干热提高蛋清粉凝胶性过程中美拉德反应的研究

1-大肠杆菌重组蛋白表达提取及纯化实验(最新整理)

第一天 1、配置LB培养基： 酵母粉15g、胰蛋白胨30g、氯化钠30g，定容至3000ml。调节PH至 7.4（2M NaOH），高压蒸汽灭菌20分钟，37℃保存。分装成15瓶（每瓶200ml）。 2、接种（超净台要提前杀菌通风） 取4瓶上述培养基，每瓶加200μlAMP（1:1000）、60μl菌液。37℃过夜。 第二天 1、扩大培养（超净台） 4瓶扩至16瓶，每瓶培养基加200μlAMP，摇床培养1小时左右。 2、诱导（超净台） 加40μlIPTG，加完后去除封口的除牛皮纸，扎口较松。25℃摇床培养4小时。 3、离心获取菌体 4℃，8000rpm离心25分钟。注意配平。 4、超声波破碎菌体 离心后去上清，向沉淀加入（600mlPB裂解液、300μl溶菌酶、3mlPMSF）。将菌液转入2个烧杯中，冰浴超声波破菌，400W，75次，每次6秒，间隔2秒。离心收集上清液。 600mlPB裂解液：20mM/L PB，10mM/L EDTA，5%甘油，1mM/L DTT，调节PH至7.4。 超声波破碎：首先用去离子水清洗探头，再将盛有菌液的小烧杯置于有冰 水混合物的大烧杯中，冰水界面略高于菌液面即可。探头浸没于菌液中，不可伸入过长。注意破菌过程中由于冰的融化导致的液面变化。 5、抽滤（双层滤纸) 洗胶（GST）。将上述上清液抽滤，滤液与GST胶混合，磁力搅拌过夜。 第三天

1、抽滤蛋白-胶混合液，滤液取样20μl，留电泳。 2、洗杂蛋白，用1×PBS+PMSF(1000:1)约400ml，洗脱若干次，用移液枪吸去上层泡沫（杂蛋白），至胶上无泡沫为止。 3、洗脱目的蛋白，洗脱液加50ml，分3次进行（15+15+15），每次加入后间歇搅拌，自然静置洗脱15分钟，抽滤，勿使胶干，合并洗脱液，取样20μl，留电泳。用洗脱液调零，测OD280。（OD值达到1.5为佳） 4、将洗脱液置于透析袋中（透析袋应提前煮好），将透析袋置于2L透析液1中，加入磁珠置于4℃冰箱内磁力搅拌器上，4小时后换为透析液2。胶的回收：用3M氯化钠溶液（用1×PBS溶液溶解）、1×PBS（无沉淀）洗涤，20%乙醇洗脱，装瓶。 洗脱液：50mM/LTRIS-HCL 、10mM/LGSH 透析液1：20mM/L TRIS-HCL、1mM/L EDTA 、0.15mM/L DTT 透析液2：:0.5mM/L EDTA、1×PBS

大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化

大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化 一可溶性蛋白的纯化 （一）菌体的破碎 1. 仪器与材料：-80℃冰箱；超声波细胞破碎仪；50mM PBS或50mM Tris-HCl pH 7.5；50 ml 离心管；冷冻高速离心机 2.方法 2.1反复冻融 2.1.1收集菌液500ml，等分10份，4000 r/min 4℃离心15min，弃上清。 2.1.2 菌体沉淀中加入相同菌液体积的50mM PBS 或50mM Tris-HCl（选择使蛋白稳定的缓冲液和pH）重悬洗涤一次。 2.1.3 然后按原菌液体积的1/4加入缓冲液重悬菌体，并加入蛋白酶抑制剂PMSF和EDTA(带His标签不加)，PMSF终浓度为100μg/ml, EDTA的终浓度为。取20μl重悬菌液进行电泳，检测蛋白表达的情况（是否表达，是可溶性表达还是包涵体表达）。 2.1.4 将菌液（经检测有表达）在-80度冰冻，室温融解，反复几次（反复冻融三次），由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 2.2超声波处理 (对超声波及热敏感的蛋白慎用) 2.2.1 将反复冻融的菌液（必要时可加入1mg/ml 溶菌酶，缓冲液pH＞8.0，加入后需静置20min），进行超声破碎，超声条件：400W，工作5秒，间隔5秒，重复一定次数，（根据我们的仪器找出一个比较好的工作条件）。直至菌体溶液变清澈为止，大约花费时间。 2.2.2 取少量经超声破碎后的菌液，10000rpm离心10分钟，分别对上清和沉淀进行检测，并用全菌作为阳性对照，检测菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。 注意事项： （1）超声破碎具体条件可根据实验情况而定，要掌握好功率和每次超声时间，降低蛋白被降解的可能。 （2）功率大时，每次超声时间可缩短，不能让温度升高，应保持在4度左右，超声时保持冰浴。 （3）菌体破碎后总蛋白浓度的测定可用Bradford法或者紫外吸收法。 （4）可通过SDS-PAGE 电泳观察菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。 二包涵体蛋白的纯化 1菌体的破碎（加溶菌酶处理包涵体效果可能不好，包涵体中总是有残留的溶菌酶，你看看有没有不加溶菌酶的，这个先保留好了） 1.1仪器与材料：超声波细胞破碎仪；20mM PBS或20mM Tris-HCl pH 7.5；裂解液buffer A；溶菌酶10mg/ml；50ml ，15ml离心管；冷冻离心机 1.2 方法 (1) 收集菌液500ml，等分10份，4000 r/min 4℃离心15min，弃上清。

某公司焦炉煤气发电项目(热电联产项目)可行性研究报告(WORD版本)

1、国家计委颁发的《热电联产项目可行性研究技术规定》 2、国家发展计划委员会、国家经******贸易委员会、建设部颁发的计基础（2000）1268号文“关于发展热电联产的规定” 3、国家技术监督局、中华人民共和国建设部联合发布的《小型火力发电厂设计规范》 4、************集团有限公司提交给************工程设计有限公司的可行性研究报告设计委托书 5、************集团有限公司提供的热负荷、焦炉煤气及其它有关设计资料 本报告的设计范围包括以下三部分内容： 1、综合利用自备电厂工程围墙内生产、生产附属、辅助生产工程及有关建筑。 2、热力网工程。 3、编制工程投资估算并做出财务评价。 属于本工程以下内容，由建设单位另行委托其他有关部门完成。 1、工程地质及水文地质报告。

2、环境影响评价报告书。 ******市位于中国东部沿海经******大省******省的中部，是中国环渤海地区一座风格独特的工业城市，是国务院批准的******半岛沿海开放城市，是著名的"******之都"、"******之城"。现辖五区三县，总面积5938平方公里，总人口414.99万。 ******的城市布局独具特色。******、******、******、******、******5个区和******呈梅花状分布，东西南北4个城区距中心城区分别为20公里左右，城乡交错，布局舒展，形成城市组群，被专家称为"******模式"。这种结构有利于促进城乡一体化，缩小城乡差别，有利于发展生产，方便生活。******因此而成为世界大城市协会的会员。1986年，******市作为中国十二大城市之一参加了联合国在西班牙巴塞罗那召开的人口与城市未来会议；1990年又出席了在澳大利亚墨尔本召开的第三届世界大城市会议。近年来，******市突出中心城区建设，城市现代化步伐逐渐加快，建成区面积达到150平方公里。城市美化、绿化和净化水平不断提高，建成区绿化覆盖率达36.1％，人均拥有公共绿地面积8.6平方米。城市基础设施、公共服务和环境配套设施等明显改善；随着******新 区的全面规划建设，******市的城市综合功能将进一步增

生物化学实验报告记录：Westernblotting检测大肠杆菌重组蛋白

生物化学实验报告记录：Westernblotting检测大肠杆菌重组蛋白

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实验三 Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白 一、实验目的 利用Western Blotting技术，定性（或定量）检测苦荞黄酮醇合酶基因（Flavon ol synthase gene, FtFLS）在大肠杆菌表达宿主菌Escherichia coli BL(DE3)中的诱导表达。 二、实验原理 黄酮醇合酶（FLS，EC 1.14.11.23）属于2-ODD家族，催化黄酮醇合成支路中最后一步氧化反应，也是直接合成黄酮醇的反应。FLS可以使二氢黄酮醇在C3链中C2和C3之间氧化形成双键，从而生成黄酮醇：a Dihydroflavonol + 2-oxoglutarate + O2 a Flavonol + succinate + CO2 + H2O。 本实验采用PCR的方法，在苦荞黄酮醇合酶基因（FtFLS）ORF起始密码子前引入Kpn?酶切位点，去掉终止密码并引入Bam H ?酶切位点。克隆引入酶切位点后的FtFLS到表达载体pET-30b(+)质粒中，其表达产物分别在N-末端和C-末端各含有6 ×His标签。重组质粒（pET-30b(+)-FtFLS）经鉴定后转化表达宿主菌E. coli BL21(DE3)并使用IPTG进行诱导表达。收集诱导0 h、2 h、4 h、6 h和8 h的产物，经SDS-PAGE后用于考马斯亮蓝R-250染色或Western blotting分析。 Western blotting的标准流程如下：蛋白质首先通过SDS-PAGE胺凝胶电泳分离，通过电泳转移到固相支持物上（硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜）；将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的非特异性吸附，固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用并通过放射、生色或化学发光的方法进行定位。 本实验采用小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体（Anti-His tag IgG，一抗）与重组FtF LS蛋白的N-末端和C-末端6 ×His发生抗原-抗体特异反应，再利用辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG（peroxidase-Goat Anti- Mouse IgG，二抗）与一抗发生特异结合，最后使用DAB进行显色。DAB即：二氨基联苯胺（3, 3'-diaminobenzidine），是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物。DAB在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。该方法常用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好，在免疫组化，原位杂交，Western blotting等膜显色中

大肠杆菌高效表达重组蛋白策略

大肠杆菌高效表达重组蛋白策略 前言 重组蛋白的制备在蛋白结构分析和医疗应用领域十分重要。药物蛋白的研究需要高纯度的重组蛋白来进行药物动力学和物理化学的研究[1]。重组蛋白在检测酶活、连接配体、蛋白相互作用等生物学领域广泛应用。已经表达出多种重组蛋白被证明有很大的应用潜力[2,3]。通过基因工程改造的方法已经获得了许多性状优良的宿主菌表达系统，尤其是通过大肠杆菌可以大量表达外源基因编码的重组蛋白[4]。但是仍然有两个问题制约着大肠杆菌表达系统对重组蛋白的表达：一个是表达量低，还有一个就是表达错误折叠的蛋白包涵体[5]。蛋白的表达和纯化工艺一直在发展进步，但是超过30%的重组蛋白为不具有生物活性的包涵体，严重影响了重组蛋白的生产应用[6,7]。 在理想条件下，重组蛋白由强启动子进行表达，产生大量的具有生物学活性的可溶性重组蛋白。但是，强启动子会导致重组蛋白的过表达,从而影响宿主菌体的生长并产生包涵体[8]。在某些条件下可以通过变性、复性的方法使包涵体恢复活性[9]，但是复性后的蛋白是否能够完全恢复活性仍然未可知。一般来讲，可以通过表达条件的优化来促进蛋白的可溶性表达，比如：诱导温度、培养基组成、宿主菌的种类。还可以通过多种方案来解决蛋白不溶的问题：蛋白重新折叠[10]，构建融合蛋白[11]。另外想要进一步增加蛋白可溶性可以与分子伴侣共表达[8]或者低温诱导[12]。本文对目前主要的促进蛋白可溶表达的方法进行了比较全面的总结。 1.大肠杆菌表达系统的构建 1.1选择表达宿主菌 对于大规模的表达重组蛋白，一般选择胞表达或者周质空间表达。与周质空间表达相比，胞表达的表达量更高，因此应用更为广泛。在实验研究和实际生产中，已经有很多大肠杆菌表达系统广泛应用于。在表达体系中较为常用的大肠杆菌为B菌株和K12菌株及它们的衍生菌株（表1[13]）。美国国立研究院已经认证了K12菌株的标准性以及安全的使用方案，因此K12菌株在生产应用中具有极大的优势。但是由B菌株演变而来的BL系列菌株与K12相比，突变了lon 和ompT两个基因[14]，因此具有许多表达优势：产物积累少，缺少蛋白酶，防止产物被降解。这些优势使得BL菌株也具有非常广泛的应用[15,16,17]。 通常来讲，针对不同的重组蛋白，宿主菌的选择也是不同的。如果重组蛋白含有大肠杆菌稀有密码子，就需要宿主能够表达针对这些密码子的tRNA，比如

蛋白质凝胶机理

蛋白质凝胶 摘要：凝胶特性是食品蛋白质的重要功能特性，蛋白质的凝胶行为及其流变性质是形成某些食品独特的质构、感官和风味的决定性因素长期以来，人们对蛋白质的凝胶行为进行了广泛深入的研究，但对蛋白质凝胶的机理和凝胶动力学还没有完全了解：本文对当前有关蛋白质凝胶的类型、凝胶过程中蛋白质分子构象的变化、形成蛋白质凝胶的主要作用力和凝胶动力学过程的研究进展作了综述：随着现代分析研究技术的进步，对蛋白质凝胶行为的认识也逐渐深入 关键词：蛋白质，凝胶机理 1 蛋白质凝胶的定义、类型及其凝胶过程中分子构象的变化 蛋白质凝胶的形成可以定义为蛋白质分子的聚集现象，在这种聚集过程中，吸引力和排斥力处于平衡，以至于形成能保持大量水分的高度有序的三维网络结构或基体(matrix)。如果吸引力占主导，则形成凝结物，水分从凝胶基体排除出来。如果排斥力占主导，便难以形成网络结构。 蛋白质凝胶的类型主要决定于蛋白质分子的形状。由于凝胶过程是一个动态过程，也受外界环境的 pH、离子强度及加热的温度和时间的影响。纤维状蛋白质分子，如明胶和肌浆球蛋白凝胶的网络结构由随机的或螺旋结构的多肽链组成。Ledward报道，明胶的凝胶网络为线性分子通过形成连接区而形成凝胶网络。Hermanssan和langton观测到肌浆球蛋白凝胶是由线性分子间形成连接点而构建成三维网络。球蛋白的热凝胶是由仍保持球形结构的蛋白质分子首尾聚集而形成的。Tombs认为球蛋白形成两种类型的凝胶：高度定向有序的“念珠串状”网络结构和随机聚集的网络结构。“念珠串状”凝胶外观透明或半透明，Nakamura报道了大豆蛋白具有这种凝胶的网络结构。这种凝胶是在低离子强度和远离蛋白质等电点pI的条件下形成的。当环境的离子强度较高及pH接近等电点pI时，则形成随机聚集的凝胶。然而大多数球蛋白凝胶都具有这两种类型的凝胶网络，这决定于蛋白质的浓度、环境的pH与离子强度及加热的温度和时间。 蛋白质分子构象的变化是蛋白质分子聚集的先决条件，球蛋白更是如此。在串状网络结构中发现蛋白质分子仍保持球形构象。经典的球形蛋白质分子展开的“两种状态”理论认为仅存住两种状态的蛋白质：未变性的蛋白质和高度变性的无序蛋白质一现在已经证明，存从无序状态向未变性状态展开的路径中明显存在一动态的中间体。已经发现相似的中间体状态存在于低pH(或高pH)的平衡条件下、适当浓度变性剂的条件下和高温度的条件下。这种中间体状态被称为“熔融球蛋白状态”，它被定义为含有与未变性状态相似的二级结构而三级结构展开的紧凑的球形分子。从受热时的未变性状态到熔融球蛋白的转变及这种部分变性的形式主要与热凝胶的形成有关。 2形成蛋白质热凝胶的作用力 蛋白质凝胶是变性的蛋白质分子间排斥和吸引相互作用力相平衡的结果。一般认为，形成和维持蛋白质凝胶的作用力主要是疏水相互作用、氢键、静电相互作用等物理作用力，但含有巯基的蛋白质分子间 SH-SS交换反应也可能对蛋白质的凝胶作用有贡献。 2．1 疏水相互作用 蛋白质受热时包埋的非极性多肽暴露出来，从而增强了I临近多肽非极十牛片段的疏水相互作用：因而，平均疏水性(例如蛋白质中疏水氨基酸的比率)应该影响凝胶的形成过程 I Shimada和Matsushita等报道，含有高于31．5％克分子分数的非极性氨基酸残基

福建华能罗源火电厂工程融资投资立项项目可行性研究报告(中撰咨询)

福建华能罗源火电厂工程立项投资融资 项目 可行性研究报告 (典型案例〃仅供参考) 广州中撰企业投资咨询有限公司

地址：中国〃广州

目录 第一章福建华能罗源火电厂工程项目概论 (1) 一、福建华能罗源火电厂工程项目名称及承办单位 (1) 二、福建华能罗源火电厂工程项目可行性研究报告委托编制单位 (1) 三、可行性研究的目的 (1) 四、可行性研究报告编制依据原则和范围 (2) （一）项目可行性报告编制依据 (2) （二）可行性研究报告编制原则 (2) （三）可行性研究报告编制范围 (4) 五、研究的主要过程 (5) 六、福建华能罗源火电厂工程产品方案及建设规模 (6) 七、福建华能罗源火电厂工程项目总投资估算 (6) 八、工艺技术装备方案的选择 (6) 九、项目实施进度建议 (6) 十、研究结论 (7) 十一、福建华能罗源火电厂工程项目主要经济技术指标 (9) 项目主要经济技术指标一览表 (9) 第二章福建华能罗源火电厂工程产品说明 (15) 第三章福建华能罗源火电厂工程项目市场分析预测 (15) 第四章项目选址科学性分析 (15) 一、厂址的选择原则 (15) 二、厂址选择方案 (16) 四、选址用地权属性质类别及占地面积 (17) 五、项目用地利用指标 (17) 项目占地及建筑工程投资一览表 (17) 六、项目选址综合评价 (18)

第五章项目建设内容与建设规模 (19) 一、建设内容 (19) （一）土建工程 (19) （二）设备购臵 (20) 二、建设规模 (20) 第六章原辅材料供应及基本生产条件 (21) 一、原辅材料供应条件 (21) （一）主要原辅材料供应 (21) （二）原辅材料来源 (21) 原辅材料及能源供应情况一览表 (21) 二、基本生产条件 (23) 第七章工程技术方案 (24) 一、工艺技术方案的选用原则 (24) 二、工艺技术方案 (25) （一）工艺技术来源及特点 (25) （二）技术保障措施 (25) （三）产品生产工艺流程 (25) 福建华能罗源火电厂工程生产工艺流程示意简图 (25) 三、设备的选择 (26) （一）设备配臵原则 (26) （二）设备配臵方案 (27) 主要设备投资明细表 (27) 第八章环境保护 (28) 一、环境保护设计依据 (28) 二、污染物的来源 (29) （一）福建华能罗源火电厂工程项目建设期污染源 (30) （二）福建华能罗源火电厂工程项目运营期污染源 (30)

火力发电厂项目可行性研究报告

火力发电厂项目 第一部分火力发电厂项目总论 总论作为可行性研究报告的首要部分，要综合叙述研究报告中各部分的主要问题和研究结论，并对项目的可行与否提出最终建议，为可行性研究的审批提供方便。 一、火力发电厂项目概况 （一）项目名称 （二）项目承办单位 （三）可行性研究工作承担单位 （四）项目可行性研究依据 本项目可行性研究报告编制依据如下： 1．《中华人民共和国公司法》； 2．《中华人民共和国行政许可法》； 3．《国务院关于投资体制改革的决定》国发（2004）20号； 4．《产业结构调整目录2011版》； 5．《国民经济和社会发展第十二个五年发展规划》； 6．《建设项目经济评价方法与参数（第三版）》，国家发展与改革委员会2006年审核批准施行； 7．《投资项目可行性研究指南》，国家发展与改革委员会2002年 8．企业投资决议； 9．……； 10．地方出台的相关投资法律法规等。

（五）项目建设内容、规模、目标 （六）项目建设地点 二、火力发电厂项目可行性研究主要结论 在可行性研究中，对项目的产品销售、原料供应、政策保障、技术方案、资金总额及筹措、项目的财务效益和国民经济、社会效益等重大问题，都应得出明确的结论，主要包括： （一）项目产品市场前景 （二）项目原料供应问题 （三）项目政策保障问题 （四）项目资金保障问题 （五）项目组织保障问题 （六）项目技术保障问题 （七）项目人力保障问题 （八）项目风险控制问题 （九）项目财务效益结论 （十）项目社会效益结论 （十一）项目可行性综合评价 三、主要技术经济指标表 在总论部分中，可将研究报告中各部分的主要技术经济指标汇总，列出主要技术经济指标表，使审批和决策者对项目作全貌了解。 表1 技术经济指标汇总表

综合能源服务项目可行性研究报告精选版

综合能源服务项目可行 性研究报告 Company number【1089WT-1898YT-1W8CB-9UUT-92108】

综合能源服务项目可行性研究报告 ***设计院 一、概念： 按照专业关联的紧密程度和业务发展模式的相似程度，将能源服务归纳为三类。第一类是能源销售服务，包括售电、售气、售热冷、售油等基础服务，以及用户侧管网运维、绿色能源采购、利用低谷能源价格的智慧用能管理（例如在低谷时段蓄热、给电动汽车充电）、信贷金融服务等深度服务。第二类是分布式能源服务，包括设计和建设运行分布式光伏、天然气三联供、生物质锅炉、储能、热泵等基础服务，以及运维、运营多能互补区域热站、融资租赁、资产证券化等深度服务。第三类是节能减排服务及需求响应服务，包括改造用能设备、建设余热回收、建设监控平台、代理签订需求响应协议等基础服务，和运维、设备租赁、调控空调、电动汽车、蓄热电锅炉等柔性负荷参与容量市场、辅助服务市场、可中断负荷项目等深度服务。 综合能源服务是指将不同种类的能源服务组合在一起，即将能源销售服务、分布式能源服务、节能减排及需求响应服务等三大类组合在一起的能源服务模式。综合能源服务是在国内刚开始发展、有广阔前景的新业态，它意味着能源行业从产业链纵向延伸走向横向互联，从以产品为中心的服务模式转向以客户为中心的服务模式，成为实现国家能源革命的新兴市场力量。

二、相关名词： 1．分布式能源：国际分布式能源联盟WADE对分布式能源定义为:安装在用户端的高效冷/热电联供系统，系统能够在消费地点(或附近)发电，高效利用发电产生的废能--生产热和电;现场端可再生能源系统包括利用现场废气、废热以及多余压差来发电的能源循环利用系统。国内由于分布式能源正处于发展过程，对分布式能源认识存在不同的表述。分布式能源是一种建在用户端的能源供应方式，可独立运行，也可并网运行，是以资源、环境效益最大化确定方式和容量的系统，将用户多种能源需求，以及资源配置状况进行系统整合优化，采用需求应对式设计和模块化配置的新型能源系统，是相对于集中供能的分散式供能方式。 2．增量配电网：也就是新增加的配电网叫增量配电网。2016年10月11日，国家发改委、国家能源局发布了《有序放开配电网业务管理办法》(以下简称《办法》)。《办法》是为落实《中共中央国务院关于进一步深化电力体制改革的若干意见》(中发〔2015〕9号)，鼓励社会资本有序投资、运营增量配电网，促进配电网建设发展，提高配电网运营效率而制定的，《办法》提出，按照管住中间、放开两头的体制架构，结合输配电价改革和电力市场建设，有序放开配电网业务，鼓励社会资本投资、建设、运营增量配电网，通过竞争创新，为用户提供安全、方便、快捷的供电服务。 3．微电网：微电网(Micro-Grid)也译为，是指由分布式电源、储能装置、能量转换装置、负荷、监控和保护装置等组成的小型发配电系统。微电网的提出旨在实现分布式电源的灵活、高效应用，解决数量庞大、形式多样的分布式

生物化学实验报告：Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白

实验三 Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白 一、实验目的 利用Western Blotting技术，定性（或定量）检测苦荞黄酮醇合酶基因（Flavon ol synthase gene, FtFLS）在大肠杆菌表达宿主菌Escherichia coli BL(DE3)中的诱导表达。 二、实验原理 黄酮醇合酶（FLS，EC 1.14.11.23）属于2-ODD家族，催化黄酮醇合成支路中最后一步氧化反应，也是直接合成黄酮醇的反应。FLS可以使二氢黄酮醇在C3链中C2和C3之间氧化形成双键，从而生成黄酮醇：a Dihydroflavonol + 2-oxoglutarate + O2 a Flavonol + succinate + CO2 + H2O。 本实验采用PCR的方法，在苦荞黄酮醇合酶基因（FtFLS）ORF起始密码子前引入Kpn?酶切位点，去掉终止密码并引入Bam H ?酶切位点。克隆引入酶切位点后的FtFLS到表达载体pET-30b(+)质粒中，其表达产物分别在N-末端和C-末端各含有6 ×His标签。重组质粒（pET-30b(+)-FtFLS）经鉴定后转化表达宿主菌E. coli BL21(DE3)并使用IPTG进行诱导表达。收集诱导0 h、2 h、4 h、6 h和8 h的产物，经SDS-PAGE后用于考马斯亮蓝R-250染色或Western blotting分析。 Western blotting的标准流程如下：蛋白质首先通过SDS-PAGE胺凝胶电泳分离，通过电泳转移到固相支持物上（硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜）；将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的非特异性吸附，固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用并通过放射、生色或化学发光的方法进行定位。 本实验采用小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体（Anti-His tag IgG，一抗）与重组FtF LS蛋白的N-末端和C-末端6 ×His发生抗原-抗体特异反应，再利用辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG（peroxidase-Goat Anti- Mouse IgG，二抗）与一抗发生特异结合，最后使用DAB进行显色。DAB即：二氨基联苯胺（3, 3'-diaminobenzidine），是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物。DAB在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。该方法常用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好，在免疫组化，原位杂交，Western blotting等膜显色中

风电项目可行性研究报告书

风电项目可行性研究报告

目录 1 总的部分 1 2 场址选择 8 3 风资源分析 10 4 工程地质 19 5 风力发电机组选型和布置 19 6 电气部分 42 7 土建部分 47 8 消防设计 9 环境保护和水土保持设计及社会影响评价 49 10 风电场规划土地利用情况 11 施工组织设计 54 12 劳动安全卫生 13 工程投资估算 57 14 财务评价 67 15 附件 92 16 附图 93

1总的部分 11发展风力发电的可行性与必要性 省是我国的重工业基地也是能源消耗大省长期以来由于能源短缺制约了工农业的发展东北电网是以火力发电为主电源的电网大量的火力发电不仅受到燃料短缺的制约而且也受运输条件的限制从长远战略出发开发利用风能资源作为常规能源的补充能源是十分必要的 风能是一种洁净的可再生的一次能源风力发电是一种不消耗矿物质能源不污染环境建设周期短建设规模灵活具有良好的社会效益和经济效益的新能源项目随着人们对环境保护意识的增强以及国家有关部门对风力发电工程项目在政策方面的扶持风力发电在我国得到了迅猛发展而辽北地区是我省风能资源最为丰富的地区之一风速大风向稳定而且大部分地区地势平坦开阔适合于大规模开发安装风力发电机组风力发电在该地区具有较好的发展前景该地区风能资源丰富且风能大多集中在春冬两季此时也恰为年用电高峰期风力发电可以与火电水电互补起到年调峰的作用因此建设风力发电场不仅具有较好经济效益同时也具有显著的社会效益 12 项目背景 近几年来随着风力发电工程项目的建设和发展以及国家有关部门出台的一些对风力发电的优惠政策极大的促进了风力发电机组的国产化工作的步伐目前已有新疆金风科技股份有限公司西安维德

研究蛋白质凝聚凝胶的技术进展

研究蛋白质凝聚凝胶的技术进展 摘要由于蛋白质形成的凝胶会影响食品的质构和品质,所以研究蛋白质凝胶对于食品科学有极其重要的意义。然而,蛋白质形成凝胶的机理过于复杂,需要更先进的技术来研究。介绍了用于蛋白质凝胶研究的最新技术进展,如原子力显微镜(AFM),共聚焦激光 显微镜(CSLM)和漫射波光谱(DWS)。与传统研究凝胶的方法如动态流变仪和扫描电子 显微镜(SEM)相比,这些新方法简化了样品的预处理,有实现在线测定的可能。由于样品 处于天然状态,所以反映的信息更具有真实性,加上高分辨率,可以实现蛋白形成凝胶过 程分子水平的可视化。因此,采用以上的新技术可以为研究蛋白凝胶的形成提供更多的 信息。 凝聚和凝胶过程对食品加工起着重要的作用,它们能形成食品所需要的质构,也 会带来不需要的沉淀或是分层现象。因此,研究胶体形成的特性对于稳定和形成食品所需结构十分重要,并且通过控制凝胶反应优化食品加工过程,提高食品品质。对于食品体系的凝胶和凝聚已经有了深入的研究,但凝聚凝胶现象还鲜有报道。因为研究凝胶过程有以下困难:首先,蛋白和多糖是大分子,三维结构描述和定量困难。其次,凝胶过程是一 个复杂的反应体系[1]。例如,球蛋白的凝胶过程,通常分为蛋白分子展开,解聚和聚合,凝聚[2]的步骤。在热变性的过程中,天然蛋白分子伸展,暴露出功能性基团(如巯基和疏水基团)。随后,为了降低体系的能量,蛋白通过形成二硫键或疏水相互作用发生凝聚[3-4]。当蛋白浓度高于形成凝胶的临界点时,凝聚继续发展形成凝胶结构。在整个反应过程中,最终的凝胶和凝聚体的结构受环境因素影响(蛋白浓度、pH、离子强度、温度等)很大。食品是个复杂的体系,一些成分会影响蛋白凝聚凝胶的过程如蛋白—蛋白的相互作用,通过改变二硫键形成、疏水相互作用、氢键或是范德华力,改变形成凝胶体的凝胶特性[5]。此外,采用传统的分析手段难以获得更加深入真实的凝胶形成信息。尽管采用动态流变仪、显微镜和动态光散射技术可以分析凝胶形成过程,但是这些方法主要通过分析凝聚发生过程时粒子尺寸或是弹性模量G′的变化来进行研究[6-9],通常需要复杂繁琐的样品前处理过程,如稀释、机械变形、干燥、冻干等,这些处理会破坏易破碎的弱凝胶,影响 亚稳定体系。因此,保持体系接近原始天然状态对于考察物理化学因素对于凝胶最终质构的影响十分重要。理想的分析方法应该是非破坏性的、非干扰性的技术,可以让样品处于天然状态下测定,从而获得处于软凝胶状态下,凝胶相互作用的信息[10]。伴随科技的发展,一些新的非破坏性的技术应用于蛋白质凝胶和凝聚的研究中。文章论述了原子 力显微镜(AFM),激光共聚焦显微镜(CSLM)和散射光波谱(DWS)用于食品蛋白质凝聚凝 胶的研究。在我国,虽然原子力显微镜已经广泛用于多糖结构的研究[11-13],但是用于 蛋白质凝胶和凝聚的研究报道还很少。 1AFM用于蛋白质凝聚凝胶 AFM起源于隧道扫描显微镜技术,它广泛应用于生物、物质结构、分子生物学等领域。AFM用于食品科学中以下六个方面[14]:AFM可以定性描述食品大分子的结构; 通过AFM成像提供的结构参数描述食品加工和储存过程中定量分析分子结构变化;显

巴西火电厂可行性研究报告

巴西卡迪奥塔火电厂二期C项目（1X335MW）可行性研究阶段 第1卷 可行性研究报告

目录 1 概述 (1) 1.1 设计依据 (1) 1.2 项目概况 (1) 1.3 研究范围 (3) 1.4 主要设计原则 (4) 1.5 工作简要过程 (5) 2 电力系统 (5) 2.1 能源状况分析 (5) 2.2 电网概况 (5) 2.3 电气主接线 (6) 3 燃料供应 (6) 3.1 煤源概况 (6) 3.2 燃料运输方式 (10) 4 厂址条件 (10) 4.1 厂址概述 (10) 4.2 交通运输 (10) 4.3 电厂水源 (11) 4.4 贮灰场 (11) 4.5 岩土工程 (11) 4.6 水文气象 (11) 5 工程设想 (11) 5.1 厂区总平面布置 (11)

5.2 装机方案和机组选型 (14) 5.3 电气部分 (15) 5.4 热力系统 (17) 5.5 燃烧系统 (19) 5.6 燃料运输系统 (20) 5.7 除灰渣系统 (21) 5.8 供水系统 (23) 5.9 化水部分 (29) 5.10 热力控制 (31) 5.11 主厂房布置 (32) 5.12 主要生产建构筑物的结构形式及地基处理 (35) 5.13 通风空调及输煤除尘系统 (37) 5.14 烟气脱硫 (38) 6 环境保护 (42) 6.1 标准限值 (42) 6.2 污染防治对策 (42) 6.3 污染物排放状况 (43) 7 投资估算及经济效益分析 (44) 7.1 投资估算 (44) 7.2 经济效益分析 (46) 8 结论 (46)

1概述 受中信集团公司（CITIC）委托，我院承担了巴西卡迪奥塔火电厂二期C项目可行性研究报告的编制工作，本报告是根据中巴两国于2004年11月12日签署的巴西卡迪奥塔火电厂二期C项目“合作框架协议”，及巴西电力公司（Elotrobras）和热电公司（CGTEE）提供的资料，及中方代表团2005年1月现场踏勘的基础上，在中信公司的组织，协调下，编制完成的。编写本研究报告的目的是为中信公司和国家开发银行（CDB）实施该项目的决策过程提供帮助和参考。 本工程安装一台亚临界凝汽式燃煤机组容量为350MW，属扩建性质，不考虑再扩建，拟采用原阿尔斯通公司设备，计划安装在巴西共和国，南里约格兰德州卡迪奥塔市，距离首府阿雷格雷港400公里。即建设在巴西热电公司所拥有梅迪西总统热电厂附近（坎迪奥塔热电厂二期B），使之成为二期项目的扩展。 本工程以230kV接入系统。 电厂年利用小时数为5500小时。 本工程计划于2005年10月开工，计划工期36个月。 1.1 设计依据 1）于2005年2月26日召开的本项目会议纪要，备忘录。 2）CGTEE提供的电厂所在地的自然条件，设备资料和老厂设施的资料。 3）阿尔斯通公司的技术资料。 4）现行的中国国家标准和电力行业规程、规范。 1.2 项目概况 1.2.1 坎迪奥塔二期工程概况： 1974年，坎迪奥塔二期第一阶段（A）完工，该电厂包括两台63MW的发电机组（整个为126MW），使用燃煤发电，设备由意大利的GIE公司提供，频率为60Hz。 1987年该电厂二期第二阶段（B）完工运行，它包括两台发电机组（每台160MW），梅迪西总统热电厂（坎迪奥塔二期）的总发电能力达到446MW。这一扩建工程是1977年进行的国际招标，最终阿尔斯通公司中标，1978年签约。商业运行开始于1989年。 1.2.2本项目概况 坎迪奥塔三期热电厂作为巴西和法国一系列技术合作项目（6×350MW），于1981年9月在南里约格兰德州的坎迪奥塔市开始建设，1983年由于执行单位——南里约格

鸡蛋清蛋白水解物的抗氧化性研究_杨瑾

现代食品科技Modern Food Science and Technology2011, Vol.27, No.12 1446 鸡蛋清蛋白水解物的抗氧化性研究 杨瑾，唐传核 （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640） 摘要：本试验研究了利用Alcalase酶解鸡蛋清蛋白制取水解度为5~15%的酶解物并对其DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、还原力进行了测定，同时对不同水解度的水解物的溶解度、表面疏水性和总游离巯基含量进行了测定。结果表明，酶解产物具有较低的表面疏水性和总游离巯基含量，同时DPPH自由基清除能力在最大蛋白浓度1.0 mg/mL处降低了约50%。但是酶解却显著增大了羟基自由基清除能力和还原力，水解度为15%时羟基自由基清除力和还原力在其试验最大蛋白浓度处较未酶解的EWP均增大了约一倍。 关键词：蛋清蛋白；酶解物；碱性蛋白酶；抗氧化性质 文章篇号：1673-9078(2011)12-1446-1450 Antioxidant Properties of Chicken Egg White Protein Hydrolysates YANG Jin, TANG Chuan-he (College of Light Industry & Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract: The antioxidant properties of the hydrolysates, obtained by hydrolysis with Alcalase from chick egg white proteins (EWP) at degree of hydrolysis (DH) of 5%-15 % were characterized. The tested properties, including DPPH and hydroxyl radical scavenging abilities, as well as reducing power, and protein solubility (PS), surface hydrophobicity (H o) and free sulphydryl group content were also evaluated. These hydrolysates exhibited much lower H o and total free SH content. The hydrolysis greatly decreased the DPPH radical scavenging ability about 50% at the highest concentration of 1.0 mg/mL. In addition, the hydrolysis significantly increased hydroxyl radical scavenging ability and reducing power about 15% at their highest concentration. Key words: egg white proteins (EWP); hydrolysate; Alcalase; antioxidant property 鸡蛋清蛋白含有人体所必需的多种氨基酸,且氨基酸组成配比均衡性好,是机体利用率最高的一种蛋白质[1]。目前鸡蛋清蛋白是食品工业中重要的成分配料，具备多种功能性质如起泡性、乳化性、凝胶性等，是食物中最优质的蛋白质之一[2]。 为了开拓蛋品资源加工新途径，提高蛋品的高附加值，酶解改善蛋清蛋白性质将是一个很好的研究方向。资料表明，蛋清白蛋白经蛋白酶适度水解，生成多肽的混合物，通过控制其水解度，可提高蛋白的收率，生成的多肽混合物也更有利于人体吸收[1]。同时蛋清蛋白经过蛋白酶水解后，其分子量降低，蛋白质的功能特性得以改善，溶解性提高，粘性、热凝固性降低，蛋白质的致敏性降低，使其更易于消化，并能产生抗氧化、降血脂、降血压等生理活性的小分子肽[3,4]。 本文通过Alcalase酶解鸡蛋清蛋白制备不同水解度的水解物，重点研究酶解后蛋清蛋白的抗氧化活性收稿日期：2011-08-02 作者简介：杨瑾（1987-），女，硕士研究生 通讯作者：唐传核，副教授 及相关物化性质，对提高蛋清的综合利用价值以及人类的健康具有十分重要的作用。 1 材料和方法 1.1 实验材料与仪器 鸡蛋清蛋白，冷冻干燥制取；Alcalase酶制剂，诺维信公司；DPPH，Sigma公司；Ferrozine，ULTRA 上海生工生物技术服务有限公司；FeCl2·4H2O，天津科密欧化学试剂有限公司；铁氰化钾，天津科密欧化学试剂有限公司；NaOH，天津科密欧化学试剂有限公司；Tris，北京鼎国生物技术有限公司；三氯乙酸，广州化学试剂厂；CR22G高速冷冻离心机，日本日立公司；高效液相色谱仪Waters1525，美国Waters公司；荧光分光光度计F-7000，日本日立公司；紫外-可见分光光度计2501PC，日本岛津公司。 1.2 实验方法 1.2.1 水解产物的制备 鸡蛋清蛋白溶于去离子水配制3%（m/V）蛋白溶液，在沸水浴30 min后，迅速冷却至最佳温度55 ℃，于55 ℃水浴中保温10 min，调pH至8.0，加入Alcalase DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2011.12.019

汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程融资投资立项项目可行性研究报告(中撰咨询)

汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程立项 投资融资项目 可行性研究报告 (典型案例〃仅供参考) 广州中撰企业投资咨询有限公司

地址：中国〃广州

目录 第一章汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目概论 (1) 一、汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目名称及承办单位 (1) 二、汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目可行性研究报告委托编制单位 (1) 三、可行性研究的目的 (1) 四、可行性研究报告编制依据原则和范围 (2) （一）项目可行性报告编制依据 (2) （二）可行性研究报告编制原则 (2) （三）可行性研究报告编制范围 (4) 五、研究的主要过程 (5) 六、汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程产品方案及建设规模 (6) 七、汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目总投资估算 (6) 八、工艺技术装备方案的选择 (6) 九、项目实施进度建议 (6) 十、研究结论 (7) 十一、汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目主要经济技术指标 (9) 项目主要经济技术指标一览表 (9) 第二章汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程产品说明 (15) 第三章汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目市场分析预测 (15) 第四章项目选址科学性分析 (15) 一、厂址的选择原则 (16) 二、厂址选择方案 (16) 四、选址用地权属性质类别及占地面积 (17) 五、项目用地利用指标 (17) 项目占地及建筑工程投资一览表 (18)

六、项目选址综合评价 (19) 第五章项目建设内容与建设规模 (20) 一、建设内容 (20) （一）土建工程 (20) （二）设备购臵 (20) 二、建设规模 (21) 第六章原辅材料供应及基本生产条件 (21) 一、原辅材料供应条件 (21) （一）主要原辅材料供应 (21) （二）原辅材料来源 (21) 原辅材料及能源供应情况一览表 (22) 二、基本生产条件 (23) 第七章工程技术方案 (24) 一、工艺技术方案的选用原则 (24) 二、工艺技术方案 (25) （一）工艺技术来源及特点 (25) （二）技术保障措施 (25) （三）产品生产工艺流程 (25) 汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程生产工艺流程示意简图 (26) 三、设备的选择 (26) （一）设备配臵原则 (26) （二）设备配臵方案 (27) 主要设备投资明细表 (28) 第八章环境保护 (28) 一、环境保护设计依据 (29) 二、污染物的来源 (30) （一）汉水泉2×1000兆瓦火电机组工程项目建设期污染源 (30)

重组蛋白在大肠杆菌分泌表达的研究进展

天津药学ＴｉａｎｊｉｎＰｈａｒｍａｃｙ２００９年第２１卷第４期 综述 重组蛋白在大肠杆菌分泌表达的研究进展’ 郑海洲，刘晓志，宋欣 （华北制药集团新药研究开发有限责任公司，石家庄０５００１５） 摘要长期以来，大肠杆菌是表达外源蛋白的首选表达系统，重组蛋白分泌表达与胞内表达相比有很大优越性，在细胞周质腔不仅能促进重组蛋白二硫键的形成及正确折叠，还能促进分泌蛋白的Ｎ一端加工。本文综述了近年来在大肠杆菌中表达可溶性外源蛋白的进展，目的是为了提高外源蛋白的生物活性。 关键词大肠杆菌，分泌表达，重组蛋白 中图分类号：Ｑ５９１．２文献标识码：Ａ文章编号：１００６－５６８７（２００９）０４－００４０－０３ Ａｄｖａｎｃｅｉｎｔｈｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｉｎｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｉｌ ＺｈｅｎｇＨａｉｚｈｏｕ，“ｕＸｉａｏｚｈｉ，Ｓ０ｎｇＸｉｎ （ＮＣＰＣＮｅｗＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｏ．，Ｌｔｄ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１５） ＡＢＳＴＲＡＣＴＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｈｏｓｔｓｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ８ｅｃｒｅ—ｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｐｒｏｖｉｄｅｓｓｅｖｅｒａｌａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍ．Ｐｅｒｉｐｌａｓｍｐｒｏｖｉｄｅｓｔｈｅｏｘｉｄａｔｉｖｅｅｎ—ｖｉｒｏｎｍｅｎｔｔｏｆａｃｉｌｉｔａｔｅｃｏｒｒｅｃｔｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｉｎｇａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｆｏｌｄｉｎｇ．ＩｔａｌｓｏａｌｌｏｗｓｃｏｒｒｅｃｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆＮ—ｔｅｒｍｉｎａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｄｕｒｉｎｇｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．ＴｈｉｓｒｅｖｉｅｗｄｉｓｃｕｓｓｅｓｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｓｅｃｒｅｔｏｒｙａｎｄｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓＳＯａｓｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｈｅｔｅｍｌｏｇｏｕｓｐｒｏｔｅｉｎｓ． ＫＥＹＷＯＲＤＳｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ｓｅｃｒｅｔｏｒｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ 大肠杆菌具有遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化等优点，是基因表达技术中发展最早和目前应用最广泛的是经典表达系统…。蛋白分泌表达是指重组异源蛋白通过运输或分泌方式定位于细胞周质，甚至穿过外膜进入培养基中。重组蛋白分泌表达的优势在于胞周质或胞外分泌表达过程中，信号肽在细胞内剪切，更有可能产生目的蛋白的天然Ｎ一末端，如果含甲硫氨酸可能会降低产物的可溶性和稳定性旧１；大肠杆菌的胞周质中含有一系列的酶，并提供了一个氧化环境，有利于二硫键的正确形成，并增强巯基蛋白的正确折叠，使活性蛋白质的产量得到 谢负担，使宿主菌适应性增加；周质空间和胞外培养基中宿主菌蛋白含量很低，有利于目的蛋白的纯化。本文将近年来一些提高重组蛋白在大肠杆菌胞周质和胞外分泌表达的策略简述如下。 １利用Ｅｃｏｌｉ自身存在的分泌途径 根据识别特异的底物及透过细胞外膜机制的不同，革兰阴性菌共分为５种天然分泌系统，即Ｉ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ｖ型。革兰阴性菌ＥｃｏｌｉＫ一１２和Ｂ菌株主 ?收稿日期：２００９－０６—１２分泌机制的研究还不透彻。Ｉ型分泌系统通过仅一溶血素途径直接介导胞外分泌，组成元件简单，外源重组蛋白与ＨｌｙＡ 信号序列，需要在体外进行剪切；此外该系统中的一些共表达部件对目的蛋白的转运有竞争作用，重组蛋白 过ＭＴＢ（ｍａｉｎｔｅｒｍｉｎａｌ 后利用以下三种途径透过胞质膜：依赖于ＳｅｃＢ的通路、信号识别颗粒（ＳＲＰ）通路或双精氨酸转移（ＴＡＴ）Ｊ。由于Ｅｃｏｌｉ跨越内膜的转运装置不完善，蛋白输出能力不够，蛋白酶降解等原因导致分泌效率低，胞外分泌量往往达不到实验或工业生产的要求，目前大肠杆菌的分泌主要是指重组蛋白通过Ｉ或Ⅱ型系统透过胞质膜分泌至周质腔。 ２信号肽对重组蛋白分泌表达的影响 大肠杆菌的分泌型蛋白定位于内膜、外膜、周质空间和胞外环境，其在Ｎ端或Ｃ端带有一定的结构，其中Ｎ端带有信号肽分子的蛋白，而Ｃ端带有分泌信号的系统。信号肽位于分泌蛋白的Ｎ端，能有效地引导 万方数据