胆红素的检测的现实意义
成都中医药大学2011年秋季学期期末考试
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胆红素检测的前景概况
摘要：近年来，健康问题逐渐成为人们最关注的问题之一。健康保健，健康体检逐渐成为人们生活中不可缺少的一部分。在这些检查中，也不断地反映出一些情况来。为了方便找出更有效的各种疾病的诊断、治疗方法，了解胆红素与人体各种疾病的关系便变得势在必行。而血清胆红素在各种疾病诊断、治疗、及预后工作中的就显得尤为重要了。血清胆红素浓度的测定在疾病诊断中也扮演着极其重要的角色，无论是肝功检测还是心血管疾病的诊断检测，血清胆红素都可作为一个很有力的参考依据。于是，提高检测的灵敏度和特异度便可通过分析比较各种检测方法，找出精准度相对较高的检测方法或者寻找到更好的检测方法。
关键字：胆红素;重氮法;化学氧化法;KHC3法
正文：胆红素（英文：Bilirubin）是胆色素的一种，它是人胆汁中的主要色素，呈橙黄色，同时也是内源性抗氧化活性的生物还原剂，它是血红蛋白分解代谢的一种产物[1]，即它是体内铁卟啉化合物的主要代谢产物，有毒性，可对大脑和神经系统引起不可逆的损害，但也有抗氧化剂功能，可以抑制亚油酸和磷脂的氧化。胆红素是临床上判定黄疸的重要依据，也是肝功能的重要指标。胆红素有游离胆红素和结合胆红素两种形式，结合胆红素不存在分子内氢键，可以直接与重氮试剂结合，生成紫红色偶氮化合物，因此又称直接胆红素，游离胆红素存在分子内氢键[2]，不能直接与重氮试剂结合，必须先用乙醇或尿素破坏氢键，才能与重氮试剂反应，因此又称间接胆红素。正常人每天产生250-350mg的胆红素，其中70%是衰老红细胞血红蛋白血红素的降解产物，即衰老细胞被单核吞噬细胞系统破坏，释放出血红蛋白，再被分解成珠蛋白和血红素。胆红素裂解成胆绿素，胆绿素还原成胆红素，即游离胆红素。肝脏可以有效地摄取血浆游离胆红素，并将其转化成结合胆红素，提高其极性和水溶性，使其易于随胆汁排入肠道。研究表明，肝脏每小时可以清除100g胆红素，比单核吞噬细胞系统产生胆红素的速度快十倍，所以正常人的血浆游离胆红素的浓度极低。当然，胆红素还和体内很多因素有着密切的关系，因此，分析找到最有效的胆红素的检测方法，是现在的形势对我们的要求。
1、胆红素的4种常规检测方法
1.1 重氮法
1.1.1重氮法的原理
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素，所以称为直胆，因此重氮法又称1min 胆红素测定法，非结合胆红素测定时要以咖啡因-苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键再与重氮试剂反应，抗坏血酸破坏剩余重氮试剂，加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转到598nm，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略不计，使灵敏度和特异性升高，最后形成的绿色是由兰色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。
1.1.2重氮法的操作
操作：
总胆管结合管对照管
血清（ml）0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml） 1.6 1.6
重氮试剂（ml）0.4 0.4
混匀后，总胆管置室温10min，结合管置37℃1min
NaN3（ml）0.05
咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml） 1.55
碱性酒石酸钠溶液（ml） 1.2 1.2 1.2
以对照调零，测各管A600，查标准曲线
正常参考值：血总胆红素5.1~19umol/L(0.3~1.1mg/dl)
血清结合胆红素1.7~6.8umol/L(0.1~0.4mg/dl
1.1.3重氮法的评价
本法稳定性好、灵敏度高、轻度溶血无影响,.重氮法作为全国检验学会推荐测定胆红素的常规方法，有较高的灵敏度、精密度和较宽的线性，但试剂无法长期稳定，溶血可使胆红素测定值偏低，以叠氮钠作为防腐剂时能破坏偶氮试剂，终止偶氮反应，使重氮反应不完全，甚至不呈色[3]。
1.2钒酸氧化法
1.2.1钒酸氧化法的原理
胆红素在酸性环境下(PH3.0)被钒酸氧化成胆绿素，使胆红素所特有的黄色减少，这样在450nm 波长处测得钒酸加入前后的吸光度，由两吸光度的差值即可得出胆红素的含量(直接胆红素试剂缓冲液中含有阻止间接胆红素被钒酸氧化的成份)。即将标本加入缓冲液中，等吸光度稳定后，读取吸光度Al，加入钒酸溶，吸光度立即下降，经一段时间(约5分钟)趋于稳定，读取吸光度A2，将A2-A1与标准品的A2-A1比较，即可测出胆红素的含量[4]。
1.2.2钒酸氧化法的操作
①双波长450-460nm，温度37℃。②终点法2，吸光度下降法。③第一试剂200μl与标本10μl，孵育5分钟，读取一次吸光度，这时加入第二试剂50μl孵育5分钟，第二次读取吸光度，前后两次吸光度之差与标准吸光度之差比较，可得样品胆红素量。光径：0.5cm。
1.2.3钒酸氧化法的评价
钒酸盐氧化法中，试剂稳定，而且操作简单，尤其适合在各种自动生化分析仪的应用。在重复性、准确性、稳定性、抗干扰能力及线性范围等方面均较理想[5]。钒酸盐氧化法因其稳定性、精密度、准确度均能满足实验室要求，且试剂简单易得[6]，各项指标符合方法学要求，因而是值得推荐的胆红素常规测定方法，近年来被许多实验广泛采用。
1.3氧化酶法
1.3.1氧化酶法的原理
1987年，Kosaka[7]和Doumas[8]分别报告了血清直接胆红素的酶法测定，实验以二牛磺酸胆红素作为直接胆红素标准，将反应液pH控制在酸性范围，在此条件下，血清中的葡萄糖醛酸结合胆红素和大部分蛋白结合胆红素都被氧化，胆红素在胆红素氧化酶的作用下与氧气反应，生成胆绿素，胆绿素在与水作用。胆红素最大吸收峰在450nm附近，在胆红素氧化酶的作用下，总胆红素在450nm 吸光度的下降与胆红素成正比[9]。
1.3.2氧化酶法的操作
测定方法：取5ml试管若干，按表1顺序加液。
表1酶法[10]测定结合胆红素操作步骤
步骤样品标准
空白测定空白测定
柠檬酸缓冲液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0
样本（μl）50 50 - -
二牛磺酸胆红素
（μl）
- - 50 50
去离子水（μl）50 - 50 -
BOX（μl）- 50 - 50
混匀，置30℃水浴保温15分钟，在460rim处读各管吸光度值( A)
1.3.3氧化酶法的评价
1987年Kosaka[7]报告了在含十二烷基硫酸钠的条件下，PH8.0的tris-HCL缓冲溶液中，氧化酶法可催化各种类型的胆红素，使胆红素所在的450nm吸收峰下降，以此测定血清总胆红素。而在无十二烷基硫酸钠，PH3.5-4.5的乳酸——枸櫞酸纳缓冲溶液，氧化酶法特异性地降解结合胆红素，在PH10.0的甘氨酸——NaOH中氧化酶法特异性地降解胆红素葡萄糖醛酸苷。关于氧化酶法测定血清胆红素的条件，国内外文献已有多次报导[8,11]。从分折原理上可以看出氧化酶法测定胆红素应具有很好的特异性．因为氧化酶法仅对胆红素起作用，在酶法铡定胆红素过程中我们以450nm为检测波长，通过检测加入氧化酶后胆红素在该波长下降程度来得出胆红素的浓度，由此可见不与氧化酶反应的物质均不会导致该测定过程。而且，氧化酶法具有明显的抗干扰能力。临床送检标本中最易发生的干扰因素之一就是溶血．有时约占临床送检标本的10%。而且各标本溶血程度也不一致，若将这种不同程度的溶血干扰带入胆红紊测定中，就会对黄疸的临床鉴别、分型及诊斯产生不良影响氧化酶法抗溶血干扰的特点则可使此类标本的误差太大减小[12]。
1.4 KHC3法
1.4.1 KHC3法的原理
总胆红素检测原理：样本中含有的结合胆红素和未结合胆红素被试剂溶解，结合胆红素和未结合胆红素在电子转移介质KHC3作用下生成蓝绿色的显色基团——胆蓝素，在红外区域700nm处有最大的吸光度，且反应前后吸光度变化与胆红素的浓度成正比，通过测定700 nm处吸光度的增加计算
出胆红素的浓度。②直接胆红素检测原理：结合胆红素被电子转移介质KHC3氧化生成蓝绿色的胆蓝素，胆蓝素在红外区域700 nm处有最大的吸光度，与结合胆红素浓度成正比。未结合胆红素在直接胆红素试剂中未能被溶解，仍与白蛋白结合，所以不能直接检测[13]。
1.4.2 KHC3法的操作
取高、中、低不同胆红素浓度水平的患者血清标本各30份，分别取样、混匀。取上述高、中、低值混合血清在暗室中各自分装成20份，并于-20℃避光冰冻保存。每天取高、低值混合血清各一份，待其在避光状态下完全溶解后测定血清胆红素，连续测定20d，按照NCCLS[14]的要求，，取患者黄疸血清和健康人正常血清标本各一份，分别编为⑤号、①号。将⑤号高值和①号低值分别按3:1、2:2、1:3的比例混合作为④、③、②号。将5个不同浓度的标本随机排列，测定每份标本中的血清胆红素，重复测定4次，取其均值为测定值，与设定值做线性对比[15]。
1.4.3KHC3法的评价
KHC3法测定血清中总胆红素和直接胆红素方法简单，为液体单试剂，室温保存，试剂稳定，无需配制直接上机使用，满足临床检验工作需要[16]。KHC3法作为胆红素一种新的测定方法，准确度高、线性范围宽，精密度好，抗干扰能力强，溶血、脂血无明显干扰，符合IFCC和酶学委员会推荐方法的各项技术要求，是一种崭新、实用的胆红素测定方法。
2、目前较为常用的检测方法比较
化学氧化法具有较好的线性范围，化学氧化法>钒酸氧化法>氧化酶法>KHC3法，4种方法的线性范围基本符合应用要求。化学氧化法、钒酸氧化法、胆红素氧化酶法的重复性较好，可以满足临床要求，而KHC3法对低值血清测定的重复性较差，说明该方法的精密度仍有待改善。血红蛋白对测定均有不同程度的干扰，化学氧化法较钒酸氧化法、胆红素氧化酶法、KHC3有更好的抗血红蛋白干扰的能力，且不易受脂肪乳、VitC、肝素等干扰因素的影响。血红蛋白对重氮法有一定程度的正干扰，而酶法为负干扰，钒酸盐氧化法则为较轻的正干扰，干扰程度随血清胆红素总体水平降低加重[17]。
钒酸氧化法与酶法比较具有试剂价格低廉，精密度更高的优点，是目前临床检验室测定胆红素推荐的方法，但钒酸盐对仪器和环境存在潜在的污染；其余方法大都需要特殊的仪器以及受某些适用范围的限制等，因此，重氮法简单、快速、价格低廉，虽然存在脂血、溶血的干扰，依然是国内很多检验科的常规方法。
3、胆红素的检测方法预测
为了提高诊断的灵敏度和特异度，目前实验室一般使用的是钒酸氧化法。通过比较可以看出，酶法和钒酸盐氧化法具有精密度高、受血红蛋白干扰小、线性范围宽等优点。酶法测定试剂盒价格昂贵，所以钒酸盐氧化法相比较而言更适合于临床实验室推广应用。虽然氧化酶法测定胆红素的试剂盒价格昂贵，但其特异性良好，操作简便，适合在全自动生化分析仪上使用，尤其是其抗干扰能力比其它胆红素常规检测方法更为理想，因而氧化酶法测定血清胆红素也是很有发展前景的。
当然，未来的胆红素检测方法方向则是具有更简便，成本更低，精密度更高，受血红蛋白干扰更小，线性范围更宽的优点的方法。如果条件允许，则尽可能把氧化酶法、重氮法、分光光度法、钒酸氧化法相结合，寻找到更有效，灵敏度和特异度更高的检测方法。
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生化复习题
名词解释 1、酶、酶活性中心、酶原、同工酶、酶原激活； 2、生物氧化、呼吸链；底物水平磷酸化、氧化磷酸化； 3、血糖、糖异生、糖酵解、三羧酸循环、糖有氧氧化、糖原合成和分解、磷酸戊糖 途径； 4、脂肪动员、血浆脂蛋白、酮体、血脂、载脂蛋白； 5、氮平衡、必需氨基酸、腐败作用、脱氨基作用、一碳单位； 6、变/别构调节、化学修饰调节 7、中心法则、半保留复制、逆转录、基因突变、转录、启动子； 8、翻译、密码子； 9、基因表达、操纵子、顺/反式作用元件、反式作用因子、内含子、外显子 10、胆汁酸肠肝循环、胆色素、黄疸、生物转化； 11、脱水及脱水类型、酸碱平衡、碱储备。 简答题 1、人体如何调节血糖（在进食、停食、饥饿三种状态）？【简述血糖的来源和去路 及机体对其的调节】； 2、试述四种脂蛋白的组成特点和生理功能（或意义）。 3、请叙述胆固醇、脂肪酸的生物合成与糖代谢之间的关系。【试述进食过量糖类食物 可导致发胖的生化机理。】 4、简述血氨的运输和解毒过程（代谢去路）。【简述氨的来源、体内转运方式及主要 代谢情况。】、【健康人体如何转运氨以避免氨的毒性？氨在何器官中通过什么途径合成何种物质使其毒性得到解除？】 5、试从模板、参与酶、合成方式、合成产物、原料等几方面叙述DNA复制与转录的异 同点。【简单比较复制和转录的相同点和差异。】 6、简述胆汁酸的代谢过程及其肠肝循环。【简述胆汁酸的分类、合成原料和生理功能等。】 7、简述胆色素在体内的代谢过程其肠肝循环。【胆红素对人体有毒性，简述人体如何进 行胆红素的转运，以避免其对组织的毒性作用？】 8、黄疸有哪几种类型？其产生原因及相应的血、尿、粪便检查变化情况如何？ 9、简述人体是如何调节体液平衡的。【机体缺水时，体内如何进行调节？】 10、结合你所学的生化知识谈谈缺钙时如何补钙 11、何谓高血钾或低血钾？其与酸碱平衡有何关系？主要危害是什么？低血钾的治疗原 则是什么？ 12、血液正常pH值是多少？它的相对恒定是由体内什么机制调节的？了解血液pH值 对判断酸碱平衡有何意义？【试述人体内酸碱平衡调节系统包括什么及其作用。】【试述肾脏对酸碱平衡的调节作用。】【当代谢产生大量乳酸时健康人体如何调节以
总胆红素测定试剂盒(钒酸盐氧化法)产品技术要求meigaoyi
总胆红素测定试剂盒（钒酸盐氧化法） 适用范围：用于体外定量检测人血清中总胆红素的浓度。 1.1包装规格 a) 试剂1：2×60ml，试剂2：2×15ml； b) 试剂1：4×60ml，试剂2：4×15ml； c) 试剂1：3×80ml，试剂2：3×20ml； d) 试剂1：2×40ml，试剂2：2×10ml； e）试剂1：2×400ml，试剂2：2×100ml； f）试剂1：2×72ml，试剂2：2×18ml； g）试剂1：12×16ml ，试剂2：12×4ml； h）试剂1：1×40ml，试剂2：1×10ml。 1.2主要组成成分 试剂1主要成成组分 试剂2主要组成成分 2.1 外观和性状 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.1.2 试剂1应为无色或淡黄色透明溶液；试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。
2.2 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.3 试剂空白吸光度 在450nm波长下，测定试剂空白吸光度，应≤0.05。 2.4 分析灵敏度 测试550 umol/L的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.15。 2.5 准确度 测定国家标准品（YY90377），测定值与靶值相对偏差不超过±10%。2.6 精密度 2.6.1批内精密度 批内精密度应不大于5％。 2.6.2批间差 抽取3个不同批号试剂，对两个浓度样品进行重复检测，批间差应不大于10%。 2.7 线性 2.7.1 在[3，628]umol/L区间内，线性回归的相关系数（r）应不低于0.990； 2.7.2 (50,628]umol/L区间内，相对偏差不超过±15%。 2.7.3 [3,50]umol/L区间内，绝对偏差不超过±7.5umol/L。 2.8 稳定性 该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为18个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7之规定。
临床常规检验项目及其临床意义
正常值 临床常规检验项目： 一：红细胞记数RBC： 临床意义：诊断各种贫血和红细胞增多症正常参考值：男（4.0-5.5）T/L 女（3.5-5.0）T/L 二：血红蛋白HGB 临床意义：同上 正常参考值：110-160g/L 三：红细胞比积HCT 临床意义：同上 正常参考值：0.37-0.49 四：平均红细胞体积MCV 临床意义：判断贫血的类型 正常参考值：82-92fl 五：平均红细胞血红蛋白含量MCH 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：27-31pg 六：平均红细胞血红蛋白浓度MCHC 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：320-360g/L 七：红细胞体积分布宽度RDW 临床意义：RDW增加可见于营养缺乏性贫血 正常参考值：11.6-14.8 八：白细胞记数WBC 临床意义：增高见于感染、组织损伤、白血病；降低见于血液病、自身免疫病、脾功能亢进等 正常参考值：4-10G/L 九：白细胞分类DC 临床意义：用于血液病等疾病的诊断和判断感染轻重程度。中性粒细胞增高见于感染、白血病；降低见于某些感染、自身免疫疾病、脾亢等 嗜酸性粒细胞（EOS）增高见于过敏性疾病、某些皮肤病及传染病的早期；降低见于使用肾上腺皮质激素后等。 正常参考值：分叶核粒细胞GRAN 50-70% 嗜酸性粒细胞EOS50-300G/L（G=106）淋巴细胞LYM 20-40% 单核细胞MID 3-8% 十：血小板记数PLT 临床意义：检测凝血系统的功能 正常参考值：100-300G/L 十一：平均血小板体积MPV 临床意义：判断血小板减少的原因 正常参考值：6.8-13.5fl 十二：血小板压积PCT 临床意义：同PLT 正常参考值：0.1-0.3% 十三：血小板分布宽度PDW 临床意义：PDW增加见于血小板降低 正常参考值：15.5-18.0% 十四：网织红细胞记数RC 临床意义：判断骨髓增生情况，评价疗效 正常参考值：0.5-1.5%
总胆红素(TBIL)测定试剂盒(重氮盐法)产品技术要求lideman
总胆红素(TBIL)测定试剂盒(重氮盐法) 适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中总胆红素的含量。 1.1规格 试剂1(R1)：4×80mL，试剂2(R2)：1×16mL； 试剂1(R1)：5×60mL，试剂2(R2)：1×16mL； 试剂1(R1)：3×40mL，试剂2(R2)：1× 6mL； 试剂1(R1): 4×80mL，试剂2(R2)：4×16mL； 试剂1(R1)：5×60mL，试剂2(R2)：5×12mL； 试剂1(R1)：4×80mL，试剂2(R2)：4×20mL； 试剂1(R1)：4×60mL，试剂2(R2)：4×20mL； 试剂1(R1)：5×60mL，试剂2(R2)：5×15mL； 试剂1(R1)：1×20mL，试剂2(R2)：1×3mL。 1.2 组成 表1 试剂组成 2.1 外观
液体双试剂：试剂1(R1)为无色澄清液体，试剂2（R2）为无色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 空白吸光度 在37℃、（546 nm±10%范围内的）波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应<0.1 ABS。 2.4 分析灵敏度 浓度为84.9μmol/L时，吸光度变化范围在(0.2-0.5)之间。 2.5 线性范围 在[0 -340]μmol/L线性范围内，线性相关系数r2 ≥0.996。在（100–340]μmol/L范围内的相对偏差≤10%；测定结果[0-100]μmol/L时绝对偏差≤10μmol/L。 2.6 精密度 试剂盒测试项目精密度 CV< 6%。 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应< 10%。 2.8 准确度 相对偏差：用参考物质配制一定浓度的溶液作为样本进行检测，其测量结果在（100–340]μmol/L范围内的相对偏差≤10%,在[0-100]μmol/L范围内的绝对偏差≤10μmol/L。 2.9稳定性
生物化学复习(1)
生物化学复习： 一、名词解释 1．酶2、呼吸链 3、糖异生4、必需氨基酸5、蛋白质等电点(pI) 6、半保留复制 7、血钙 8、一碳单位 9、未结合胆红素10、蛋白质的变性作用 11、三羧酸循环 二、选择题知识点 l、碱性氨基酸有哪些？酸性氨基酸有哪些？含硫氨基酸有哪些？ 2、酶催化作用的特点有哪些： 3、维持蛋白质一级结构的化学键是：( ) 4、维持蛋白质二级结构的化学键有： 5、蛋白质分子的元素组成特点是 6、关于蛋白质变性的论述不正确是 A、一级结构无改变 B、溶解度降低 C、失去生物学活性 D、空间结构无改变 7、蛋白质营养价值的高低取决于： A．氨基酸的种类 B．氨基酸的数量 C．必需氨基酸的种类、数量和比例 D．非必需氨基酸的种类 8、、负氮平衡见于： A．营养充足的儿童 B．营养充足的孕妇 C．疾病恢复期的病人 D．晚期癌症的病人 9、重金属粒子进入体内与酶活性中心结合的基团是： A、—OH B、—SH C、—COOH D、—NH2 10、全酶是指 A、酶蛋白一底物复合物 B、酶蛋白—抑制剂复合物 C、酶蛋白一别构剂复合物 D、酶蛋白---辅助因子 11、转氨酶的辅酶中含有下列何种维生素 A、维生素BI B、维生素B2 C、维生素C D、维生素B6 12、组成核酸的基本的单位是： 13、核酸中核苷酸之间的连接方式是： A．2′，3′磷酸二酯键 B．糖苷键 C．3′，5′磷酸二酯键 D．2′，5′磷酸二酯键 14、tRNA的三级结构是： A、三叶草形结构 B、倒L-形结构 C、双螺旋结构 D、发夹样结构 15、某DNA分子中腺嘌呤的含量为20%，则胞嘧啶的含量应为： A．15% B．30% C．40% D．35% 16、测得某一蛋白质样品的含氮量为0.5克,此样品约含蛋白质多少克? A．3.125 B．312.5 C．4.25 D．5.25 17、成熟红细胞的能量来源方式是： A.糖的有氧氧化 B.糖的无氧氧化 C.氧化磷酸化 D.糖异生作用 18、、生物体内ATP最主要的来源是： A．糖酵解 B．糖异生作用 C．磷酸戊糖途径 D．糖的有氧氧化 19、生物氧化的特点有哪些 20、生物转化的结果，下列那项是错误的： A．极性增强，水溶性增强 B．有利于排出体外 C．生物学活性发生改变 D．均能经转化能达到解毒的目的
尿沉渣的临床意义
尿沉渣分析相关知识 １、尿液分析的内容 尿液分析可以分为物理学检测，干化学检测和沉渣镜检三部分内容。 物理学检测包括观察尿液的颜色、透明度、气味，也可以通过一些简单的仪器对尿液的比重和肾透压进行检测。 干化学检测是通过试纸条与尿液的反应，检测出尿液的蛋白质、葡萄糖、酸碱度、酮体、胆红素、尿胆元、亚硝酸盐、红细胞、白细胞及比重等。 显微镜发明以后，通过显微镜可以观测到所有的有形成分，如红白细胞、管型、结晶体、细菌、寄生虫、真菌、精子、黏液等，出现了至今在尿沉渣领域被奉为“金标准”的镜检法。 ２、尿沉渣分析的临床意义 尿沉渣分析或称尿有形成分分析、或进一步称为尿颗粒计数是尿液分析中不可缺少的重要内容，在临床上对肾脏疾病、泌尿道疾病、循环系统疾病以及感染性疾病等，有重要的诊断和鉴别作用，曾被美国著名的Dahelen Free称为“体外的肾活检”。 ３、尿沉渣标准化进程 ??90年代开始，国外已非常重视尿液分析 ?1995年美国临床检验标准委员会（NCCLS）的文件GP-16A ?1995年日本临床检验标准委员会（JCCLS）的文件GP1-P2 ?1997年欧洲尿液分析协作组提出尿沉渣检查的相关文件 ?2000年中国CCCLS制定《尿液物理学、化学及沉渣分析标准化》 4、尿沉渣各有形成份临床意义一览表： 沉渣有形成份主要临床意义 红细胞 1、肾外疾病：见于急、慢性胰腺炎、输卵管炎、疟疾、亚急性细菌性心内膜炎、恶性高血压、白血病和坏血病等。 ２、下尿道疾病：见于急、慢性感染，结石、肿瘤、尿道狭窄、药物治疗后膀胱出血等。 ３、肾脏疾病：见于急慢性肾小球肾炎，肾盂肾炎、与药物有关的间质性肾炎、肾肿瘤、肾结石、肾结核、肾静脉栓塞、肾盂积水、多囊肾等。 ４、药物引起的中毒反应：如磺胺药物治疗、水杨酸以及不合适的抗凝治疗。
胆红素的代谢过程
胆红素的代谢过程集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]
胆红素的代谢过程一、胆红素的来源与生成 胆红素的来源不外以下几种：①大部分胆红素是由衰老红细胞破坏、降解而来，由衰老红细胞中血红蛋白的辅基血红素降解而产生的胆红素的量约占人体胆红素总量的75％；②小部分胆红素来自组织(特别是肝细胞)中非血红蛋白的血红素蛋白质(如细胞色素p450、细胞色素b5、过氧化氢酶等)的血红素辅基的分解；③极小部分胆红素是由造血过程中，骨髓内作为造血原料的血红蛋白或血红素，在未成为成熟细胞成分之前有少量分解，即无效造血所产生的胆红素。 胆红素的生成过程包括：①衰老的红细胞在单核吞噬细胞系统被破坏，首先除去珠蛋白而分离出血红素；②血红素在单核吞噬细胞内微粒体的血红素加氧酶的作用下，形成胆绿素，③胆绿素在胆绿素还原酶催化下生成胆红素。 胆红素可进入血液循环，在血浆内主要以胆红素-白蛋白复合体的形式存在和运输。除白蛋白外，α1-球蛋白也可与胆红素结合。一般说白蛋白与胆红素的结合是可逆的。当血浆胆红素浓度正常时，1分子白蛋白通常结合1分子胆红素，而当血浆胆红素增多时则可结合2分子胆红素。正常成人每100ml血浆中的白蛋白结合胆红素的能力约为20-25mg，所以正常情况下白蛋白结合胆红素的潜力很大。由于胆红素与白蛋白较紧密地结合成复合体，一方面改变了胆红素的脂溶性，另一方面又限制了它自由通过各种生物膜的能力，不致有大量游离胆红素进入组织细胞而产生毒性作用。 二、肝对胆红素的摄取、转化及排泄 当胆红素随血液运输到肝后，由于肝细胞具有极强的摄取胆红素的能力，故可迅速被肝细胞摄取。肝迅速地选择性地从血浆摄取胆红素的能力与下述机制有关。 ⒈位于血窦表面的肝细胞膜上可能有特异的载体蛋白系统，胆红素等有机阴离子与膜上载体结合后，即从膜的外表面转移至内表面，然后进入胞质。当白蛋白-胆红素复合物通过肝窦壁时，胆红素与白蛋白解离，只有胆红素被肝细胞所摄取。 ⒉肝细胞内有两种色素受体蛋白即y蛋白和z蛋白y蛋白与胆红素亲和力较高，在肝细胞中含量较大，约占肝细胞浆蛋白的5％，是肝细胞内主要的胆红素载体蛋白；y蛋白与z蛋白利用其对胆红素的高亲和力，从细胞膜上接受进入胞质的胆红素，并将它运至内质网。 肝细胞对胆红素的转化在滑面内质网上进行。在葡萄糖醛酸基转移酶的催化下，胆红素被转化为葡萄糖醛酸胆红素，胆红素在肝细胞内经结合转化后，其理化性质发生了变化，从极性很低的脂溶性的未结合胆红素变为极性较强的水溶性结合物-葡萄糖醛酸胆红素，从而不易透过生物膜。这样既起到解毒作用，又有利于胆红素从胆道排泄。在肝细胞内，胆红素通过其丙酸基与葡萄糖醛酸结合，主要生成双葡萄糖醛酸胆红素。
总结总、直接胆红素的检测方法
血清总胆红素和直接（结合）胆红素测定 目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。 改良咖啡因（J-G）法： 一、实验原理 血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，生成紫色的偶氮胆红素；在同样条件下，未结合胆红素须有加速剂破坏胆红素氢键后才能与重氮试剂反应。咖啡因、苯甲酸钠作为加速剂，醋酸钠缓冲液可维持反应的PH值同时兼有加速作用。叠氮钠破坏剩余重氮试剂，终止结合胆红素测定管的偶氮反应。最后加入碱性酒石酸钠，在碱性条件下，紫色偶氮胆红素转变为蓝色偶氮胆红素，使最大吸光度由530nm转移到598nm，此时，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度可忽略不计，使测定的灵敏度和特异性增加。最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。 二、实验方法 （一）器材 试管，刻度吸管，分光光度计，37℃水浴箱。 （二）试剂 1．咖啡因-苯甲酸钠试剂无水醋酸钠41g，苯甲酸钠37.5g，EDTANa2 0.5g，溶于约500mL 的蒸馏水中，再加入咖啡因25g，搅拌至完全溶解(不可加热)，然后加蒸馏水稀释至1000mL，混匀，过滤后放置棕色试剂瓶中，室温保存可稳定6个月。 2. 5g/L 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠5.0g，加蒸馏水溶解并稀释至100mL，若发现溶液呈淡黄色时，应丢弃重配。 3. 5g/L 对氨基苯磺酸溶液：对氨基苯磺酸（NH2C6H4SO3H·H20）5.0g，加于约800mL 蒸馏水中，加浓盐酸15mL，待完全溶解后，加蒸馏水至1000mL。 4. 重氮试剂临用前，取5g/L 亚硝酸钠溶液（试剂2）0.5mL 与5g/L 对氨基苯磺酸溶液（试剂3）20mL 混合。 5. 5g/L 叠氮钠溶液：叠氮钠0.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100mL。 6. 碱性酒石酸钠溶液：氢氧化钠75g，酒石酸钠(Na2C4H4O6·2H2O)263g，加蒸馏水溶解并稀释至1000mL，混匀，置塑料瓶中，室温保存可稳定6个月。 7.胆红素标准液可购买，也可按以下方法配制： （1）稀释血清：收集不溶血、无黄疽、清晰的血清过滤作为混合血清稀释剂。取过滤血清1.0ml，加生理盐水24ml，混匀。在分光光度计中，以比色杯光径1cm，波长414nm，用生理盐水调零，读取的吸光度应小于0.100，波长460nm 处读取的吸光度应小于0.040。（2）171umol/L胆红素标准液：称取符合标准的胆红素（MW:584.68）10mg，加入二甲基亚砜1ml，玻棒搅匀，加入0.05mol/LNa2CO3溶液2ml，使胆红素完全溶解。移入100ml 容量瓶，用稀释血清洗涤数次并移入容量瓶中，缓慢加入0.1mol/LHCl溶液2ml（边加边缓慢摇动，切勿产生气泡），最后用稀释血清稀释至100ml。避光，4℃保存，三天内有效，最好当天绘制标准曲线。 （三）步骤 1. 取试管3支，标明总胆红素管、结合胆红素管和空白管，然后按下表操作： 试剂(ml) 总胆红素管结合胆红素管空白管 血清0.2 0.2 0.2
尿常规检查及其临床意义
WBC镜检（白细胞镜检） RBC镜检（红细胞镜检） 鳞状上皮（鳞状上皮细胞【镜检】） SG（尿比重） PH（尿酸碱度） LEU（白细胞【生化】） NIT（亚硝酸盐） PRO（尿蛋白） GLU（尿糖） KET（尿酮体） UBG（尿胆原） BIL（胆红素） ERY(尿红细胞【生化】) 尿常规在临床上是不可忽视的一项初步检查，不少肾脏病变早期就可以出现蛋白尿或者尿沉渣中有形成分。一旦发现尿异常，常是肾脏或尿路疾病的第一个指征，亦常是提供病理过程本质的重要线索。近年来有不少人强调，负责医生应自己动手做患者尿常规检查，是有利于医生发现肾脏疾病的一般诊断方法。 尿常规检查内容包括尿的颜色、透明度、酸碱度、红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、蛋白质、比重及尿糖定性。 (1)尿色：正常尿液的色泽，主要由尿色素所致，其每日的排泄量大体是恒定的，故尿色的深浅随尿量而改变。正常尿呈草黄色，异常的尿色可因食物、药物、色素、血液等因素而变化。 (2)透明度：正常新鲜尿液，除女性的尿可见稍混浊外，多数是清晰透明的，若放置过久则出现轻度混浊，这是由于尿液的酸碱度改变，尿内的粘液蛋白、核蛋白等逐渐析出之故。 (3)酸碱度：正常尿为弱酸性，也可为中性或弱碱性，尿的酸碱度在很大程度上取决于饮食种类、服用的药物及疾病类型。 (4)细胞：在临床上尿中有重要意义的细胞为红细胞、白细胞及小圆上皮细胞。①红细胞。正常人尿中可偶见红细胞，离心沉淀后每高倍镜视野不超过3个。若尿中出现多量红细胞，则可能由于肾脏出血、尿路出血、肾充血等原因所致。剧烈运动及血液循环障碍等，也可导致肾小球通透性增加，而在尿中出现蛋白质和红细胞。②白细胞。正常人尿中有少数白细胞存在，离心尿每高倍镜视野不超过5个。异常时，尿中含有大量白细胞，表示泌尿道有化脓性病变，如肾盂肾炎、膀胱炎及尿道炎等。③小圆形上皮细胞。正常尿液中，有时可发现少数脂肪变性的小圆形上皮细胞。若肾小球肾炎时，尿中上皮细胞增多。若肾小管有病变时，可出现许多小圆形上皮细胞。 (5)管型：正常尿液中仅含有极微量的白蛋白，没有管型，或偶见少数透明管型。若尿中出现1个管型，可以反映至少1个肾单位的情况，是肾脏疾病的一个信号，对诊断具有重要意义。 (6)蛋白质：一般认为正常人每日排出蛋白质量为40～80毫克，最多100～150毫克，常规定性检测为阴性。病理性蛋白尿见于肾小球肾炎、肾盂肾炎、急性肾功能衰竭、高血压肾病、糖尿病肾病、妊娠中毒症、狼疮性肾炎、放射性肾炎及肾内其它炎症病变、中毒、肿瘤等。
胆红素的代谢过程
胆红素的代谢过程 一、胆红素的来源与生成 胆红素的来源不外以下几种：①大部分胆红素是由衰老红细胞破坏、降解而来，由衰老红细胞中血红蛋白的辅基血红素降解而产生的胆红素的量约占人体胆红素总量的75％；②小部分胆红素来自组织(特别是肝细胞)中非血红蛋白的血红素蛋白质(如细胞色素p450、细胞色素b5、过氧化氢酶等)的血红素辅基的分解；③极小部分胆红素是由造血过程中，骨髓内作为造血原料的血红蛋白或血红素，在未成为成熟细胞成分之前有少量分解，即无效造血所产生的胆红素。 胆红素的生成过程包括：①衰老的红细胞在单核吞噬细胞系统被破坏，首先除去珠蛋白而分离出血红素；②血红素在单核吞噬细胞内微粒体的血红素加氧酶的作用下，形成胆绿素，③胆绿素在胆绿素还原酶催化下生成胆红素。 胆红素可进入血液循环，在血浆内主要以胆红素-白蛋白复合体的形式存在和运输。除白蛋白外，α1-球蛋白也可与胆红素结合。一般说白蛋白与胆红素的结合是可逆的。当血浆胆红素浓度正常时，1分子白蛋白通常结合1分子胆红素，而当血浆胆红素增多时则可结合2分子胆红素。正常成人每100ml血浆中的白蛋白结合胆红素的能力约为20-25mg，所以正常情况下白蛋白结合胆红素的潜力很大。由于胆红素与白蛋白较紧密地结合成复合体，一方面改变了胆红素的脂溶性，另一方面又限制了它自由通过各种生物膜的能力，不致有大量游离胆红素进入组织细胞而产生毒性作用。 二、肝对胆红素的摄取、转化及排泄 当胆红素随血液运输到肝后，由于肝细胞具有极强的摄取胆红素的能力，故可迅速被肝细胞摄取。肝迅速地选择性地从血浆摄取胆红素的能力与下述机制有关。 ⒈位于血窦表面的肝细胞膜上可能有特异的载体蛋白系统，胆红素等有机阴离子与膜上载体结合后，即从膜的外表面转移至内表面，然后进入胞质。当白蛋白-胆红素复合物通过肝窦壁时，胆红素与白蛋白解离，只有胆红素被肝细胞所摄取。 ⒉肝细胞内有两种色素受体蛋白即y蛋白和z蛋白y蛋白与胆红素亲和力较高，在肝细胞中含量较大，约占肝细胞浆蛋白的5％，是肝细胞内主要的胆红素载体蛋白；y蛋白与z蛋白利用其对胆红素的高亲和力，从细胞膜上接受进入胞质的胆红素，并将它运至内质网。 肝细胞对胆红素的转化在滑面内质网上进行。在葡萄糖醛酸基转移酶的催化下，胆红素被转化为葡萄糖醛酸胆红素，胆红素在肝细胞内经结合转化后，其理化性质发生了变化，从极性
总胆红素测定试剂盒(重氮盐法)产品技术要求艾威德
总胆红素测定试剂盒（重氮盐法） 适用范围：用于体外定量测定人血清中总胆红素的含量。 1.1 包装规格 a) 试剂1：1×20mL 试剂2：1×5mL b) 试剂1：2×40mL 试剂2：1×20mL c) 试剂1：4×60mL 试剂2：2×30mL d) 试剂1：2×80mL 试剂2：2×20mL 1.2 主要组成成分 1.2.1试剂1主要组分 三羟甲基氨基甲烷缓冲液100 mmol/L 氨基磺酸30 mmol/L 二甲基亚砜10 mmol/L 表面活性剂及稳定剂适量 1.2.2试剂2主要组分 三羟甲基氨基甲烷缓冲液100 mmol/L 亚硝酸钠60 mmol/L 表面活性剂及稳定剂适量 2.1 外观 试剂1应为无色透明液体，试剂2应为无色或淡黄色透明液体。 2.2 试剂装量 应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白吸光度 在546nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.5。 2.4 分析灵敏度 测定TBIL含量为100 μmol/L样本时，其△A应≥0.01。 2.5 线性范围 2.5.1在（0，500）μmol/L范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990； 2.5.2测试浓度在（0，50] μmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±5 μmol/L； 测试浓度在（50，500）μmol/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.6 测量精密度 2.6.1重复性：用两个水平质控血清重复测试其变异系数（CV）应不超过5％。 2.6.2批间差：抽取3个不同批号试剂，对同一份样本进行重复测定，相对极差≤10％。 2.7 准确度 在样本中加入一定量的纯品，计算回收率，应在85%～115% 范围内。 2.8 稳定性 取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月的试剂进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
浅谈尿沉渣检验在泌尿系统疾病诊断中的重要性及临床意义
浅谈尿沉渣检验在泌尿系统疾病诊断中的重要性及临床意义 发表时间：2015-04-30T11:53:40.077Z 来源：《医药前沿》2014年第35期供稿作者：吕承旻 [导读] 尿沉渣检验在泌尿系统疾病患者的临床诊断中具有非常重要的意义，值得在临床上进一步推广。吕承旻（广西贵港市第二人民医院广西贵港 537132） 【摘要】目的观察和分析尿沉渣检验在泌尿系统疾病患者临床诊断中的意义和重要性。方法选取我院2014年1月~2014年12月间收治的内科住院患者的新鲜尿液标本400例进行研究，对其进行离心去除上清液后，取残留的沉渣进行尿沉渣检验。结果本组400例新鲜尿液标本的检验中，共有39例标本经尿沉渣检查为镜下血尿，检出率为（9.75%），有2例红细胞形态异常，检出率（0.5%），经调查临床资料显示，以上患者均具有不同程度的慢性肾炎和肾小球肾炎。有19例标本经显微镜检查显示白细胞满视野，且检出细菌，检出率（4.75%），属于泌尿系统感染。有3例标本经显微镜检查显示有颗粒管型和透明管型，检出率（0.75%），属于肾病综合征和糖尿病肾病。结论尿沉渣检验在泌尿系统疾病患者的临床诊断中具有非常重要的意义，值得在临床上进一步推广。【关键词】尿沉渣检验泌尿系统疾病红细胞白细胞临床意义 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）35-0131-02 泌尿系统疾病不仅能够由机体的其它系统病变引发，还能够对机体的其它系统甚至全身造成影响，患者在临床上主要表现为泌尿系统疼痛、肿块及排尿改变等泌尿系统症状，同时也可伴发水肿、贫血及高血压等[1]。大量的临床试验表明，尿液和尿液沉渣的分析对于泌尿系统疾病的临床诊断具有非常重要的临床意义。其中尿液分析容易受到其它因素的感染，导致无法进行准确的分析，而尿沉渣检验可以有效排除干扰因素，为临床诊断提供准确可靠的依据[2]。本次研究通过选取我院2014年1月~2014年12月间收治的内科住院患者的400例新鲜尿液标本进行研究，对其尿沉渣检验资料进行回顾性分析总结如下： 1 一般资料及方法 1.1 一般资料 本次研究选取我院2014年1月~2014年12月间收治的内科住院患者的新鲜尿液标本400例进行研究。标本均取自住院患者清晨起床后的首次尿液，属于较酸化或浓缩的标本，其中的上皮细胞、管型及血细胞等结构均比较完整。留置尿液标本前叮嘱患者仔细清洗外阴，将前段尿液排出后,使用干净的尿杯取中段尿液送检。女性月经期间禁止留置标本，防止受到月经血污染标本。 1.2 检验方法 （1）将送检的尿液标本轻摇混匀充分后，取10ml逐渐倒入离心管中，注意不可倒满试管，防止混匀吸样时发生溢出，进而导致标本间互相污染。（2）在标本中放入尿试带，待其充分浸入之后取出滤干后置于尿干化学分析仪中进行检测。注意不可用手碰触试带的实验区，使用完毕后将瓶盖拧紧，置于30℃阴凉干燥环境下储存。（3）使用水平式离心机将尿管取出，离心半径为15cm，转速为1500r/min，相对离心力为400g，离心5min后去除上清液，取0.2ml尿液沉渣，混匀后取1滴于载玻片上，低倍镜观察整体后改用高倍镜对各个细胞的管型形态进行辨认。（4）报告方法①细胞成分：平均值/HPF，对于标本中出现红细胞异常的，应该详细标明红细胞的百分数和形态；②管型成分：最低~最高/LPE，对于检查疑似管型的物质可以通过滴加醋酸的方法进行区分。因为管型包括了蛋白质成分，滴入醋酸后会使管型物质变清晰，而假管型则会消失；③结晶成分：当其占据视野的25%时为+，50%时为++，75%时为+++，100%时为++++，对于具有草酸钙结晶、尿酸盐解决、胆固醇结晶和磷酸盐结晶等有意义的结晶应注明类型[3]；④在进行报告时，应注明离心沉渣镜检；⑤当镜检时发现有真菌和细菌时，应在报告中注明，且建议进行尿液真菌及细菌培养。 2 结果 本组400例新鲜尿液标本的检验中，共有39例标本经尿沉渣检查为镜下血尿，检出率为（9.75%），有2例红细胞形态异常，检出率（0.5%），经调查临床资料显示，以上患者均具有不同程度的慢性肾炎和肾小球肾炎。有19例标本经显微镜检查显示白细胞满视野，且检出细菌，检出率（4.75%），属于泌尿系统感染。有3例标本经显微镜检查显示有颗粒管型和透明管型，检出率（0.75%），属于肾病综合征和糖尿病肾病。 3 讨论 健康人群尿液中包含的红细胞通常都比较少，平均每个视野中均小于3个，当超过3个时即代表出现异常，并且根据尿液中红细胞的形态来判断属于肾内出血或肾外出血。70%以上的红细胞变形来自于肾内出血，红细胞形态正常的患者属于非肾性血尿。当患者的尿液表现为洗肉水样时，代表患者的泌尿系统存在严重的疾病，应安排其进行进一步的深度检查，查明原因[4]。尿沉渣检验在泌尿系统疾病患者临床诊断中的意义主要包括以下几点：①尿沉渣检验对于尿蛋白和红细胞的定量检测具有较高的灵敏度，所以临床上测定泌尿系统患者的尿液时应将尿沉渣检验结果作为依据；②尿沉渣检验不仅可以检出管型的存在，还能够对管型的类别进行区分。可以通过在尿沉渣中滴入一滴较黄的人血清的方式对管型进行染色，从而提高管型检验的准确性[5]；③尿沉渣检验的优点主要在于结果可靠、准确及可比性强等。综上所述，尿沉渣检验在泌尿系统疾病患者的临床诊断中具有非常重要的意义，值得在临床上进一步推广。参考文献 [1]何超,曹伟华,常娟锋等.64排容积CT尿路造影对泌尿系统疾病的诊断价值[J].实用放射学杂志,2014,30(1):90-93. [2]罗娟,阳海平,李秋等.尿液分析在大规模筛查小儿无症状泌尿系统疾病中的作用[J].重庆医学,2010,39(5):596-597. [3]https://www.wendangku.net/doc/825810512.html,/NSTLQK_NSTL_QK.aspxBednarek AK,Laflin KJ,Daniel RL. WWOX,a novel WW domain-containing protein mapping to human chromosome 16q23.3-24.1,a region frequently affected in breast Cancer[J].Cancer Research,2010, (08):2140-2145. [4]林逾峰.泌尿系统疾病所致早期肾损害的尿液改变[J].中国保健营养(上旬刊),2013,23(4):1635-1636. [5]韦爱青.86例尿沉渣检验结果分析[J].吉林医学,2010,31(33): 6105.
胆红素及其代谢
第四节胆红素代谢与黄疸 一、胆红素的来源、生成与运输 （一）胆红素的来源与生成 用14C标记的甘氨酸的示踪试验及其他实验研究的结果表明，胆红素的来源不外以下几种：①大部分胆红素是由衰老红细胞破坏、降解而来，由衰老红细胞中血红蛋白的辅基血红素降解而产生的胆红素的量约占人体胆红素总量的75％；②小部分胆红素来自组织（特别是肝细胞）中非血红蛋白的血红素蛋白质（如细胞色素P450、细胞色素b5、过氧化氢酶等）的血红素辅基的分解；③极小部分胆红素是由造血过程中，骨髓内作为造血原料的血红蛋白或血红素，在未成为成熟细胞成分之前有少量分解，即无效造血所产生的胆红素。 胆红素的生成过程包括：①衰老的红细胞在单核吞噬细胞系统被破坏，首先除去珠蛋白而分离出血红素；②血红素在单核吞噬细胞内微粒体的血红素加氧酶的作用下，将血红素卟啉环氧化断裂，释放出CO和铁，并形成胆绿素，血红素加氧酶存在于肝、脾、骨髓或巨噬细胞等单核吞噬细胞系统细胞中，在微粒体内属混合功能氧化酶，反应需要分子氧参加，并需要NADPH、NADPH-细胞色素P450还原酶共同存在；③胆绿素在胆绿素还原酶催化下生成胆红素Ⅸa，胆绿素还原酶存在于单核吞噬细胞系统细胞内的可溶性部分，以NADPH为辅酶。 在体内从血红素形成胆绿素，继而还原为胆红素，并进一步被结合、排泄，这样复杂的过程总共只需1-2min。胆红素生成过程如图10-1所示。 图10-1 胆红素生成过程 （二）胆红素在血液中的运输 在单核吞噬细胞中生成的胆红素可进入血液循环，在血浆内主要以胆红素-白蛋白复合体的形式存在和运输。除白蛋白外，α1-球蛋白也可与胆红素结合。一般说白蛋白与胆红素的结合是可逆的。当血浆胆红素浓度正常时，1分子白蛋白通常结合1分子胆红素，而当血浆胆红素增多时则可结合2分子胆红素。正常成人每100ml血浆中的白蛋白结合胆红素的能力约为20-25mg，所以正常情况下白蛋白结合胆红素的潜力很大。由于胆红素与白蛋白较紧密地结合成复合体，一方面改变了胆红素的脂溶性，另一方面又限制了它自由通过各种生物膜的能力，不致有大量游离胆红素进入组织细胞而产生毒性作用。据报道有一部分胆红素与白蛋白共价结合，可能是白蛋白分子中赖氨酸残基的ε-氨基与胆红素一个丙酸基的羧基形成酰胺键，在血中停滞时间长，称为δ-胆红素。δ-胆红素在肝细胞损伤及胆汁郁滞等高结合胆红素性黄疸时出现，与重氮试剂呈直接反应，可用离子交换柱层析法检测。目前认为δ-胆红素检测的临床意义是：①δ-胆红素与急性黄疸性肝炎的恢复期密切相关，恢复期总胆红素下降，尤其结合胆红素明显降低，而δ-胆红素的相对百分比却显著增高，最后达总胆红素的80％-90％以上，这种表现可作为对急性黄疸性肝炎恢复期观察的可靠指征；②严重肝功不全病人血清中δ-胆红素常小于总胆红素的35％，死前可降至20％以下，患者恢复后δ-
总胆红素测定试剂盒(重氮法)
总胆红素测定试剂盒（重氮法） 一、胆红素的代谢 正常人血中胆红素来源有以下几种 （1）大部分来自于衰老RBC破坏后的Hb衍化而成 （2）小部分来自于非Hb的血红素蛋白质的血红素辅基分解，即分路胆红素 （3）极少部分来自于骨髓无效造血所产生的胆红素 胆红素与ALB结合后为肝细胞摄取并转变为水溶性的结合 胆红素，排至胆汁中，结合胆红素在肠道中被细菌作用还原成尿胆原，在肠道被吸收入门静脉，大部分肠肝循环，另一部分入体循环，经肾排泄入尿。 因此，在胆红素代谢的上述途径中有任一环节受阻，均可导致结合或非结合胆红素升高而产生黄疸。 二、胆红素测定的意义 测定胆红素有助于鉴别溶血性黄疸，肝细胞性黄疸及梗阻性黄疸 联合其它检测项目还可鉴别肝内淤胆和肝外梗阻性黄疸 溶血性黄疸肝细胞性黄疸梗阻性黄疸 血浆总胆红素（mg/dl）＜5 1-70 不完全梗阻10~15，完全梗阻20~30
未结合胆红素高度增加增加增加 结合胆红素正常增加高度增加 尿胆素定性阴性阳性强阳性 尿中胆素原增多不定或升高减少或消失 粪中胆素原增多减少减少或消失 三、测定原理 血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素，所以称为直胆，又称1min胆红素测定，非结合胆红素测定时要以咖啡因、苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键再与重氮试剂反应，抗坏血酸破坏剩余重氮试剂，加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转到598nm，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略不计，使灵敏度和特异性升高，最后形成的绿色是由兰色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。 试剂：（1）咖啡因（2）碱性酒石酸钠液（3）亚硝酸钠液 （4）对氨基苯磺酸溶液（5）重氮试剂（将3、4混合） （6）5g/L NaN3 （7）胆红素标准液 操作： 总胆管结合管对照管
总胆红素测定试剂盒(钒酸盐氧化法)标准化操作规程TB-v-SOP
总胆红素测定试剂盒（钒酸盐氧化法）标准化操作规程 1 目的 规实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。 2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。 3 适用围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中的总胆红素的浓度。 4 检验方法 本试剂盒采用钒酸盐氧化法测定总胆红素的浓度。 5 检验原理 pH值接近3时，在钒酸盐、加速剂和表面活性剂的作用下，总胆红素被氧化成胆绿素，胆红素在450nm处的特异性吸光度下降。通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化，即可计算出样品中总胆红素的含量。 6 检验标本要求 6.1标本类型: 使用新鲜血清样本，不要使用溶血及乳糜血样本。 6.2标准运输:室温条件下运输。 7 试剂及配套品 7.1试剂来源 迪瑞医疗科技股份总胆红素试剂盒（钒酸盐氧化法） 7.3试剂的稳定性与贮存： 7.3.1试剂在2?C ～8?C条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期12个月。 7.3.2后在2～8℃可稳定30天。 8 实验仪器及性能指标 8.1 实验仪器 迪瑞CS系列全自动生化分析仪 8.2试剂性能指标 8.2.1试剂空白：试剂空白吸光度A≤0.050 8.2.2分析灵敏度：测试1μmol/L被测物时，吸光度变化△A＜-0.0002。
8.2.3线性围： 0～684.0μmol/L，线性相关系数r值≥0.9900；线性围在0～187.0μmol/L时，绝对偏差应不超过±28.05μmol/L；线性围在187.0～684.0μmol/L时，相对偏差应不超过±15%。 8.2.4准确度：相对偏差应在±10％。 8.2.5精密度： 重复性： CV≤5.0% 批间差： R≤6.0% 9 校准 9.1校准品来源 迪瑞医疗科技股份生产的临床化学校准血清 9.2校准品的组成：人血清 9.4校准品使用注意事项 9.4.1 若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。 9.4.2 不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。9.4.3 请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。 9.4.4 胆红素对光敏感，因此应将校准血清置于避光冷藏处。复溶的校准血清中的胆红素在2～8℃下至少可以稳定8小时；勿置于15～25℃的温度下保存，勿冷冻。 9.5 校准程序： 使用迪瑞公司的临床化学校准血清，按仪器使用说明书进行校准。 10 质量控制 10.1质控品来源 迪瑞医疗科技股份生产的临床化学质控血清(水平I和水平II) 10.2质控品组成：人血清 10.3质控品存贮 未复溶的校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定至标签失效期。 复溶后校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定7天；15～25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。 10.4质控品使用注意事项 10.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。 10.4.2请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。 10.4.3 因批与批之间的质控血清赋值不同，所以不同批号的质控血清不能当做
尿常规检查及其临床意义
尿常规检查及其临床意义 WBC镜检（白细胞镜检） RBC镜检（红细胞镜检） 鳞状上皮（鳞状上皮细胞【镜检】） SG（尿比重） PH（尿酸碱度） LEU（白细胞【生化】） NIT（亚硝酸盐） PRO（尿蛋白） GLU（尿糖） KET（尿酮体） UBG（尿胆原） BIL（胆红素） ERY(尿红细胞【生化】) 尿常规在临床上是不可忽视的一项初步检查，不少肾脏病变早期就可以出现蛋白尿或者尿沉渣中有形成分。一旦发现尿异常，常是肾脏或尿路疾病的第一个指征，亦常是提供病理过程本质的重要线索。近年来有不少人强调，负责医生应自己动手做患者尿常规检查，是有利于医生发现肾脏疾病的一般诊断方法。 尿常规检查内容包括尿的颜色、透明度、酸碱度、红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、蛋白质、比重及尿糖定性。 (1)尿色：正常尿液的色泽，主要由尿色素所致，其每日的排泄量大体是恒定的，故尿色的深浅随尿量而改变。正常尿呈草黄色，异常的尿色可因食物、药物、色素、血液等因素而变化。 (2)透明度：正常新鲜尿液，除女性的尿可见稍混浊外，多数是清晰透明的，若放置过久则出现轻度混浊，这是由于尿液的酸碱度改变，尿内的粘液蛋白、核蛋白等逐渐析出之故。 (3)酸碱度：正常尿为弱酸性，也可为中性或弱碱性，尿的酸碱度在很大程度上取决于饮食种类、服用的药物及疾病类型。 (4)细胞：在临床上尿中有重要意义的细胞为红细胞、白细胞及小圆上皮细胞。①红细胞。正常人尿中可偶见红细胞，离心沉淀后每高倍镜视野不超过3个。若尿中出现多量红细胞，则可能由于肾脏出血、尿路出血、肾充血等原因所致。剧烈运动及血液循环障碍等，也可导致肾小球通透性增加，而在尿中出现蛋白质和红细胞。②白细胞。正常人尿中有少数白细胞存在，离心尿每高倍镜视野不超过5个。异常时，尿中含有大量白细胞，表示泌尿道有化脓性病变，如肾盂肾炎、膀胱炎及尿道炎等。③小圆形上皮细胞。正常尿液中，有时可发现少数脂肪变性的小圆形上皮细胞。若肾小球肾炎时，尿中上皮细胞增多。若肾小管有病变时，可出现许多小圆形上皮细胞。 (5)管型：正常尿液中仅含有极微量的白蛋白，没有管型，或偶见少数透明管型。若尿中出现1个管型，可以反映至少1个肾单位的情况，是肾脏疾病的一个信号，对诊断具有重要意义。 (6)蛋白质：一般认为正常人每日排出蛋白质量为40～80毫克，最多100～150毫克，常规定性检测为阴性。病理性蛋白尿见于肾小球肾炎、肾盂肾炎、急性肾功能衰竭、高血压肾病、糖尿病肾病、妊娠中毒症、狼疮性肾炎、放射性肾炎及肾内其它炎症病变、中毒、肿瘤等。
生物化学题
考点分析 本章为重点难点章节，知识点多，考点多。以下列出详细考点： 一、蛋白质 （1）元素组成：碳、氢、氧、氮、硫等，各种蛋白质的氮元素含量接近为16%（即每克氮相当于6.25克蛋白质），据此可以通过测定生物样品中的含氮量而推算出样品中蛋白质的大致含量。 （2）蛋白质的基本单位：氨基酸（20种） 必需氨基酸概念：人体需要又不能自身合成，必须由外界供给的氨基酸。 种类:苯丙、蛋、赖、色、苏、亮、异亮、缬。 （3）蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序称为蛋白质的一级结构，它是蛋白质的基本结构。肽键是维持蛋白质一级结构的主要化学键。 （4）二级结构的类型：α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲。 二、蛋白质的理化性质，特别是两性电离、等电点和蛋白质的变性。 2、蛋白质变性：在某些理化条件下，蛋白质空间结构改变，生物活性丧失。 应用：杀菌消毒 3、蛋白质沉淀——应用：重金属中毒抢救。 本章重点掌握酶的概念，酶催化化学反应的特点，酶的活性中心，酶原及酶原激活的意义。另外需要理解影响酶促反应速度的因素。 1．酶：活细胞产生的具有催化活性的蛋白质。 特点：高效、专一、敏感、可调。 2．酶活性中心：酶分子上能结合底物并把底物转化为产物的部位。 3．酶原：没有活性的酶的前身。 酶原激活：酶原变成具有活性的酶的过程。 4．影响酶促反应速度的因素：温度，pH值，底物浓度，酶浓度，激活剂与抑制剂。抑制剂：能降低酶活性但不使酶变性的物质，分为可逆和不可逆两类。 ①、不可逆抑制：抑制剂+酶——→结合牢固，不能用物理方法解除，可用化学方法解除，难解除。 有机磷农药中毒和重金属离子中毒 ②、可逆抑制：抑制剂+酶——→以非共价键结合，可用物理方法解除，易解除 A、竞争性抑制：抑制剂与底物相似，冒充底物，占领活性中心，可以通过增加底物来解除抑制 B、非竞争性抑制：（不相似，不能冒充，不能占领），破坏酶的活性中心以外的基团本章重点掌握如下糖代谢的主要途径的概念及意义。 一、糖酵解：葡萄糖或糖原在无氧或缺氧的条件下，分解生成乳酸并产生少量ATP 的过程。生理意义 ①、机体缺氧时迅速提供急需的能量（肌肉） ②、有些组织不缺氧，但仍以糖酵解作为主要的供能途径。（例如：成熟的红细胞 ③、糖酵解过度同时肝功能障碍引起乳酸堆积和酸中毒 二、有氧氧化：萄糖或糖原在有氧的条件下，彻底分解生成水和二氧化碳并产生大量ATP的过程。生理意义；机体最重要的供能途径