文档库

最新最全的文档下载
当前位置:文档库 > 川贝母中西贝母碱提取工艺优选-王道东

川贝母中西贝母碱提取工艺优选-王道东

9

第18卷 第5期 2016 年 5 月

辽宁中医药大学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

Vol. 18 No. 5 May,2016

川贝母中西贝母碱提取工艺优选

王道东1,邵珠德2,刘元涛2

(1.山东中医药大学附属医院,山东 济南 250355;2.山东中医药大学,山东 济南 250355)

摘 要:

目的:优选川贝母中西贝母碱的酸水温浸提取工艺。方法:以川贝母中西贝母碱提取率为指标,采用单因素试验考察提取方法,选取药材粉碎粒度、温浸温度、溶剂倍量、药液pH、提取时间、提取次数为考察因素,通过正交试验优选西贝母碱的提取工艺。结果:最佳提取工艺为粉碎过20目筛,加入6倍量pH 为1的盐酸水溶液,60 ℃动态温浸提取3次,每次1 h。最佳提取工艺的西贝母碱提取率为89.29%。结论:该方法灵敏度高,稳定性和准确性良好,且优选的工艺稳定可行,川贝母中西贝母碱提取率较高,适用于工业大生产。

关键词:川贝母;西贝母碱;提取率;提取工艺

中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2016) 05- 0009- 03

收稿日期:2015-10-11基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项项目(2013ZX09103002-015)作者简介:王道东(1978-),男,山东聊城人,主任药师,学士,研究方向:药剂学。

Optimization Extraction Process of Sipeimine in Fritillaria Cirrhosa

WANG Daodong 1,SHAO Zhude 2,LIU Yuantao 2

(1.Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,Shandong,

China;2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,Shandong,China)Abstract:Objective :To optimization the acid water soaking extraction process of sipeimine in Fritillaria cirrhosa . Methods :To adopt the extraction rate of sipeimine in Fritillaria cirrhosa as index. Single factor test was used to investigate the extraction method,select the medicinal powder granularity,soaking temperature,solvent volume,extraction time,solution pH,extracting times as factors,orthogonal test for optimization of extraction process by means of sipeimine. Results :The optimum extraction process is to ground through a 20 mesh sieve,adding 6 times amount of water solution of hydrochloric acid of pH for 1,60 ℃ dynamic temperature soaking and extracting for 3 times,each time1 hours. The extraction rate of the best extraction process of sipeimine as 89.29%. Conclusion :The method has high sensitivity,good stability and accuracy,and theoptimization process is stable and feasible,and extraction rate of sipeimine in Fritillaria cirrhosa is higher,and is applicable to industrial production.

Keywords:Fritillaria cirrhosa ;sipeimine;extraction rate;extraction process 川贝母系百合科植物川贝母(Fritillaria cirrhosa

D.Don)的干燥鳞茎[1]

。具有清热润肺、化痰止咳、散结消痈等功效[2],临床主要用于虚劳咳嗽、肺热燥咳、瘰疬、乳痈、肺痈。现代研究表明,川贝母具有镇咳、祛痰、平喘、镇静、抗菌等作用,其主要活性成分为西贝母碱等生物碱类成分[3]。目前对川贝母总生物碱的提取工艺研究报道较少,该药材经提取后常因得膏率高、杂质成分多,导致不能合理应用。本实验采用酸水提取法通过正交试验优选川贝母中西贝母碱的提取工艺,为川贝母中西贝母碱的提取和工业化生产提供实验依据。

1 仪器与材料1.1 实验仪器

LC-2010A 型高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括蒸发光散射检测器、CLASS-VP 工作站;METTLER TOLEDO AB135-S 型电子天平;UV1100型紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);PHS-3C 型PH 计(上海雷磁仪器厂);PK-S24型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司);KQ-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 实验材料

色谱纯乙腈(美国 DNK 公司),色谱纯磷酸(天

津孚赛瑞公司),其余试剂均为分析纯;西贝母碱对照品(质量分数≥98%购自上海源叶生物科技有限公司,批号20120802)。川贝母药材购自济南建联中药店,经山东中医药大学药学院万鹏教授鉴定为百合科植物川贝母(Fritillaria cirrhosa D.Don)的干燥鳞茎。

2

方法与结果

2.1 西贝母碱含量测定

2.1.1 色谱条件与系统适应性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%三乙胺溶液(65∶35)为流动相;体积流量

1.0 mL·min -1

;柱温30 ℃;选用蒸发光散射检测器,漂移管温度100 ℃;载气流速2.6 mL·min -1,增益1,撞击器关[4],进样量5μL。理论板数按西贝母碱峰计算应不低于2000。结果见图1~图

川贝母中西贝母碱提取工艺优选-王道东

2。

图1 西贝母碱对照品HPLC 图谱

DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2016.05.002

辽宁中医药大学学报18

川贝母中西贝母碱提取工艺优选-王道东

图2 川贝母药材供试品HPLC 图谱

2.1.2 标准曲线的绘制

取西贝母碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液,即得西贝母碱对照品溶液。精密量取上述对照品溶液各0.1、0.2、0.4、0.6、1.0 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按“2.1.1”项下色谱条件进样,以西贝母碱进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,求得回归方程:Y =23785X-0.3918(r=0.9993),线性范围

1.90~3.01μg。

2.2药材粉碎粒度的考察

由于川贝母粉性较强,故粒度对西贝母碱的浸出及得膏率有较大影响。本研究以西贝母碱的提取率、得膏率为指标,比较粉碎粒度对西贝母碱提取效果的影响。取川贝母,分别直接投料、粉碎至20、50、100、150目投料,以6倍量pH为1的盐酸水溶液为提取溶剂,50 ℃温浸提取1 h,测定西贝母碱的提取率及得膏率,结果见表1,图3。

表1 不同粉碎程度西贝母碱提取率及得膏率

粒度(目)西贝母碱提取率(%)得膏率(%)

未粉碎20.88 6.33

2046.12 8.95

5048.2918.96

10058.2628.35

15060.5131.64

川贝母中西贝母碱提取工艺优选-王道东

川贝母中西贝母碱提取工艺优选-王道东

图3 不同粉碎程度西贝母碱提取率及得膏率

由图3可知,随粉碎粒度增加,西贝母碱提取率及得膏率均增加。药材粉碎至过20目时,提取率与粉碎至50目以上时相差不大,但得膏率远小于粉碎至50、100、150目的得膏率,因此确定将川贝母粉碎至过20目即可。

2.3药材温浸温度的考察

采用酸水提取时温度过高易导致川贝母中所含淀粉水解成支链淀粉[5]。因此,温度对生物碱的浸出及得膏率有较大影响。本研究以西贝母碱的提取率及得膏率为指标,比较温度对西贝母碱提取效果的影响。取川贝母过20目粗粉20 g,以7倍量pH 为1的盐酸水溶液为提取溶剂,分别在40、60、80 ℃条件下温浸提取1 h,测定西贝母碱的提取率及得膏率,结果见表2。

表2 不同温浸温度对西贝母碱提取效果的影响

温度(℃)西贝母碱提取率(%)得膏率(%)提取液状态4046.28 8.17透明,稳定

6056.15 9.04透明,稳定

8061.9935.14黏度大,放冷后浑浊

由表2结果可知,温浸温度对西贝母碱的提取率及得膏率影响较大,随温度升高,西贝母碱提取率

及得膏率均增加。但温度高于80 ℃时,淀粉大量溶出,得膏率偏大,且提取液黏稠,放冷后浑浊不稳定。因此,在保证西贝母碱提取率前提下,确定温浸温度为得膏率较小的60 ℃。

2.4正交优选川贝母酸水温浸提取工艺

在前期试验基础上,以西贝母碱提取率为指标,采用L9(34)正交试验对川贝母提取工艺进行优选。

2.4.1 因素水平表的设计

以溶剂倍量、药液pH、提取时间、提取次数为因素,每个因素设定3个水平,因素水平表见表3。

表3 川贝母提取工艺正交设计因素水平

水平

因素

A B C(h)D

11411

226 1.52

33823

注:A:pH;B:溶剂倍量;C:提取时间;D:提取次数。2.4.2 正交试验

取川贝母20 g,粉碎过20目筛,按照L9(34)正交试验进行试验,并测定西贝母碱的提取率,结果见表4~表5。

表4 川贝母提取工艺正交试验结果

试验号

因素西贝母碱

提取率(%)

A B C D

1111155.13

2122267.92

3133392.18

4212378.06

5223160.12

6231250.62

7313253.98

8321365.49

9332153.06

K1215.23187.17171.24168.31

K2188.80193.53199.04172.52

K3172.53195.86206.28235.73

R42.7 8.69 35.04 67.42

表5 正交试验方差分析结果

因素离差平方和均值自由度F值显著性

A309.6164222154.80821122.95*

B 13.4882892 6.744144 1.00

C228.1176892114.05884416.91

D950.9649562475.48247870.50*直观分析:R D>R A>R C>R B,因此A、D为主要因素,B、C为次要因素;A1>A2>A3,A1为最优水平;D3>D2>D1,D3为最优水平;B3>B2>B1,B3为最优水平;C3>C2>C1,C3为最优水平。直观最优提取工艺为A1B3C3D3,即取川贝母药材,粉碎过20目筛,加入8倍量pH为1的盐酸水溶液,60 ℃温浸提取3次,每次2 h。

方差分析:以极差最小的B为误差项进行方差分析,A、D因素为显著因素(D>A),B、C为不显著因素(C>B)。对于A、D两因素,各水平间差异很大,应分别选择最优水平A1D3;B因素为最不显著因素,各水平间特别是水平2、3之间相差不大,从节省料液并有利于后续处理角度考虑,选择水平2即可;C因素各水平间相差不大,从节省时间、提高效率角度考虑,选择水平1即可。故拟定最佳提取工艺为A1B2C1D3,即取川贝母药材,粉碎过20目筛,加入6倍量pH为1的盐酸水溶液,60 ℃温浸提取3次,每次1 h。

2.4.3 提取工艺验证

为考察上述工艺的稳定性,取川贝母最粗粉3份,每份20 g,分别按上述拟定最佳工艺提取,按照

10

11

第18卷 第5期 2016 年 5 月

辽宁中医药大学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

Vol. 18 No. 5 May,2016

热毒宁注射液联合注射用阿莫西林克拉维酸钾治疗小儿扁桃体发炎临床疗效观察

阚淑月,王国辉,钱坤,王慧丽,于庆坤

(唐山市妇幼保健院,河北 唐山 063000)

摘 要:

目的:探讨热毒宁注射液联合注射用阿莫西林克拉维酸钾治疗小儿扁桃体发炎的临床疗效。方法:收集我院收治的扁桃体炎患儿80例,根据用药不同分为对照组和实验组,每组各40例,分别给予相应的药物治疗,治疗结束后,对所有患儿的白细胞水平以及各症状恢复情况进行检测。结果:与对照组相比,实验组患儿各指标改善较为显著,具体表现为:①实验组患者的白细胞水平下降较为显著(P <0.05);②实验组患者的白细胞水平恢复时间较短(P <0.05);③实验组咽痛及扁桃体肿大评分下降较为显著(P <0.05);④实验组患者的咽痛、扁桃体肿大恢复时间以及退热时间较短(P <0.05)。结论:热毒宁注射液联合注射用阿莫西林克拉维酸钾能够显著、快速改善小儿扁桃体发炎的各种临床症状,值得临床推广。

关键词:热毒宁注射液;注射用阿莫西林克拉维酸钾;小儿扁桃体发炎;白细胞

中图分类号:R766.18 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2016) 05- 0011- 03

收稿日期:2015-10-03

作者简介:阚淑月(1969-),女,河北唐山人,主任药师,学士,研究方向:临床药学。

Effect on the Inflammation of Children's Amygdala by Amoxicillin and

Clavulanate Potassium Injection Combined with Reduning Injection KAN Shuyue,WANG Guohui,QIAN Kun,WANG Huili,YU Qingkun

(Tangshan City Maternal and Child Health Hospital,Tangshan 063000,Hebei,China)

Abstract:Objective :To investigate the effect on the inflammation of children's amygdala by amoxicillin

and clavulanate potassium injection combined with Reduning Injection. Methods :80 cases of children with the amygdala in our hospital were selected and divided into control group and experiment group,40 cases in each group were treated with the corresponding drugs. The white blood cell level and the symptoms were detected and compared after treatment. Results :Compared with the control group,each index of the patients in the experimental group improved more significantly(P <0.05),the specific performance:decreased levels of white blood cells of the patients in the experimental group is significant(P <0.05). The patients in the experimental group the levels of white blood cell recovery time shorter(P <0.05);experimental group sore throat and tonsils are swollen big score decreased more significantly(P <0.05);patients in the experimental group of sore throat,swollen tonsils reply time and cooling time shorter(P <0.05). Conclusion :Reduning Injection combined with amoxicillin and clavulanate potassium injection can significantly,rapid improvement of various clinical symptoms in children with tonsil inflammation,worthy of clinical promotion.

Keywords:Reduning Injection;amoxicillin and clavulanate potassium injection;children with tonsil inflammation;WBC “2.1.1”项下方法测定西贝母碱提取率,结果西贝母碱提取率分别为89.6%、90.32%、87.94%,均值为89.29%,RSD 为1.37%。结果表明该工艺稳定、可行,因此确定川贝母最佳提取工艺为:粉碎过20目筛,加入6倍量pH 为1的盐酸水溶液,60 ℃动态温浸提取3次,每次1 h。

3

讨论与总结

川贝母的主要活性成分为甾体类生物碱,此类成

分大都没有共轭体系,用常见的紫外吸收检测器不能检测到,一般采用酸性染料比色法、两相滴定法、非水滴定法测定贝母药材中总生物碱含量。《中华人民共和国药典》2010年版第2部川贝母含量测定采用溴甲酚绿比色法[6],实际操作中发现存在结果不稳定、不易成线性、测定结果偏低等问题。蒸发光散射检测器(Evaporative Light Scanning Deteetor,ELSD)作为质量型检测器,对一些不易挥发的化合物,不论有无紫

外吸收均能检测[7]

,与HPLC 配合使用是紫外检测器的一个很好的补充,采用蒸发光检测器以高效液相色谱法测定则操作简便、结果准确。根据《中华人民共

和国药典》2010年版第2部川贝母含量测定项下的

方法及文献报道,选择西贝母碱为指标成分。

本试验所采用的酸水温浸提取西贝母碱尚未见有关文献报道,该工艺操作简便易行,西贝母碱提取率较高,相对于乙醇回流提取耗能更低,大生产更易实现,为西贝母碱的工业化生产提供依据。◆

参考文献

[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版(一部)[ S ] .北

京:化学工业出版社,2010.[ 2 ] 周瑞玲,陈玉兴.川贝枇杷膏止咳、化痰、平喘、抗炎及免疫作

用研究[ J ] .中国实验方剂学杂志,2004,10 ( 5 ):25-26. [ 3 ] 颜晓燕,彭成.川贝母药理作用研究进展[ J ] .中国药房,

2011,22 ( 31 ):2963-2964.[ 4 ] 霍务贞,朱盛山,邬威尧,等.HPLC-ELSD 测定蛇胆川贝散

生产过程西贝母碱的含量变化[ J ] .中国实验方剂学杂志,2012,18 ( 3 ):93-94.[ 5 ] 王书军,高文远,于璟琳,等.淀粉的热性质在贝母药材鉴别和

分类中的应用[ J ] .中国药学杂志,2007,42 ( 21 ):1617-1619.[ 6 ] 余江平,刘震东,王曙.分光光度法测定栽培川贝母中总生物

碱的含量[ J ] .中国药房,2010,21 ( 15 ):1383-1384.[ 7 ] 赵宇新,李曼玲.蒸发光散射检测器在中药成分分析中的应用

[ J ] .中国中药杂志,2003,28 ( 10 ):913-915.

DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2016.05.003