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选修一微生物实验

选修一微生物实验（二）

果酒及果醋的制作

【实验原理】

酵母菌能以葡萄汁中的葡萄糖为原料，在无氧的条件下进行酒精发酵。

醋酸杆菌在有氧的情况下，可将酒精转变为醋酸。

【方法步骤】

【练习题】

1．是果酒和果醋醋作的实验流程和某同学设计的果酒和果醋的发酵装置。根据图示回答下列问题：

（1）完成图1中的实验流程。

（2）冲洗的主要目的是洗去浮尘_，冲洗应特别注意不反复冲洗，以防止菌种的流失。

（3）图2装置中的充气口在果酒发酵时关闭，在果醋发酵时连接充气

泵，并不断向内泵入无菌空气（氧）。

（4）排气口在果酒发酵时排出的气体是由酵母菌产生的二氧化碳，在

果醋发酵时排出的是剩余的空气，为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶

管与瓶身连接？防止空气中微生物的污染；出料口的作用是取样的。

（5）在用玻璃瓶发酵生产时，必须对玻璃瓶用70%的酒精溶液_进行

消毒，然后在玻璃瓶中加入葡萄汁，加入的葡萄汁不应超过玻璃体积的_2/3。

（6）若在果汁中混含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果

汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。并写出醋酸菌的代谢类型及其酒精产生

醋酸的反应式。不能。因为果酒发酵时缺氧能抑制醋酸菌的生长，

且醋酸菌发酵条件是氧气充足异养需氧型

C2H5OH+O 2CH3COOH +H20+能量

（7）如何检验果酒制作是否成功？

发酵后取样，通过嗅味和品尝进行初步鉴定。此外，还可用显微镜观察酵

母菌，并用重铬酸钾检验酒精的存在。

2．下面是家庭酿酒的具体操作过程：先将米煮熟，待冷却至30℃左右

时，加少许水和一定量的酒药与米饭混合后均匀置于一瓷坛内，在中间要

挖一个洞，加盖并简单密封后置于适当的地方保温（28℃左右）12小时既

成。请根据上述过程回答以下问题：

⑴在米饭中央挖一个洞的目的是增加氧气量，保证菌种的数量尽快升

到相应数值，此时酵母菌的繁殖方式主要是出芽生殖。

⑵有经验的主妇在家里酿米酒时,总会发现坛内先“来水”，后“来酒”。

先来水的原因是酵母菌先进行有氧呼吸，产生了水_；后“来酒”的原因是

后来由于氧气减少，酵母菌进行酒精发酵而产生酒精。

⑶请写出“来酒”过程的生化反应方程式⑶C6H12O

2C2H5OH+2CO2+能量

⑷酒药中含有曲霉、毛霉和酵母等多种微生物，酿米酒的反应分糖化

和酒化两个过程。糖化指的是曲霉和毛霉能把米饭中的淀粉转化为葡萄糖；

酒化则是指酵母菌在没有氧气地条件下，把葡萄糖分解成酒精。如果酒酿

制时间加长？味道如何变化？为什么？⑷甜度降低，酒味变浓，更多的葡

萄糖通过酵母菌的无氧呼吸转化为酒精。

⑸制作过程并未对用具专门进行灭菌，坛口也未严格密封，但一般情

况下，坛内的米饭不会被杂菌污染，试简要阐明原因：

①初始阶段由于接种了酵母菌，使酵母菌在与杂种的竞争中占据优

势。

②发酵过程中在与杂菌的竞争中，酵母菌产生的酒精可抑制杂菌的

生长繁殖下降，酵母菌等微生物的呼吸作用消耗有机物。

⑹根据推测，在此酿制过程中，坛内物质的重量会下降，酵母的呼吸

作用消耗有机物,原因是酵母的呼吸作用消耗有机物。⑺请你画出酵母

菌种群数量变化的曲线。

3．低度的果酒、果醋不但好喝，还具有一定的保健养生功能。下图是两

位同学制果酒和果醋时使用的装置。

同学甲用A（带盖的瓶子）装置制葡萄酒，在瓶中加入适量葡萄汁，

发酵温度控制在18~25℃，每隔12h左右将瓶盖拧松一次（注意不是打开瓶

盖），之后再将瓶盖拧紧。当发酵产生酒精后，再将瓶盖打开，盖上一层纱

布，温度控制在30~35℃，进行制果醋的发酵。

同学乙用B装置，温度控制与甲相同，不同的是制果酒阶段除充气口

用夹子夹紧外，排气的橡胶管也用夹子夹住，并且每隔12h左右松一松夹

子放出多余的气体。制果醋阶段适时向充气口充气。经过20天左右，两位

同学先后完成了自己的发酵制作。据此回答有关问题：

⑴酵母菌与醋酸杆菌在结构上的最大区别是后者无成形细胞核。从制

酒和制醋两阶段对装置的处理方式判断，酵母菌和醋酸杆菌的异化作用类

型依次是兼性厌氧型、需氧型。

⑵同学甲在制酒阶段，每隔12h左右就要将瓶盖拧松一次，但又不打

开，这样做的目的是放出CO2(制酒阶段的后期，酵母菌无氧呼吸会产生大

量气体，如不及时放出会把瓶子或瓶盖胀破)；不打开瓶盖，是防止氧气和

有害杂菌进入。

用反应式表示出A和B装置酿酒过程刚开始时发生的主要化学变化：

⑶B装置中排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的

原因是排出CO2，防止污染。

⑷制葡萄酒时要将温度控制在18~25℃，而制葡萄醋时要将温度控制在30~35℃，原因是酵母菌和醋酸菌发酵的最适温度不同（18~25℃是酵母菌生长和发酵的合适温度，30~35℃是醋酸菌的生长和发酵的合适温度）；碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。葡萄汁为酵母菌、醋酸杆菌等微生物的生长提供的营养成分是碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。

⑸制作过程一般不需额外添加酵母菌和醋酸杆菌即可完成。为了提高果酒品质也可在果汁中加入人工培养的酵母菌。利用选择培养基可分离获得较为纯净的酵母菌菌种。

腐乳的制作

实验原理

1．参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种，其中起主要作用的是毛霉。

2．毛霉是一种丝状真菌，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具有发达的白色菌丝。

3．毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。

实验步骤

1、制腐乳胚

（1）将豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干块。所用豆腐的含水量为70％左右，水分过多则腐乳不易成形。

2、让豆腐块长出毛霉

（1）将豆腐块平放在铺有干粽叶的盘内，粽叶可以提供菌种，并能起到保温的作用。每块豆腐等距离排放，周围留有一定的空隙。豆腐上面再铺上干净的粽叶。气候干燥时，将平盘用保鲜膜包裹，但不要封严，以免湿度太高，不利于毛霉的生长。

（2）将平盘放入温度保持在15～18℃的地方。毛霉逐渐生长，大约5d后豆腐表面丛生着直立菌丝。

（3）当毛霉生长旺盛，并呈淡黄色时，去除包裹平盘的保鲜膜以及铺在上面的粽叶，使豆腐块的热量和水分能够迅速散失，同时散去霉味。这一过程一般持续36h以上。

3、腌制

（1）当豆腐凉透后，将豆腐间连接在一起的菌丝拉断，并整齐排列在容器内，准备腌制。（2）长满毛霉的豆腐块（以下称毛坯）与盐的质量分数比为5∶1。将培养毛坯时靠近平盘没长直立菌丝的一面统一朝向玻璃瓶边，将毛坯分层盘立摆放在容器中。分层加盐，并随层加高而增加盐量，在瓶口表面铺盐厚些，以防止杂菌从瓶口进入。约腌制8d。〔注〕用盐腌制时，注意盐都用量。盐的浓度过低，不足以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高，会影响腐乳的口味。

4、加卤汤调味

1）将黄酒、米酒和糖，按口味不同而配以各种香辛料（如胡椒、花椒、

八角茴香、桂皮、姜、辣椒等）混合制成卤汤。卤汤酒精含量控制在12％

左右为宜。〔注〕酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系。

酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含

量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，

难以成块。

2）将广口玻璃瓶刷干净后，用高压锅在100℃蒸汽灭菌30min。将腐乳

咸坯摆入瓶中，加入卤汤和辅料后，将瓶口用酒精灯加热灭菌，用胶条密

封。在常温情况下，一般六个月可以成熟。

注意事项

1．酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。前期

发酵所发生的主要变化是毛霉在豆腐（白坯）上的生长。发酵的温度为15～

18℃，此温度不适于细菌、酵母菌和曲霉的生长，而适于毛霉慢慢生长。毛

霉生长大约5d后使白坯变成毛坯。前期发酵的作用，一是使豆腐表面有一

层菌膜包住，形成腐乳的“体”；二是毛霉分泌以蛋白酶为主的各种酶，

有利于豆腐所含有的蛋白质水解为各种氨基酸。后期发酵主要是酶与微生

物协同参与生化反应的过程。通过腌制并配入各种辅料（红曲、面曲、酒

酿），使蛋白酶作用缓慢，促进其他生化反应，生成腐乳的香气。

2．毛霉是一种低等丝状真菌，有多个细胞核，进行无性繁殖。毛霉是

食品加工业中的重要微生物，它可以产生能够分解大豆蛋白的蛋白酶，常

用于制作腐乳和豆豉。

【练习题】

1．绍兴腐乳独具特色，它采用优质黄豆作为原料，经严格筛选，再经

浸泡、冲洗、磨煮、滤渣、点浆、压坯、划坯成型。再将白坯放入竹笼后

喷洒万分之二的毛霉菌种，在20℃左右的气温下，经5天左右的前期发酵，

即可腌渍，加盐量为毛坯的30%，一层毛坯加盐一层，在室温20℃左右的

情况下，经10天腌渍即成腌坯。正常腌坯色泽黄亮、坚硬，四角方整，由

毛霉形成一层表皮，即可装入坛中，进行后期发酵。入坛时加入佐料即黄

酒、红曲浆，酱籽及花椒等，用荷叶封口后堆叠，在25～30℃环境下，经5～

6个月即可成熟。请结合以上材料，回答下列问题：

（1）请总结出做腐乳的制作流程图：

（2）腐乳制作的原理主要利用了微生物产生的蛋白酶等酶类，通过发

酵，豆腐中营养物质的种类

增加，且更易于消化和吸收。

（3）制作腐乳时含水量为70％左右的豆腐较适宜；用盐腌制时，注意

控制盐的用量是因为盐的浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致

豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味。

（4）若你完成了腐乳制作，则可以从色泽、口味、块形等方面评价乳

腐的质量。【练习题解析】

1．（1）

2．根据王致和发明腐乳的传说，并请回答下列问题：

(1) 王致和发现没卖出的豆腐长出了白毛，豆腐长白毛其实是毛霉的白

色菌丝。

(2) 在腐乳制作的过程中，起主要作用的是微生物毛霉，毛霉是一种丝

状的真菌，属于真核细胞生物，乳酸菌与其结构相比，主要的区别是乳酸

菌无成形的细胞核。

(3) 腐乳与豆腐相比，优点之一是易于吸收，原因是毛霉等微生物产生

的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成肽和氨基酸，产生的脂肪酶将脂肪分

解成甘油和脂肪酸等小分子有机物。

泡菜的腌制及亚硝酸盐的测定

【实验原理】

腌制泡菜的原理：在无氧的条件下，天然微生物乳酸菌、假丝酵母等

利用蔬菜中的糖或其他营养物质进行发酵，产物有乳酸、醇类等物质，不

仅使泡菜酸脆可口，也抑制了杂菌的生长。

在腌制泡菜的发酵过程中，也会产生一定量的亚硝酸盐。（亚硝酸盐在

食品生产中常用做食品添加剂，起到增色和防腐作用。膳食中的亚硝酸盐

一般不会危害人体健康，但人体摄入总量达0.3~0.5g时，会引起中毒，总量达3g时，会引起死亡。我国卫生标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不超过30mg/kg，酱腌菜中不超过20mg/kg，而婴儿奶粉中不得超过2 mg/kg。）所测试材料沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，其亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N－1－萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电或分光光度计比色法定量测定或目测比色法。【试剂】

提取试剂：氯化铵缓冲溶液（pH 9.7）；硫酸锌溶液（0.4mol/L）；NaOH 溶液（2mol/L）显色剂：对氨基苯磺酸溶液和N－1－萘基乙二胺溶液等体积混合液亚硝酸钠标准溶液测定液：（浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.5μg/mL)【实验步骤】

【详细步骤】

一、泡菜的腌制

1．配制盐水：按清水和盐4：1比例配制盐水，煮沸后冷却备用。

2．蔬菜洗净，切成适当大小块。

3．将蔬菜、糖及调味品放入洗净的泡菜坛中至8成满，注入盐水，浸没蔬菜、如果希望发酵快些，可将蔬菜在开水中浸一分钟入坛，再加点白酒。

4．将坛口用水封好，防止外界空气进入。

5．一周后，可开坛食用，也可随时加入蔬菜，不断取用。如果腌制时加入一些已经腌制过的泡菜汁，可减少腌制时间。

二、亚硝酸盐的测定

本实验分组进行，研究新鲜蔬菜及腌制不同时间的泡菜亚硝酸盐含量．㈠样品处理

1．称量25g泡菜及少量泡菜汤，用榨汁机榨汁，用四层纱布和漏斗过滤至500ml烧杯中，用100ml水洗涤研钵两次，洗涤液均过滤至烧杯中。

2．用NaOH溶液将滤液调制pH8.0后，加入25mL硫酸锌溶液，混匀，

如不产生白色沉淀，再加入NaOH至产生白色沉淀为止。

3．在60℃热水浴中，将样品提取液加热10分钟后，令其冷却至室温，

至于500ml容量瓶中，定容。滤纸过滤出50ml溶液作为待测样品。

㈡配制标准溶液，样品亚硝酸盐含量测定

1．绘制标准曲线

1）分别取0、0.5、1.0、3.0、5.0mL（分别为0、0.1、0.2、0.3、0.5μg/ml)

亚硝酸钠标准溶液+4.5mL氯化铵缓冲液+ 2.5 mL 60%乙酸+ 5mL显色液

→25mL容量瓶，加水定容混匀，暗处静置25min。

2．样品亚硝酸盐含量测定

1）分别取10mL待测样品+ 4.5mL氯化铵缓冲液+ 2.5 mL60%乙酸+

5mL显色液→25mL容量瓶，加水定容混匀，暗处静置25min。与上述标

准溶液进行颜色的比对

2）用光程为1cm的比色杯在550nm处测光密度值。以10mL水为空

白对照。以亚硝酸钠质量为横坐标，以

光密度（OD）值为纵坐标，用已知浓度亚硝酸钠标准液绘制标准

曲线的同时，在标准曲线上，根据

待测样品的OD值得出其亚硝酸盐含量m2。

【练习题】

1．根据教材中泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请

回答：（1）制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是亚硝酸盐的含

量低

（2）制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为4：1 加热煮沸是为了

杀灭杂菌，冷却是为了保证乳酸菌的生命活动不受影响盐有抑菌、渗出蔬

菜中过多的水以及调味的作用

（3）泡菜风味形成的关键在于调味料的加入。

（4）泡菜的制作方法不当，很容易造成泡菜变质，甚至发霉变味，试

分析可能的原因：泡菜坛子密封不严或取食工具不卫生，或盐的比例太小

都会引起杂菌滋生、泡菜变质

（5）发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是亚硝酸盐对人体

有害，发酵不同时期亚硝酸盐的含量会发生变化，及时检测是为了把握取

食的最佳时机

（6）测定亚硝酸盐含量的方法是目测比色法或分光光度计测定法

2．关于测定亚硝酸盐含量的原理的正确叙述是C

A．重氮化酸化显色比色

B．重氮化酸化比色显色

C．酸化重氮化显色比色

D．酸化重氮化比色显色

3．泡菜是人们日常生活中比较喜欢的一种食品，但是泡菜中却含有亚

硝酸盐。当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.3g - 0.5g时，会引起中毒，达到

3g时，会引起死亡。我国卫生标准规定，亚硝酸的残留在酱菜中不得超过

20mg/kg。膳食中的绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿液排

出，只有在特定的条件下，才会转变成致癌物质-亚硝胺。针对泡菜在发酵

过程中会产生亚硝酸盐的事实，某中学生物小组设计实验，探究不同食盐

浓度和发酵时间对亚硝酸盐含量变化的影响。

（1）请补充实验设计的空缺内容：

①制作泡菜的原理：利用乳酸菌在无氧的环境下大量繁殖并发酵产生乳酸

而制作泡菜②测量指标及方法：亚硝酸盐与某些化学物质发生反应后形成

玫瑰红色。先使泡菜样品及一系列已知浓度的亚硝酸盐溶液分别与化学物

质发生显色反应，然后通过对比颜色，可以估测出泡菜液样品亚硝酸盐

的含量。③确定浓度梯度：经过查找资料和初步实验，发现当食盐浓度

为3%以下时，制作的泡菜溶液发生腐败，而当食盐浓度在8%以上时，制

作的泡菜又容易成为咸腌菜。因此，分别设计了3%、5%、7%的食盐浓

度梯度来制作泡菜。

④选择实验材料：红萝卜和白萝卜，哪种更适合于用做实验材料

白萝卜，理由是避免植物中色素对显色反应的干扰。

⑤制作泡菜：将实验材料分成3组制作泡菜，除了实验材料的重

量相同外，还要保证每组泡菜的制作（或培养、发酵）条件相同。

⑥从第三天开始，定期测定泡菜中的亚硝酸盐含量。

（2）下图是该生物活动小组记录的三种食盐浓度的泡菜中的亚硝酸盐

含量mg与发酵天数的关系图。根据此图实验结果，请你给出制作泡菜的最

佳指导意见。

用5%的食盐浓度制作泡菜比较适合食用，但要在发酵时间达

10天以后食用才比较适宜

微生物培养与应用基础知识

2．1．1培养基配制原理：微生物的生长繁殖时需要各种营养物质，一般包括水、无机盐、碳源和氮源，有的还需要少量特殊营养物质（生长因子）根据微生物的种类和实验目的不同，选择不同的原料配制不同培养基。本课题使用牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基，也称普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl ，其中牛肉膏为细菌提供碳源和能源，磷酸盐；蛋白胨主要提供氮源；而NaCl 提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入琼脂作凝固剂。在培养细菌时要用稀酸或稀碱将pH 调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖

2．1．2 无菌操作原理：针对不同对象采用不同的消毒和灭菌的方法，在高温、高压、化学药剂、强酸和强碱作用下，使微

2．1．3 纯化大肠杆菌的原理：为了获得某种微生物的纯培养，选用平板划线法或稀释涂布平板法，在牛肉膏蛋白胨培养基上操作，经培养后可分离得到有单个细胞繁殖而来的子细胞群，即菌落。实验流程

配制合适的培养基

配制牛肉膏蛋白胨培养基操作时注意：（1）溶化琼脂时要控制火力的大小并不断搅拌，以免培养基溢出或糊底引起烧杯破裂；（2）加热过程中部分水分蒸发，待琼脂完全溶化后应补加蒸馏水，以保持溶液的浓度；（3）培养基各种成分溶化后灭菌前要根据培养微生物需要调节pH （4）一般是培养基先灭菌再倒平板，倒平板操作必须在酒精灯火焰旁进行，并且不要将皿盖完全打开；（5）冷却后的平板要倒置，以确保拿放方便，同时避免水分蒸发，以利微生物生长。

接种操作

微生物接种方法有两种，一是平板划线接种，即用接种环划线将菌体沾在斜面培养基或平板培养基上。微生物的生长和繁殖迅速，一段时间后，就会在培养基表面形成长满菌落的细线。划线法的作用是纯化微生物，通过划线将微生物单个地分离，并最终形成标准的菌落。划线操作时注意：（1）用接种环取菌种之前、每次划线之前和划线结束都要进行灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再操作；（2）划线时不要划破培养基，如果采用分段划线法操作从第二次操作应总在上一次划线末端开始，首尾区不能相连；（3）操作必须始终在酒精灯火焰旁进行。

二是稀释涂布平板接种，即先将菌液进行一系列梯度稀释，用涂布器将不同稀释度的菌液均匀地涂布在平板上进行培养。在

稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，通过统计菌落数可以计算样品中的菌体数目，。涂布操作时注意：（1）配制系列梯度稀释液必须用无菌水配制；（2）配制系列梯度稀释液和转移菌液以及涂布过程等必须都在酒精灯火焰旁进行。

培养操作

将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h 。（未接种的用来检测培养基灭菌是否彻底。）

微生物学实验报告

2012级制药专业工业微生物学实验报告姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健日期：2014.6.11

一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。

微生物学实验知识点总结与实践应用

微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。（1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。（2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。（3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或

环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。（4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。（5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下：微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于

微生物学实验指导

实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、大小的测定和计数一、实验目的１、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法二、实验器材１、显微镜２、微生物标本装片３、目、物镜测微尺４、血球计数板５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。２、操作在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。四、微生物大小的测量原理和方法微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --

-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。结果计算：长μm=平均格数×校正值宽μｍ＝平均格数×校正值大小表示: 宽μm ×长μｍ五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区图1-1 目镜测微尺图1-2 物镜测微尺图1-3 目、物镜测微尺的校正图1-4 血球计数板

人教版高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳

专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

微生物大小与数量的测定实验报告

山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。二、基本原理一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操

高中生物选修一微生物的实验室培养教案(2)

普通高中课程标准实验教科书——生物选修1[ 人教版] 课题 1 微生物的实验室培养 ★课题目标（一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 ★课题重点无菌技术的操作 ★课题难点无菌技术的操作 ★教学方法启发式教学 ★教学工具多媒体课件 ★教学过程（一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。（二）进行新课 1.基础知识 1.1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂

【补充】培养基的类型及其应用： 1.2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、0、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97%以上。【补充】碳源：如C02、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1.3培养基除满足微生物生长的_p^、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素,培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。活动2:阅读"无菌技术”，讨论回答下列问题： 1.4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵—。 1.5无菌技术包括： (1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;

微生物生理生化反应实验报告

山东大学实验报告2012年 12 月 4日姓名系年级 2011级生科2班组别四科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。（1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测

微生物学实验报告--第八周

年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验【K-B法】菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃24h判读结果。结果如图所示：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。【试管稀释法】菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素

2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃16—18h 3.判读MIC 试验操作如下图所示：注意:设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图：实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教）金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断：金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：

①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用 ③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用【实验讨论】 1．K-B法原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2. K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理：以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。

微生物学实验

微生物学实验实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC 以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。六、思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么? 实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。三、试剂与器材 1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。 2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基四、实验内容

选修一微生物的培养高考练习题综合

选修一大题 1、（山东卷，理综，34）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。 ⑴分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的、大小及形状不同，在电场中的不同而实现分离。 ⑵可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供和。 ⑶分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的，确定该蛋白质的抗菌效果。 ⑷细菌培养常用的接种方法有和。实验结束后，对使用过的培养基应进行处理。 2、（上海卷，理综，39））氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1。（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的____________。（2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是____________。（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于____________培养基和____________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是____________。（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为 ____________。（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在____________培养条件下最早停止生长，其原因是____________。 3、有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和作用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功的筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题。 (1)培养基中加入的化合物A是____________，为微生物的生长提供_____________，这种培养基属于____________培养基。 (2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入_____________________。 (3)在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度。为获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是_________________，操作时采用________灭菌的方法；还可用________的方法接种。 (4)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是______________ 4、下面是果酒和果醋制作的实验流程和某同学设计的果酒和果醋的发酵装置。根据图示回答下列问题：（1）完成图1中的实验流程。（2）冲洗的主要目的是，冲洗应特别注意不能，以防止菌种的流失。（3）图2装置中的冲气口在过程中要关闭，某同学在实验时为了密闭装置特意将瓶塞使劲塞紧，并将充气口和排气口用夹子夹紧，以便于发酵，但第二天去观察时发现瓶塞松了，他不明白其中的原因，请帮助解释说明其原因。（4）排气口在果酒发酵时排出的气体来源是。（5）若在果汁中含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。。 5、下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：（1）制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是。（2）制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为，盐水需煮沸并冷却后才可使用，原因是。试说明盐水在泡菜制作中的作用：。（3）泡菜风味形成的关键在于的加入。（4）泡菜的制作方法不当，很容易造成泡菜变质，甚至发霉变味，试分析可能的原因：。（5）发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是。 6、（10分）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。 (1)实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉出料口充气口排气口选挑葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒果醋图1 果酒、果醋制作流程图2

【实验报告】微生物学实验报告格式

微生物学实验报告格式专业学号姓名实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌一、实验目的二、实验原理三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量）四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭）五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点）六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？实验二自生固氮菌的分离纯化（这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。）一、实验目的

二、实验原理三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出）四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤）五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点）六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？实验三平板培养测数法一、实验目的二、实验原理三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出）四、实验步骤（详叙相关步骤）五、实验结果六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点）七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？

2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。实验四简单染色一、实验目的二、实验原理三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿）四、实验步骤五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态）六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？实验五革兰氏染色一、实验目的二、实验原理三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿）四、实验步骤五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？）六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？

食品微生物学实验技术思考题答案

食品微生物学实验技术思考题答案 1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比. 2. 列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。 3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？答：物镜的NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 5. 根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。 6. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节 7. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌 8. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对

生物选修一微生物培养

1．(2014·全国课标Ⅰ，39)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题。 (1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将________分解成________。 (2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR 可与纤维素形成________色复合物。用含有CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。 (3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是________________。 2.(2014·课标Ⅱ，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_________________；然后，将1 mL 水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL 稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________________。 (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是__________。 (3)示意图A 和B 中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。题组二其他各省市高考选萃 3．(2014·天津理综，5)MRSA 菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H 与青霉素组合使用对MRSA 菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如下表。下列说法正确的是 ( ) A.B ．第2组和第3组对比表明，使用低浓度的青霉素即可杀死MRSA 菌 C ．实验还需设计用2μg/mL 青霉素做处理的对照组 D ．蛋白质H 有很强的杀菌作用，是一种新型抗生素 4．(2013·四川卷，10)由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。 (1)图甲中，过程①需要的酶有________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以________作为唯一碳源。②、③过程需重复几次，目的是___________。 (2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是________；推测该同学接种时可能的操作失误是________。 (3)以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是___________________。 (4)用凝胶色谱法分离α-淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________。考点一微生物的实验室培养 2．为了从泡菜汁中筛选分离出发酵产酸速度快、亚硝酸盐降解能力强的乳酸菌，科研人员做了如下实验。请回答问题： (1)在无菌操作下，使用无菌水对泡菜汁进行________，将不同稀释度的泡菜汁涂布于添加了CaCO3的乳酸菌培养基(MRS 培养基)平板上。在适宜条件下培养后，挑取有________的菌落，继续在MRS 平板上用________法分离，得到单菌落。 (2)取分离到的乳酸菌分别接种到MRS 液体培养基中，间隔取样测定pH ，目的是筛选出________的乳酸菌。 (3)取上一步筛选出的乳酸菌接种到含有NaNO2的MRS 培养基中，培养一段时间后，用________法测定NaNO2的含量，筛选出________的菌株。 1．(2014·苏、锡、常、镇调研，32)微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。下图甲、乙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问

微生物学实验

实验一实验室和人体表面微生物的检查一实验目的 1 证明实验室环境与体表存在微生物 2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型 3 体会无菌操作的重要性二实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。三、器材 1、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂平板 2、仪器或其他用具无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。四、操作步骤 1、写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。 2、实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉膏蛋白胨琼脂平板放在洁净工作台内或无人走动的实验室中，移去皿盖，1h后盖上两个皿盖。（2）实验台 ①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。 ②取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。放回棉塞，并将空试管放在试管架上。 ③弄湿棉签左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞，并将灭菌水试管放在试管架上。 ④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围。 ⑤接种在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下），立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拔出棉塞，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。

选修一微生物实验

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