培 养 基 配 制
培养基配制
1)血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。
2)巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。
3)庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基）
哥伦比亚琼脂250mL
绵羊血12.5mL
庆大霉素0.5mL
附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL
1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg
4)杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基）
哥伦比亚琼脂250mL
兔血（马血）12.5mL
杆菌肽lmL
附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L)
5)万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基）
哥伦比亚琼脂 250mL
兔血（马血） 12.5mL
万古霉素 1.0mL (5mg/250mL)
附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支）
①一瓶400mg去甲万古霉素加0.85％NaCl 10mL=50mg/mL
②1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85％NaCl 9mL=5mg/mL
6)高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基）
蛋白胨10g 牛肉浸膏1g
氯化钠7g 琼脂15g
水 1000mL 甘露醇10g
0.2%酚红25mL
煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。
7)吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用）
1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL
2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL
肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。
灭菌方法：
第一天：800C1小时
第二天：850C1小时，于370C过夜
第三天：900C1小时，于370C过夜
8)亚碲酸钾琼脂：（分离白喉棒状杆菌用）
1 pH7.6肉汤琼脂100mL
2 10%葡萄糖肉液2mL
3 1%亚碲酸钾溶液 4.5mL
4 0.5%胱氨酸水溶液1mL
5 脱纤维绵羊血 5～10mL
先将肉浸汤琼脂溶化后，待冷至500C左右，无菌加入已灭菌的葡萄糖，亚碲酸钾和胱氨酸溶液、血液混匀后倾注平板。
9)气管分泌物标本运送培养基（Transportation medium）
TSB大豆培养基 3g 葡萄糖 0.5g
脱脂奶粉 2g 甘油 10mL
蒸馏水 100mL
先将1、2项加入温水中煮溶后，再加脱脂奶粉，摇匀，再煮沸，最后滴加甘油，每管1.0-1.5mL分装进塑料小管。
10)大便转送培养基
①甘油盐水保存液：
无水磷酸氢二钾 3.1g 无水磷酸二氢钾 1g
氯化钠 4.2g 甘油 300mL
0.1%酚红溶液 10mL 蒸馏水 700mL
先将盐类溶于蒸馏水中，加入甘油，充分混匀。调pH7.2，再加入酚红。每管4mL 分装于大试管中， 1210C15分钟灭菌后备用。
②磷酸盐缓冲盐水（PBS）（小肠结炎耶尔森氏菌标本冷增菌）
Na
2HPO
4
8.23g Na
2
HPO
4
·H
2
O 20g
氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL
将上述成分溶于蒸馏水中，调pH7.6，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。
③改良磷酸盐缓冲盐水（SB）
在1000mLPBS中加入山梨醇10g，胆盐1.5g，溶解后，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。
④霍乱弧菌增菌转送培养基
采用杭州天和生物制品有限公司碱性蛋白胨水运送培养基。按产品说明书溶解后，调节pH8.6，分装每支8～10ML。加入适量甲酚红着色，便于与大便肛管识别。
⑤空肠弯肠菌转送培养基
采用杭州天和生物制品有限公司Cary-Blair运送培养基（C-B培养基）。按产品说明配制，分装5mL/支，高温高压灭菌后备用。
⑥增菌肉汤肛管
采用杭州天和生物制品有限公司增菌肉汤，按产品说明书配制分装成3Ml/支，用棉花肛管做塞，高温高压灭菌后备用。
11)庖肉培养基：
牛肉 500g 葡萄糖 2g
蛋白胨 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 2000mL
混匀后煮沸30分钟，冷却用18×180mm试管分装，加牛肉至6cm，加肉汤至8cm，再加入融化的白凡士林至10cm，121℃15min灭菌，冷却置冰箱备用。
12)中药微量培养基（金钱草培养基）：
取10%金钱草煮沸1小时后，过滤取滤液配成1%琼脂，用时每2mL加入2滴吐温80。
13)苯丙氨酸脱氨酶试验培养基：
DL-苯丙氨酸 0.2g 酵母浸膏 0.3g
Na
2HPO
4
0.1g(或Na
2
HPO
4
?12H
2
O 0.33g) 氯化钠 0.5g
琼脂 1.2g 蒸馏水 100mL
加热融化后，校正PH7.4分装每管1.8-2mL，121℃15min灭菌，倾成斜面。
14)MIU（动力－靛基质－尿素）试验培养基：
胰胨 1g（或蛋白胨2g）葡萄糖 0.2g
KH
2PO
4
0.2g NaCl 0.5g
琼脂 0.4g 蒸馏水 100mL
调PH至6.8，121℃15min灭菌，加入0.2％甲酚红0.6mL，再加入20％无菌尿素（用滤器除菌）10mL，分装，2～2.5mL/支。
20％尿素制备：2g尿素，加入少许蒸馏水溶解，隔水煮沸10～15min。
15)葡萄糖酸盐利用试验试剂（班氏试剂）
①CuSO
4.5H
2
O 2.5g（先用少量蒸馏水溶解）
②枸橼酸钠 10.6g
③无水Na
2CO
3
6.3g
②+③用少量蒸馏水溶解，再加入①，最后定容至250mL。
16)靛基质试验
试剂：对二甲氨基苯甲醛 2.5g；戊醇或丁醇 3.75mL。徐徐加入浓盐酸12.5mL。方法：被检菌接种于胰蛋白胨水，35℃孵育16～18小时，滴加试剂于培养物上，红色为阳性，黄色为阴性。
17)葡萄糖酸盐培养基
蛋白胨 1.5g 酵母浸膏 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖酸钾 40g（或葡萄糖酸钠37.25g）蒸馏水 1000mL
上述成分溶解、过滤，校正pH6.5，分装2.0mL/支，高压灭菌115℃15min冷却，取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。
18)枸橼酸盐培养基
采用英国OXOID公司成品琼脂粉，按说明配制，分装1.8mL/支，高温高压灭菌后倾成斜面，取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。
19)KIA培养基：
采用英国OXOID公司成品琼脂粉，按说明配制，分装成4.5 mL/支、高温高压灭菌后倾成斜面。取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。
20）老玉米吐温-80培养基
采用杭州天和生物制品有限公司老玉米粉琼脂培养基，按产品说明书配制分装成5mL/支，高温高压灭菌后备用。用时取一支培养基煮溶后用滴管加入3滴吐温-80混匀，用前以白色念珠菌作对照。
配制培养基添加成份
1)嗜血杆菌药敏琼脂（HTM）培养基添加成份：SR0158E,每支用灭菌蒸馏水
或生理盐水2mL溶解后，1支可加入500mL琼脂中。（可1mL添加剂/300mL 琼脂）。
2)空肠弯曲菌（CCDA）培养基添加成份：SR155E，每支用灭菌蒸馏水2mL
溶解后，1支可加入500mL琼脂中。（可1mL添加剂/300mL琼脂）。
3)沙保罗氏（SDA）培养基添加成份：300mL琼脂加1.5mL1％TTC（氯化三
苯四氮唑），再加1mL氯霉素（储存在无菌室内柜台里）。
4)碱性琼脂（CV）培养基添加成份：300mL琼脂加0.3mL1％亚碲酸钾（最
终浓度10μg/mL）。
5)巧克力琼脂培养基（用绵羊血制备时）添加成份：SR0090A，1支SR0090B
与SR0090C混匀后可作为500mL琼脂的添加剂。
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植物组培培养基的成分
植物组培培养基的成分 培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。 大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。 人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。 怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地
用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。 植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分 水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。
基孔制、基轴制公差带、配合、基本偏差数值表
内容摘要:国家标准《公差与配合》规定了公差带由标准公差和基本偏差两个要素组成。标准公差确定公差带的大小，而基本偏差确定公差带的位置，见下图。1）标准公差（IT）标准公差的数值由基本尺寸和公差等级来决定。其中公差 国家标准《公差与配合》规定了公差带由标准公差和基本偏差两个要素组成。 标准公差确定公差带的大小， 而基本偏差确定公差带的位置，见下图。 1）标准公差（IT） 标准公差的数值由基本尺寸和公差等级来决定。其中公差等级是确定尺寸精确程度的等级。标准公 差分为20级，即IT01，IT0，IT1，…，ITI8。其尺寸精确程度从IT01到ITI8依次降低。标准公差的具体数值可查表得到。 2）基本偏差 基本偏差一般是指上下两个偏差中靠近零线的那个偏差。即当公差带位于零线上方时，基本偏差为下偏差；当公差带位于零线下方时，基本偏差为上偏差，见上图。 国家标准对孔和轴均规定了28个不同的基本偏差。基本偏差代号用拉丁字母表示，大写字母表示孔，小写字母表示轴。下图是孔和轴的28个基本偏差系列图。
从基本偏差系列图可知，轴的基本偏差从a到h为上偏差（es），且是负值，其绝对值依次减小；从j到2c为下偏差（ei），且是正值，其绝对值依次增大。 孔的基本偏差从A到H为下偏差（E1），且是正值，其绝对值依次减小，从J到ZC为上偏差（Es），且是负值，其绝对值依次增大；其中H和h的基本偏差为零。JS和js对称于零线，没有基本偏差，其上，下偏差分别为+IT/2和-IT/2。 基本偏差系列图只表示了公差带的各种位置，所以只画出属于基本偏差的一端，另一端 则是开口的，即公差带的另一端取决于标准公差（IT）的大小。 7-6 极限与配合
植物组织培养的培养条件
植物组织培养的培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。 一、温度(temperature) 因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23～27℃之间进行，一般采用 25±2℃。低于15℃时培养，植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。白鹤非的最适温度是20℃、月季是25～27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28℃为最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。 不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在2～5℃条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～5d，可得到无病毒苗。 二、光照(light) 组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面： 1、光照强度(light intensity) 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。 2、光质(light wave) 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 3、光周期(light period) 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
植物组织培养的培养基
植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。其实并非如此。之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因： （1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。 （2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。 （3）诱导作用。在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。 通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节 当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了 植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。所以用蔗糖更简单 动物细胞只能吸收葡萄糖，二糖蔗糖是无法吸收的。 以蔗糖为植物培养基碳源有两个原因: 1.抑制杂菌生长.细菌等不能直接以蔗糖为碳源,故可起抑制其生长的作用 2.蔗糖被植物细胞利用机理目还无定论.主要有以下两个学说(1)植物细胞先以次级主动运输的方式在细胞内外形成质子梯度,然后蔗糖就会利用这个梯度被吸收进细胞. (2).植物的细胞壁中含有能分解蔗糖的相关酶,蔗糖先在细胞膜外被分解为单糖,然后这些单糖再以主动运输的方式进入细胞,从而被细胞利用.
实验一 植物组织培养基母液配制的若干关键环节
实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求： 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。 以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制 成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍 数 称取量/ mg 母液定溶 体积/ml 配1LMS培 养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制 培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。 一、组成培养基的五类成分 目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。 1.无机营养物 无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源 培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。 3.维生素 在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。 4.有机附加物 包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。 5.生长调节物质 常用的生长调节物质大致包括以下三类： (1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。 (2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
组培培养基本操作步骤
实验一、贮备液的配制和保存 实验目的 通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。 原理 配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选取培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS 培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。 实验仪器设备和试剂 冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉 NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2?EDTA?2H2O，KI, FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水 实验方法 ⑴MS大量元素母液的配制 配制时先用量筒量取蒸馏水大约800ml，放入1000ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将
溶液倒入1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑵MS微量元素母液的配制 按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4 ?4H2O，ZnSO4?7H2O ，H2BO3 ，KI ，NaMoO4?2H2O，CuSO4?5H2O，CoCl2?6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑶MS铁盐母液配制 把FeSO4?7H2O和Na2?EDTA?2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解，然后将2种溶液混合，把pH值调到5.5，加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1－2min，在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑷MS有机化合物母液的配制 按配方表中用量依次称取：维生素B1，烟酸，甘氨酸，维生素B6，用蒸馏水依次溶解并定容后，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 ⑸植物生长物质母液的配制 2，4-D母液：准确称量后先用少量（1-3ml）95%乙醇完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 MS培养基母液配方
M519 植物组织培养基
MS培养基 MS培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。 MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的**盐、钾和铵的含量高，这是它的明显特点。 Phytotech是美国著名的植物培养基供应商，公司集研发、生产、销售为一体，产品主要覆盖植物组织培养、植物生物技术与植物科学等领域。特色产品有优质基础培养基、植物凝胶、琼脂粉、植物生长调节因子、抗生素等，其生产的植物培养基如MS培养基、N6及B5植物培养基具有极高的性价比。 M519这款产品可以配置50升培养基. 品牌phytotech 产地美国 每升培养基需要4.43克M519再加7—10克糖溶于一升水即可. 目标客户:农科院,清华大学人环楼做植物的,遗传所,北林等 MS是人名Murashige and Skoog的缩写。 MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。 MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
植物组织培养技术所有名词解释
植物组织培养复习材料 一、名词解释。 1、植物组织培养(plant tissue culture)：植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养，并在人工控制的环境条件下，使其发育成完整植株的科学技术 2、脱分化（dedifferentiation）：指失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂，形成无分化的细胞即愈伤组织的现象。 3、再分化（redifferentiation）：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。 4、外植体(explant)：植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。（如器官、组织、细胞、原生质体、种子等） 5、愈伤组织(callus)：原本指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。在组培中，则指人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。 6、器官发生：胚胎时期由胚层器官原基发育成器官的过程。包括细胞分化和器官形成。 7、胚状体发生：在植物细胞、组织或器官体外培养过程中，由一个或一些体细胞经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。可进一步发育成植株。 8、细胞全能性（cell totipotency）：指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 9、细胞分化：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。 10、极性：细胞（也可指器官或植株）内的一端与另一端在形态结构和生理生化上的差异。 11、试管苗：通过组织培养产生的植株。 12、看护培养：是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。这块愈伤组织被称为看护组织。 13、固相化培养：将细胞或原生质体固着在琼脂糖、藻（月元）酸盐或多聚赖氨酸中，然后将他们放入液体培养基中震荡培养。这种培养方法既利用了振荡培养室营养物质和气体易于交换的优点，有利用了固相化使细胞免受振荡时剪切力的作用。 14、悬浮细胞培养：将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增值的技术。适用于大规模的培养，使细胞工程的基本平台。 15、植板效率=（每个平板中新形成的细胞团数/每个平板中接种的细胞数）*100 16、实验室的组成及功能：1.基本实验室（1）准备室（2）接种室（3）培养室 2.辅助实验室（1）细胞学实验室（2）摄影室及暗室（3）生化分析室（无菌操作室、化学实验室、培养室、细胞学观察室、暗室）。 17、植物种质：物亲代通过生殖细胞或体细胞传递给后代的遗传物质，植物种质资源即为携带各种不同遗传物质的植物总称。 18、玻璃化现象：指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。 19、基本培养基：包括大量元素和微量元素（无机盐类）、维生素和氨基酸，还有糖和水等。 20、完全培养基：在基本培养基基础上，根据各种不同试验要求，添加各种植物生长调节物质以及其他复杂有机附加物，包括有些成分尚不完全清楚的天然提取物。21、外植体褐变：在组织培养过程中，外植体向培养基中释放褐色的物质（醌类）致使培养 １
基孔制与基轴制
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基孔制与基轴制 机械工艺2009-09-28 22:01 阅读275 评论0 字号：大大中中小小 基孔制基轴制特性及说明 H11/a11A11/h11间隙非常大，液体摩擦情况差，产生紊流现象。用于精度极低粗糙机械转动很松的配合，高温工作的转动轴以及轴向自由移动的齿轮和离合器等，在一般机械中很少采用 H11/b11B11/h11间隙非常大，液体摩擦情况较差，且有紊流。用于高温工作和粗糙的机械传动轴，其配合间隙非常大，且间隙有很大的变动范围 H12/b12B12/h12间隙非常大，有紊流现象，液体摩擦很差的粗糙配合，其配合间隙很大的变动。如扳手孔与座等的配合 H9/c9间隙很大，液体摩擦尚好。有于高温工作，高速转动造成配合间隙减小，大公差、大间隙要求的外露组件的配合，在一般机械中很少采用 H10/c10间隙很大，液体摩擦尚好。用于结合件材料线膨胀系数显著不同处。如光学测长仪与光学零件的配合 H11/c11C11/h11配合间隙非常大，液体摩擦较差，易产生紊流的配合。用于转速很低，配合很松的配合。常用于大间隙、大公差的外露组件及装配很松之处 H8/d8D8/h8间隙比较大，液体摩擦良好，带层流。用于精度不高、高速及载荷不高的配合，高温条件下的转动配合以及由于装配精度不高而引起偏斜的连接 H9/d9D9/h9间隙很大的灵活转动配合，液体摩擦情况尚好，用于精度非主要要求时，或有大的温度变动，高速或大的轴颈压力等情况的转动配合，如一般通用机械中的平键连接，滑动轴承及较松的皮带轮等的配合 H10/d10D10/h10间隙很大的松动配合，液体摩擦情况尚好。如一般比较松的皮带轮及滑动轴承等的配合
植物组织培养基配制
培养基的配制 植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素(母液Ⅰ) mg／L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液Ⅱ) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 肌醇20 000
ⅣB 烟酸100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸400 以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。 各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。 配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。 配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。 溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL 的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻
植物组培的培养基中为什么添加蔗糖 (2)
植物组培的培养基中为什么添加蔗糖而不是添加葡萄糖？ 植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。其实并非如此。之所以以蔗糖作为碳源，主要有两个方面的原因： （1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。 配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。 （2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。 （3）诱导作用。在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。 当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。 因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。植物组织培养中，培养基中的蔗糖浓度较低的，一般为3%—10%，而质壁分离中的蔗糖浓
度为30%,可见两者浓度差距之大，质壁分离由于时间短，细胞吸收的量很少，而不是不能吸收，不足以对细胞液渗透压造成影响，才会出现壁分离现象。而只要浓度不是过高，时间又足够长，那么蔗糖就可以以被动扩散的形式进入植物细胞内而被植物利用。同时植物体内有蔗糖转化酶，可以吸收和利用蔗糖。而且转化酶在高等植物蔗糖代谢中起着关键的作用。研究表明,转化酶参与植物的生长、器官建成、糖分运输等多项功能，因此在植物培养基中加蔗糖。
植物组织培养之培养基
植物組織培養之培養基設計主要是參考分析植物體養分而來，但須注意的是，試管培養之培殖體吸收養分的途徑和栽植在土讓利用根系吸收養分之機制有所不同。在早期組織培養試驗顯示氮、磷、鉀、鈣、鎂及硫為細胞正常生長之重要元素，上述之養分稱為巨量元素，癒合組織培養通常需要較高濃度巨量元素，而根之培養度濃度則需降低。 在木本植物組織培養中最常使用之培養基為MS 培養基，或將MS培養基修飾呈不同濃度層級，但在針葉樹培養，MS 培養基則較少使用。培養基是否適於培養特定植物或誘導植物之型態發展，其關鍵在於培養基之離子強度、總氮含量、硝酸態氮與銨態氮之比、鈣離子及培殖體是否對氯離子敏感。 當培養之樹種尚無研究資料時，一般建議先使用養分濃度較低之培養基，如此可使培殖體之死亡率降低，後序之培養如有需要可逐漸提高養分濃度。 培養基之養分濃度隨培養時間改變，有些元素養分消耗很快，養分元素消耗之情形主要和物種及培殖體種類有關。當培殖體生長迅速時，頻繁之繼代培養可保持培養基之養分維持在最低底線上，尤其是使用低養分濃度之培養基更需時常繼代培養。 組織培養之培養基組成份可分成三大類，即巨量元素（Macroelements）、微量元素（Microelements）及維生素（Vitamins）。以本實驗室最常使用之培養基MS 及WPM 為例，其組成份如下。
培養液通常先配成數瓶貯存液（Stock solution）存放 4 ℃ 冰箱，待要配製培養基時才進行稀釋，配貯存液時許要注意幾點： 高濃度鈣離子與硫酸鹽離子及磷酸鹽離子會形成不溶性鹽。 鎂離子與磷酸鹽離子亦會形成不溶性鹽。 EDTA與硫酸鐵最好先各自溶解後才加在一起，否則容易造成沈澱。
植物组培1-培养基配制
植物组织培养-培养基配制 一 、【实验目的】 1、掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术 二 、【实验原理】 植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。 三、【实验仪器和试剂】 仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸 试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】 培养基的配制 用于配制培养基的水最好是三蒸水。 所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。 配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
1、 MS培养基的配制 1）按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml 2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.8 3）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。 4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。 5）经高压高温灭菌后，由于某些成分的降解或氧化，酸度会增加（pH 值一般可降低0.2），因此调整pH值时应加以考虑。 2、灭菌 经高压灭菌的培养基凝固后，宜放在培养室中预培养3～5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在10℃以下保存，而含有生长调节物质的培养基则在4～5℃低温下保存更好。 3、培养基的存放 经高压灭菌的培养基凝固后，宜放在培养室中预培养3～5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在10℃以下保存，而含有生长调节物质的培养基则在4～5℃低温下保存更好。 4、植物愈伤组织诱导培养基的配制 1）每2人一小组，自由组合，固定。每5小组为1中组 2）MS培养基的配制 a、母液的配制 b、培养瓶洗刷 c、每中组配制500mlMS培养基，（含琼脂4.5g，蔗糖15g，2,4-D母液1ml），调节PH，分装，灭菌 3）每人准备100ml/瓶去离子水→灭菌（无菌水) 4）每人100ml烧杯/试剂瓶→灭菌（无菌烧杯） 5）每2人一套平板，清洗，灭菌 五、【实验结果及讨论】 略
植物组织培养基及其配制
植物组织培养基及其配制 培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。 一、组成培养基的五类成分 目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。 1.无机营养物 无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。 2.碳源 培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。 3.维生素 在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。 4.有机附加物 包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。 5.生长调节物质 常用的生长调节物质大致包括以下三类： (1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。 (2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。 (3)赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。 二、常用培养基配方及其特点 1.常用培养基配方 组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点，适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时，应对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9－1。 培养基中的激素种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料而有变化，因此各配方中均不列入。 2.几种常用培养基的特点 (1) MS培养基。 MS培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存、消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响离子间的平衡。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、
基轴制和基孔制选择
如何确定基轴制基孔制 1。要看所配零件中有没有标准件，如轴承，与轴承外圈配则应该采用基轴制，而与轴承内圈配则应该采用基孔制；2。所配零件中没有标准件的，通常采用基孔制，这样有利于生产加工。 优先选用基孔制，因为孔比轴难加工。轴的公差一般比孔的高一级。 基准制的选用主要是考虑工艺的经济性和结构的合理性，一般情况，优先选择基孔制，这样可以减少备用的定制孔用刀具、量具的种类，经济效益比较好。如果轴采用的是标准件，则应该选择基轴制，另外如果一根轴和多个孔配合且配合性质不同时，也选择基轴制。 优先选用基孔制 优先选用基孔制主要是从工艺上和宏观经济效益来考虑的。选用基孔制可以减少孔用定值刀具和量具的规格数目。 在下列情况下应选用基轴制 1在同一基本尺寸的轴上有不同配合要求。例如，发动机的活塞轴与连杆铜套孔和活塞孔之间的配合。 根据工作需要及装配性，活塞销与活塞采用过渡配合，而与连杆铜套孔采用间隙配合。所示，销轴将做成阶梯状。 2直接使用有一定精度（IT8~IT11）而不再进行机械加工的冷拔钢材（这种钢材是按基准轴的公差带制造）做轴。在这种情况下，当需要各种不同的配合时，可选择不同的孔公差带位置来实现。这种情况应用在农业机械和纺织机械中。 3与标准件配合，应以标准件为基准件，来确定采用基孔制还是基轴制。 例如，滚动轴承的外圈与壳体孔的配合应采用基轴制，而其内圈与轴径的配合则是基孔制。 4允许采用非基准制配合。非基准制配合是指相配合的孔和轴，孔不是基准孔H，轴也不是基准轴h的配合。最为典型的是轴承盖与轴承座孔的配合。 在箱体孔中装配有滚动轴承和轴承盖，有滚动轴承是标准件，它与箱体孔的配合是基轴制配合，箱体孔的公差带已由此而确定为J7，这时如果轴承盖与箱体孔的配合坚持用基轴制，则配合为J/h，属于过渡配合。但轴承盖需要经常拆卸，显然应该采用间隙配合，同时考虑到轴承盖的性能要求和加工的经济性，轴承盖配合尺寸采用9级精度，最后选择轴承盖与箱体孔的配合为J7/f9。 公差等级的选用一般采用类比法，也就是参考从生产实践中总结出来的经验资料，进行比较选用。选择时应考虑以下几个方面： 1、孔和轴的工艺等价性 孔和轴的工艺等价性是指孔和轴加工难易程度应相同。在常用尺寸段内，对间隙配合和过渡配合，孔的公差等级高于或等于IT8级时，轴比孔应高一级，如H8/g7，H7/n6。当孔的精度低于IT8级时，孔和轴的公差等级应取同一级，如H9/d9。对过盈配合，孔的公差等级高于或等于IT7级时，轴应比孔高一级，如H7/p6，而孔的公差等级低于IT7级时，孔和轴的公差等级应取同一级，如H8/s8。这样可以保证孔和轴的工艺等价性。实践中也允许任何等级的孔、轴组成配合。 2、相关件和配合件的精度 例如，齿轮孔与轴的配合，它们的公差等级取决于相关件齿轮的精度等级。与滚动轴承配合的轴径和外壳孔的精度等级取决与滚动轴承的精度等级。
植物组织培养的基本步骤
植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类2.维生素3.氨基酸4.肌醇5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素2.细胞分裂素3.其他生长调节剂【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭2.抗生素3.抗氧化物质4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭
【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口 【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】