新城疫抗体测定技能

新城疫抗体测定

（一）血凝试验（HA）：取96孔板，按以下步骤操作：

1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照（20分）；

2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1-2-12（25分）。

3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀（25分）。

4、室温静置10-30分，观察结果（10分）。

5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。

结果判定：以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度（20分）。

注意:由于新城疫病毒含有神经氨酸酶，它能破坏红细胞表面的血凝素受体，使凝集的病毒从红细胞上解脱下来，所以要及时观察结果。

（二）血凝抑制试验（HI）：取一96孔板，按以下步骤操作：

1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价乘4即为4个单位血凝素的稀释度（10分）。

2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔…,依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释度为2-1-2-12（20分）。

3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀（20分）；

4、室温静置20min（5分）；

5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀（15分）。

6、室温静置10--30分，观察结果（10分）；

结果判定：以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制（HI）滴度（20分）。

鸡群HI滴度的高低在一定程度上反映了免疫保护水平的高低。鸡群HI滴度的高低在一定程度上反映了免疫保护水平的高低。HI滴度在1：24的鸡群保护率约为50%；在1：24以下的非免疫鸡群约为10%，免疫鸡群约为40% ；HI滴度在1：26-10的鸡群保护率达90%以上。若鸡群出现1：211或以上的HI滴度，说明鸡群已发生新城疫野毒的感染。

口蹄疫O型间接血凝抗体检测试验

口蹄疫O型间接血凝抗体检测试验 一、原理： 用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验（IHA）。 抗原与其对应的抗体相遇，在一条件下形成抗原—抗体复合物。但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。将抗原吸附（致敏）在红细胞表面，制成口蹄疫血凝抗原，用于检测免疫动物血清中的口蹄疫抗体水平。这种经过口蹄疫抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰的凝集现象。 二、主要组分： 1．口蹄疫O型血凝抗原5ml/瓶，5瓶/盒； 2．口蹄疫O型阳性对照血清0.5ml/管，1管/盒，阳性血清已1:4稀释； 3．口蹄疫O型阴性对照血清0.5ml/管，1管/盒； 4．稀释液50ml/瓶，2瓶/盒； 5．封板膜10张/盒。 三、试验器材： 1．96孔110°V型医用血凝板； 2．8道或12道移液器； 3．微量振荡器。 四、物理性状： 1．抗原摇匀呈棕红色（或咖啡色），静置后，血球逐渐沉入瓶底； 2．阴性对照血清淡黄色清亮稍带粘性的液体； 3．阳性对照血清微红或淡黄色稍浑浊带粘性的液体； 4．稀释液淡黄或无色透明液体，低温下放置，瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶，不影响使用。 五、作用与用途： 用于检测口蹄疫O型疫苗免疫动物血清抗体效价。 六、用法与判定： 1、用法 1.1加稀释液 在血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和第5～7孔；加稀释液50μl/孔。 1.2稀释待检血清 待检血清使用前，需经过56℃水浴灭活30分钟，取待检灭活血清样品50μl，分别加入反应板1～6排的第1孔中，与稀释液混匀后，吸取50μl，加于第2孔中，依次作2倍系列稀释至第10孔，第10孔混匀后取出50μl弃去。 1.3稀释阳性对照血清 在血凝板的第7排第1孔加阳性血清50μl，2倍系列稀释至第10孔，混匀后从该孔取出50μl丢弃。此时被检血清和阳性血清的稀释倍数依次为1:2～1:1024。

新城疫抗体水平检测

新城疫抗体水平检测文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。 2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。 病毒颗粒 红细胞

四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 （二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 （三）血凝试验（HA) 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul 生理盐水 抗体 抗原

口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的应用_胡珊莲

2015年第1期浙江畜牧兽医欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍 表3 副猪嗜血杆菌西药药敏试验结果 药物耐药中敏高敏抑菌圈直径 环丙沙星1516－202126氧氟沙星1011－151632头孢哌酮1516－202136复方新诺明1011－151611林可霉素1415－20210诺氟沙星1516－181924青霉素1920－27280链霉素1112－14150庆大霉素 12 13－14 15 21 Hps 血清型较多，目前报道有15种，不同菌株 对同一种抗生素的敏感性存在很大差异，临床治疗应结合分离菌株的药敏试验结果，科学用药。3小结与讨论 本试验通过对疑似发病猪场采集患猪病料，并进行病原菌分离鉴定、动物试验，鉴定为副猪嗜血杆菌。 通过药敏试验，确诊分离菌对庆大霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星和头孢哌酮高敏，复方新诺明中敏，青霉素、链霉素、林可霉素耐药；对金银花及 其组成的复方敏感，且复方作用效果优于单方［9］。 副猪嗜血杆菌病临床治疗上中药建议使用金银花及其组成复方，西药建议使用庆大霉素、环丙沙 星、氧氟沙星、诺氟沙星和头孢哌酮。参考文献 ［1］Oliveira S ，Blackall P J ，Pijoan C．Characterization of the di －versity of Haemophilus parasuisfield isolates by use of sero －typing and genotyping ［J ］．Am J Vet Ｒes ，2003，64（4）：435－442． ［2］Del Ｒio M L ，Gutierrez C B ，Ｒodriguez Ferri E F．Value of in －direct hemagglutination and coagglutination tests for serotyping Haemophilus parasuis ［J ］．J Clin Microbiol ，2003，41（2）：880－882． ［3］蔡旭旺，刘正飞．副猪嗜血杆菌的分离培养和血清学鉴 定［ J ］．华中农业大学学报，2005（2）：55－58．［4］高丰，罗毅，成军，等．副猪嗜血杆菌感染的诊断与防治 ［J ］．动物医学进展，2002，23（6）：101－102． ［5］朱小宁，余兴龙，李润成，等．副猪嗜血杆菌的分离与鉴 定及其16S rＲNA 生物信息学分析［J ］．湖南农业大学学报：自然科学版， 2009，35（5）：517－520．［6］易顺华，陈进喜，蒋碧桂．副猪嗜血杆菌的分离鉴定与 药敏试验［ J ］．动物医学进展，2009，30（9）：41－44．［7］冼琼珍，黄耿森，王淑敏，等，副猪嗜血杆菌的分离鉴定 ［J ］．中国兽医杂志：2006：42（3）：27－28． ［8］尹秀凤，王艳，姜平，等．副猪嗜血杆菌PCＲ检测方法的 建立与应用［J ］．中国兽医学报，2007，27（2）：180－183． ［9］华升，梅书棋，曾德芳．副猪嗜血杆菌病研究进展［J ］ ．动物医学进展， 2006，27（11）：7－10．收稿日期：2014- 11-21口蹄疫O 型液相阻断ELISA 免疫抗体检测方法的应用 胡珊莲 （上海市闸北区光明荷斯坦牧业有限公司，上海闸北200436） 摘要：应用液相阻断ELISA 试验方法检测上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场牛群经口蹄疫O 型灭活疫 苗免疫的奶牛血清样品2412份。经检测，2412份样品中规模奶牛场牛群免疫抗体滴度≤1?64样品42份，抗体滴度≥1?128样品2370份， 抗体保护率为98%。关键词：液相阻断ELISA ；O 型口蹄疫；抗体检测；奶牛 中图分类号：S858．23文献标识码：A 文章编号：1005－7307（2015）01－0003－003 口蹄疫属我国农业部公布的一类动物疫病，是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，以牛，猪最易感，羊、骆驼、象等均有 发病报告。该病可分为O 、A 、C 、南非Ⅰ型、南非 Ⅱ型、南Ⅲ型和亚洲Ⅰ型等7个血清型，其中以O 型和A 型分布最广，危害最大。本试验应用液相阻断ELISA 检测方法跟踪检测上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场O 型口蹄疫疫苗免疫抗体滴度水平，以利及时指导下属牧 3

新城疫抗体水平检测

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。 2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反 病毒颗粒 红细胞

应，也称血凝抑制反应。 四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 （二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 抗体

2014全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定解读

2014年全国职业院校技能大赛 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：G-057 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农业 二、竞赛目的 通过本项目竞赛，促进高职学生了解鸡新城疫抗体水平测定的内容，熟练掌握测定方法，提高检测水平，培养学生的团队合作能力，不断提升学生的职业能力；引领农业职业院校适应畜牧业行业现状及技术发展趋势，促进畜牧兽医专业建设与教学改革；推进学院与相关企业深度合作，更好地实现工学结合的人才培养模式，为畜牧兽医行业培养高素质技术技能型人才。 三、竞赛内容与时间 （一）竞赛内容 竞赛项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法）。测定方法参考《新城疫诊断技术》（GB/T16550—2008）标准，具体分为6个部分。竞赛总时间为180分钟。 1.试验器材准备（占总成绩的6%） 按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放。 2.配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的20%） 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液。 3.血凝（HA）试验（占总成绩的16%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板上滴加稀

释液、新城疫标准抗原，充分混匀后倍比稀释，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡和感作，正确判定抗原的血凝效价。 4.配制四单位病毒（占总成绩的15%） 根据HA试验测定结果，按照操作规程配制四单位病毒。 5.血凝抑制（HI）试验（占总成绩的16%） 按照操作规程，对10个被检血清进行血凝抑制试验操作，同时设新城疫标准阳性血清对照和阴性血清对照。 6.抗体滴度报告（占总成绩的27%） 按照操作规程正确读数，填写完成报告单。 （二）竞赛时间 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，须为同校在籍学生。由各省、自治区、直辖市教育行政部门商农业行政部门，在本区域内设置畜牧兽医专业的涉农高职院校全日制在籍学生中（参赛选手年龄须不超过25周岁，即2014年7月1日前不满26周岁），经选拔组成1个代表队参加比赛，每队限报1名指导教师。本赛项本次竞赛不邀请

实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果 和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞 凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细 胞凝集抑制试验(HI)。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型 振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清 4．实验步骤 (1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被 特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如 抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（ND）的HA和HI （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细 胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后 一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

猪口蹄疫抗体检测卡说明书(完整版)

猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒 ——（胶体金法）使用说明书 【名称】 通用名称：猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒 英文名称：Rapid Anti-FMDV Test 汉语拼音：Zhu KouTiYi Kangti Kuaisu Jiance Shiji He(Jiaoti Jin Fa) 【原理】 猪口蹄疫抗体检测试剂盒（胶体金法），系采用国际最先进的胶体金免疫层析技术检测样本（全血、血清、血浆）中抗猪口蹄疫抗体的方法。整个试验只需20分钟，操作简便、快速、准确，灵敏度高、结果直观、容易判定。本试剂盒内还设计一张“金标试纸与正向间接血凝试验实物参照图”，用试纸检测线的颜色与实物参照图对照，便可粗略估计样品中抗体的滴度。 【试剂盒组成】 1.猪口蹄疫抗体快速检测卡50头份 2.说明书1份 3.一次滴管50根 【操作方法】 1．在检测卡的加样孔内加入2滴（100ul）待检血清或血液样品。 2．将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5－20分钟内判定结果。超过20分钟的结果只能作为参考。 阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区

（C）同时出现紫红色线。猪口蹄疫抗体滴度越高，检测线（T）颜色越深。 弱阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区 （C）同时出现紫红色线，但检测线区（T）出现的颜色很浅。 阴性：在观察孔内，只有对照线区 （C）出现一条紫红色线。 失效：在观察孔内，对照线区 （C）和检测线区（T）都不出现色线；或仅检测线区（T）出现色线。 【诊断参考】 1. 如果该猪未接种过猪口蹄疫病毒疫苗: a)当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有口蹄疫病毒抗体。如果猪群健康， 应当及时进行猪口蹄疫病毒疫苗接种。 b)当被检样品检测线（T）处有明显色带出现，则该猪有可能为野毒感染，应进一步观察验证。 2. 如果该猪已接种过猪口蹄疫病毒疫苗: c)当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1：32效价时，说明口蹄疫病毒抗体的滴度较高，已 达到抵御强毒攻击的保护水平。 d)当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1：32效价时，说明口蹄疫病毒抗体效价未达到抵御 口蹄疫病毒强毒攻击的最低保护滴度，建议进行疫苗补种。 【注意事项】 铝箔袋打开后，检测卡应尽快使用；受潮后检测卡将失效。常温保存，保质期18个月。 【特点】 方便:肉眼判断、无需仪器、操作简单； 快速:5－20分钟即可出结果，有利于疫情的快速鉴别和免疫水平监测； 用途:适合于各级防检部门、猪场、兽医站广泛使用。

鸡新城疫抗体水平测定

2018年全国职业院校技能大赛 拟设赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：GZ-2018011 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the Antibody against Chicken NewCastle Disease Virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目的 本赛项由学校、行业、企业共设，通过技能竞赛，能有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，加大行业人才队伍建设力度，提升行业产业发展水平。同时，通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量。 三、竞赛内容 本赛项为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛时间为180分钟。具体步骤及其分值如下： （一）试验器材准备（占总成绩的8%） 按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。

（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%） 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1%鸡红细胞量适宜等。 （三）血凝试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，再次滴加稀释液，再添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，静置感作适当时间后，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩的10%） 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 （五）血凝抑制试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果，确定抗体滴度，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。 （六）抗体滴度报告（占总成绩的24%） 按照操作规程，正确判定抗体滴度，完成报告。要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，

实验一鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

实验一鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒（如新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象（）。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（）。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5 只，被检鸡15-25 只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2 聚乙烯塑料管100、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1 ）浓缩抗原；（2 ）生理盐水或磷酸缓冲盐水（）；（3）细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清4．实验步骤 （1）发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 （2）诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4 倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（）的和 （1 ）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫n系或系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ②0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管（按每毫升血加 入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2 毫升做抗凝剂）内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内（保存液2份，血液1份）于4 C冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000 转／分钟，离心5-10 分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液（生理盐水）洗涤。再用离心机3000 转／分钟离心5-10 分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液（0.7 毫升红细胞泥加99 .3毫升稀释液）。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内（微 量法可用孔径2-3 毫米塑料管由翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。 每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。 ④稀释液：为灭菌的生理盐水。 ⑤红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05克，柠檬酸钠（）0.80克，柠檬酸（2H20）0.055克，

猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒

仅供科研使用，不得用于临床检验。 猪口蹄疫病毒O型抗体定性检测试剂盒（ELISA）说明书 【产品名称】 通用名称：猪口蹄疫病毒O型抗体定性检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus O ELISA KIT 【包装规格】 96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。 本试剂用于检测猪血清中口蹄疫病毒O型抗体，可用于口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果评价。 【检验原理】 本试剂盒系由预包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪口蹄疫病毒O型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪口蹄疫病毒O型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫病毒O型抗体。

【主要组成成分】 主要成分 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

2018年全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定项目申报书 (46)

附件： 2018年全国职业院校技能大赛 赛项申报书 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 赛项类别：常规赛项?行业特色赛项□ 赛项组别：中职组□高职组? 涉及的专业大类/类： 方案设计专家组组长： 手机号码： 方案申报单位（盖章）：全国林业职业教育教学指导委员会方案申报负责人： 方案申报单位联络人： 联络人手机号码： 电子邮箱： 通讯地址： 邮政编码： 申报日期：2017年8月31日

2018年全国职业院校技能大赛 赛项申报方案 一、赛项名称 （一）赛项名称 鸡新城疫抗体水平测定。 （二）压题彩照 图1 新城疫抗体水平测定比赛现场 （三）赛项归属产业类型 农业 （四）赛项归属专业大类 51农林牧渔大类 二、赛项申报专家组 本赛项主要由本科及高职院校畜牧兽医及相关专业教师，农业科学院畜牧兽医研究所和企业技术骨干组成竞赛项目设计团队。竞赛项目设计团队成员及相关信息如表1。

表1 赛项申报专家组名单 三、赛项目的 本赛项考核的核心技能是鸡的采血方法、1%鸡红细胞悬液配制、血凝试验操作、四单位病毒配制、血凝抑制试验操作、抗体滴度报告撰写等技能。本赛项考核的核心知识是《动物微生物》、《兽医临床诊疗技术》、《动物传染病》等专业课程理论知识。 本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医等专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。 四、赛项设计原则 （一）公开、公平、公正 本赛项筹备与实施的各环节均按规定要求科学组织，公开进行报名、审查，提前公布技术文件、比赛样题，合理设计竞赛规则、程序、标准，公开执行过程，严格命题、裁判回避制度等措施，确保比赛公平。赛项设计源于职业岗位具体要求、又能够展现通用性技术与选手能力；比赛过程在公平和不干扰比赛选手的前提下向社会开放，并邀请广播、电视、网络等媒体宣传报道，提高赛项知名度，促进职业技能大赛健康发展。 （二）关联职业岗位面广 鸡新城疫抗体水平测定是兽医临床衡量养殖场免疫状况、预警免疫缺陷、制定有效防疫方案的重要方法之一，是畜牧兽医专

新城疫抗体检测

新城疫的抗体检测 某些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的实验称血球凝集试验，以此来推断被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制，即血球凝集抑制实验（HI ），通过血凝与血凝抑制试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 一目的意义 1免疫监测（1）免疫效果评价（2）免疫时机确定 2诊断疾病（根据有无抗体或抗体的高低） 3流行病学调查 二试验仪器与试剂 1 试验仪器离心机、离心管两支、50ml 量筒一个、V 型微量反应板、微量加样器（移液 器）、塑料吸头（黄色）若干、1ml 吸管1 支、胶头滴管两支、微量振荡器、 电热恒温培养箱、托盘天平。 2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5 H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、 3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。 三方法 1 病毒的血凝试验 1.13.8% 柠檬酸钠抗凝剂的配制：用托盘天平称取柠檬酸钠3.8 克溶于100ml 蒸馏水 或纯净水中，摇匀使其充分溶解即可，有条件的可121 C高压蒸汽灭菌20分钟，冷却至室 温后置4C冰箱中保存备用。 1.21%鸡红细胞制备过程：事先用5ml （或10ml）的注射器吸入抗凝剂若干（其量为 所需血量的1/5）, 从健康公鸡（未经新城疫疫苗注射）的心脏或翅下静脉采取2-4 毫升血液, 以2000 转每分钟，离心5 分钟，吸去上清液（注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净）。然后用生理盐水（用量为血细胞泥的5-10 倍）洗红细胞，离心5分钟，弃去上清液，如此反复洗3-5 次，直至上清液透明清亮为止，最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度，然后置4 C冰箱备用（一般可保存3天）。 1.3红细胞凝集试验（血凝试验）操作方法（见表1）： （1）取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板，用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水，每孔25 微升，直至加到第十五孔（第一列12 孔，第二列3 孔）。 （2）取新城疫抗原液25微升加入第一孔中，充分混合后吸取25微升加入第二孔中，如此直至第14孔，混合后吸取25微升丢弃，第15孔不加病毒为对照。 （3）更换移液器前端的塑料吸头，每孔加已备的1%鸡红细胞液各25 微升（注意从后往 前加）。 （4）将反应板置微型震荡器上，振动混合1分钟，取下置37C恒温箱中作用30分钟后 开始观察结果，注意每五分钟观察一次，直至30 分钟，判定并记录结果。 判定结果如下： ++++——红细胞全部凝集，均匀分布于孔底。 ++ ---- 红细胞部分凝集，沉积于孔底呈小圆点状。 - ——红细胞全部不凝集，沉积于孔底呈圆点状。 以使红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价。4单位病毒的确定，以 上述血凝价除以4即为4单位病毒，如血凝价为1:128，则1:128的0.1ml中有一个凝集单位，4 单位病毒为128/4=32 ，即1:32 为4 个凝集单位。

检测口蹄疫血清抗体的方法

检测口蹄疫血清抗体的方法 （一）口蹄疫正向间接红细胞凝集试验（间接血凝试验）该试验是以口蹄疫O、A、C、Asia-1型病毒和猪水泡病病毒的细胞培养物（细胞毒）经PEG浓缩，蔗糖密度梯度超离后纯化的病毒抗原分别致敏戊二醛鞣酸处理的绵羊红细胞，而制成的血凝抗原，用于快速检测动物血清中的口蹄疫和猪水泡病特异抗体水平。 该法简易、快速、特异、直观、是当前测抗的实用方法。 1．试验材料V型96孔110。医用血凝滴定板、玻璃板（与血凝板大小相同）、微量移液器（10~100微升）、塑料咀、微量振荡器、1毫升/5毫升刻度玻璃吸管、玻璃中试管（内径毫米，长度100毫米）、铝质试管架（40孔）、口蹄疫各型和猪水泡正向间接血凝诊断液、口蹄疫O、A、C、Asia-1型阳性血清、SVD阳性血清、阴性血清、稀释液。 2．试验方法根据试验目的可分为用于鉴别诊断；用于监测疫苗接种动物的抗体水平的检测方法。 （1）疫苗接种动物抗体水平监测方法 接种何种疫苗就使用何种正向血凝诊断液。 ①稀释待检血清在血凝板上1~8孔各加稀释液50微升，取待检血清50微升加入第1孔，混匀后从中取出50微升加入第2孔，混匀后从中取出50微升加入第3孔……直至第8孔混匀后从该孔取出50微升丢弃，保持每孔50微升的剂量。此时1~8孔的血清稀释度依次为1：2、1：4、1：8、1：16；1：32、1：64、1：128、1：256。 ②稀释阴性对照血清取中试管1支加稀释液毫升，再加阴性血清毫升，充分摇匀阴性血清的稀释度即为1：16。 ③稀释阳性对照血清取中试管5支，第1管加稀释液毫升，第2~5管分别加稀释液毫升，取阳性血清毫升加入第1管混匀后从中取出毫升，加入第2管混匀后从中取出毫升，加入第3管……直至第5管，此时各管阳性血清的稀释度低次为1：32、1：64、1：128、1：256、1：512。 ④滴加对照孔取1：16稀释的阴性血清50微升加入血凝板的第10孔；取1：500稀释的阳性血清50微升加入第11孔；取稀释液50微升加入第12孔。 ⑤滴加正向血凝诊断液取正向血凝诊断液充分摇匀（瓶底应无血球沉淀），每孔各加25微升后立即置微量振荡器上振荡1分钟，取下血凝板放在白纸上观察每孔中的血球是否均匀（孔底应无血球沉淀）。如仍有部分孔底出现血球沉积，应继续振荡直至完全混匀为止。 ⑥静置将血凝板放在室温下（15~30℃）静置2h后判定检测结果，若结果 不清晰或来不及判定，也可放置第2天判定。 ⑦判定标准先观察10~12孔（对照孔），第10孔为阴性血清对照，应无红细胞凝集现象，红细胞全部沉入孔底，形成小园点或仅有25%红细胞有凝集（“+”的凝集）；第11孔为阳性血清对照，应出现“++”以上的凝集（50%以上

2016年全国职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测定赛项规程

2016年全国职业院校技能大赛高职组 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：GZ-108 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目的 本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。 三、竞赛内容 本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛总时间为180分钟。具体步骤及其分值如下： （一）试验器材准备（占总成绩的8%） 按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。 （二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%） 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，

要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。 （三）血凝试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩的10%） 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 （五）血凝抑制试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、结果判断正确等。 （六）抗体滴度报告（占总成绩的24%） 按照操作规程，正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求抗体滴度报告方式正确、场地整洁、结果误差小等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，每个团队限报1名指导教师。参赛选手均为高职院校在籍学生。本赛项本次竞赛不邀请境外代表队参赛。 竞赛安排上午、下午各一场，竞赛场次由领队抽签决定。竞赛场座位号由选手抽签决定，竞赛用设备、材料及实验动物与座位号对应。

6新城疫抗体测定-比赛规程

2013年龙岩市第二届中等职业院校教师教学技能大赛农林牧技术“新城疫抗体测定”比赛规程 一、比赛项目 比赛设二个项目：1.片段教学（含板书） 2.专业技能 二、参赛对象、资格审查及组队方式 ⒈参赛对象：龙岩市中等职业学校农林牧技术类在职在岗教师。 ⒉资格审查：各校做好本校参赛教师的资格审查工作。比赛时参赛选手须带身份证和抽签号。资格审查时应主动提供给评委和工作人员检查。证明材料不一致或不符合要求的提请组委会决定是否取消参赛资格。 ⒊组队方式：各中职学校每校选拔1-3人参加。 三、比赛地点与时间安排 1．比赛地点：龙岩市农业学校 2．比赛时间：2013年11月23日 四、比赛内容 总分（共计）200分，片段教学（100分）、专业技能（100分） （一）片段教学比赛（评分标准见附件） 1.教材范围：中国农业出版社中等职业教育课程《动物微生物与检验》） 2.比赛内容：每位参赛教师按照抽签顺序号进入备课室，根据现场抽选课题进行备课（时间为50分钟），备课结束后按抽签顺序号进行片段教学，由评委现场评分。 3.比赛要求：比赛时间15分钟（不少于10分钟且不超过15分钟）。片段教学应能体现课程新理念，重点突出，贴近专业，能积极引导学生互动，并有

效开展对学生的评价；板书按照片段教学内容要求自行设计，应当文字清晰、设计得当、布局合理、体现学科特点。 备课的课题教材（复印件）、备课纸均由大赛组委会提供，比赛现场选手不得携带与比赛相关的资料。片段教学时选手只能携带备课教材复印件、备课稿进入片段教学考室。 （二）新城疫抗体测定项目（评分标准见附件） 在规定90分钟内，参赛教师完成新城疫抗体测定项目（微量法）。 （1）试验器材准备按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放 （2）血凝试验按照操作规程使用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原并充分混匀和递倍稀释，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡和感作，正确判定出1个血凝单位。 （3）配制四单位病毒根据HA试验测定的新城疫标准抗原的血凝效价，按照操作规程配制四单位病毒。 （4）血凝抑制试验按照操作规程进行被检血清的血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照。 （5）抗体滴度报告按照操作规程正确读数，并完成报告单填写。 五、比赛场地与设施

新城疫抗体水平检测精编版

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新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞 2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。 抗体 病毒颗粒 红细胞

四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 （二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 （三）血凝试验（HA) 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 血凝价的判定

关于2018年全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项比赛(报到)的通知【模板】

***于2018年全国职业院校技能大赛 鸡新城疫抗体水平测定赛项比赛（报到）的通知 各省、自治区、直辖市教育厅（教委），新疆生产建设兵团教育局： 2018年全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项（高职组）将于2018年5月25—28日在**学院举行，现将有关事宜通知如下： 一、报到时间 2018年5月25日全天至5月26日11:30前 二、报到地点 报到地点：指定入住酒店（详见“四、食宿及接站安排”）报到手续：各参赛队凭身份证、学生证、保险单领取参赛证件、赛项指南和参赛服装。

四、食宿及接站安排 1.住宿安排（费用自理） 2.用餐安排

各入住酒店均提供免费早餐，中晚餐由各参赛代表队自行安排；建议在入住酒店、学院食堂用餐，餐费自理；参赛队成员如对用餐有特殊要求，请务必在回执中注明。 3.接站安排 在以下每个接站点均安排专人接站，安排专用车辆迎送参赛师生前往报到酒店。接站点分别是： （1）高铁南平北站； （2）南平火车南站； （3）九峰大厦（福州长乐机场到南平大巴的终点站） 注：如乘飞机到福州长乐机场的参赛师生，建议先乘坐机场大巴前往福州火车站（车程约1小时），然后乘坐福州火车站至南平北站的高铁或动车（车程约40分钟）；或选择乘坐福州长乐机场到南平的定时大巴，终点在南平九峰大厦，车程大约3小时30分钟。 五、比赛内容 包括试验器材准备、配制1%鸡红细胞悬液、血凝试验、配制四单位病毒、血凝抑制试验、抗体滴度报告等6个方面内容。具体详见2018年全国职业院校技能大赛官网发布的“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程。 六、组队与报名

1．严格按照《2018年全国职业院校技能大赛参赛报名办法》和大赛执委会相关通知执行。 2．本赛项为团体赛,每队由2名选手组成。 3．不得跨校组队，同一学校报名参赛队不超过1支。每支参赛队限配2名指导教师，指导教师须为本校专职教师。 4．报名方式与程序按大赛执委会统一安排，进行网上报名。 七、赛事观摩 本赛项设计观摩区，实时直播竞赛现场实况，观摩人员在指定区域观赛。 八、其他注意事项 1.各参赛代表队须为参赛选手购买大赛期间的人身意外伤害保险。 2.由于接待能力所限，每队不超过5人。 3.参赛选手报到时需携带身份证、学生证和保险单，以便入住登记、核实参赛资格。 4.赛项所有信息都将发布于国赛网站，请随时关注：***https://www.wendangku.net/doc/843294091.html,/。 5.各参赛院校务必于5月15日前将参赛回执表（见附件）的电子文档发送至大赛报到邮箱********@https://www.wendangku.net/doc/843294091.html,，联系人：丁灵妍******** 附件：参赛回执表.docx 2018年全国职业院校技能大赛 高职组“鸡新城疫抗体水平测定”赛项执委会 赛项承办校：**学院（代章） 2018年5月8日

鸡新城疫抗体滴度检测

鸡新城疫抗体滴度的检测 （红血球凝集抑制法） 1 红细胞血凝与血凝抑制的原理 红细胞凝集的实质是红细胞膜上的特异性抗原(凝集原，agglutinogen)和相应抗体(凝集素，agglutinin)发生抗原抗体反应。当病毒的悬液中先加入特异性抗原，且这种抗原的量足以封闭病毒颗粒或其凝集素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其凝集素直接接触，这是红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制，也称为血凝抑制反应。新城疫病毒属于副黏病毒属，是最主要的红细胞凝集性病毒，具有神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA)，可使红细胞凝集。 2 实验材料 鸡新城疫抗原(NDV，南京天邦生物科技有限公司)；生理盐水；肝素钠；96 孔V 型微量血凝板；微量移液枪 3 红细胞凝集 3.1 1%鸡红细胞悬液的制备 取无免疫过的成年公鸡，翅静脉采血10~15 mL，肝素抗凝，2000 r/min 离心10 min，弃上清，注意要将血细胞泥表面的一层薄膜洗净。然后用血细胞泥5~10 倍的PBS洗涤，2000 r/min 离心10 min，弃上清，如此反复洗涤 3 次至上清液透明，弃上清液后得到红细胞泥。再用PBS配成1%鸡红细胞悬液（红细胞泥：PBS=1ml:100ml）。4℃保存，不超过5d。 3.2 红细胞凝集(4 单位抗原的滴定)

在96 孔微量血凝板上，从左到右每空各加50 μL 生理盐水，另加一排作为重复。再向每排的第 1 孔加入50 μL 新城疫抗原，依次向后倍比稀释直至第11 孔，第12 孔作为对照，无抗原液。然后向每孔加入1%鸡红细胞悬液50 μL，将微量板振荡混匀20~30 次（于微型振荡器上震荡1 m in），置于37℃温箱感作30 min 后每5 min 观察一次，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果观察：将反应板倾斜45 度角，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动着为沉淀，表明红细胞未被凝集或不完全被病毒凝集；如果红细胞铺平孔底，凝集成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，表明红细胞被病毒所凝集。以100%凝集的抗原最大稀释孔位该抗原的血凝价，即1 个凝集单位；从该孔向前移2 孔的抗原稀释度作为4 单位抗原的稀释度。 抗原应稀释的倍数=血凝滴度÷4 (若血凝价为26，病毒抗原应稀释倍数为24（16），即16ml生理盐水+1ml抗原即为4个单位血凝单位的病毒抗原)。 4 红细胞凝集抑制 在96 孔微量血凝板上，从左到右每孔中各加50 μL 生理盐水，再向每排的第 1 孔加入50 μL 待测血清，依次向后倍比稀释直到第10 孔，然后向每孔加入50 μL 4 单位抗原，振荡混匀20~30 次，置于37℃温箱感作20 min。取出再向每孔中加入1%鸡红细胞悬液50 μL，振荡混匀20~30 次，置于37℃温箱感作20 min 后每5 min 观察一次。