C010 谷草说明书GOT(微孔法)

谷草转氨酶（AST/GOT ）测定试剂盒（赖氏法）

一、 实验仪器:

新96孔板，混匀器，微量移液器，恒温水浴/气浴箱，酶标仪

二、操作表：

测定孔

对照孔

基质液（μl ）37°C 已预温

25 25

待测样本（μl ）

5

测定孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部基质液中，反复吸打混匀后

37℃水浴或气浴30分钟 2，4—二硝基苯肼液（μl ）

25 25

待测样本（μl ）

5

对照孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部液体中，反复吸打混匀后

37℃水浴或气浴20分钟 0.4mol/L 氢氧化钠液（μl ）

250 250

轻轻水平摇动96孔板混匀，室温放置15分钟，510nm 波长，酶标仪测各孔OD 值，以（绝对OD=测定孔OD 减去对照孔OD ），查标准曲线，求得相应的AST/GOT 活力单位。

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附录Ⅰ：AST标准曲线

标准曲线的制备：

0 1 2 3 4

0.1mol/L磷酸缓冲液（μl） 5 5 5 5 5

基质缓冲液（μl）25 22.5 20 17.5 15

2,4—二硝基苯肼液（μl）25 25 25 25 25

2μmol/ml丙酮酸钠标准液（μl）0 2.5 5 7.5 10 每孔每吸取一个标准，将吸嘴伸入孔板底部液体中，反复吸打混匀后

37℃水浴或气浴20分钟

0.4mol/L氢氧化钠液（μl）250 250 250 250 250

轻轻水平摇动96孔板混匀，室温放置15分钟，510nm波长，酶标仪测各孔OD值，各孔吸光度减去零孔吸光度，所得差值=绝对OD作为横坐标，相应的卡门氏单位为纵坐标，作坐标图拟合公式，直接在Excel表中用公式计算样本中的AST酶活性。

附参考标准曲线：

本所实验的吸光度值 0.2320.3170.3870.4620.523

本所实验的绝对吸光度值 00.0850.1550.2300.291

相当于酶活力卡门氏单位 0 24 61 114 190