鸡新城疫抗体水平测定

2018年全国职业院校技能大赛

拟设赛项规程

一、赛项名称

赛项编号：GZ-2018011

赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定

英语翻译：Detection of the Antibody against Chicken NewCastle Disease Virus

赛项组别：高职组

赛项归属产业：农林牧渔

二、竞赛目的

本赛项由学校、行业、企业共设，通过技能竞赛，能有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，加大行业人才队伍建设力度，提升行业产业发展水平。同时，通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量。

三、竞赛内容

本赛项为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛时间为180分钟。具体步骤及其分值如下：

（一）试验器材准备（占总成绩的8%）

按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。

（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）

按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1%鸡红细胞量适宜等。

（三）血凝试验（占总成绩的20%）

按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，再次滴加稀释液，再添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，静置感作适当时间后，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。

（四）配制四单位病毒（占总成绩的10%）

根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。

（五）血凝抑制试验（占总成绩的20%）

按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果，确定抗体滴度，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。

（六）抗体滴度报告（占总成绩的24%）

按照操作规程，正确判定抗体滴度，完成报告。要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。

四、竞赛方式

本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生，不得跨校组队。

竞赛安排上午、下午各一场（每场两个赛场），竞赛场次由领队抽签决定。竞赛场座位号由选手抽签决定，竞赛用设备、材料及实验动物与工位号对应。

本赛项不邀请境外代表队参赛。

五、竞赛流程

本项目竞赛日程与流程安排见表1。

六、竞赛赛卷

本赛项不设理论考试，只对操作技能进行综合考核，技能竞赛题为公开赛卷，见本赛项规程的竞赛内容。

七、竞赛规则

1.参赛选手须为高职院校全日制在籍专科学生；本科院校中高职类全日制在籍学生；五年制高职四、五年级学生。参赛选手必须持本人身份证和参赛证参加比赛。参赛选手年龄须不超过25周岁，年龄计算时间截止2018年5月1日。凡在往届全国职业院校技能大赛中获一等奖的选手，不能再参加同一项目同一组别的比赛。

2.参赛选手和指导教师报名获得确认后不得随意更换。如比赛前参赛选手和指导教师因故无法参赛，须由省级教育行政部门于本赛项开赛10个工作日之前出具书面说明，经大赛执委会办公室核实后予以更换。竞赛开始后，参赛队不得更换参赛队员。

3.参赛选手出场顺序、位置、比赛所用器材等均由抽签决定，不得擅自变更、调整。

4.参赛选手提前30分钟检录进入赛场，按照抽签工位号参加比赛，竞赛开始后迟到15分钟以上者取消比赛资格；开赛30分钟后，选手方可离开赛场。

5.选手进入赛场后须检查实验用品是否齐全，如有疑问向裁判询问。选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场，如有特殊情况，需经裁判同意，选手若需休息、饮水或去洗手间等，耗用时间计算在比赛时间内。

6.选手应在竞赛试卷或实物标签上填写工位号。试卷（或实物标签）上不得有任何暗示选手身份的记号和符号，否则取消成绩。比赛过程中如果动物出现死亡等意外情况，举手示意，可更换实验动物。各参赛选手要按照规定做好详细记录；判定试验结果时要举手示意裁判。

7.竞赛在规定时间结束时，选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延。选手若提前完成操作，需举手示意，由裁判员记录结束时间，确认后方可离开比赛现场。

八、竞赛环境

赛场照明、控温良好。

赛场内设有相对独立的长实验台并标明编号，选手根据抽签结果

在相应的实验台完成比赛。

赛场内设置摄像头，可将实时赛况直播到观摩室。

九、技术规范

本赛项以教育部颁布的职业院校相关专业教学指导方案和国家职业标准《动物疫病防治员》（三级）规定的知识和技能要求为基础，依据《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，确定比赛内容及方式。

十、技术平台

仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制。本赛项所用的仪器、设备与材料见表2。

十一、成绩评定

成绩评定按照公平、公正、客观的原则进行。

（一）裁判组成

项目组设裁判员19名，其中裁判长1名，加密裁判2名，评分裁判16名（2个赛场同时举行比赛）。

（二）评分方法

本赛项采取过程评分的方式评分，结果评定采用百分制。竞赛现场每位裁判对每一组选手分别打分，由项目裁判组统一评分，去掉一个最高分，去掉一个最低分，其余得分的算术平均值作为参赛队伍的最后得分。

各裁判员首先审核选手原始打分成绩，并签名；赛项裁判长对所有裁判员的打分成绩进行审核，并签名。

（三）成绩审核

为保障成绩评判的准确性，监督组将对赛项总成绩排名前30%的所有参赛队伍（选手）的成绩进行复核；对其余成绩进行抽检复核，抽检覆盖率不得低于15%。如发现成绩错误以书面方式及时告知裁判

长，由裁判长更正成绩并签字确认。复核、抽检错误率超过5%的，裁判组将对所有成绩进行复核。

（四）成绩公布

记分员将解密后的各参赛队成绩汇总成最终成绩单，经裁判长、监督组签字后，在指定地点、以纸质形式进行公示，公示时间为2小时。成绩公示无异议后，由仲裁长、监督组长在成绩单上签字，并在闭赛上公布竞赛成绩。

项目技能竞赛评分标准见表3。

十二、奖项设定

本赛项设一、二、三等奖。以赛项实际参赛队总数为基数，一、二、三等奖获奖比例分别为10%、20%、30%（小数点后四舍五入）。获得奖项的参赛队，授予相应的荣誉证书。获得一等奖的参赛队指导教师由大赛组委会颁发优秀指导教师证书。

十三、赛项安全

（一）比赛环境

1.执委会须在赛前组织专人对比赛现场、住宿场所和交通保障进行考察，并对安全工作提出明确要求。赛场的布置，赛场内的器材、设备，应符合国家有关安全规定。如有必要，也可进行赛场仿真模拟测试，以发现可能出现的问题。承办单位赛前须按照执委会要求排除安全隐患。

2.赛场周围要设立警戒线，要求所有参赛人员必须凭执委会印发

的有效证件进入场地，防止无关人员进入发生意外事件。比赛现场内应参照相关职业岗位的要求为选手提供必要的劳动保护。在具有危险性的操作环节，裁判员要严防选手出现错误操作。

3.承办单位应提供保证应急预案实施的条件。对于比赛内容涉及高空作业、可能有坠物、大用电量、易发生火灾等情况的赛项，必须明确制度和预案，并配备急救人员与设施。

4.严格控制与参赛无关的易燃易爆以及各类危险品进入比赛场地，不许随便携带书包进入赛场。

5.配备先进的仪器，防止有人利用电磁波干扰比赛秩序。大赛现场需对赛场进行网络安全控制，以免场内外信息交互，充分体现大赛的严肃、公平和公正性。

6.执委会须会同承办单位制定开放赛场和体验区的人员疏导方案。赛场环境中存在人员密集、车流人流交错的区域，除了设置齐全的指示标志外，须增加引导人员，并开辟备用通道。

7.大赛期间，承办单位须在赛场管理的关键岗位，增加力量，建立安全管理日志。

8.竞赛用生物制品均由符合国家标准的企业生产与提供，实验动物（鸡）符合生物安全规范。

（二）生活条件

1.比赛期间，原则上由执委会统一安排参赛选手和指导教师食宿。承办单位须尊重少数民族的信仰及文化，根据国家相关的民族政策，安排好少数民族选手和教师的饮食起居。

2.比赛期间安排的住宿地应具有宾馆/住宿经营许可资质。以学校宿舍作为住宿地的，大赛期间的住宿、卫生、饮食安全等由执委会

和提供宿舍的学校共同负责。

3.大赛期间有组织的参观和观摩活动的交通安全由执委会负责。执委会和承办单位须保证比赛期间选手、指导教师和裁判员、工作人员的交通安全。

4.各赛项的安全管理，除了可以采取必要的安全隔离措施外，应严格遵守国家相关法律法规，保护个人隐私和人身自由。

（三）组队责任

1.各学校组织代表队时，须安排为参赛选手购买大赛期间的人身意外伤害保险。

2.各学校代表队组成后，须制定相关管理制度，并对所有选手、指导教师进行安全教育。

3.各参赛队伍须加强对参与比赛人员的安全管理，实现与赛场安全管理的对接。

（四）应急处理

比赛期间发生意外事故，发现者应第一时间报告执委会，同时采取措施避免事态扩大。执委会应立即启动预案予以解决并报告组委会。赛项出现重大安全问题可以停赛，是否停赛由执委会决定。事后，执委会应向组委会报告详细情况。

（五）处罚措施

1.因参赛队伍原因造成重大安全事故的，取消其获奖资格。

2.参赛队伍有发生重大安全事故隐患，经赛场工作人员提示、警告无效的，可取消其继续比赛的资格。

3.赛事工作人员违规的，按照相应的制度追究责任。情节恶劣并造成重大安全事故的，由司法机关追究相应法律责任。

十四、竞赛须知

（一）参赛队须知

1.参赛队名称统一使用规定的地区代表队名称。

2.参赛选手和指导教师报名获得确认后不得随意更换。如比赛前参赛选手和指导教师因故无法参赛，须由省级教育行政部门于本赛项开赛10个工作日之前出具书面说明，经大赛执委会办公室核实后予以更换。竞赛开始后，参赛队不得更换参赛队员。

3.参赛队按照大赛赛程安排，凭大赛组委会颁发的参赛证和有效身份证件参加比赛及相关活动。

4.参赛院校须为参赛队员购买保险。

（二）指导教师须知

1.各参赛代表队要发扬良好道德风尚，听从指挥，服从裁判，不弄虚作假。如发现弄虚作假者，取消参赛资格，名次无效。

2.各代表队领队要坚决执行竞赛的各项规定，加强对参赛人员的管理，做好赛前准备工作，督促选手带好证件等竞赛相关材料。

3.竞赛过程中，除参加当场次竞赛的选手、执行裁判员、现场工作人员和经批准的人员外，领队、指导教师及其他人员一律不得进入竞赛区域。

4.参赛代表队若对竞赛过程有异议，在规定的时间内由领队向赛项仲裁工作组提出书面报告。

5.对申诉的仲裁结果，领队、指导教师要带头服从和执行，并做好选手工作。参赛选手不得因申诉或对处理意见不服而停止竞赛，否则以弃权处理。

6.指导老师应及时查看大赛专用网页有关赛项的通知和内容，认

真研究和掌握本赛项竞赛的规程、技术规范和赛场要求，指导选手做好赛前的一切技术准备和竞赛准备。

（三）参赛选手须知

1.参赛选手应按有关要求如实填报个人信息，否则取消竞赛资格。

2.参赛选手凭统一印制的参赛证和有效身份证件参加竞赛。

3.参赛选手应认真学习领会本次竞赛相关文件，自觉遵守大赛纪律，服从指挥，听从安排，文明参赛。

4.参赛选手请勿携带与竞赛无关的电子设备、通讯设备及其他资料与用品进入赛场。

5.参赛选手应提前30分钟抵达赛场，凭参赛证、身份证件检录，按要求入场，不得迟到早退。竞赛开始后迟到15分钟以上者取消比赛资格；开赛30分钟后，选手方可离开赛场。

6.参赛选手应按抽签结果在指定位置进行比赛。

7.竞赛过程中，参赛选手必须严格遵守赛场纪律，不得在赛场内大声喧哗，不得作弊或弄虚作假；同时，必须严格遵守操作规程，确保设备和人身安全，并接受裁判员的监督和警示。若因选手因素造成设备故障或损坏，无法进行比赛，裁判长有权终止该队比赛；若因非选手个人因素造成设备故障的，由裁判长视具体情况做出裁决。

8.各参赛选手必须按规范要求操作竞赛设备。一旦出现较严重的安全事故，经裁判长批准后可立即取消其参赛资格。

9.竞赛时间终了，选手应全体起立，结束操作。经现场指挥人员发出指令后，方可离开赛场。

10.在竞赛期间，未经执委会的批准，参赛选手不得接受其他单

位和个人进行的与竞赛内容相关的采访。参赛选手不得将竞赛的相关信息私自公布。

（四）工作人员须知

1.大赛全体工作人员必须服从组委会统一指挥，认真履行职责，做好比赛服务工作。

2.全体工作人员要按分工准时到岗，尽职尽责做好份内各项工作，保证比赛顺利进行。

3.认真检查、核准证件，非参赛选手不准进入赛场。同时，要安排好领队、指导教师休息。

4.比赛出现技术问题（包括设备、器材等）时，应及时联系各项技术负责人，妥善处理；如需重新比赛，须得要得到组委会同意后方可进行。

5.如遇突发事件，要及时向组委会报告，同时做好疏导工作，避免重大事故发生，确保大赛圆满成功。

6.要认真组织好参赛选手的赛前准备工作，遇有重大问题及时与组委会联系协商解决办法。

7.各项比赛的技术负责人，一定要坚守岗位，要对比赛技术操作的全过程负责。

8.工作人员不要在赛场内接听或打电话，负责现场的人员在比赛期间一律关闭手机。

十五、申诉与仲裁

本赛项在比赛过程中若出现有失公正或有关人员违规等现象，代表队领队可在比赛结束后2小时之内向仲裁组提出书面申诉。书面申诉应对申诉事件的现象、发生时间、涉及人员、申诉依据等进行充分、

实事求是的叙述，并由领队亲笔签名。非书面申诉不予受理。

赛项仲裁工作组在接到申诉后的2小时内组织复议，并及时反馈复议结果。申诉方对复议结果仍有异议，可由省（市）领队向赛区仲裁委员会提出申诉。赛区仲裁委员会的仲裁结果为最终结果。

十六、竞赛观摩

赛场内设定观摩区域，向媒体、企业代表、院校师生及家长等社会公众开放。

为保证大赛顺利进行，在观摩期间应遵循以下规则：

1．除与竞赛直接有关工作人员、裁判员、参赛选手外，其余人员均为观摩观众。

2．请勿在选手准备或比赛中交谈或欢呼；请勿对选手打手势，包括哑语沟通等明示、暗示行为，禁止鼓掌喝彩等发出声音的行为。

3．请勿在观摩赛场地内使用相机、摄影机等一切对比赛正常进行造成干扰的带有闪光灯及快门音的设备。

4．不得违反全国职业院校技能大赛规定的各项纪律。请站在规划的观摩席或者安全线以外观看比赛，并遵循赛场内工作人员和竞赛裁判人员的指挥，不得有围攻裁判员、选手或者其他工作人员的行为。

5．请务必保持赛场清洁，将饮料食品包装、烟头及其他杂物扔进垃圾箱。

6．观摩期间，严重违纪者除本人被逐出观摩赛场地外，还将视情况严重程度对所在代表队的选手的成绩进行扣分直至取消比赛资格。

7.如果对裁判裁决产生质疑的，请通过各参赛队领队向赛项仲裁组提出，不得在比赛现场发言。

2014全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定解读

2014年全国职业院校技能大赛 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：G-057 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农业 二、竞赛目的 通过本项目竞赛，促进高职学生了解鸡新城疫抗体水平测定的内容，熟练掌握测定方法，提高检测水平，培养学生的团队合作能力，不断提升学生的职业能力；引领农业职业院校适应畜牧业行业现状及技术发展趋势，促进畜牧兽医专业建设与教学改革；推进学院与相关企业深度合作，更好地实现工学结合的人才培养模式，为畜牧兽医行业培养高素质技术技能型人才。 三、竞赛内容与时间 （一）竞赛内容 竞赛项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法）。测定方法参考《新城疫诊断技术》（GB/T16550—2008）标准，具体分为6个部分。竞赛总时间为180分钟。 1.试验器材准备（占总成绩的6%） 按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放。 2.配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的20%） 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液。 3.血凝（HA）试验（占总成绩的16%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板上滴加稀

释液、新城疫标准抗原，充分混匀后倍比稀释，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡和感作，正确判定抗原的血凝效价。 4.配制四单位病毒（占总成绩的15%） 根据HA试验测定结果，按照操作规程配制四单位病毒。 5.血凝抑制（HI）试验（占总成绩的16%） 按照操作规程，对10个被检血清进行血凝抑制试验操作，同时设新城疫标准阳性血清对照和阴性血清对照。 6.抗体滴度报告（占总成绩的27%） 按照操作规程正确读数，填写完成报告单。 （二）竞赛时间 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，须为同校在籍学生。由各省、自治区、直辖市教育行政部门商农业行政部门，在本区域内设置畜牧兽医专业的涉农高职院校全日制在籍学生中（参赛选手年龄须不超过25周岁，即2014年7月1日前不满26周岁），经选拔组成1个代表队参加比赛，每队限报1名指导教师。本赛项本次竞赛不邀请

鸡新城疫抗体(NDV-Ab)说明书

鸡新城疫抗体（NDV-Ab）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫抗体（NDV-Ab）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体（NDV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的新城疫抗体（NDV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存 标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

新城疫抗体水平检测

新城疫抗体水平检测文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。 2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。 病毒颗粒 红细胞

四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 （二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 （三）血凝试验（HA) 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul 生理盐水 抗体 抗原

实验一鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

实验一鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒（如新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象（）。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（）。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5 只，被检鸡15-25 只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2 聚乙烯塑料管100、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1 ）浓缩抗原；（2 ）生理盐水或磷酸缓冲盐水（）；（3）细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清4．实验步骤 （1）发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 （2）诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4 倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（）的和 （1 ）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫n系或系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ②0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管（按每毫升血加 入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2 毫升做抗凝剂）内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内（保存液2份，血液1份）于4 C冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000 转／分钟，离心5-10 分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液（生理盐水）洗涤。再用离心机3000 转／分钟离心5-10 分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液（0.7 毫升红细胞泥加99 .3毫升稀释液）。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内（微 量法可用孔径2-3 毫米塑料管由翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。 每只鸡应更换一个注射器，严禁交叉使用。 ④稀释液：为灭菌的生理盐水。 ⑤红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05克，柠檬酸钠（）0.80克，柠檬酸（2H20）0.055克，

实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果 和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞 凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细 胞凝集抑制试验(HI)。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型 振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清 4．实验步骤 (1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被 特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如 抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（ND）的HA和HI （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细 胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后 一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

鸡新城疫抗体水平测定

2018年全国职业院校技能大赛 拟设赛项规程 一、赛项名称 赛项编号:GZ－2０18011 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Deteｃtioｎof the Aｎtｉbody agａiｎst Chicｋen Ne ｗCastｌe DｉsｅasｅViｒｕｓ 赛项组别:高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目得 本赛项由学校、行业、企业共设，通过技能竞赛,能有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间得交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间得合作交流，加大行业人才队伍建设力度，提升行业产业发展水平.同时，通过本赛项得资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业得师生风采与建设成果，提高专业得教学水平，提升人才培养质量。 三、竞赛内容 本赛项为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫诊断技术》（GB／T１6550－2008）标准，竞赛时间为１80分钟.具体步骤及其分值如下: （一)试验器材准备(占总成绩得8％） 按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理,桌面整洁等. (二)配制１%鸡红细胞悬液（占总成绩得1８%） 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1％鸡红细胞悬液，

要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1％鸡红细胞量适宜等。 (三）血凝试验(占总成绩得２0%) 按照操作规程,用微量移液器在９6孔V型血凝反应板１－12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原,充分混匀，倍比稀释后，再次滴加稀释液,再添加１％鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，静置感作适当时间后,正确判定抗原得血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩得10％) 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 (五)血凝抑制试验(占总成绩得20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作,并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清得结果，确定抗体滴度，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔得稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等. (六)抗体滴度报告（占总成绩得24％) 按照操作规程，正确判定抗体滴度,完成报告.要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生,不得跨校组队。 竞赛安排上午、下午各一场(每场两个赛场）,竞赛场次由领队抽

蛋鸡抗体检测实验室建设方法

蛋鸡抗体检测实验室建设方法 一、面积、台面、墙面 面积至少要有6平方，放置一张操作台（桌子，面要平，长1.5米，宽1米），一张凳子，墙用彩钢板隔开，制作一个门，保持空间独立。 二、器材 1、一台小高压锅，用于灭菌。 2、冰箱，用于盛放易耗品等。 3、离心机（5000转以下）一台，用于制作红细胞。 4、移液枪两把，一把为1毫升的，另一把为200微升的。 5、电子天平一台。 三、耗材 1、枪头，1毫升的及200微升的，各500个。 2、盛放枪头的盒子，两种规格，各5个。 3、Ependorf管100个，Ependorf管架2个。 4、葡萄糖瓶子10各。 5、量筒2个。 6、记号笔一支。 四、 血凝试验(HA) 定义：某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HA) 血凝抑制试验(HI) 定义：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 原理：特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。 用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定 根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。 阿氏（Alsevers）液配制

新城疫抗体检测

新城疫的抗体检测 某些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的实验称血球凝集试验，以此来推断被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制，即血球凝集抑制实验（HI ），通过血凝与血凝抑制试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 一目的意义 1免疫监测（1）免疫效果评价（2）免疫时机确定 2诊断疾病（根据有无抗体或抗体的高低） 3流行病学调查 二试验仪器与试剂 1 试验仪器离心机、离心管两支、50ml 量筒一个、V 型微量反应板、微量加样器（移液 器）、塑料吸头（黄色）若干、1ml 吸管1 支、胶头滴管两支、微量振荡器、 电热恒温培养箱、托盘天平。 2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5 H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、 3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。 三方法 1 病毒的血凝试验 1.13.8% 柠檬酸钠抗凝剂的配制：用托盘天平称取柠檬酸钠3.8 克溶于100ml 蒸馏水 或纯净水中，摇匀使其充分溶解即可，有条件的可121 C高压蒸汽灭菌20分钟，冷却至室 温后置4C冰箱中保存备用。 1.21%鸡红细胞制备过程：事先用5ml （或10ml）的注射器吸入抗凝剂若干（其量为 所需血量的1/5）, 从健康公鸡（未经新城疫疫苗注射）的心脏或翅下静脉采取2-4 毫升血液, 以2000 转每分钟，离心5 分钟，吸去上清液（注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净）。然后用生理盐水（用量为血细胞泥的5-10 倍）洗红细胞，离心5分钟，弃去上清液，如此反复洗3-5 次，直至上清液透明清亮为止，最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度，然后置4 C冰箱备用（一般可保存3天）。 1.3红细胞凝集试验（血凝试验）操作方法（见表1）： （1）取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板，用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水，每孔25 微升，直至加到第十五孔（第一列12 孔，第二列3 孔）。 （2）取新城疫抗原液25微升加入第一孔中，充分混合后吸取25微升加入第二孔中，如此直至第14孔，混合后吸取25微升丢弃，第15孔不加病毒为对照。 （3）更换移液器前端的塑料吸头，每孔加已备的1%鸡红细胞液各25 微升（注意从后往 前加）。 （4）将反应板置微型震荡器上，振动混合1分钟，取下置37C恒温箱中作用30分钟后 开始观察结果，注意每五分钟观察一次，直至30 分钟，判定并记录结果。 判定结果如下： ++++——红细胞全部凝集，均匀分布于孔底。 ++ ---- 红细胞部分凝集，沉积于孔底呈小圆点状。 - ——红细胞全部不凝集，沉积于孔底呈圆点状。 以使红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价。4单位病毒的确定，以 上述血凝价除以4即为4单位病毒，如血凝价为1:128，则1:128的0.1ml中有一个凝集单位，4 单位病毒为128/4=32 ，即1:32 为4 个凝集单位。

2016年全国职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测定赛项规程

2016年全国职业院校技能大赛高职组 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：GZ-108 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目的 本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。 三、竞赛内容 本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛总时间为180分钟。具体步骤及其分值如下： （一）试验器材准备（占总成绩的8%） 按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。 （二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%） 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，

要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。 （三）血凝试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩的10%） 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 （五）血凝抑制试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、结果判断正确等。 （六）抗体滴度报告（占总成绩的24%） 按照操作规程，正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求抗体滴度报告方式正确、场地整洁、结果误差小等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，每个团队限报1名指导教师。参赛选手均为高职院校在籍学生。本赛项本次竞赛不邀请境外代表队参赛。 竞赛安排上午、下午各一场，竞赛场次由领队抽签决定。竞赛场座位号由选手抽签决定，竞赛用设备、材料及实验动物与座位号对应。

2018年全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定项目申报书 (46)

附件： 2018年全国职业院校技能大赛 赛项申报书 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 赛项类别：常规赛项?行业特色赛项□ 赛项组别：中职组□高职组? 涉及的专业大类/类： 方案设计专家组组长： 手机号码： 方案申报单位（盖章）：全国林业职业教育教学指导委员会方案申报负责人： 方案申报单位联络人： 联络人手机号码： 电子邮箱： 通讯地址： 邮政编码： 申报日期：2017年8月31日

2018年全国职业院校技能大赛 赛项申报方案 一、赛项名称 （一）赛项名称 鸡新城疫抗体水平测定。 （二）压题彩照 图1 新城疫抗体水平测定比赛现场 （三）赛项归属产业类型 农业 （四）赛项归属专业大类 51农林牧渔大类 二、赛项申报专家组 本赛项主要由本科及高职院校畜牧兽医及相关专业教师，农业科学院畜牧兽医研究所和企业技术骨干组成竞赛项目设计团队。竞赛项目设计团队成员及相关信息如表1。

表1 赛项申报专家组名单 三、赛项目的 本赛项考核的核心技能是鸡的采血方法、1%鸡红细胞悬液配制、血凝试验操作、四单位病毒配制、血凝抑制试验操作、抗体滴度报告撰写等技能。本赛项考核的核心知识是《动物微生物》、《兽医临床诊疗技术》、《动物传染病》等专业课程理论知识。 本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医等专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。 四、赛项设计原则 （一）公开、公平、公正 本赛项筹备与实施的各环节均按规定要求科学组织，公开进行报名、审查，提前公布技术文件、比赛样题，合理设计竞赛规则、程序、标准，公开执行过程，严格命题、裁判回避制度等措施，确保比赛公平。赛项设计源于职业岗位具体要求、又能够展现通用性技术与选手能力；比赛过程在公平和不干扰比赛选手的前提下向社会开放，并邀请广播、电视、网络等媒体宣传报道，提高赛项知名度，促进职业技能大赛健康发展。 （二）关联职业岗位面广 鸡新城疫抗体水平测定是兽医临床衡量养殖场免疫状况、预警免疫缺陷、制定有效防疫方案的重要方法之一，是畜牧兽医专

鸡新城疫的免疫检测程序

教学实习内容 一．鸡新城疫的免疫检测 目的：系统掌握鸡新城疫的抗体检测技术。 实验材料：新城疫疫苗、待测鸡蛋、生理盐水、5%柠檬酸钠、1%鸡红细胞悬液、胶头滴管、注射器、锥形瓶、15ml离心管、试管、96孔V型板、离心机等 1.1%鸡红细胞悬液的制备 （1）每组采取3ml左右健康鸡静脉血，迅速注入装有约0.3-0.4ml抗凝剂的离心管内，轻轻颠倒混匀； （2）加入适量生理盐水，混匀，3000rpm*10min，吸弃上清液和红细胞沉淀上层的白细胞层 （3）加入适量生理盐水，重悬红细胞，3000rpm*10min，吸弃上清液。如此，重复3次。（4）量取红细胞沉淀的体积，用生理盐水配成1%的红细胞悬液，待用。 2.HA试验 1%红细胞 根据所用NDV液的凝集价，配制4单位病毒液。 3.HI试验 （1）待测卵黄样品的制备：用镊子敲破鸡蛋小头，将蛋清倒去，留蛋黄在蛋壳内；吸取0.5ml 生理盐水，放入小试管内；去掉部分蛋壳，用1ml注射器（不带针头）吸取蛋黄0.5ml，加到有生理盐水的试管内，混匀（避免其很多泡）待检。 （2）按照检测血清抗体的方法检测卵黄中的抗体。

被检鸡蛋卵黄 1%红细胞 （3）判定和记录所检测鸡蛋的卵黄抗体效价。 结果与分析 对所测得的结果进行分析，确定该鸡群目前的免疫状态，并对生产提出合理建议或给出科学指导。 分析并指出影响本实验结果的主要因素。 二．传染病的分子生物学检测——PCR检测（以PCV2为例） 1.DNA提取： 将猪肝脏称重后，按照1:3（W:V）的比例加入PBS，用组织研磨器研磨成组织悬液，反复冻融3次后8000 rpm离心5 min，取上清300 μL提取DNA。 取冻融、离心后的组织悬液/血清300μL，加入300 μL细胞裂解缓冲液和5 μL的蛋白酶K(20 mg/mL)，混匀，置50 ℃消化2 h，每隔30 min，剧烈震荡一次；加入等体积的Tris饱和酚，充分振荡混匀，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）混匀后，4 ℃ 12000 rpm 离心10 min；用酚：氯仿：异戊醇（25:24: l）重复抽提一次；取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中，加入2倍体积冰预冷的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L醋酸钠（pH 5.2），室温放置30 min 以沉淀基因组DNA；4 ℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；用75%乙醇1 mL 洗涤沉淀，4 ℃ 12 000 rpm 离心10 min后，弃去上清，自然晾干。用25 μL含RNaseA(20 μg/mL)的TE溶解DNA沉淀，直接用于检测病毒DNA或-20 ℃保存待测。 2.PCR检测： 将所提取的DNA用特异性引物进行PCR扩增检测组织中PCV2。 25 μL反应体系如下： 10×Taq Reaction Buffer 2.5 μL 10 mmol/L dNTPs 2 μL 25 pmol/μL上下游引物各0.5 μL DNA模板 2 μL

关于2018年全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项比赛(报到)的通知【模板】

***于2018年全国职业院校技能大赛 鸡新城疫抗体水平测定赛项比赛（报到）的通知 各省、自治区、直辖市教育厅（教委），新疆生产建设兵团教育局： 2018年全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项（高职组）将于2018年5月25—28日在**学院举行，现将有关事宜通知如下： 一、报到时间 2018年5月25日全天至5月26日11:30前 二、报到地点 报到地点：指定入住酒店（详见“四、食宿及接站安排”）报到手续：各参赛队凭身份证、学生证、保险单领取参赛证件、赛项指南和参赛服装。

四、食宿及接站安排 1.住宿安排（费用自理） 2.用餐安排

各入住酒店均提供免费早餐，中晚餐由各参赛代表队自行安排；建议在入住酒店、学院食堂用餐，餐费自理；参赛队成员如对用餐有特殊要求，请务必在回执中注明。 3.接站安排 在以下每个接站点均安排专人接站，安排专用车辆迎送参赛师生前往报到酒店。接站点分别是： （1）高铁南平北站； （2）南平火车南站； （3）九峰大厦（福州长乐机场到南平大巴的终点站） 注：如乘飞机到福州长乐机场的参赛师生，建议先乘坐机场大巴前往福州火车站（车程约1小时），然后乘坐福州火车站至南平北站的高铁或动车（车程约40分钟）；或选择乘坐福州长乐机场到南平的定时大巴，终点在南平九峰大厦，车程大约3小时30分钟。 五、比赛内容 包括试验器材准备、配制1%鸡红细胞悬液、血凝试验、配制四单位病毒、血凝抑制试验、抗体滴度报告等6个方面内容。具体详见2018年全国职业院校技能大赛官网发布的“鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程。 六、组队与报名

1．严格按照《2018年全国职业院校技能大赛参赛报名办法》和大赛执委会相关通知执行。 2．本赛项为团体赛,每队由2名选手组成。 3．不得跨校组队，同一学校报名参赛队不超过1支。每支参赛队限配2名指导教师，指导教师须为本校专职教师。 4．报名方式与程序按大赛执委会统一安排，进行网上报名。 七、赛事观摩 本赛项设计观摩区，实时直播竞赛现场实况，观摩人员在指定区域观赛。 八、其他注意事项 1.各参赛代表队须为参赛选手购买大赛期间的人身意外伤害保险。 2.由于接待能力所限，每队不超过5人。 3.参赛选手报到时需携带身份证、学生证和保险单，以便入住登记、核实参赛资格。 4.赛项所有信息都将发布于国赛网站，请随时关注：***https://www.wendangku.net/doc/849355967.html,/。 5.各参赛院校务必于5月15日前将参赛回执表（见附件）的电子文档发送至大赛报到邮箱********@https://www.wendangku.net/doc/849355967.html,，联系人：丁灵妍******** 附件：参赛回执表.docx 2018年全国职业院校技能大赛 高职组“鸡新城疫抗体水平测定”赛项执委会 赛项承办校：**学院（代章） 2018年5月8日

鸡新城疫抗体滴度检测

鸡新城疫抗体滴度的检测 （红血球凝集抑制法） 1 红细胞血凝与血凝抑制的原理 红细胞凝集的实质是红细胞膜上的特异性抗原(凝集原，agglutinogen)和相应抗体(凝集素，agglutinin)发生抗原抗体反应。当病毒的悬液中先加入特异性抗原，且这种抗原的量足以封闭病毒颗粒或其凝集素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其凝集素直接接触，这是红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制，也称为血凝抑制反应。新城疫病毒属于副黏病毒属，是最主要的红细胞凝集性病毒，具有神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA)，可使红细胞凝集。 2 实验材料 鸡新城疫抗原(NDV，南京天邦生物科技有限公司)；生理盐水；肝素钠；96 孔V 型微量血凝板；微量移液枪 3 红细胞凝集 3.1 1%鸡红细胞悬液的制备 取无免疫过的成年公鸡，翅静脉采血10~15 mL，肝素抗凝，2000 r/min 离心10 min，弃上清，注意要将血细胞泥表面的一层薄膜洗净。然后用血细胞泥5~10 倍的PBS洗涤，2000 r/min 离心10 min，弃上清，如此反复洗涤 3 次至上清液透明，弃上清液后得到红细胞泥。再用PBS配成1%鸡红细胞悬液（红细胞泥：PBS=1ml:100ml）。4℃保存，不超过5d。 3.2 红细胞凝集(4 单位抗原的滴定)

在96 孔微量血凝板上，从左到右每空各加50 μL 生理盐水，另加一排作为重复。再向每排的第 1 孔加入50 μL 新城疫抗原，依次向后倍比稀释直至第11 孔，第12 孔作为对照，无抗原液。然后向每孔加入1%鸡红细胞悬液50 μL，将微量板振荡混匀20~30 次（于微型振荡器上震荡1 m in），置于37℃温箱感作30 min 后每5 min 观察一次，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果观察：将反应板倾斜45 度角，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动着为沉淀，表明红细胞未被凝集或不完全被病毒凝集；如果红细胞铺平孔底，凝集成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，表明红细胞被病毒所凝集。以100%凝集的抗原最大稀释孔位该抗原的血凝价，即1 个凝集单位；从该孔向前移2 孔的抗原稀释度作为4 单位抗原的稀释度。 抗原应稀释的倍数=血凝滴度÷4 (若血凝价为26，病毒抗原应稀释倍数为24（16），即16ml生理盐水+1ml抗原即为4个单位血凝单位的病毒抗原)。 4 红细胞凝集抑制 在96 孔微量血凝板上，从左到右每孔中各加50 μL 生理盐水，再向每排的第 1 孔加入50 μL 待测血清，依次向后倍比稀释直到第10 孔，然后向每孔加入50 μL 4 单位抗原，振荡混匀20~30 次，置于37℃温箱感作20 min。取出再向每孔中加入1%鸡红细胞悬液50 μL，振荡混匀20~30 次，置于37℃温箱感作20 min 后每5 min 观察一次。

实验一鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象()。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验()。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2聚乙烯塑料管100、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（）；（3）细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清 4．实验步骤 (1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（）的和 （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

实验一鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清 4．实验步骤 (1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（ND）的HA和HI （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

2020年全国职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测定赛项规程-精品

2020年全国职业院校技能大赛高职组鸡新城疫抗体水平测定赛项规程-精品 “鸡新城疫抗体水平测定”赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：GZ-108 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the antibody titer against the Newcastle disease virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目的 本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。 三、竞赛内容 本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛总时间为180分钟。具体步骤及其分值如下： （一）试验器材准备（占总成绩的8%） 按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。 （二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）

按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。 （三）血凝试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩的10%） 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 （五）血凝抑制试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、结果判断正确等。 （六）抗体滴度报告（占总成绩的24%） 按照操作规程，正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求抗体滴度报告方式正确、场地整洁、结果误差小等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，每个团队限报1名指导教师。参赛选手均为高职院校在籍学生。本赛项本次竞赛不邀请境外代表队参赛。 竞赛安排上午、下午各一场，竞赛场次由领队抽签决定。竞赛场

新城疫抗体水平检测精编版

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新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞 2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。 抗体 病毒颗粒 红细胞

四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干）、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 （二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 （三）血凝试验（HA) 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 血凝价的判定