体HV2-Lys47粗品溶解到水中，然后向其中添加盐或有机溶剂，以沉淀出水蛭素突变体HV2-Lys47，干燥即得水蛭素突变体HV2-Lys47纯品，可选地进行真空干燥，更可选地进行冷冻真空干燥。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过离心机来处理高温灭菌的发酵液，可选地所述离心机为管式离心机或碟式离心机。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述高温处理是在65℃-67℃下保持5-20分钟，可选地10分钟。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸铵、硫酸钠、硫酸钾中的一种或更多种。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述分子筛柱层析选自由sephadex G25、sephadex G50、sephadex G75和sephadex G100组成的组。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，浓缩经由分子筛柱层析得到的收集液是通过减压真空浓缩、纳滤膜浓缩或反渗透膜浓缩来进行的。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇或乙腈中的一种或更多种。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，作为辅料添加的盐的以克计的重量为粗分离的浓缩液的以毫升计的体积的5％或更大。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，用于溶解所述干粉的水的以毫升计的体积为所述干粉的以克计的重量的10倍以上。

10.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，为了使水蛭素突变体HV2-Lys47沉淀，所添加的盐的以克计的重量为溶解有水蛭素突变体HV2-Lys47粗品的水溶液的以毫升计的体积的20％-30％，所添加的有机溶剂的体积为溶解有水蛭素突变体HV2-Lys47粗品的水溶液的体积的5-9倍。

11.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述大肠杆菌发酵液是通过以pBH-2为表达载体的菌株大肠埃希氏菌(Escherichia coli)pBH2CGMCC No0908培养生产的，可选地，所述培养包括在需氧条件下，在25℃-35℃的温度下培养至对数生长期结束，然后升温至35℃-45℃继续培养至水蛭素突变体HV2-Lys47的产量达到峰值。

12.一种水蛭素突变体HV2-Lys47，所述水蛭素突变体HV2-Lys47根据权利要求1-11中

2

水蛭素开发利用与专利技术大全

水蛭素开发利用与专利技术大全 【册数】: 16开精装全一卷（附光盘） 【日期】: 2010年12 【作者】: 国家专利局组织编写 【出版社】: 中国知识出版社 【定价】: 580 【现价】: 380 详细目录介绍 1 CN01141415.4 高效表达重组水蛭素及其生产方法 2 CN03113566.8 菲牛蛭的养殖方法及水蛭素的提取技术 3 CN01121593.3 水蛭素口服缓(控)释剂型 4 CN01133773.7 重组水蛭素口服肠溶缓释制剂 5 CN94194897.8 水蛭素与亲脂化合物的水蛭素结合物 6 CN96101995.6 用水蛭素和乙酰水杨酸治疗未溶栓的急性心肌梗塞病人的方法 7 CN91101687.2 含水蛭素衍生物的分泌物 8 CN91103025.5 水蛭素的重组体制备方法 9 CN92114142.4 具有改善稳定性的新的合成的异水蛭素 10 CN92107076.4 医用天然水蛭素的提取方法

11 CN92111829.5 重组水蛭素及其复合物用于制备预防和治疗血栓病药物 12 CN94190578.0 高分子量的脱硫水蛭素 13 CN95117701.X 用亲合色谱法提纯水蛭素的方法 14 CN96193457.3 基于水蛭素氨基酸序列的凝血酶抑制剂 15 CN97114426.5 水蛭素 16 CN01113526.3 新型分泌表达载体及其在重组水蛭素表达技术中的应用 17 CN01105798.X 一种新型双功能水蛭素及其制备方法和应用 18 CN00129747.3 水蛭素基因hv2－47k及其合成与表达 19 CN00812955.X 用于由大肠杆菌向培养基中分泌来制备Leu－水蛭素的信号序列 20 CN01107807.3 用酵母分泌表达重组水蛭素 21 CN03132224.7 重组水蛭素的新用途 22 CN03109244.6 水蛭素突变体的一种编码基因与高效表达菌株 23 CN03125104.8 酶性止血剂拮抗水蛭素出血作用的用途 24 CN200410034671.6 用于由大肠杆菌向培养基中分泌来制备Leu-水蛭素的信号序列 25 CN200410037695.7 一种水蛭素冻干粉针制剂及其制备方法

低分子肝素及水蛭素在抗凝治疗中的应用

第20卷第9期 2012年9月 Vol.20 No.9 Sep，2012 中国医学工程 China Medical Engineering ? ? 187 综 述 ? ?低分子肝素及水蛭素在抗凝治疗中的应用分析 王艳春 （航空总医院，北京 100012） 中图分类号:R 973.2 文献标识码:A 抗凝疗法是使用抗凝剂对血栓栓塞性疾病进行治疗或者是预防的一种方法，其起效的主要原理是通过使用抗凝剂对纤维蛋白原的转化起到阻止的效果，避免其向纤维蛋白转化，从而防治了血栓的最终形成与发展。目前较为常用的抗凝剂为香豆类和肝素等口服抗凝剂，两者都有着较长的使用历史，并且已经有了相对成熟的经验。本文将另述两类相对较新的抗凝药物，极为水蛭素（HRD）和低分子肝素(LMMH\LMWH)。 1 低分子肝素（LMMH/LMWH） 低分子肝素又可称之为未组分肝素，其是一种经过化学处理或者是酶解法处理后得到了分子量相对较小的一种组分制品。低分子肝素的分子量平均为5000道尔顿。目前我国已有多种低分子肝素在市场上出现，但是由于不同的制备方法，导致不同厂家所生产的低分子肝素的分子量的分布、药代动力学以、平均分子量以及药效的动力学互相之间都有着一定的差异[1]。目前国内上市的低分子肝素主要有速避宁、法安明等[2]。 1.1作用机理与特点 低分子肝素通过皮下注射后，其生物利用度可以达到90%以上，比普通的肝素要高出15%左右，所以前者多采用皮下注射的方式给药。低分子肝素的半衰期较长，每天注射2次便可发挥抗凝作用，其还具有促进释放内源性的纤溶酶活化物、促进TFPI释放、增加前尿激酶和t-PA的活性等。 1.2用途与适应症 低分子肝素最早于高危患者的血栓预防中使用，取得了较好的效果，有效的降低了血栓形成的发病率，治疗效果明显比普通的肝素预防方法优秀。近年来根据相关文献报道，对于长期进行抗凝治疗的患者来说，若其难以耐受香豆素类抗凝剂的口服或者是难以耐受其所带来的明显的出血的并发症，便可以选择低分子肝素进行替代。随着低分子肝素在血栓预防方面的成功，人们逐渐的将低分子肝素用于治疗血栓栓塞性疾病方面，并且获得了较好的结果[3]。 1.3用法与用量 目前对于低分子肝素的使用并没有一个国际统一的标准，因此计量常难以进行标准的规划。目前常采取皮下注射的方式使用低分子肝素，注射次数为每日1-2次即可。目前国内治疗和预防血栓栓塞性的疾病用量为:法安明的预防用量为2500-5000u术前于皮下注射，其后每天药量同上，连续一周；治疗为每千克200U，每日皮下注射一次。速避宁预防时40-60U/(kg.d)的用量，通常治疗时的用量比预防用量多[4]。 2 水蛭素（HRD） 水蛭素是一种抗凝蛋白肽类的物质，其是由医用的水蛭中所提取出来的[5]。水蛭我国属于一味历史悠久的中药，但是水蛭中所提取之物也是直至1884才被HAYCRAFT确定有抗凝血的作用。其于1995年被MARKWARDT确定其为一种蛋白物质，并命其明为水蛭素。在一些品种水蛭的口器中可以提取出天然的水蛭素，并且此中水蛭素的产量较为有效，通常只可于研究中使用，难以在临床中被满足应用。但是由于分子生物学的不断发展，逐渐的开始有人克隆出了水蛭素的基因，并且于1986年将r-HRD制备出来[6]。 2.1r-HRD作用机理 r-HRD与天然水蛭素的分子结构极为相似，其抗凝血的作用机理是通过和凝血酶结合后形成的复合物具有不可逆的特性，使得凝血酶失去了作用。其是一种凝血酶特异性的抑制剂，目前在临床中处于观察阶段，且体内的半衰期与肝素相比较短[7]。 2.2适应症和用途 临床中常使用r-HRD治疗血栓栓塞性疾病，.其中主要包括对急性心机梗塞，血栓形成、不稳定性心绞痛等的治疗，同时还可用于血液透析、体外循环以及血管成形术中。在对术后血栓形成的方面，有学者将其和普通肝素的治疗效果进行比较，结果显示r-HRD在降低DVT方面明显比固定的低剂量肝素疗效好[8]。 2.3用法和用量 r-HRD可采取皮下注射和静脉注射两种方式进行，其剂量在10-30mg之间每天[9]。 2.4副作用 r-HRD可引起的主要并发症状便是出血，但是对其所引起的并发症的发生率报道不同，因此与其剂量无关。r-HRD 虽然是一种蛋白质物质，但是由于其分子量相对较小，其免疫原性则相对较弱，所以难以产生抗体，但是随着其在临床中的广泛应用，仍要密切观察其副作用[10]。 r-HRD在临床中的应用时间相对较短，其在各种用途中的效果都在早期的观察之中。r-HRD对凝血酶所起到的有效的特异抑制作用是极为重要的，但是其在预防和治疗血栓栓塞性的疾病方面的地位目前却难以确定。 参 考 文 献 [1] 薛玉文,王均玲,杜以明,等.肝素与低分子肝素对急性肺动脉 栓塞症抗凝治疗的作用比较[J].新医学,2005,36(3):149-150. [2] 焦华波,乔治,谭向龙,等.低分子肝素对急性胰腺炎患者预后 的改善作用[J].中国危重病急救医学,2004,16(12):712-714. [3] 姚娓,刘勇,张红,等.水蛭素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作 用及对C-met表达的影响[J].中国肿瘤临床,2011,38(23):1427-1429. [4] 陈华友,黄静,蒋芝君,等.抗凝良药水蛭素的研究进展[J].生 物学通报,2003,38(3):3-5. [5] 秦海娜,修志龙,张代佳,等.水蛭素聚乙二醇化及其体外抗凝 活力分析[J].中国化学工程学报(英文版),2007,15(4):586-590. [6] 池小凤,许平辉,张晓莺.单剂量低分子肝素在血液灌流中抗 凝问题的探讨[J].护士进修杂志,2007,22(15):1412-1413. [7] 赵志权,磨红,蒙洁英,等.阿加曲班与低分子肝素在 连续性血液净化治疗抗凝中的对比研究[J].实用医学杂 收稿日期:2012-08-11

月产一吨水蛭素提取纯化工艺设计

目录 第一章项目总论 (1) 1.1水蛭素的介绍 (1) 1.1.1水蛭素的化学结构和理化性质 (1) 1.1.2水蛭素的生理功能 (2) 1.2水蛭素的应用前景 (3) 1.3水蛭素生产工艺 (3) 1.3.1粗提纯 (3) 1.3.2水蛭素的纯化 (4) 1.3.3水蛭素蛋白质分析方法 (5) 第二章方案设计 (1) 2.1产品方案概述 (1) 2.1.1进行产品方案选择 (1) 2.1.2 简要论述选定方案 (1) 2.2工艺流程 (2) 2.2.1工程流程示意图 (2) 2.2.2工艺流程说明 (2) 2.2.3工艺流程论证阐述以及工艺参数 (3) 2.3物料衡算 (4) 2.3.1技术参数 (4) 2.3.2计算 (5) 第三章设备选型 (1) 3.1粉碎机 (1) 3.2过滤装置 (2) 3.3离心装置 (3) 3.4凝胶层析装置 (3) 3.5浓缩结晶装置 (3) 3.6冷冻干燥装置 (4) 第四章防污措施 (6)

4.1车间环境 (6) 4.2设备和管道的清洗与杀菌 (6) 4.3废水的处理 (6) 4.4废渣的处理 (6) 第五章结语 (7) 参考文献 (8)

第一章项目总论 1.1 水蛭素的介绍 水蛭素(hirud in)是水蛭（Leech）及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质（多肽）。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。近年来在我国以水蛭素为主要成分的中成药已有许多种，如抗血栓片、活血通胶囊等，其年产值达数千万元。含水蛭的新药也在不断研究和推出。利用基因工程生产重组水蛭类多肽药物，以取代水蛭素或作为抗凝化瘀药的添加成分，这在近期内就可实现。作为注射剂用于心血管系统疾病和肿瘤治疗药物，则还需要进一步的临床研究。毋庸置疑，重组水蛭素类多肽药物的开发将会带来巨大的社会效益和经济效益。所以对水蛭素生产工艺研究的不断深入,完善水蛭素提取工艺就显得尤为重要。 1.1.1水蛭素的化学结构和理化性质 水蛭（Hirudo）为水蛭科动物蚂蟥（Whitman ia p igra Whitman）、水蛭（Hirudo nip po nica W hit man）或柳叶蚂蟥（Whitman ia acranulata W h itman）的干燥全体，具有破血、逐瘀、通经作用，用于癥瘕痞块、血瘀经闭、跌扑损伤治疗。作为常用的活血化瘀中药，水蛭在临床广泛用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病的治疗，其有效成分主要为一种抗凝血物质，名为水蛭素（Hirud in）。它能阻止凝血酶对血小板的作用，抑制血小板受凝血酶的刺激而释放，从而延缓或阻止血液的凝固。研究表明，水蛭素是由65个氨基与3个二硫键组成的多肽，分子量约为7 000，在干燥状态下稳定存在;室温下，在水中稳定存在6个月，80 ℃下加热15 min不被破坏;提高溶液的p H值，其稳定性下降;20 ℃下，在0.1 mo l/L的HC l或NaOH中可稳定15min。 水蛭素是一类很有前途的抗凝化瘀药物，它可用于治疗各种血栓疾病，尤其是静脉血栓和弥漫性血管凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成；改善体外血液循环和血液透析过程。在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭

水蛭素治疗脑血管疾病研究进展_新洷康天然水蛭素

水蛭素治疗脑血管疾病研究进展_新洷康天然水蛭素 【关键词】水蛭素类脑血管障碍凝血 水蛭又名蚂蟥,为水蛭科动物蚂蟥、水蛭及柳叶蚂蟥的干燥体,味苦、咸、平，有小毒，为破血逐瘀之品.近年来国内外对水蛭的化学成分、药理作用及临床应用进行了大量的研究,取得了重大的进展,开发了龙生蛭胶囊、水蛭注射液及水蛭地龙注射液（舒血通）等新药.本文对水蛭治疗脑血管疾病的临床与实验研究进展进行了综述. 1 实验研究 1.1 有效成分水蛭含17种氨基酸,其中谷氨酸、天门冬氨酸及赖氨酸等的含量较高, 它的唾液含有水蛭素，并含有蛋白质、肝素、抗凝血酶及多种微量元素，主要从新鲜活日本医蛭(Hirudonipponicawhitman)中提取.水蛭素是由65个氨基酸组成的多肽，分子质量约为 7ku，对凝血酶有高亲和性，可与凝血酶形成极稳定的复合物，在低浓度下即有抑制凝血酶活性的作用，是天然的凝血酶特效抑制剂；水蛭素亦具有类似肝素样作用，但与肝素不同，它不需抗凝血酶Ⅲ作为辅助因子，不被肝素蛋白灭活，可使脑血块内或内皮下的凝血酶灭活，抑制凝血酶对血小板的作用［1］.不同种类的水蛭的活性成分不尽相同，从各种水蛭中被分离出的作用于凝血 纤溶系统的活性成分大致可分为以下几类:1)FXa抑制剂，如antistasin,ghilanten，therosasin;2)凝血酶抑制剂，如水蛭素， haemendin,bufrudin,haemadin,granulin，theromin;3)胶原诱导血小板聚集抑制剂，如calin，LAPP，血小板GPⅡb/Ⅲ a抑制剂，如decorsin，ornatin;4)纤维蛋白(原)溶解剂，如hementin，hementerin;5)FⅫa抑制剂，如tridegin［2，3］. 1.2 药理作用 1.2.1 抗凝血及抗血栓水蛭素可延长或抑制凝血过程.据报道，水蛭素可明显抑制实验性大鼠血栓形成,并对已形成的血栓具有溶栓作用,而凝血酶诱发的血液凝固是血管血栓形成的主要机理［4］.由于水蛭素直接靶向凝血酶，可有效地防止纤维蛋白和血细胞结合形成血凝块，因此可防止各类血栓的形成及延伸. 1.2.2 对血小板的作用水蛭素可降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，降低血小板黏附性［5］.血管内皮细胞损伤和功能衰退引发血小板的激活，血小板通过其糖蛋白上的Ⅰβ和Ⅰa/Ⅱa受体与胶原组织结合，形成血小板黏附.凝血酶是作用最强的促进血小板激活的物质，水蛭素与之结合可抑制凝血酶与血小板的结合及血小板受凝血酶刺激后的释放，使两者解离，从而减弱凝血酶激活血小板的作用，抑制血小板聚集. 1.2.3 对血液流变学的影响水蛭煎剂可降低血液黏稠度，减少血浆中纤维蛋白原的含量. 1.2.4 降低血脂灌胃给予实验动物水蛭水煎剂可降低大鼠血液中甘油三酯及脂蛋白的含量,亦可降低食饵高脂血症家兔血液中胆固醇及甘油三酯的含量，使实验动物的主动脉及冠状动脉粥样硬化斑块消失,胆固醇结晶减少. 1.2.5 对脑组织的作用水蛭素可增加脑血流量,促进大鼠实验性脑血肿的吸收,减轻血肿周围炎性反应性水肿,缓解颅内高压,改善局部血液循环,保护脑组织［6］.据报道，水蛭提取液对实验性脑出血血肿周围组织的保护作用机制可能与HSP70及TGFB 1表达增强有关［7］.t pA，PAI 1是纤溶系统的重要调节因子，在纤溶平衡中起重要作用，二者主要来自血管内皮细胞，PAI 1还可来自活化的血小板a颗粒及增生的血管平滑肌细胞.t pA可激活血栓中纤溶酶原使血栓溶解，PAI 1可与t pA结合使其失活.急性脑梗死，尤其在发病早期患者血浆t pA活性明显下降，PAI 1活性明显升高.水蛭地龙注射液可明显降低急性脑梗死

水蛭素生产创新工艺流程,水蛭素制备新方法新技术应用手册

水蛭素、蚂蝗素生产创新工艺流程与制备新方法新技术应用手册 主编：专利编写组 出版社：国家专利局内部发行资料2011年 规格：全一卷16开精装+1张CD光盘 定价：680元优惠价：550元 详细目录 1、2010.08.25 / 靶向血小板的水蛭素聚离子胶束组合物 2、2010.08.25 / 水蛭素的聚离子胶束组合物 3、2010.08.18 / 一次性软连接并联多管水蛭素抗凝采血连接器 4、2010.08.18 / 一次性硬连接并联多管水蛭素抗凝采血连接器 5、2010.07.28 / 一次性软连接水蛭素抗凝横式真空采血套件 6、2010.07.28 / 一次性硬连接水蛭素抗凝横式真空采血套件 7、2010.07.28 / 一次性水蛭素化瘀热敷贴及其应用 8、2010.07.21 / 水蛭素真空采血管 9、2010.06.30 / 一种水蛭素的双水相-反胶束提取法 10、2010.06.30 / 水蛭素的生理盐水-聚乙二醇双水相提取法 11、2009.11.25 / 一种水蛭素口服微球制剂及其制备方法 12、2008.10.08 / 一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素的方法

13、2008.08.27 / 一种重组水蛭素编码基因与应用 14、2008.07.30 / 一种以菲牛蛭唾液为原材料的水蛭素生产工艺 15、2008.07.30 / 一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺 16、2008.05.14 / 一种重组双功能水蛭素口服制剂及其制备方法 17、2008.04.16 / 一种测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法 18、2008.04.09 / 一种有利于减少水蛭素降解的重组毕赤酵母菌株及其构建方法 19、2008.04.02 / 重组水蛭素的药物组合 20、2008.01.23 / 一种天然水蛭素有效成分的提取方法 21、2007.09.19 / 水蛭素的制取方法 22、2007.03.14 / 以油体蛋白作载体在转基因大豆中生产重组水蛭素的方法 23、2007.01.03 / 水蛭素抗血栓气雾剂制造技术 24、2006.12.27 / 一种以吸血水蛭为原料制备水蛭素的方法与应用 25、2006.12.06 / 水蛭素鼻腔给药制剂及其用途 26、2006.10.04 / 天然水蛭素舌下含片 27、2006.10.04 / 天然水蛭素软膏 28、2006.08.09 / 水蛭素干粉吸入剂及其制备方法 29、2005.03.16 / 天然水蛭素复方药用保健品 30、2005.01.26 / 一种水蛭素冻干粉针制剂及其制备方法

水蛭素提取工艺-推荐下载

2014分离工程方向课程设计题目 动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，以及阻止凝血酶催化的凝 血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象。此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞 的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。与肝素相比，它不仅用量少，不会引起出血，也不依 赖于内源性辅助因子；而肝素则有引起出血的危险，在弥漫性血管内凝血的发病过程中抗 凝血酶III 往往减少，这将限制肝素的疗效，采用水蛭会有较好的效果。 过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免

外，大大简化了下游工程。我们根据水蛭素的特性，设计了适合大规模生产的低成本的分 离纯化新工艺，无需高效液相层析或反相层析，只经三步纯化，即获得电泳纯的产品。目 前我们得到水蛭素的表达量、纯度和得率均达到国际先进水平。 表达水平，纯化工艺，产品质量与国外水平相当，某些技术指标超过国外，成本比国外低。 在美国，药用重组水蛭素每毫克6美元。我国生产的成本低，如果每毫克降至人民币 6元， 广大患者就有可能承受得起。国外重组水蛭素都采用针剂，我们正在研制口服剂型，口服 无疑更易被病人接受，成本也可更多降低。尤其是它可以拓宽使用的范围，用于各种血栓 病的防治，或作为有关药物的主要成分或添加成分，可开发更大的市场。 、管路敷设技术不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术包含线槽、管架等多项方式，为解决、电气课件中调试工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启、电气设备调试高中资料试卷技术中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷

水蛭疗法

水蛭疗法 生活环境生活在稻田、沟渠、浅水污秽坑塘等处，嗜吸人畜血液，行动非常敏捷，会波浪式游，也能作尺蠖式移行。每到春暖即行活跃，6～10月均为其产卵期，到冬季往往蛰伏在近岸湿泥中，不食不动，生存能力强。 生活习性水蛭属冷血软体动物，在中国南北方均可生长繁殖，它主要生活在淡水中的水库、沟渠、水田、湖沼中，以有机质丰富的池塘或无污染的小河中最多。生长适温为 10-40℃，北方地区低于3℃时在泥土中进入蛰伏冬眠期，次年3-4月份高于8℃左右出蜇活动。水蛭为杂食性动物，以吸食动物的血液或体液为主要生活方式，常以水中浮游生物、昆虫、软体动物为主饵，人工条件下以各种动物内脏、熟蛋黄、配合饲料、植物残渣，淡水螺贝类、杂鱼类、蚯蚓等作饵。 采制夏、秋捕捉。捕得后洗净，先用石灰或酒闷死，然后晒干或焙干。日本医蛭通常用线穿于体的中段，挂起晒干；茶色蛭除用线穿起外，并将体的一端拉长，故成狭窄的条状。由于加工后外形不同，药材中以日本医蛭的干燥品称为'水蛭'，以宽体金线蛭的干燥品称为“宽水蛭”，以茶色蛭的干燥品称为“长条水蛭”。 ⒈宽水蛭：以夏秋二季为盛产期，湖泊中产者体大，水田里

产者体小，捞出后置阳光下晒干，或放在锅内焙干。 ⒉长条水蛭：采收方法同上，惟捞出后用线穿起，体的一端拉长，挂在阳光处晒干。 ⒊水蛭：采收期同蚂蟥，捞出后用线穿起，穿时常从体的中段穿上，持于阳光处晒干。 蚂蝗治疗麦可森说，水蛭“减痛”的关键在于它的唾液，因为它的唾液里面含有几种消炎的成分，这种成分可以深入人的关节组织。加拿大多伦多大学细菌学教授戴瑟说，水蛭开口咬人的时候，会释放出一系列的化学物质，而在这些化学物质中，有些具有减少发炎的作用，相当于消炎剂。治疗用途古代医书中记载有利用蚂蟥治疗多种疾病，谓其“主逐恶血、瘀血、月闭、破血消积聚……”。医圣张仲景用其祛邪扶正，治疗“瘀血”、“水结”之症，显示了其独特的疗效。 后世张锡纯赞此药：“存瘀血而不伤新血，纯系水之精华生成，于气分丝毫无损，而血瘀默然于无形，真良药也”。 公元1500年前，埃及人首创医蛭放血疗法，到上世纪初，欧洲人更迷信医蛭能吮去人体内的病血，不论头痛脑热概用医蛭进行吮血治疗。后来随着医学的发展，这种带有迷信色彩的治疗方法才逐渐被放弃了。然而近年来，医蛭在医学上的新用途正受到人们广泛的关注。 整形外科医生利用医蛭消除手术后血管闭塞区的瘀血，减少

水蛭素的作用和用途

水蛭素 作者：南宁JBC 水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是“迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂”，被医学界认为是专克心血管病这个”第一杀手“的”第一高手“。对付冠心病、心肌梗塞、脑血栓、脑中风、高血压、高血粘、高血脂等，水蛭素具有独到的非凡疗效。 专家提醒： 生命本质在于人体血液循环平衡，如果血液循环平衡被破坏了，那 生命健康就会得到威胁，心脑血管疾病和“三高”都是因为人体的血液循环已经被破坏。所以治疗疾病的根本原因还是从日常饮食、运功上面注意，如果有条件的可以服用新洷康天然水蛭素，天然水蛭素是对付心脑血管病的“全能高手”，不仅能直接扩张血管，降低血液粘稠度，而且能加快血流速度，抗凝血、溶血栓、降低血小板聚集性，对人类心脑血管疾病尤其是血栓性疾病等有独特的功效。这种资源遵循的是平衡血液的循环，而非西药有破坏人体自身修复系统功能。 水蛭素能与凝血酶的催化中心及纤维蛋白原结合中心发生不可逆转的结合，使凝血酶失活，因而能够有效的防治血栓的形成，促进伤口愈合，同时具有降血压、降血脂、扩张外周血管、加速血液循环的作用。目前水蛭素主要用于各种血栓疾病，如脑血栓、静脉血栓、弥散性血管内凝血及冠状动脉血栓等的预防和治疗，也用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管形成后再栓塞，及改善体外血液循环和血液透析过程。 综合来说，水蛭素为最明显的五个作用： 1、溶解血栓； 2、消除血液垃圾； 3、减低血液粘度； 4、改善血液循环； 5、促进新陈代谢。 相对于目前临床上用于治疗心血管病最常用抗凝药物——肝素，天然水蛭素有一下优点： （1）天然水蛭素抑制凝血酶的反应不需要抗凝血酶II作为辅助因子，使其抗凝作用与量效关系更吻合；（2）肝素不能灭活结合与血栓上的凝血酶，而天然水蛭素则对血液中和结合于血栓的凝血酶都可抑制;（3）肝素用于抗血栓治疗，出血

【CN109957008A】水蛭素突变体的提取纯化方法及其应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910301614.6 (22)申请日 2019.04.16 (71)申请人 广东双骏生物科技有限公司 地址 515071 广东省汕头市汕头保税区C03 地块双骏生物科技园 (72)发明人 陈杰鹏　段丽丽　陈鸿锐　胡留松　 陈煜藩　洪琳　许志锴　叶红林　 纪烨瑜　蔡春丽　 (74)专利代理机构 北京安信方达知识产权代理 有限公司 11262 代理人 凌翠　张奎燕 (51)Int.Cl. C07K 14/815(2006.01) C07K 1/36(2006.01) C07K 1/34(2006.01) C07K 1/16(2006.01)C12P 21/02(2006.01)A61J 1/05(2006.01)A61J 1/14(2006.01)C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 水蛭素突变体的提取纯化方法及其应用 (57)摘要 本申请公开了一种从大肠杆菌发酵生产水 蛭素突变体HV2-Lys47的发酵液中提取纯化水蛭 素突变体HV2-Lys47的方法，所述方法采用膜技 术及一次柱层析技术，从而获得高纯度的水蛭素 突变体HV2-Lys47。本申请还公开了由此制备的 水蛭素突变体HV2-Lys47在抗凝采血管中的应用 及包含水蛭素突变体HV2- Lys47的抗凝采血管。权利要求书2页 说明书15页 附图2页CN 109957008 A 2019.07.02 C N 109957008 A

权　利　要　求　书1/2页CN 109957008 A 1.一种从大肠杆菌发酵生产水蛭素突变体HV2-Lys47(SEQ ID NO.:1)的发酵液中提取纯化水蛭素突变体HV2-Lys47的方法，包括以下步骤： 在升高的温度下处理大肠杆菌发酵液，以灭菌且去除杂蛋白； 通过陶瓷膜或通过离心机来处理灭菌的发酵液，以去除菌体； 可选地，通过超滤膜来处理通过陶瓷膜或离心机的发酵液，以去除杂蛋白； 通过纳滤膜来处理通过陶瓷膜或离心机的发酵液、或通过超滤膜的发酵液，以获得粗分离的浓缩液； 将盐添加到所述粗分离的浓缩液中作为辅料，喷雾干燥，得到干粉； 将所述干粉溶解在水中并过滤除杂，可选地通过滤纸、砂芯漏斗或膜设备来进行过滤； 使滤液仅通过分子筛柱层析1次，用水洗脱，浓缩收集液，得到水蛭素突变体HV2-Lys47粗品； 将所述水蛭素突变体HV2-Lys47粗品溶解到水中，然后向其中添加盐或有机溶剂，以沉淀出水蛭素突变体HV2-Lys47，干燥即得水蛭素突变体HV2-Lys47纯品，可选地进行真空干燥，更可选地进行冷冻真空干燥。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过离心机来处理高温灭菌的发酵液，可选地所述离心机为管式离心机或碟式离心机。 3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述高温处理是在65℃-67℃下保持5-20分钟，可选地10分钟。 4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸铵、硫酸钠、硫酸钾中的一种或更多种。 5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述分子筛柱层析选自由sephadex G25、sephadex G50、sephadex G75和sephadex G100组成的组。 6.根据权利要求1所述的方法，其中，浓缩经由分子筛柱层析得到的收集液是通过减压真空浓缩、纳滤膜浓缩或反渗透膜浓缩来进行的。 7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇或乙腈中的一种或更多种。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，作为辅料添加的盐的以克计的重量为粗分离的浓缩液的以毫升计的体积的5％或更大。 9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，用于溶解所述干粉的水的以毫升计的体积为所述干粉的以克计的重量的10倍以上。 10.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，为了使水蛭素突变体HV2-Lys47沉淀，所添加的盐的以克计的重量为溶解有水蛭素突变体HV2-Lys47粗品的水溶液的以毫升计的体积的20％-30％，所添加的有机溶剂的体积为溶解有水蛭素突变体HV2-Lys47粗品的水溶液的体积的5-9倍。 11.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述大肠杆菌发酵液是通过以pBH-2为表达载体的菌株大肠埃希氏菌(Escherichia coli)pBH2CGMCC No0908培养生产的，可选地，所述培养包括在需氧条件下，在25℃-35℃的温度下培养至对数生长期结束，然后升温至35℃-45℃继续培养至水蛭素突变体HV2-Lys47的产量达到峰值。 12.一种水蛭素突变体HV2-Lys47，所述水蛭素突变体HV2-Lys47根据权利要求1-11中 2

水蛭的妙用---慢性肾功能不全

水蛭的妙用---慢性肾功能不全 转自中医于春廷慢性肾功能不全 自1980年开始，笔者在益肾汤中加用水蛭治疗慢性肾功能不全，并设置益肾汤组为对照组，收到了一定的效果，对照组14例用益肾汤，治疗组18例用益肾汤加水蛭粉内服，4周为一个疗程，每周复查各项指标，4个疗程后总结疗效。 益肾汤：生黄芪50g、附子10g、大黄10g、山茱萸10g、枸杞30g、桑葚15g、金银花15g、白花蛇舌草15g、车前草30g、益母草30g、丹参30g，每天1剂，水煎分3次服。 尿毒症严重的患者或呕吐不能进食者，用生大黄、半支莲各30g，生牡蛎50g，水煎取药汁100ml，保留灌肠20min，每天1到2次，以每天排便3到4次为宜，其它对症处理如纠酸、利尿、降血压等。 水蛭组在对照组的基础上重用生水蛭30克，研粉末每日分3次用益肾汤冲服,装胶囊更好，可避免恶心呕吐。 结果：

1.从尿素氮和肌酐比较，两组有显著差异；从症状比较，有非常显著差异。 2.从尿量比较，水蛭组有8例用药2周后尿量显著增加，水肿消退，对照组不明显。 3.副作用方面：水蛭组治疗后9例由便结转为稀便，没天2到3次，6例便稀者未见次数增加，无明显副作用。 原按：水蛭治疗本病有三个要点：时间要早、剂量要大、疗程要长。 所谓时间早指不论是代偿期，或者原发病急慢性期，不必悉具瘀血证均投之。这对于治疗原发病，延缓病情发展大有裨益。所谓剂量大指水蛭用量要大，常用到30克，量小则难以奏效，并且要生用，忌炙用或入煎，否则疗效大减。所谓长指治疗有效后可以长时间服用乃至数年，不仅延长存活期，还可以逆转肾功能。水蛭组病情稳定后继续服用水蛭，平均存活37.4个月，最长达8年，现在已经恢复工作，对照组仅29个月。 水蛭组有效病例，治疗前肾功能为中度损害，而对重度

水蛭素提取工艺

2014分离工程方向课程设计题目 水蛭素 水蛭素(hirudin)是水蛭（Leech）及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质（多肽）。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。 概述 水蛭素(hirudin)是水蛭（Leech）及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质（多肽）。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。 作用 动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，以及阻止凝血酶催化的凝血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象。此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。与肝素相比，它不仅用量少，不会引起出血，也不依赖于内源性辅助因子；而肝素则有引起出血的危险，在弥漫性血管内凝血的发病过程中抗凝血酶III 往往减少，这将限制肝素的疗效，采用水蛭会有较好的效果。 应用 水蛭素是一类很有前途的抗凝化瘀药物，它可用于治疗各种血栓疾病，尤其是静脉血栓和弥漫性血管凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成；改善体外血液循环和血液透析过程。在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭素可促进伤口愈合。研究还表明，水蛭素在肿瘤治疗中也能发挥作用。它能阻止肿瘤细胞的转移，已证明有疗效的肿瘤如纤维肉瘤，骨肉瘤，血管肉瘤，黑素瘤和白血病等。水蛭素还可配合化学治疗和放射治疗，由于促进肿瘤中的血流而增强疗效。

水蛭的作用功效

水蛭的作用功效 水蛭 (《本经》) 【异名】蛭蝚、至掌、虮(《尔雅，)，马蜞(陶弘景)，马蛭(《唐本草》)，蜞、马蟥(《本草图经》)，马鳖(《本草衍义》)，红蛭(《济生方》)，蚂蝗蜞(《医林纂要》)，黄蜞(《本草求原》)，水麻贴(《河北药材》)，沙塔干、肉钻子(《中药材手册》)，门尔哥蚂里(朝名)。 【来源】为水蛭科动物日本医蛭、宽体金线蛭、茶色蛭等的全体。 【动物形态】①xx医蛭，又名： 医用蛭。 体狭长稍扁，略呈圆柱形，体长3～5厘米，宽4～5毫米(固定)。背面绿中带黑，有黄色纵线5条。腹面子坦，灰绿色，无杂色斑纹。体环数103；环带不显著，占15环。雄生殖孔在31～32环沟间；雌孔在36～37环沟间。眼5对，列成弧形。体前端腹面有一前吸盘。食道纵褶6条，颚3片，半圆形，颚齿发达。后端腹面有一后吸盘，碗状，朝向腹面，肛门在其背侧。 生活于水田及沼泽中。吸人、畜血液。行动敏捷，能作波浪式游泳和尺蠖式移行。春暖时即活跃，6～10月为产卵期，冬季蛰伏。再生力很强，如将其切断饲养，能由断部再生成新体。全国各地均有分布。 ②宽体金线蛭 体长大，略呈纺锤形，扁平，长6～13厘米，宽0.8～2厘米。背面通常暗绿色，具6条细密的黄黑色斑点组成的纵线，背中线1条较深。腹面淡黄色，杂有许多不规则的茶绿色斑点。体环数107。环带明显，占15环。雄生殖孔在33～34环沟间；雌孔在38～39环沟间。眼与日本医蛭同。前吸盘小，颚齿不发达。 生活于水田、河流、湖沼中。不吸血，吸食水中浮游生物、小形昆虫、软体动物的幼虫及泥面腐殖质等。

全国大部地区均有分布。 ③茶色蛭，又名： 牛鳖。 体较宽体金线蛭略小，呈柳叶形，扁平。背部棕绿色，有5条细密的绿黑色斑点组成的纵线；腹面浅黄色，甚平坦，散布不规则的暗绿色斑点。余与宽体金线蛭相似。 全国大部地区均有分布。 【采集】夏、秋捕捉。捕得后洗净，先用石灰或酒闷死，然后晒干或焙干。日本医蛭通常用线穿于体的中段，挂起晒干；茶色蛭除用线穿起外，并将体的一端拉长，故成狭窄的条状。由于加工后外形不同，药材中以日本医蛭的干燥品称为"水蛭"，以宽体金线蛭的干燥品称为"宽水蛭"，以茶色蛭的干燥品称为"长条水蛭"。 【药材】①水蛭 呈扁长圆柱形，长2～5厘米，宽2～3毫米。腹面稍高，体多弯曲扭转，通常用线穿起，多数密集成团，全体黑棕色。质脆，断面不平坦，无光泽。气微腥。 ②宽水蛭 呈扁平纺锤形，长5～9厘米，宽0.8～2厘米。背部稍隆起，腹面平坦，背腹相贴呈拘挛状，前端稍尖，后端钝圆。背部黑棕色，体两侧及腹面呈棕黄色。质脆，易折断，断面呈胶质状而有光泽。有土腥气。③长条水蛭 呈狭长扁平形，或呈线状，长8～12厘米，宽1～5毫米。体两端均细，体表凹凸不平。背腹面均呈黑棕色，因加工时两端穿有小孔，故吸盘不易辨认。质脆，断面不平坦，无光泽。有土腥气。 以上三种药材，均以整齐、黑棕色，无杂质者为佳。全国大部地区均产。

水蛭素对脑血栓的作用

水蛭素对脑血栓的作用 作者：南宁JBC 由国家工信部、国家卫生部、国家食品药品监督管理局三个部委联合发布《关于加快医药行业结构调整的指导意见》鲜明指出我国中药产业发展方向及目标，即“明确优先发展具有中医药治疗优势、疗效确切、前景好的中成药的二次研究与开发，将培育50个以上疗效确切、物质基础清楚、作用机理明确、安全性高、剂型先进、质量稳定可控的现代中药”这个文件指明了中药产业的发展方向的同时，也告诉我们什么样的脑梗塞中药最好。那么中药为什么要二次与开发呢？大家都知道，中药在治疗心脑血管等慢性疾病方面比西药效果独到、无耐药性、副作用低等优势，但中药的缺点也比较明显，由于中药的生长条件、原料产地的不同，使中药有疗效不够的稳定缺点，一个生产批次有效果显著，一个生产批次可能就效果不那么理想，主要原因还是有效成分含量不稳定导致，为了使中药的效果疗效更确切，有效含量就要更稳定才可以，而中成药的有效成分成百上千种，加工工艺的不同又会产生不同的有效成分，所以中药二次研发的难度非常之大，需要动用的人力物力都十分巨大，因此国家批准二次研发也很慎重，而获得批准而又二次研发成功的二次研发中药更是凤毛麟角，目前在脑血栓（包括脑血栓、脑栓塞，也叫缺血性脑中风或缺血性脑卒中）领域。 生命本质在于人体血液循环平衡，如果血液循环平衡被破坏了，那生命健康就会得到威胁，心脑血管疾病和“三高”都是因为人体的血液循环已经被破坏。所以治疗疾病的根本原因还是从日常饮食、运功上面注意，如果有条件的可以服用新洷康天然水蛭素，天然水蛭素是对付心脑血管病的“全能高手”，不仅能直接扩张血管，降低血液粘稠度，而且能加快血流速度，抗凝血、血栓、降低血小板聚集性，对人类心脑血管疾病尤其是血栓性疾病等有独特的功效。这种资源遵循的是平衡血液的循环，而非西药有破坏人体自身修复系统功能。 水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是“迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂”，被医学界认为是专克心血管病这个”第一杀手“的”第一高手“。对付冠心病、心肌梗塞、脑血栓、脑中风、高血压、高血粘、高血脂等，水蛭素

[原创]水蛭素提取工艺

[原创]水蛭素提取工艺 2014分离工程方向课程设计题目 水蛭素 水蛭素(hirudin)是水蛭(Leech)及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。 概述 水蛭素(hirudin)是水蛭(Leech)及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。 作用 动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，以及阻止凝血酶催化的凝血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象。此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。与肝素相比，它不仅用量少，不会引起出血，也不依赖于内源性辅助因子;而肝素则有引起出血的危险，在弥漫性血管内凝血的发病过程中抗凝血酶III往往减少，这将限制肝素的疗效，采用水蛭会有较好的效果。应用 水蛭素是一类很有前途的抗凝化瘀药物，它可用于治疗各种血栓疾病，尤其是静脉血栓和弥漫性血管凝血的治疗;也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成;改善体外血液循环和血液透析过程。在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭素可促进伤口愈合。研

究还表明，水蛭素在肿瘤治疗中也能发挥作用。它能阻止肿瘤细胞的转移，已证明有疗效的肿瘤如纤维肉瘤，骨肉瘤，血管肉瘤， 黑素瘤和白血病等。水蛭素还可配合化学治疗和放射治疗，由于促进肿瘤中的血流而增强疗效。 动物试验和临床研究表明，静脉或皮下注射水蛭素均无明显毒副作用，无论急性、亚急性的毒性试验，对血压、心率、血相、出血时间和血液化学成分均不受影响，呼吸系统也没有影响，无过敏反应，一般无特异抗体发现。半致死剂量 LD50>50mgAg，远大于治疗所用的剂量(1mgAg)。尤其值得指出的是，水蛭素可以口服，这给用药带来很大方便。水蛭素比较稳定，胰蛋白酶和糜蛋白酶并不破坏其活性，而且水蛭素的某些水解片段仍有抑制凝 血酶的作用，这就可以解释为何口服中药水蛭提取液仍然有疗效的原理。 近年来在我国以水蛭素为主要成分的中成药已有许多种，如抗血栓片、活血通胶囊等，其年产值达数千万元。含水蛭的新药也在不断研究和推出。利用基因工程生产重组水蛭类多肽药物，以取代水蛭素或作为抗凝化瘀药的添加成分，这在近期内就可实现。作为注射剂用于心血管系统疾病和肿瘤治疗药物，则还需要进一步的临床研究。毋庸置疑，重组水蛭素类多肽药物的开发将会带来巨大的社会效益和经济效益。重组 由于水蛭素具有重要开发价值，而水蛭的来源有限，故国内外医药界均着重研究通过基因工程获得重组水蛭素。1986年后，重组水蛭素已在大肠杆菌和酶母中分别表达成功，与天然水蛭素相比，重组水蛭素在第63位氨基酸(酪氨酸)上未硫酸酪化，活性略低，其余性质基本相同。在治疗的剂量下静脉注射无毒副反应。现国外一些大的生物技术公司对水蛭素己进入多方面的临床研究。有关水蛭素类多肽的专利，每年公布的数量至少在十多项以上，包括水蛭素类似的多肽，研究论文每

水蛭素治疗脑血栓

水蛭素治疗脑血栓 作者：南宁JBC 脑血栓发病的主要原因：一是脑血管内的粥样硬化斑块使得血管狭窄，表面粗糙不平，而硬化后的血管失去弹性，且长期处于高压状态下，易造成血管破裂出血，激活体内的血液凝固系统形成血栓。二是血流动力学改变，血压下降使血流速度缓慢，血液中的古体成分易于沉积在血管壁形成血栓。三是血液粘稠度改变：脂质过多、脱水、纤维蛋白原增多使血液粘稠，粘稠的血液已形成游离的栓子，随着血液循环进入脑部血管，造成堵塞。水蛭作为一种传统的中药在临床上应用那个上千年，具有破血、散瘀、通经的作用，而脑血栓顾名思义就是脑局部的血管栓塞、血凝而不流、血瘀于脑血管，用天然水蛭素刚好能抗凝、祛瘀、通络。最脑血栓的急性期及后遗症期均具有很好的效果。 水蛭素能与凝血酶的催化中心及纤维蛋白原结合中心发生不可逆转的结合，使凝血酶失活，因而能够有效的防治血栓的形成，促进伤口愈合，同时具有降血压、降血脂、扩张外周血管、加速血液循环的作用。目前水蛭素主要用于各种血栓疾病，如脑血栓、静脉血栓、弥散性血管内凝血及冠状动脉血栓等的预防和治疗，也用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管形成后再栓塞，及改善体外血液循环和血液透析过程。 综合来说，水蛭素为最明显的五个作用： 1、溶解血栓 2、消除血液垃圾 3、减低血液粘度 4、改善血液循环 5、促进新陈代谢 水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是“迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂”，被医学界认为是专克心血管病这个”第一杀手“的”第一高手“。对付冠心病、心肌梗塞、脑血栓、脑中风、高血压、高血粘、高血脂等，水蛭素具有独到的非凡疗效。

专家提醒： 生命本质在于人体血液循环平衡，如果血液循环平衡被破坏了，那生命健康就会得到威胁，心脑血管疾病和“三高”都是因为人体的血液循环已经被破坏。所以治疗疾病的根本原因还是从日常饮食、运功上面注意，如果有条件的可以服用新洷康天然水蛭素，天然水蛭素是对付心脑血管病的“全能高手”，不仅能直接扩张血管，降低血液粘稠度，而且能加快血流速度，抗凝血、溶血栓、降低血小板聚集性，对人类心脑血管疾病尤其是血栓性疾病等有独特的功效。这种资源遵循的是平衡血液的循环，而非西药有破坏人体自身修复系统功能。