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临床微生物SOP-室内质量控制管理程序1

临床微生物SOP-室内质量控制管理程序

1.目的:

规范微生物实验室管理程序,确保临床报告的质量。

2.适用范围:

微生物实验室的所有检验项目。

3.职责:

实验室检验人员均必须熟知并遵守本程序。

4.程序:

4.1 分析前质量管理

4.1.1 检验申请单临床医生应按照《微生物检测项目申请程序》申请临床微生物检测。口头申请追加样本检验项目,必须在样本有效期内申请,并补正式的检验申请单。

4.1.2 生成微生物检验标本标签护士应在核对医嘱、病人信息和检验申请信息后,按照《微生物标本检验标签程序》生成申请单和微生物检验项目标签,并将微生物检验项目标签正确贴于容器上。

4.1.3 标本的采集手册实验室应制定样本采集手册,指导正确采集和处理样本。

4.1.4 样本采集和运输样本采集人员应按照《采样前病人识别程序》确认病人,按照《标本采集、运输程序》采集样本,并在规定的时间和温度范围内,使用指定的运输培养基,安全运送到微生物室。

4.1.5 样本的接收样本接收人员应严格按照《标本接收、识别程序》《标本拒收程序》对标本接收或拒收,并记录。

4.1.6 微生物检验标本信息输入微生物实验室接种实验室岗位检验人员严格按照《微生物标本信息输入程序》录入、核对病人信息和标本信息等质料。

4.1.7 样本储存微生物实验室接种岗位检验人员按照《微生物标本检验前储存程序》正确储存未能及时处理的标本。已经检验的样本应在保证性质稳定的条件下,将样本以适当的方式保留到规定时间内,以便能在出具结果报告后可以复查,

或做补充检验。

4.2 分析中质量管理

4.2.1 试剂的质量控制

4.2.1.1 所有试剂用于检测标本前,必须做质控以评估质量并记录质控结果,只

有质控合格才可以使用。下列试剂每进一批新批号或货号要求用阴、阳性标准菌

株或质控菌株评估其质量(表2-1)。

触酶、氧化酶、凝固酶、β-内酰胺酶、Optochin、X、V 和XV 纸片;

细菌鉴定系统使用的每一种鉴定卡及相关试剂;

表2-1 常用实验试剂质量控制

试剂阳性对照阴性对照监测频率

氧化酶铜绿假单胞菌A TCC27853 大肠埃希菌A TCC25922 每次新配制时及使用中每个工作日

触酶金黄色葡萄球菌A TCC25923 A群链球菌A TCC19615 每次新配制时及使用中每个工作日

靛基质大肠埃希菌A TCC25922 肺炎克雷伯菌A TCC13883 1%蛋白胨水及靛基质试剂:每次新配制

时及使用中每个月1次直接用于检测病人标本有内标准的抗原试验如:金黄色葡萄球菌乳胶凝集试

剂(每天或每次做质控);

抗血清(至少每半年用阴、阳性质控菌株做质控);

革兰染液(每周一次用阴、阳性质控片做质控);

抗酸染液(每次使用要求用阴、阳性质控片做质控);

自制试剂(每配制一批新试剂做质控)。

4.2.1.2 平行试验新批号试剂使用前必须用老试剂或参考材料平行试验。

4.2.1.3 无厂家商特别说明时,不同批号的试剂不可混用。

4.2.1.4 缺陷或失控试剂只能用于培训员工业务能力,否则报废处理。培训试剂

应明显标记“仅培训使用”,并与检验试剂分开放置。

4.2.2 培养基的质量控制

4.2.2.1 购买的有质量保证标准的培养基实验室应保存制造商所遵循的质量保

证标准,以及每批号产品完成无菌试验、生长试验、生化试验及质量控制性能的

合格证明等文件;无质量保证标准的培养基,每批号和(或)每次购买的产品应

检测相应的性能,包括生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验(适用时)、

生化反应(适用时)等。

4.2.2.2 外观检查合格培养基的标准:完整。琼脂附于平板底部,血平板应不透明、没有溶血情况,平板颜色好、湿润,无干裂、无污染、无浑浊或沉淀、无冻伤、无过热现象,琼脂厚度至少3mm,如发现与上情况不符的培养基,应不予使用。

4.2.2.3 无菌试验抽检培养基数量:100 块以内,随机抽检5;100 块以上可随机取10 块平板或10 支试管培养基进行无菌试验。35 度培养24 小时后观察是否有细菌生长,无细菌生长为合格。

4.2.2.4 生长试验及生化反应试验质控菌株(表2-2,2-3)35℃培养24 小时,用无菌生理盐水配制 1.5 麦氏单位的细菌悬液。无菌生理盐水1:100 稀释,每块平板接种10μl(浓度相当于10^3-10^4CFU/平板)。培养24-48 小时。符合生长,生化试验质控标准者方可使用。失控者必须记录失控情况并有相应的纠正措施。

表2-2 生化试验用培养基的质控

培养基质控菌株鉴定标准

克氏双糖铁培养基大肠埃希菌A TCC25922 +/–

奇异变形杆菌A TCC49005 –/H2S

福氏志贺菌质控菌株–/+

铜绿假单胞菌A TCC27853 –/+ 1蛋白胨水大肠埃希菌A TCC25922 +

肺炎克雷伯菌A TCC13883 –鸟氨酸阴沟肠杆菌A TCC45301 +

肺炎克雷伯菌A TCC13883 –

尿道定位显色培养基大肠埃希菌A TCC25922 紫红色

肺炎克雷伯菌A TCC13883 蓝色

表2-3 培养基的生长试验质控

培养基质控菌株鉴定标准

巧克力平板流感嗜血杆菌ATCC49247 生长情况好

血平板金黄色葡萄球菌A TCC25923 中度到大量生长

A群链球菌ATCC19615 生长,β溶血

肺炎链球菌ATCC49619 生长,α溶血中国蓝培养基大肠埃希菌A TCC25922 生长,蓝色菌落

奇异变形杆菌ATCC49005 部分抑制

粪肠球菌ATCC29212 不生长SS培养基大肠埃希菌A TCC25922 部分或全部抑制

福氏志贺菌质控菌株生长,无色菌落

4.2.3 自动化仪器试剂质控

4.2.3.1 鉴定卡的质控每新进一批鉴定卡做一次质控,每一新生产批号鉴定卡需用相应质控菌株做质控以检测生化反应的可靠性。材料和试剂批号必须记录并保存。

4.2.3.2 药敏卡的质控分为日质控、周质控和新进药敏卡质控。新用户在熟悉操作前,建议先进行日质控,直至结果满意可转为周质控。

日质控:按质控菌株表要求,没种药敏卡每日用相应质控菌株进行质控,连续检测20 日并记录结果。将某一种质控菌株及其对应的抗生素作为一个组合,连续检测20 日得出20 个结果,只要每个组合的20 个结果中,失控不超过 2 个,则可转为周质控。

周质控:每周用相应质控菌株进行质控并记录结果。如抗生素种类改变,必须重新做日质控直至结果满意再转为周质控。

新进药敏卡质控:没一新生产批号药敏卡需要用需要质控菌株做质控,以检测MIC 结果的可靠性。材料和试剂批号必须记录保存。

鉴定卡和药敏卡质控菌株应根据仪器品牌种类而定,表2-4 以Vitek 2Compact 为例介绍常用反应卡使用的质控菌株。

表2-4 Vitek 2 Compact 常用反应卡使用质控菌株

反应卡种类质控菌株

GNI 阴沟肠杆菌A TCC700323 产酸克雷伯菌ACTT700324

GPI 金黄色葡萄球菌A TCC25923 铅黄肠球菌ACTT700327

YST 葡萄牙念珠菌ATCC34449 头孢地霉ATCC28576

NH 流感嗜血杆菌ATCC9007 乳糖奈瑟菌ATCC23970

ANC 普通拟杆菌A TCC8482 产气荚膜梭菌ATCC13124

AST-GNXX 大肠埃希菌A TCC25922 铜绿假单胞菌ATCC27853

AST-NXXX 大肠埃希菌A TCC25922 铜绿假单胞菌ATCC27853

AST-GPXX 肺炎链球菌A TCC49619

AST-PXXX 粪肠球菌ATCC29212 金黄色葡萄球菌A TCC25913

4.2.3.3 检测仪器要进行维护、功能评估及稳定监测。参见《仪器管理程序》。4.2.4 抗菌药物敏感试验纸片参见《药物敏感性试剂标准操作程序》。

4.2.5 染液质量质控见表2-

5.

表2-5 染液质量质控

4.2.6 标本预处理、涂片及接种(微生物标本接种岗位检验人员完成)

4.2.6.1 严格按照《呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程》预处理呼吸道标本,涂片革兰染色以判定痰标本是否合格,正确选择培养基接种。

4.2.6.2 按照《血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程》将血培养瓶放入全自动培养分析系统进行培养。如仪器报阳性,应立即取瓶,涂片革兰染色,同时接种血平板。如果涂片阳性,应按照《危机值报告程序》将染色结果以初步报告形式电话通知临床医生,并记录在《危机值报告登记表》上。

4.2.6.3 按照《脑脊液标本细菌学检验标准操作规程》处理脑脊液标本,涂片革兰染色,正确选择培养基接种。如果涂片阳性,应按照《危机值报告程序》将染色结果以初步报告形式电话通知临床医生,并记录在《危机值报告登记表》上。

4.2.6.4 按照《尿液标本细菌学检验标准操作规程》定量培养。

4.2.6.5 按照《生殖标本细菌学检验标准操作规程》正确选择培养基,处理、接种生殖道标本。阴道炎病人标本须进行革兰染色;孕妇需进行 B 群链球菌的筛查。

4.2.6.6 根据医生的要求,按照《粪便标本细菌学检验标准操作规程》正确选择培养基,处理、接种粪便标本。有抗酸药物治疗史的严重腹泻病人(6 个月婴儿除外),粪便常规培养无异常发现时,可检测艰难梭菌毒素。

4.2.6.7 按照《浓及伤口标本细菌学检验标准操作规程》处理、接种伤口标本。深部伤口感染应至少包括标本采集、需氧菌及厌氧菌的培养及鉴定。最好进行直接涂片革兰染色检查并报告结果。如果涂片阳性,将染色结果以初步报告形式电话通知临床医生。

4.2.6.8 按照《厌氧菌属检验标准操作规程》处理、接种厌氧菌细菌学检测标本。

4.2.6.9 按照《分支杆菌属检验标准操作规程》处理。接种结核分支杆菌细菌学检测标本应置密封的防渗漏容器内;某些标本(如尿液、痰液)抗酸染色及培养前,应以密封的螺旋盖试管密封的离心机内离心浓缩,以最大限度减少气溶胶危害。分支杆菌培养最好接种 2 种培养基培养(包括液体、固体),置35-37℃孵箱培养。

4.2.6.10 按照《深部真菌检验标准操作规程》处理接种真菌学检查标本。

4.2.6.11 核对检验单与接种平板信息,确保无误后并记录,按照检验要求将接种好的平板放置相应条件孵育箱培养。

4.2.7 菌落观察及鉴定(细菌鉴定岗位检验人员完成)细菌鉴定岗位检验人员取出充分孵育的平板按照标本标准操作程序,观察初步检测结果,制定进一步鉴定及药敏试验方案。涂片染色、手工或仪器判别细菌类型。根据按照《质量质控管理程序》进行质控,并记录在《室内质控记录表》上,确保试验质量。

4.2.8 药敏试验(药敏试验岗位检验人员完成)药敏试验岗位检验人员根据细菌鉴定或初步鉴定结果审核药敏试验方案,按照纸片琼脂扩散法、深部真菌药敏试验标准操作规程、稀释法等标准操作规程进行药敏试验。要求按照质量控制管理程序进行质控,并记录在《药敏试验质控记录表》上。要求用头孢西丁纸片检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌,VRE、PISP 和PRSP 需用MIC 法确定。

4.2.9 严格遵守《二级生物安全管理程序》进行微生物标本检测。

4.3 分析后质量控制

4.3.1 药敏岗位检验人员综合细菌鉴定和药敏结果形成检验报告并签名,微生物实验室负责人或指定人按照相关抗菌药物试验标准操作规程核对药敏结果,尤其注意异常和少见结果,例如VRE、PRSP 等。

4.3.2 报告病人结果之前,应确定质控在可接受范围。

4.3.3 经双人双核后的报告单交报告发放员分发到各病房或门诊病人,注意签收并记录。缺乏审核者得报告结果,应由微生物实验室负责人或指定人在24 小时内进行评估。

4.3.4 血培养阳性、脑脊液涂片阳性的初步报告经核实后,按《危急值报告程序》报告。4.3.5 发现传染性疾病原菌应按照《传染病报告程序》做好报告。

4.3.6 完成分析后的微生物标本,检验人员应按照《检验后标本保存程序》安全保管标本和平板,要求有明确标识以备复查。3-5 日后,由废弃物处理岗位人员按照《废弃物处理程序》处理。

4.3.7 遇到来自临床或病人对检验结果的抱怨,应按照《投诉与抱怨处理程序》解决。

4.3.8 发现检验流程、文书等错误,应按照《质量改进程序》处理。

参考文献

1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL31:2007 医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2007

2 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL02:2008 医学实验室质量和能力认可准则(ISO 15189:2007).2008

连续很多天都是天亮之后才睡觉。别人问我,你晚上不睡觉都在干嘛。我马上回答,写稿啊,书稿还没交呢。但其实,我一个字也没写。而之所以熬夜,也不过是因为心里有牵挂的人和未完成的事吧。

别人问你怎么还不睡,你说不困。其实熬夜很困,打个哈欠都会有眼泪流出来,只是心中一直有所期待,有所牵挂。就好像下一秒就会收到喜欢的人的消息,下一秒就能遇见一个惊喜。又或者,熬了太久却迟迟得不到自己想要的结果,渐渐的习惯了孤独。

为什么会熬夜呢,大概是因为白天的自己太理智,太冷漠,好像什么都不在乎。所以有些情绪和思念,心酸和不舍,是要留到深夜独自慢慢消化的。白天的自己和晚上的自己完全不是同一个人啊,白天口口声声说一定早睡,晚上却从来做不到。像失忆一样拿命熬夜,白天开开心心无忧无虑,晚上却忧郁的不行。白天觉得我最牛逼,晚上却变成世界第一大傻逼。

总觉得幸福的人是不用熬夜的,每天都有规律的生活,爱的人就躺在身边,现在过的是想要的生活,手里牵的是喜欢的人。

昨天有人问我,为什么你晚上不睡觉。

我想了很久,已经两三年没有在两点之前入睡过了。但我也说不清为什么,那个人突然给我发了一段话,我突然觉得,这是我熬夜的原因,也是很多人熬夜的原因。

你总是习惯熬夜,然后我也故意很晚都不睡。装作是和你一样睡不着,这样就可以和你聊很久,可是你都不知道其实我要困死了。后来你走了,熬夜的习惯却怎么都改不掉。

说片面点是熬夜,说实在点是失眠,说实话是想你。

你有没有过,为了陪一个人聊天,其实下一秒已经要睡着,但还是死抓着手机不肯睡。

你有没有过,因为一个人的一句话,明明很困却突然变得很清醒,开心和喜悦赶走了所有困意。

你有没有过,为了等一个人的晚安,不停的刷着朋友圈发着动态,其实只想让他看到你还没睡。

你有没有过,因为太思念一个人,每天都害怕深夜来临,害怕孤独,害怕寂寞,害怕牵挂的感觉。

我知道,你都有过。

可是,你每天这样熬夜,有人心疼你吗?

前天晚上一个作家姐姐突然发消息说,妹妹,钱是挣不完的,别累着自己,身体最重要。昨晚她发现我又在熬夜,给我发消息说,一定照顾好自己,莫名心疼你。

我很感动,又觉得很可笑。一个没见过面的人看你熬夜都会心疼,会劝你照顾好自己,但你每天熬夜想着的那个人,没给你发过一条消息。第一次见面的陌生人都会劝你少喝酒少抽烟,素不相识的微信好友都会让你早点休息,可你抽烟喝酒熬夜在等的那个人,从来都没在意过你,连一句晚安都没有。

我经常给别人讲道理,永远不要为了一个不爱你的人折磨自己。但这句话其实就像放屁,因为一旦爱上一个人,就没办法控制自己。我们在爱情里,从来都不是理性的。后来有人问我,怎么忘记一个人。

我说,把酒喝够,把烟抽完,把黑夜熬成天亮,等你真的感觉疼了,你就忘记了。不撞南墙不死心,大概就是这个道理。别人苦口婆心的劝说,其实你一点儿都听不进去。你害怕失去、害怕背叛、害怕从未拥有,你害怕的太多、心事太多,所以很难入睡。那你就熬吧,等熬过了这一阵,你又会觉得其实生活还是很美好。

你要记住,所有关于感情的问题,都不要在深夜做决定。无论分手还是牵手,无论坚持还是放弃。因为女人啊,从来都不是理性动物,再加上深夜里的一杯红酒,一根香烟,感性越发强烈。

五年前第一次听梁静茹的《问》,歌里唱,如果女人,总是等到夜深,无悔付出青春,他就会对你真。

那时候真的傻到相信,用心爱一个人,就能把他留在自己身边。现在才明白,在一起一辈子这种事,不是嘴上说了就可以。外面的诱惑这么多,人的欲望这么大,而你能给的爱,其实就这么多。

后来我经常说,如果爱一个人又不可得,那就找个爱自己的吧。别太累,别付出太多,别太委屈,你说你爱他所以无所畏惧,但你的感情和耐心其实就这么多,你无法永远输出。

总有一天它们会因迟迟得不到回应而枯竭。等到那一天你会发现,哪怕再遇到喜欢的人,也没有力气去喜欢了。

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