第二节 免疫细胞
第六章免疫系统
第二节免疫细胞
凡参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞统称为免疫细胞。它们的种类繁多，功能各异，但相互作用，相互依存。根据它们在免疫应答中的功能及作用机理，可分为免疫活性细胞和免疫辅佐细胞两大类。此外还有一些其他细胞，如K 细胞、NK细胞、粒细胞、红细胞等，也参与了免疫应答中的某一特定环节。
一、免疫活性细胞
在淋巴细胞中，受抗原物质刺激后能增殖分化，并产生特异性免疫应答的细胞，称为免疫活性细胞，主要指T细胞和B细胞，在免疫应答过程中起核心作用。
（一）T、B细胞的来源与分布（图6-9）T、B细胞均来源于骨髓的多能干细胞，骨髓中的一部分多能干细胞首先分化为淋巴干细胞，并进一步分化为前T细胞和前B细胞。前T细胞进入胸腺发育为成熟的T细胞，并经血流分布到外周免疫器官的胸腺依赖区定居和增殖，并可经血液→组织→淋巴→血液再循环巡游全身各处。T细胞接受抗原刺激后活化、增殖、分化成为效应T细胞，发挥细胞免疫的功能。效应性T细胞是短寿的，一般存活4～6d，其中一小部分变为长寿的免疫记忆细胞，进入淋巴细胞再循环，它们可存活数月到数年。
前B细胞在哺乳动物的骨髓或鸟类的腔上囊分化为成熟的B细胞，成熟的B 细胞分布在外周免疫器官的非胸腺依赖区定居和增殖。B细胞接受抗原刺激后活化、增殖、分化为浆细胞，发挥体液免疫的功能。浆细胞一般只能存活2d。一部分B细胞成为免疫记忆细胞，参与淋巴细胞再循环，它们是长寿的B细胞，可存活100d以上。
（二）T、B细胞的表面标志
T细胞和B细胞在光学显微镜下均为小淋巴细胞，从形态上难于区分（图6-10）。在扫描电镜下多数T细胞表面光滑，有较小绒毛突起；而B细胞表面较为粗糙，有较多绒毛突起。但这不足以区别T细胞和B细胞。淋巴细胞表面存在着大量不同种类的蛋白质分子，这些表面分子又称为表面标志（surface marker）。T细胞和B细胞的表面标志包括表面受体和表面抗原，可用于鉴别T 细胞和B细胞及其亚群。
表面受体是淋巴细胞表面上能与相应配体（特异性抗原、绵羊红细胞、补体等）发生特异性结合的分子结构。表面抗原是指在淋巴细胞或其亚群细胞表面上能被特异性抗体（如单克隆抗体）所识别的表面分子。由于表面抗原是在淋巴细胞分化过程中产生的，故又称为分化抗原。不同的研究者和实验室已建立了多种单克隆抗体系统用以鉴定淋巴细胞表面抗原，出现了多种命名。为避免混淆，从1983年起，经国际会议商定以分化群（CD）统一命名淋巴细胞表面抗原或分子，如将单抗OKT3和单抗Leu4所识别的同一分化抗原命名为CD3等，至今已命名200余种CD抗原。
1．T细胞的表面标志
（1）T细胞抗原受体（TCR）：T细胞表面具有识别和结合特异性抗原的分子
结构，称T细胞抗原受体（TCR）。人和各种动物的T细胞表面均具有TCR，每个成熟的T细胞克隆内各个细胞具有相同的TCR，在每个机体内可能有数百万种T 细胞及其特异性的TCR，故能识别许多种抗原。
TCR识别和结合抗原的性质是有条件的，即只有当抗原片段或决定簇与抗原递呈细胞上的MHC分子结合在一起时，T细胞的TCR才能识别或结合MHCⅡ类分子（或MHCⅠ类分子）—抗原片段复合物中的抗原部分。这就是TCR识别抗原须受MHC分子与抗原片段结合的限制，亦称为TCR识别抗原的MHC限制性或MHC 约束性。所以TCR不能识别和结合单独存在的抗原片段或决定簇。
（2）CD
2
曾称为红细胞受体或E受体，是T细胞重要的表面标志，B细胞缺乏这一标志。在体外将某种动物T细胞与绵羊红细胞混合，可见红细胞围绕T 细胞形成玫瑰花环（图6-11），E玫瑰花环试验是鉴别T细胞及检测外周血中T 细胞的比例及数目的常用方法
（3）CD
3仅存在于T细胞表面，常与TCR紧密结合形成TCR-CD
3
复合体。
CD
3
分子的功能是把TCR与外来结合的抗原信息传递到细胞内，启动细胞内的活化过程，在T细胞被抗原激活的早期过程中起重要作用。
（4）CD
4和CD
8
分别为MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子的受体。CD
4
、CD
8
分别
出现在具有不同功能亚群的T细胞表面，在同一T细胞表面只表达其中一种，因
此T细胞可分为两大类群：CD
4+ T细胞和CD
8
+ T细胞。在正常情况下，这两类T
细胞比值为2∶1，这是评估机体免疫状态的重要依据之一。如这一比值偏离正常值，甚至出现比值倒置，则说明机体免疫机能失调。
（5）白细胞介素受体：T细胞表面具有多种白细胞介素受体（如IL-2受体），可结合白细胞介素，并接受白细胞介素的刺激和调控。
此外，在T细胞的表面还有丝裂原受体、IgG或IgM的Fc受体以及各种激素或介质如肾上腺素、皮质激素、组织胺的受体等。
2．B细胞的表面标志
（1）B细胞抗原受体：B细胞表面的抗原受体是细胞表面的免疫球蛋白（SmIg）。这种SmIg的分子结构与血清中的Ig相同，其Fc段的几个氨基酸镶嵌在细胞膜脂质双层中，Fab段则伸向细胞外侧以便与抗原结合。只有SmIg与抗原发生结合后，才能引起B细胞发生免疫应答。每个B细胞表面约有104～105个免疫球蛋白分子。SmIg是鉴别B细胞的主要特征，常用荧光素或铁蛋白标记的抗免疫球蛋白抗体来鉴别B细胞。
（2）Fc受体此受体能与免疫球蛋白的Fc片段结合。大多数B细胞有IgG
的F
C 受体，能与IgG的F
C
段结合。当B细胞表面的F
C
受体与抗原抗体复合物结
合，有利于B细胞对抗原的捕获和结合以及B细胞的激活和抗体的产生。
（3）补体受体大多数B细胞表面存在能与补体结合的受体。补体受体有利于B细胞捕捉与补体结合的抗原抗体复合物，此受体被结合后可促使B细胞活化。
此外，在B细胞表面还有丝裂原受体、CD
79、白细胞介素受体、以及CD
9
、CD
10
、
CD
19、CD
20
分子等。
（三）T、B淋巴细胞亚群及其功能
1．T细胞的亚群及其功能根据T细胞在免疫应答中的功能不同，将T细
胞分为五个主要亚群：
细胞毒性T细胞（Tc）：又称杀伤性T细胞（Tk），活化后称为细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）。在免疫效应阶段，Tc活化产生CTL，它能特异性地杀伤带有抗原的靶细胞，如感染微生物的细胞、同种异体移植细胞及肿瘤细胞等，CTL能连续杀伤多个靶细胞（图6-12）。Tc细胞具有记忆性能，有高度特异性。
辅助性T细胞（T H）：是体内免疫应答不可缺少的亚群，其主要功能为协助其他免疫细胞发挥功能。通过分泌细胞因子和与B细胞接触可促进B细胞的活化、分化和抗体产生；通过分泌细胞因子可促进Tc和T DTH的活化；能协助巨噬细胞增强迟发型变态反应的强度。
抑制性T细胞（Ts）：能抑制B细胞产生抗体和其他T细胞的增殖分化，从而调节体液免疫和细胞免疫。Ts细胞占外周血液T细胞的10%～20%。
诱导性T细胞（T I）：能诱导T H和Ts细胞的成熟。
迟发型变态反应性T细胞（T D或T DTH）：在免疫应答的效应阶段和Ⅳ型变态反应中能释放多种淋巴因子导致炎症反应，发挥清除抗原的功能。
2．B细胞亚群根据B细胞产生抗体时是否需要T H细胞的协助，将其分为B1和B2两个亚群。B1为T细胞非依赖细胞，在接受胸腺非依赖性抗原刺激后活化增殖，不需T H细胞的协助；B2为T细胞依赖性细胞，这类细胞在接受胸腺依赖性抗原刺激后发生免疫应答，必须有T H细胞的协助才能产生抗体。
二、辅佐细胞
T细胞和B细胞是免疫应答的主要承担者，但免疫应答的完成尚需体内的巨噬细胞、树突状细胞等对抗原进行捕捉、加工和处理，这些细胞称为免疫辅佐细胞，简称A细胞。由于辅佐细胞在免疫应答中能将抗原递呈给免疫活性细胞，因此称为抗原递呈细胞（APC）。
（一）单核巨噬细胞系统包括血液中的单核细胞和组织中的巨噬细胞。巨噬细胞主要分布于疏松结缔组织、肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓、肺泡及腹膜等处，可存活数周到几年。不同组织内的巨噬细胞具有不同的名称，如结缔组织中组织细胞，肺泡中的尘细胞、肝脏中的枯否氏细胞、骨组织中的破骨细胞、神经组织中的小胶质细胞、各处表皮部位的朗罕氏细胞，在淋巴结和脾脏中仍称为巨噬细胞。各组织中的巨噬细胞分化程度很低，主要靠血液中的单核细胞来补充。（图6-13、6-14、6-15）
组织中的巨噬细胞比血液中的单核细胞含有更多的溶酶体和线粒体，具有更强大的吞噬功能。在单核巨噬细胞表面具有IgG的Fc受体、补体C3b受体、各种淋巴因子受体等，与其功能有关。
单核巨噬细胞系统的免疫功能主要表现在以下三个方面：
1．吞噬和杀伤作用组织中的巨噬细胞可吞噬和杀灭多种病原微生物，（图
6-16、6-17）并处理机体自身凋亡损伤的细胞，是机体非特异性免疫的重要因素。特别是结合有抗体（IgG）和补体（C3b）的抗原性物质更易被巨噬细胞吞噬。巨噬细胞可在抗体存在下发挥ADCC作用。巨噬细胞也是细胞免疫的效应细胞，经细胞因子如IFN-γ激活的巨噬细胞更能有效地杀伤细胞内寄生菌和肿瘤细胞。
2．递呈抗原作用（图6-18、6-19）在免疫应答中，巨噬细胞是重要的抗原递呈细胞，外源性抗原物质经巨噬细胞通过吞噬、胞饮等方式摄取，经过胞内酶的降解处理，形成许多具有抗原决定簇的抗原肽，随后这些抗原肽与MHCⅡ类分子结合形成抗原肽-MHCⅡ类分子复合物，并呈送到细胞表面，供免疫活性细胞识别。因此，巨噬细胞是免疫应答中不可缺少的免疫细胞。
3．合成和分泌各种活性因子活化的巨噬细胞能合成和分泌50余种生物活性物质，如许多酶类（中性蛋白酶、酸性水解酶、溶菌酶）；白细胞介素1、干扰素和前列腺素；血浆蛋白和补体成分等。这些活性物质的产生具有调节免疫反应的功能。
（二）树突状细胞简称D细胞（图6-10），来源于骨髓和脾脏的红髓，成熟后主要分布脾脏和淋巴结中，结缔组织中也广泛存在。树突状细胞表面伸出许多树突状突起，胞内线粒体丰富，高尔基体发达，但无溶酶体和吞噬体，故无吞噬能力。大多数树突状细胞有较多的MHCⅠ类分子和MHCⅡ类分子，少数D细胞
受体，不能吞噬抗原，主要功能是处理与递呈不需细胞处理表面有Fc受体和C
3b
的抗原，尤其是可溶性抗原，能将病毒抗原、细菌内毒素抗原等递呈给免疫活性细胞。
此外，B细胞、红细胞、郎罕氏细胞也具有抗原递呈作用。
三、其他免疫细胞
（一）杀伤细胞（Killer cell）简称K细胞，是一种直接来源于骨髓的淋巴细胞，主要存在于腹腔渗出液、血液和脾脏中。K细胞的主要特点是表面具有IgG的Fc受体。当靶细胞和相应的IgG结合，K细胞可与结合在靶细胞上的IgG的Fc片段结合，从而使自身活化，释放细胞毒，裂解靶细胞，这种作用称为抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（antibody dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC）（图6-20）。K细胞杀伤的靶细胞包括病毒感染的宿主细胞、恶性肿瘤细胞、移植物中的异体细胞及某些较大的病原体（如寄生虫）等。因此，K细胞在抗肿瘤免疫、抗感染免疫和移植物排斥反应、清除自身的衰老细胞等方面有一定的意义。
（二）自然杀伤细胞（Natural killer cell）简称NK细胞，是一群既不依赖抗体，也不需要抗原刺激和致敏就能杀伤靶细胞的淋巴细胞，因而称为自然杀伤细胞。该细胞表面存在着识别靶细胞表面分子的受体结构，通过此受体与靶细胞结合而发挥杀伤作用。NK细胞来源于骨髓，主要存在于外周血和脾脏中，淋巴结和骨髓中很少，胸腺中不存在。NK细胞的主要生物学功能为非特异性地杀伤肿瘤细胞、抵抗多种微生物感染及排斥骨髓细胞的移植，同时通过释放多种细胞因子如IL-1、IL-2、干扰素等发挥免疫调节作用。多数NK细胞具有IgG Fc
受体，也具有ADCC作用。
（三）粒细胞胞浆中含有颗粒的白细胞统称为粒细胞，包括嗜中性、嗜碱性和嗜酸性粒细胞（图6-21）。嗜中性粒细胞是血液中的主要吞噬细胞，具有高度的移动性和吞噬功能。细胞膜上有Fc及补体C3b受体。它在防御感染中起重要作用，并可分泌炎症介质，促进炎症反应，还可处理颗粒性抗原提供给巨噬细胞。嗜碱性粒细胞内含有大小不等的嗜碱性颗粒，颗粒内含有组织胺、白三烯、肝素等参与Ⅰ型变态反应的介质，细胞表面有IgE的Fc受体，能与IgE结合，带IgE的嗜碱性粒细胞与特异性抗原结合后，立即引起细胞脱粒，释放组织胺等介质，引起过敏反应。嗜酸性粒细胞胞浆内有许多嗜酸性颗粒，颗粒中含有多种酶，尤其富含过氧化物酶。该细胞具有吞噬杀菌能力，并具有抗寄生虫的作用，寄生虫感染时往往嗜酸性粒细胞增多。
（四）红细胞研究表明红细胞和白细胞一样具有重要的免疫功能，它具有识别抗原、清除体内免疫复合物、增强吞噬细胞的吞噬功能、递呈抗原信息及免疫调节等功能。
机体的免疫系统除上述介绍的免疫器官和免疫细胞外，还有直接发挥免疫效应作用的免疫分子，包括抗体、补体和细胞因子等，其详细内容在分别在第八章、第九章中讲述。
MHC和MHC限制现象
1．主要组织相容性复合体及其产物
在20世纪初人们发现了不同种属或同种动物不同系别的个体之间存在正常组织的移植排斥反应，而且这种排斥反应具有记忆性、特异性和可转移性，研究表明这种排斥反应是一种典型的免疫反应，是由细胞表面的某种抗原诱导的，称这些抗原为组织相容性抗原。这种抗原存在于细胞表面，不同程度地分布在各种组织细胞上。一般同种动物不同个体之间，这种抗原的特异性是互不相同的。但是从同一个卵细胞发生的孪生儿之间或同一纯系动物的不同个体之间，这种抗原的特异性却完全相同，说明它是受遗传基因控制的。组织相容性抗原包括许多复杂的抗原，其中，引起强烈而迅速的移植排斥反应的称为主要组织相容性抗原系统，引起弱的移植排斥反应的成为次要组织相容性抗原，它们由相应的基因编码产生。编码主要组织相容性抗原系统的一组基因，它包括多个不同的位点，集中分布于各种脊椎动物的某一染色体上的特定区域，是一组紧密连锁的基因群，称为主要组织相容性复合体（Major Histocompatibility Complex，MHC）。
MHC主要表达两类分子：MHCⅠ类分子和MHCⅡ类分子。MHCⅠ类分子广泛分布于体内各种有核细胞表面，MHCⅡ类分子主要分布在某些免疫细胞表面，如B细胞、单核-巨噬细胞、树突状细胞、激活的T细胞等。
MHC产物行使着将抗原递呈给T细胞的重要作用。抗原的加工和递呈有两条不同的途径：一是内源性抗原途径，抗原在内质网和高尔基体内加工并与MHC-I类分子结合后，被递呈到细胞表面，加工后的抗原能被CD8+T细胞识别；二是外源性抗原途径，抗原在内吞体内被加工降解，并与MHC-Ⅱ类分子结合后，
转运到细胞表面，它可被CD4+T细胞识别。MHC分子的抗原递呈功能是免疫应答和免疫调节的关键，因为MHC分子是免疫细胞间沟通信息，相互协作的基础。
2．免疫应答的MHC限制（约束）现象
免疫应答的发生，须有抗原的刺激和免疫细胞间的相互作用。在免疫应答发生的过程中，无论是T细胞和B细胞、T细胞和巨噬细胞、T细胞和T细胞间的相互作用，或是T细胞对靶细胞的裂解作用，都需涉及到一个重要问题：即T 细胞对细胞表面抗原的反应不仅是对抗原的特异性识别，而且也必须识别细胞上的自身抗原或MHC分子，否则反应即不会发生，可见反应的发生受限于MHC 分子（MHCⅠ类抗原为α链，几乎分布于所有的有核细胞和血小板表面；MHC Ⅱ类抗原为α、β链），称此为MHC限制（约束）现象（MHC restriction）。
免疫学名词解释整理
免疫(immunity)：是指机体识别“自我”与“非我”抗原，对自身抗原形成天然免疫耐受同时排除非己抗原的，维持机体内环境生理平衡的功能。正常情况下，对机体有利；免疫功能失调时，会产生对机体有害的反应。 固有免疫应答(innate immune response)：也称非特异性或获得性免疫应答，是生物体在长期种系发育和进化过程中逐渐形成的一系列防御机制。此免疫在个体出生时就具备，可对外来病原体迅速应答，产生非特异性抗感染免疫作用，同时在特异性免疫应答过程中也起作用。 适应性免疫应答(adaptive immune response)：也称特异性免疫应答，是在非特异性免疫基础上建立的，该种免疫是个体在生命过程中接受抗原性异物刺激后，主动产生或接受免疫球蛋白分子后被动获得的。 免疫防御(immunologic defence)：是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。该功能正常时，机体可抵御病原微生物及其毒性产物的感染和损害，即抗感染免疫；异常情况下，反应过高会引起超敏反应，反应过低或缺失可发生免疫缺陷。 免疫自稳(immunologic homeostasis)：是机体免疫系统维持内环境稳定的一种生理功能。该功能正常时，机体可及时清除体内损伤、衰老、变性的细胞和免疫复合物等异物，而对自身成分保持免疫耐受；该功能失调时，可发生生理功能紊乱或自身免疫性疾病。 免疫监视(immunologic surveillance)：是机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理功能。该功能失调时，有可能导致肿瘤发生，或因病毒不能清除而出现持续感染。 MALT(mucosal-associated lymphoid tissue)：即黏膜伴随的淋巴组织。是指分布在呼吸道、肠道及泌尿生殖道的粘膜上皮细胞下的无包膜的淋巴组织。除执行固有免疫外，还可执行局部特异性免疫。 抗原（antigen，缩写Ag，不是银！）：能诱导（活化/抑制）免疫系统产生免疫应答，并与相应的反应产物（抗原/致敏淋巴细胞）进行特异性结合（体内/体外）的物质。 半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 抗原决定簇（antigen determinant,AD）：指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。抗原表位（epitope）：是与TCR、BCR或抗体特异性结合的基本单位，也称抗原决定基。又称抗原决定簇。 胸腺依赖性抗原（thymus dependent antigen，TD-Ag）：是一类必须依赖Th细胞辅助才能诱导机体产生抗体的抗原。该抗原由T表位和B表位组成，绝大多数蛋白质类抗原为TD-Ag，可刺激机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答。
免疫组织化学(傅琦博)-免疫组织化学
免疫组织化学 傅琦博 引言 酶工程是生物工程的重要组成部分，近几十年来，随着研究手段的更新和技术水平的提高，产生了一门以研究酶在细胞内的存在及其动态，以阐明组织细胞的结构和功能为主要内容的科学——酶组织化学。酶组织化学是利用酶化学反应的产物可在光学显微镜或电子显微镜下被识别的特性，借以从形态学角度判定酶在组织细胞内的存在的部位的一门技术，其基础是组织化学。它具有将形态学、生物化学和生理学联系起来的特点，在生物学、生物化学、医学生物领域内日益发挥着重要的作用。研究组织细胞内特定酶分布的酶组织化学方法大致分为：（1）利用酶的活性反映的方法；（2）利用抗原抗体反应（免疫应答）证实酶的存在部位的方法。后者也被称之为免疫组织化学。 免疫组织化学概述 免疫组织化学简称免疫组化，是应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分，进行原位的定性、定位或定量的研究。这种技术称为免疫组织化学技术。免疫组化是利用抗体与抗原的结合具有高度特异性的特点，采用一直的抗体检测组织或细胞的抗原物质，以期确定组织或细胞是否存在未知抗原，并进行定性、定位或定量的研究。抗原与抗体结合形成的免疫复合物是无色的，故必须借助组织化学方法，将抗体抗原反应部位显示出来。它的主要研究方法是免疫组织染色法（简称免疫染色法），食用该方法检测细胞内物质，必须具备两个条件：①作为检测对象的物质须具有抗原性，能制作出与之相应的特异、高效价的抗体；②在免疫反应发生之前，目标物质要保持抗原性，同时还要保持在组织细胞内的稳定状态。要检测抗原，就要用与之相应的抗体进行免疫反应，同时要用可视的标记标出抗原或抗体，采用这种方法的免疫染色法称为标识抗体法或标识抗原法，常用的表示抗体法有直接法、间接法、补体结合法以及多重染色法等。直接法是标识要检出的抗原的抗体，然后进行反应的方法，其特异性高，但检出的敏感度不如间接法，标识抗体的食用范围手局限。间接法是以未标识的第一抗体进行反应，接着标识以第一抗体为抗原所制作的抗体（即第二抗体）进行重叠反应，间接的证明抗原，这种方法的缺点是容易出现非特异性反应，但敏感度较高，标识抗体的用途也广；补体结合法是将间接法中的第二抗体作为标识抗补体抗体食用；多重染色法则是在同一标本上检出多种抗原物质的方法，可以用反复进行的重复标记的直接法，也可以用酶标记的重复进行的间接法。此外，还有后标识抗体的免疫染色法，此法先采用未标识的抗体进行反应，反应结束后，通过免疫化学反应或其他化学反应，用适当的标记物质来识别已与组织细胞内抗原发生结合的抗体。 免疫组织化学技术的发展 免疫组织化学技术是形态学研究领域一门新兴方法学。自它问世以来发展迅猛,用“日新月异”一词形容它毫不过分。酶标免疫组织化学技术是由Nakane 等人于60 年代末期创立的最早的免疫酶组织化学技术,之后Sternberger 等人于70 年代初期便在此基础上建立了非标记抗体酶法(又称间接法) 和PAP 法(过氧化酶抗过氧化酶法) 。80 年代初期美籍华人Hsu 又建立了卵白素生物素复合物法(ABC法) ,自此之后,免疫金银染色法、免疫电镜等技术相继问世。80 年代末期人们又发现链霉菌抗生物素蛋白(或译成链霉菌亲合素,St reptavidin) 与生物素结合力极强,遂用它标记过氧化酶建立起了SP 法,或称LSAB 法(链霉菌亲合素生物素过氧化酶法) 。由于链霉菌亲合素不与人组织中的内源性生物素起非特异性结合反应,故背景染色更加清晰,且敏感性比ABC 法高4～8 倍,比PAP 法高8～16 倍。进入90 年代,免疫组织化学又向基因水平深入发展,与分子生物学技术的结合日益紧密。如原位杂交后信 号的放大与显示便是采用了免疫组织化学显色技术,因而又可称之为原位杂交免疫组织化学技术。而图象分析、流式细胞仪的运用，是免疫细胞化学定量分析技术提高到更精确的水平。现就该技术的发展及其应用作一概述。 1利用免疫荧光标记技术可以分辨出标记抗原抗体所在的位置及其性质, 并可利用荧光定量技术计算抗原(或抗体) 的含量, 以达到对定性、定位、定量测定的目的[2 ]。如黄祥瑞等人(1999) 利用免疫荧光细胞化学技术研究西藏环状病毒细胞生物学特性和敏感细胞范围(CPE) , 成功地观察到该病毒的细胞病变效应特异荧光发生的部位、细胞数量和病毒的形态发生。辛德毕斯热是由辛德毕斯病毒Sindbis V irus (SiN ) 引起的人兽共患虫媒病毒病, 1974 年南非发生辛德毕斯热大流行。1991年梁国栋等通
免疫细胞化学常用试剂介绍.
免疫细胞化学常用试剂介绍 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m 配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。
第三章-免疫细胞知识讲解
第三章免疫细胞 Chapter 3 Immunocytes 第一部分教学内容和要求 一、目的要求 掌握：淋巴细胞的种类、T、B细胞膜表面分子及功能，T、B细胞的功能、抗原提呈细胞的种类和功能，NK细胞的功能；熟悉：淋巴细胞的分化发育，单核-巨噬细胞和NK细胞的表面受体；了解：TCR基因和重排。 二、教学内容 1.T淋巴细胞的分化发育、膜表面分子、亚群及其功能。 2.B淋巴细胞的分化发育、膜表面分子、亚群及其功能。 3.NK细胞的膜表面分子、功能；NK细胞识别和杀伤靶细胞的机制。 4.巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和非专职性抗原提呈细胞的分布及其在免疫中所发挥的作用。 5.中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜硷粒细胞、肥大细胞、红细胞和血小板等细胞在免疫应答中的作用。 第二部分测试题 一、选择题 （一）单项选择题（A型题） 1.可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物 A.PWM B.PHA C.ConA D.MHC E.BCG 2.中性粒细胞在血循环中存活的时间 A.数小时 B.十几小时 C.数天 D.数周 E.数月 3.可刺激T细胞增殖的刺激物是 A.ConA B.MHC C.SPA D.AFP E.LPS 4.具有特异性杀伤功能的细胞 https://www.wendangku.net/doc/835530410.html,K 细胞 B.巨噬细胞 C.中性粒细胞 D.细胞毒性T细胞 E.NK细胞 5.淋巴细胞增殖试验可用来检测 A.细胞免疫功能 B.体液免疫功能 C.淋巴细胞数量 D.抗原提呈功能 E.补体功能 6.既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞 A.树突状细胞 B.巨噬细胞 C.中性粒细胞 D.B细胞 E.T细胞 7.NK细胞表面的杀伤细胞抑制受体可识别 A.自身组织细胞表面的糖类配体复合物 B.肿瘤细胞表面的糖类配体 C.自身组织细胞表面的MHC-Ⅰ类分子 D.自身组织细胞表面的MHC-Ⅱ类分子 E.表达于感染细胞表面的病毒蛋白 8.具有SRBC受体的细胞是 A.T 细胞 B.B细胞 C.肥大细胞 D.NK 细胞 E.巨噬细胞 9.含有T细胞百分率最高的部位是 A.胸导管 B.胸腺 C.脾脏 D.外周血 E.扁桃体 10.参与非特异性免疫作用的细胞是 A.CD4+Th1细胞 B.CD4+Th2细胞 C.γδT细胞 D.αβT细胞 E.CD8+Tc细胞 11.B细胞识别抗原的表面分子是 A.C3 受体 B.mIg C.SRBC 受体 D.EB病毒受体 E.HIV受体 12.MHC-I类分子的受体是
(完整版)免疫学名词解释完整版
免疫学名词解释 第一章：免疫学概论 1.免疫防御：防止外界病原体的入侵及清除已入侵病原体及其他有害物质。 2.免疫监视：是机体免疫系统及时识别并清除体内出现的非己成分的一种生理功能。该功能失调会导致肿瘤发生或持续性病毒感染。 3.免疫自身稳定：通过自身免疫耐受或免疫调节两种主要机制来达到免疫系统内环境的稳定。 4.适应性免疫应答的特点：特异性、耐受性、记忆性 第二章：免疫器官和组织 1.免疫系统：是机体执行免疫功能的物质基础，由免疫器官和组织、免疫细胞及免疫分子组成。 2.淋巴细胞归巢：血液中的淋巴细胞选择性趋向迁移并定居于外周免疫器官的特定区域或特定组织的过程。包括淋巴细胞再循环和淋巴细胞向炎症部位迁移。 3.淋巴细胞再循环：是指定居在外周免疫器官的淋巴细胞，由输出淋巴管经淋巴干、胸导管或右淋巴导管进入血液循环；经血液循环到达外周免疫器官后，穿越HEV，重新分布于全身淋巴器官和组织的反复循环过程。 第三章：抗原 1.抗原（Ag）：是指能与T细胞、B淋巴细胞的TCR或BCR识别并结合，激活T、B细胞，促使其增殖、分化，产生抗体或致敏淋巴细胞，并与免疫应答效应产物特异性结合，进而发挥适应性免疫效应应答的物质。 2.半抗原：又称不完全抗原，是指仅具有免疫反应性而无免疫原性的小分子物质，当半抗原与应答效应产物结合后即可成为完全抗原，刺激机体产生针对半抗原的特异性抗体。 3.抗原表位：存在于抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称抗原决定簇，是与TCR、BCR或抗体特异性结合的最小结构和功能单位。 4.异嗜性抗原：一类与种属无关，存在于人、动物及微生物之间的共同抗原。6.独特型抗原：TCR、CER或Ig的V区所具有的独特的氨基酸顺序和空间构型，可诱导自体产生相应的特异性抗体。 7.超抗原：指在极低浓度下即可非特异性激活大量T细胞克隆，产生极强的免疫应答，且不受MHC限制，故称超抗原。 8.佐剂：预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫类型的非特异性免疫增强性物质，称佐剂。 10.完全抗原:同时具有免疫原性和免疫反应性的物质称为完全抗原 11.胸腺依赖性抗原：指刺激B细胞产生抗体需要Th细胞辅助的抗原，简称TD 抗原。 12.胸腺非依赖性抗原：刺激B细胞产生抗体无需Th细胞辅助的抗原，简称TI 抗原。 第四章：免疫球蛋白 1.抗体（Ab）：是介导体液免疫的重要效应分子，是B细胞或记忆B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。 6.单克隆抗体：是由单一杂交瘤细胞所产生的、只作用于单一抗原表位的高度均一的特异性抗体。 7.抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）：抗体的Fab段结合靶细胞表面的
免疫学知识点归纳-终版
免疫学知识点归纳 一、常用名词 1.中枢免疫器官也称次级免疫器官,是免疫细胞发源、发育成熟的地方。骨髓是 B细胞分化、成熟的场所，也是血细胞和免疫细胞发生的场所。胸腺是T细胞分化、发育和成熟的场所 2.外周免疫器官也称初级免疫器官，是成熟T、B细胞定居的场所，也是免疫应 答的发生场所。包括淋巴结、脾脏和粘膜相关淋巴组织。 3.淋巴细胞归巢Lymphocyte homing成熟淋巴细胞离开中枢免疫器官， 经血液循环趋向性迁移并定居于外周免疫器官或组织的特定区域称为淋巴细胞归巢 4.淋巴细胞再循环Lymphocyte recirculation淋巴细胞在血液、淋巴液、 淋巴组织或器官反复循环过程称为淋巴细胞再循环。意义1、增加抗原和淋巴细胞接触机会，2、充实淋巴组织 5.抗原结合价Antigenic valence抗原分子上能与抗体分子结合的抗原表位 的总数 6.内源性抗原指在抗原体呈细胞内新合成的抗原，此类抗原在细胞内加工处理为 抗原短肽，与MHC-1类分子结合成复合物，可被CD8+ 细胞的TCR识别 7.外源性抗原指来源于APC之外的抗原……（参考上一个） 8.调理作用是指抗体的FC段与中性粒细胞、巨噬细胞表面的FC受体结合，从 而增强吞噬细胞的吞噬作用 9.单克隆抗体Monoclonal antibody由单一B淋巴细胞克隆所产生的、只 作用于某一特定抗原决定簇的均一抗体称为单克隆抗体 10.Joining chain J链是一条富含半胱氨酸多肽链，由浆细胞合成。可连接Ig 单 体形成二聚体、五聚体或多聚体。稳定多聚体结构，参与体内转运 11.主要组织相容性复合体在组织不相溶引起的移植物排斥反应中起主要作用 的基因复合物 12.MHC限制性MHC restriction T细胞以其TCR实现对抗原肽和MHC分 子的双重识别…，一类、二类 13.锚定残基与MHC结合成复合物的抗原肽往往带有两个或两个以上和MHC 分 子凹槽相结合的特定部位，称锚定位，该位置的氨基酸残基称为锚定残基 14.补体Complement广泛存在于血清、组织液、细胞表面的一组经活化后具 有酶活性的蛋白质免疫调节Immunological regulation免疫调节是机体本身对免疫应答过程中作出的生理性反馈，以保持机体内环境的稳定 15.免疫耐受Immunological tolerance 是机体对抗原刺激表现为“免疫不 应答”的现象，具有抗原特异性，即抗原不能激活特异性T或B细胞完成正特异性免疫应答的过程 16.高带耐受High-zone immunological tolerance抗原剂量太高引起的 免疫耐受。抗原剂量太高，则诱导应答细胞凋亡，或可能诱导抑制性T细胞活化，抑制免疫应答，呈现为特异负应答状态，致高带耐受 17.低带耐受Low-zone immunological tolerance 抗原剂量太低引起 的免疫耐受。抗原剂量太低，不足以激活T、B细胞，不能诱导免疫应答，致低带耐受
免疫细胞化学与图像分析
免疫细胞化学与图像分析 在细胞生物学中，一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节较多，只要有一个环节失误就会影响实验结果，除了需要精制的药品外，还需要熟练的技术。那么，做成了理想的标本后，如何进行观察，才能获得尽量多的的各种定量信息，而且使这些信息能较客观的反映出来，这就是本章的编写目的。 一、定量分析的重要性 目前有许多研究免疫细胞化学的文章，是做定性和定位研究的。如有文献中提到，P物质在脑组织中存在于30处以上，这只是解决了定性定位问题，这些部位含P物质的量是否相同？可否用快速简便的方法对细胞内免疫反应产物的量进行分析？从而可进行比较。所谓反应产物的“量”包括颜色深浅，其所占的长度或面积等，就要借助于图像分析仪（image analyzer）了。 以往我们对免疫细胞化学或一般组织化学光镜标本的观察，对反应产物的量常用“+”号表示，一般可分为0～+++，共五个等级，这种方法对差别较大的标本当然还是可以用的，但存在以下三方面的问题：①同一张标本，不同的观察者可以得到出不同的结论，因为这种分级没有明确的客观标准；②即使同一张标本同一个观察者，间隔若干天后进行再次观察时，可能结论也不一样的；③最后一点也是最重要的一点，人的视觉是有一定限制的，用一般观察法实际上已经丢失掉了许多可贵的信息，因为你察觉不到实际上存在的较小的差异。因此我们力求有一个客观的比较精密的标准。除了常用的仪器如显微分光光度计(microspe ctrophotometer)和显微密度计（microdensitometer）等以外，还可用图像分析仪进行测量。前二者已有许多有关著作中介绍过，就其精确与灵敏来说都是够的，但却不能同时测出标本中某些成分的面积、体积或长度等其他极有用的参数。图像分析仪的分析广度则要大得多，并能明显地提高工作效率，所得到的各种数据可通过分析仪上的计算机进行统计学处理，只要将各种统计学公式输入计算机，选择其中你所采用的公式，即可快速得出分析结果，告诉你有无显著性差异。 二、图像分析仪简介 图像分析仪又称图像分析系统（image analysis system），主要用来解决如何客观地较精确地用数字来表达存在于标本中的各种信息，可称为数学形态学。它已经成为一种公认的科学研究工具，并且逐渐展现出巨大的潜能。图像中包含着极其丰富的内容，是人们从客观世界中获得信息的重要手段，因此，正确地测量和处理图像已成为测量技术中的重要课题，并广泛应用于航空遥感测量、金属图像测量、微电子技术
免疫学中诺贝尔奖获得者及其主要成果
免疫学中诺贝尔奖获得者及其主要成果 其他回答共2条 免疫学领域的诺贝尔奖 免疫学研究在医学领域具有特殊地位，20世纪，诺贝尔生理学或医学奖对它的褒奖达18次之多：首届诺贝尔奖就授予免疫学成就；70年代之后，免疫学每10年都有3次获奖。 免疫是指机体的免疫系统识别“自己”与“非己”成分，并排斥异体物质的生理功能；免疫学则是一门研究免疫反应规律性的科学；而B细胞产生的免疫球蛋白即抗体，是产生体液免疫反应的关键物质，T细胞则是执行细胞吞噬功能的主体细胞。 笔者认为，免疫学在20世纪取得的最大成就，莫过于查清B细胞和T细胞免疫的隐秘。 自18世纪末19世纪初人类免疫实践的创始者、英国医生琴纳发现牛痘疫苗以来，免疫接种实践日渐丰富；自近代微生物学奠基人、法国学者巴斯德发现病原菌以后，传染性免疫现象的研究获得了长足进展。到20世纪初，从理论上解释免疫机理的要求日感迫切，这时朴素的免疫学理论应时而生。1908年，诺贝尔生理学与医学奖颁发给俄国人梅奇尼柯夫提出的第一个细胞免疫理论——细胞吞噬学说，以及德国人艾利希提出的第一个体液免疫理论“侧链说”（即“受体说”），这是医学家探索现代免疫理论的开端。 诺贝尔生理学或医学奖曾2次颁发给探索各种免疫反应奥秘的免疫生物学研究领域。 法国人里歇1907年将致敏动物的血液注入正常动物体内，发现其对过敏原呈现过敏状态，从而发现了一种与免疫现象相反的现象——过敏反应，为该项研究奠定了基础，荣获了1913年诺贝尔生理学与医学奖。 比利时人博尔德特1895年发现动物血清中，存在一种能促进病原菌溶解的物质即补体。1900年，他又发现，在补体存在的条件下，红细胞才会被溶血素溶解。将这两个发现结合起来，他又创立了补体结合试验。博尔德特因为发现补体而获取了1919年诺贝尔生理学与医学奖。 变态反应又称超敏反应，是指抗原刺激引起的免疫应答，以及由此导致的组织损伤或功能紊乱。引起变态反应的抗原称为变应原，可以是外源性抗原，或者是自身抗原。接触变应原的人群约有20％发生变态反应，一般多有家族史，是一种常染色体的显性遗传。
免疫组织化学技术(ABC法)
免疫组织化学技术（ABCxx） 大鼠脊髓冰冻切片或细胞爬片依次入含3%Triton-x100 和 0.03%H 2O 2的 0.01%磷酸盐缓冲液（PBS, pH 7.4 ），室温30min ;含3%牛血清白蛋白（BSA, Sigma的PBS室温30 min; 豚鼠抗HAP1抗体（1:300）, 4C孵育48h; PBS漂洗3次，每次10min;生物素化羊抗豚鼠IgG（1:200）室温2小时；PBS漂洗3次，每次10min; ABC复合物（1:100）, 2小时；PBS漂洗3次，每次10min ;含 0.03%DAB 和 0.006%H 2O 2 的Tris 盐酸缓冲液（pH 7.6）室温13mi n;常规脱水、透明、树脂封片，显微镜观察、拍照。以上免疫染色以PBS缓冲液替代一抗作阴性对照。 鞘内注射HAP1-siRNA后大鼠脊髓HAP1表达水平的变化。A示对照组大鼠脊髓背角HAP1免疫反应性，B示RNAi组大鼠脊髓背角HAP1免疫反应性强度减弱。C示RNAi后大鼠脊髓HAP1表达水平的免疫印迹检测。D示RNAi后大鼠脊髓背角免疫反应强度变化的统计学分析, *示与对照组比较, P< 0.01。比例尺为100 am。E示RNAi后大鼠脊髓HAP1蛋白含量变化的统计学分析, ▲示与对照组比较, P< 0.01。 免疫荧光双标技术
脊髓切片或生长在盖玻片上的PC12细胞依次入含3%Triton-100的PBS室温30min，含2%正常羊血清(NGS和3%BSA的PBS室温30min,入豚鼠抗HAP1 抗体(1:3000)和兔抗NK1R(1:100) 4C 孵育48h; PBS漂洗 3 次，每次10 min，加入RodamineRed或FITC标记的驴抗豚鼠或兔IgG (1:500),室温闭光2h, PBS闭光漂洗3次，每次10min，含10%甘油的PBS封片。荧光显微镜观察，FITC用488nm 氩氪激光激发，用530-560nm滤光片检测；Rodamine Red用543nm 氩氪激光激发,用570nm 滤光片检测。 HAP1和NK1R在大鼠脊髓背角中的定位关系。A示荧光标记的脊髓灰质背角浅层表达的HAP1, B示荧光标记的脊髓灰质背角浅层表达的NK1R C示A和 B的重叠图像。箭头示HAP1和NK1R双标细胞。 比例尺为20 am。 细胞进行处理后,弃培养基,用 0.01MPBS漂洗3遍。加入4%多聚甲醛固定30min。PBS漂洗3遍。 加入3%Triton-x 100的PBS室温30 min;含2%正常驴血清(NGS和3%BSA 的PBS室温30 min;分别加入小鼠抗MAP2单克隆抗体(1:200, Neuro-Marker 公司)或兔抗mGluR5多克隆抗体(1:1000, sigma公司)或兔抗NSE多克隆抗体 (1: 100,北京中山生物技术公司)4C孵育48h; PBS漂洗3次，每次 10min;入Rodamine Red标记的驴抗兔/小鼠IgG (1:500, Jackson ImmunoResearch Laboratories，室温闭光3h; PBS闭光漂洗3 次，每次10 min;含10%甘油的PBS封片。激光共聚焦显微镜(Olympus FV500观察，EGFP用 488nm氩氪激光激发，用530-560nm滤光片检测；RodamineRed用543nm 氩氪激光激发,用570nm 滤光片检测。
免疫组织化学技术题库1-2-10
免疫组织化学技术题 库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组化技术的优点不包括（）. A.高特异性 B.高敏感性 C.形态学的直观性 D.精确定量分析 E.能对抗原表达情况进行分析 免疫组化技术重要的特点是形态学的直观性，用于抗原表达的定性分析，不能精确定量。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫组织化学技术中，必须保证组织材料（）. A.取材新鲜 B.形态保存良好 C.抗原物质的抗原性不被破坏 D.以上均包括 E.以上均不包括 取材必须新鲜、形态保存良好、抗原性不被破坏。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫细胞组织化学技术包括（）. A.酶免疫组织化学技术 B.荧光免疫组织化学技术 C.亲和素免疫细胞组织化学技术 D.以上均包括 E.以上均不包括 免疫细胞组织化学技术包括以上所有。 (NBA总冠军 https://www.wendangku.net/doc/835530410.html,/)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]免疫标记电镜技术获得成功的关键是（）. A.对细胞超微结构完好保存 B.保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原性不受损失 C.选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合 D.以上叙述都正确 E.以上均不正确 上述均为免疫标记电镜的成功关键。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]胶体金是氯金酸在何者的作用下聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态（）. A.还原剂 B.氧化剂 C.变构剂 D.化学物质 E.以上都不对 氯金酸在还原剂如白磷、维生素C等的作用下还原为金颗粒。
免疫组织化学及其应用
免疫组织化学及其应用 浙江大学病理学与法医学研究所 周韧 1．免疫组织化学的历史、现状和发展 1．1．历史 ●人类的历史有多长，医学的历史也就有多长.医学的任何一个进步都是建立在当 时科学与技术发展的相应水平上的. ●医学的目的: 解除人体的病痛 ●核心: 诊断和治疗。 任何疾病的有效治疗均来源于正确的诊断。●疾病的诊断手段准确性，首推病理诊断准确性高，即病理组织学诊断。更准确、 更可信、更有权威性。 ●免疫组织化学（以下简称免疫组化）已成为病理诊断中的一种常用手段。 病理诊断发展过程的主要事件 年代作者事件 1632年 Severino 肿瘤切开后观察的书 1661年 Malpighi 放大镜观察后的报告 1761年 Morgagni 肿瘤与外科方面的书 1829年 Horner 首篇病理论文 1832年Hodgkin 报告7例尸检结果的论文 1858年Virchow 发表《细胞病理学》 1863年 Paget 发表《外科病理学》 1897年 Mallory和Wright 发表组织学技术的书 1914年 Mallory 发表《细胞组织学原则》 1919年 Ewing 发表《肿瘤病》 1924年 McFarland 发表《外科病理学》 1926年 Karsner 发表《人体病理学》 1928年 Papanicolaou 发表细胞学方面的书 1951年电镜应用于病理诊断 1974年免疫组化用于病理诊断 ●诊断病理学开始于19世纪 ●20世纪的第二个25年中达到光学显微镜诊断的辉煌。随之而起的电子显微镜 ●20世纪第三个25年中成为诊断病理的发展高峰。
●进入20世纪最后25年，取而代之的便是免疫组化了。 1．2．免疫组织化学的发展 1．2．1．免疫学的发展 1．2．2．单克隆技术的出现 ●病理诊断的确立：是找到“特征性”形态表现。 常规苏木素伊红（HE）染色 几百种的“特殊染色” ●免疫组织化学产生： 抗原抗体结合原理 ●从组织细胞水平进行抗原抗体反应，于是就了免疫组织化学技术。 主要的发展过程 年代研究者事件 1941年 Coons 实用免疫荧光技术 1948年 Fagraeus 进一步发展免疫荧光技术 1970年 Sternberger 抗体酶标记技术 1974年 Taylor 证实组织中的浆细胞免疫 1975年 Kohler和Milstein 单克隆抗体技术 1981年 Hsu ABC法 90年代以来 SP法，原位杂交及原位PCR免 疫组化法
免疫细胞化学 (abcam新版指南)ICC-IMMUNOCYTOCHEMISTRY
IMMUNOCYTOCHEMISTRY (ICC) General Procedure: i Coat coverslips with polyethylineimine or poly-L-lysine for 1 hr at room temperature. ii Rinse coverslips well with sterile H2O (3 times 5 min each). iii Allow coverslips to dry completely and sterilize them under UV light for at least 4 hrs. iv Grow cells on glass coverslips or prepare cytospin or smear preparation. v Rinse briefly in phosphate-buffered saline (PBS). Fixation: 1. Fix the samples either in ice-cold methanol, acetone (1-10 min) or in 3-4% paraformaldehyde in PBS pH 7.4 for 15 min at room temperature. 2. Wash the samples twice with ice cold PBS. Permeabilization: If the target protein is expressed intracellularly, it is very important to permeabilize the cells. Note: acetone fixed samples do not require permeabilization. 3. Incubate the samples for 10 min with PBS containing 0.25% Triton X-100 (or 100 μM digitonin or 0.5% saponin). Triton X-100 is the most popular detergent for improving the penetration of the antibody. However, it is not appropriate for the use of membrane-associated antigens since it destroys membranes. 4. Wash cells in PBS three times for 5 min. Blocking and Incubation: 5. Incubate cells with 1% BSA in PBST for 30 min to block unspecific binding of the antibodies (alternative blocking solutions are 1% gelatin or 10% serum from the species that the secondary antibody was raised in). 6. Incubate cells in the diluted antibody in 1% BSA in PBST in a humidified chamber for 1 hr at room temperature or overnight at 4°C. 7. Decant the solution and wash the cells three times in PBS, 5 min each wash. 8. Incubate cells with the secondary antibody in 1% BSA for 1 hr at room temperature in dark. 9. Decant the secondary antibody solution and wash three times with PBS for 5 min each in dark. Counter staining: 10. Incubate cells on 0.1-1 μg/ml Hoechst or DAPI (DNA stain) for 1 min. 11. Rinse with PBS. Mounting: 12. Mount coverslip with a drop of mounting medium.
免疫细胞化学技术题库9-2-10
免疫细胞化学技术题 库9-2-10
问题： [单选,A1型题]应用尚无文献报道的抗血清或自己制备的抗血清进行免疫酶组织细胞化学染色时，必须设置的对照是（） A.交叉实验 B.替代实验 C.吸收实验 D.置换实验 E.阳性对照
问题： [单选,A1型题]可引起免疫酶组织化学染色假阳性的是（） A.组织内待检抗原过多 B.内源性过氧化物酶丰富 C.洗液用TBS缓冲液 D.抗体浓度过低 E.抗体特异性高
问题： [单选,A1型题]免疫酶组织化学染色中过氧化氢液的作用是（） A.提高抗原抗体的识别能力 B.减少内源性过氧化酶的活性 C.修复抗原 D.提高敏感性 E.激活抗原 https://www.wendangku.net/doc/835530410.html,/ 月子病
问题： [单选,A1型题]ABC法的基本原理是（） A.利用抗卵白素分别连接卵白素标记的第二抗体和卵白素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 B.利用抗卵白素分别连接卵白素标记的第一抗体和卵白素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 C.利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 D.利用抗生物素分别连接生物素标记的第一抗体和生物素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原 E.利用抗地高辛分别连接生物素标记的第一抗体和生物素标记的酶来检测组织和细胞中的抗原
问题： [单选,A1型题]BRAB法的基本原理是（） A.用生物素标记抗体，然后与生物素和酶形成复合物 B.用生物素分别标记抗体和酶，然后以抗生物素为桥，把两者连接起来 C.用卵白素标记抗体，然后与卵白素和酶形成复合物 D.用卵白素分别标记抗体和酶，然后以抗卵白素为桥，把两者连接起来 E.用亲和素分别标记抗体和酶，然后以抗亲和素为桥，把两者连接起来
考点一与免疫有关的细胞比较
考点一与免疫有关的细胞比较 1．淋巴细胞的起源与分化 即时应用 1．下图表示人体内各类血细胞生成的途径，a～f表示不同种类的细胞，请你判断下列说法中错误的是(双选)() A．造血干细胞形成多种细胞，要经过细胞增殖和细胞分化过程 B．各类细胞来源相同但功能不同，根本原因是不同细胞表达的基因不同 C．c和d在相同的场所发育而成 D．当再次受抗原刺激后，机体具有更强烈的免疫反应，主要与c和d有关 考点二特异性免疫——人体的第三道防线 1．体液免疫的图解
2．细胞免疫的图解 3．两者的关系 两个免疫过程既各自有其独特的作用,又可以相互配合共同发挥免疫效应。如：(1)细菌外毒素(抗原)进入人体，人体的免疫系统产生特异性抗毒素(抗体),将其消灭，这属于体液免疫。 (2)对于胞内病原体，体液免疫先起作用，阻止病原体的传播。当病原体进入细胞内则需细胞免疫使其释放出抗原，再由体液免疫进行最后的清除。 即时应用 2．下图表示人体的特异性免疫过程，依据此图，请指出正确的选项是()
A．能特异性识别抗原的细胞有a、b、c、d、f B. 图中与④物质产生有关的细胞有a、b、c、g、f C．HIV侵入人体，只对⑤免疫有抑制作用 D．对切除胸腺的小鼠进行大剂量的X射线照射，导致小鼠丧失全部特异性免疫功能,通过输入细胞f可使⑥完全恢复 即时应用 3．(2012·苏北第一次调研)下列关于人体免疫的叙述正确的是() A．某病原体初次感染人体，人体会产生相应的过敏反应 B．艾滋病和类风湿性关节炎都属于免疫系统疾病 C．体液免疫中每个浆细胞能产生多种特定抗体 D．效应T细胞能直接吞噬侵入细胞的病原
免疫学名词解释完整版
免疫(Immunity): 是对抗原的识别和清除。其核心是机体识别“自我”与“非我（异己）”、产生免疫应答，以清除“异己”抗原或者诱导免疫耐受，从而维持自身内环境稳定。 免疫学(Immunology): 研究免疫系统结构与功能的学科, 涉及免疫识别、免疫应答、免疫耐受与免疫调节等免疫学的基本科学规律与机制研究；以及免疫机制在相关疾病发生发展中的作用和免疫学技术在疾病诊断、治疗与预防中的应用。 免疫应答(Immune response)：指机体免疫系统受抗原刺激后，淋巴细胞特异性识别抗原分子，发生活化、增生、分化或无能、凋亡，进而表现出一定生物学效应的全过程。 免疫反应：指免疫应答过程中所产生的抗体和致敏淋巴细胞与相应抗原特异性结合所发生的反应。 免疫调理：凡是能增强吞噬细胞吞噬功能的就叫免疫调理。 固有免疫：是生物体在长期种系进化过程中形成的一系列防御机制，是机体的第一道防线，也是特异性免疫的基础。 免疫原性：抗原能刺激特异性免疫细胞，使之活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质（抗体和致敏淋巴细胞）。决定免疫原性的因素:抗原的异物性；抗原的理化性质；宿主的遗传因素、年龄、性别、健康状态；抗原进入机体的剂量、途径、次数以及佐剂。 免疫耐受：是机体的免疫系统接触某种抗原后形成的特异性免疫无应答状态，表现为再次接触同一抗原时，不发生可查见的反应，是一种特殊的免疫应答。 免疫球蛋白：是指具有抗体（antibody, Ab)活性或在化学结构上与抗体相似的一类球蛋白, 主要存在于体液中（分泌型），也可存在于B细胞膜上（膜型）。 （AID）自身免疫病：自身免疫应答并非必然引起自身免疫病，仅当自身免疫应答过强或持续时间过长、以致破坏自身正常组织结构并引起相应临床症状时，才导致自身免疫病。(IDD)免疫缺陷病（immunodeficiengcy disease,）：是由免疫系统先天发育障碍或后天损伤而使免疫细胞的发育、分化、增殖和代谢异常，并导致免疫功能障碍所出现的临床综合征。自身免疫应答：在某些情况下，自身耐受遭到破坏，机体免疫系统针对自身抗原产生免疫应答，体内检出自身抗体或自身反应性T/B细胞，此为自身免疫应答 中枢免疫器官：是免疫细胞发生、分化、发育和成熟的场所，包括骨髓和胸腺。 （MIS）黏膜免疫系统即（MALT）黏膜相关淋巴组织：由弥散分布于吸道、消化道及泌尿生殖道等处黏膜及粘膜下的淋巴细胞组成。功能：参与黏膜局部免疫应答，发挥黏膜局部防御作用；产生分泌型IgA(SIgA)；口服蛋白抗原介导免疫耐受。 人工主动免疫（artificial active immunization）将疫苗和类毒素等抗原物质接种机体，诱导免疫系统产生特异性抗体和（或）致命淋巴细胞，从而预防感染。输入物质是抗原，诱导时间较长（数周），体内维持时间较长（数月到数年），应用在预防方面。 人工被动免疫（artificial passive immunization）给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，是宿主迅速获得特异性免疫力，以治疗或紧急预防感染。输入物质是抗体、致敏淋巴细胞，诱导时间较短（立刻），体内维持时间较短（2周到数月），应用在治疗和应急预防方面。 免疫球蛋白超家族：属于粘附因子的一种，此类分子具有与IgV区和C区相类似的折叠结构，其氨基酸系列也具有同源性，在粘附作用中，它们通常作为整合素成为其他IgSF的配体。（ITAM）免疫受体酪氨酸活化基序：TCR识别并结合由MHC分子提呈的抗原肽，导致ITAM 所含酪氨酸磷酸化，与ZAP-70等信号分子中SH 2结构域结合，可活化相关酶，将识别信号转入T细胞内。CD3是参与TCR信号转导的关键分子，CD3肽链的缺陷或缺失，将导致T细胞活化缺陷。 （AIDS）获得性免疫缺陷综合征：又称艾滋病，首先报道于1981年，1984年证实人类免疫
免疫细胞化学技术
免疫细胞化学技术 一、免疫细胞化学技术的概述 *免疫细胞化学(immunocytochemistry, ICC) -是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定细胞内抗原的成分(主要是多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为～。 (一) 对抗原和抗体的要求 *具有特异性高和亲和力强的抗体是实验成功的首要条件。 -对抗体的要求：纯度高、比活性强； *高度特异性抗体的获得，取决于抗原的纯度。 -对抗原的要求：纯度高，免疫原性强，稳定无变化。 (二) 抗原(antigen, Ag) *抗原的概念：凡是在机体内引起体液免疫和(或)细胞免疫反应的物质，称为抗原。抗原具有两个方面的特性： -免疫原性：引起机体产生抗体和(或)致敏淋细胞的特性； -免疫反应性：抗原能与相应的抗体及致敏淋巴细胞发生特异的结合或反应的特性。 *根据抗原是否显示免疫原性分为： -完全抗原：分子量较大，一般在10kDa以上，并具有较复杂的化学组成。 *免疫原性最强的是蛋白质抗原，多糖次之；脂类和核酸必需和蛋白质及多糖形成复合物才具有良好的免疫原性。 -半抗原：又称为不完全抗原，分子量较小。例如：某些短肽、多糖、类脂和药物等。 *半抗原必需与载体结合，才能获得免疫原性。 载体 *通常是具有高度免疫原性的大分子物质，具有将免疫原性传递给耦联的半抗原能力。 -常用的载体有钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OV A)等。 -用戊二醛或碳化二亚胺作为交联剂通过功能基团-NH2、-COOH等将半抗原结合到载体上。结合比例为5kDa结合5～25个分子的小肽。 （三）抗体(antibody, Ab) 1、抗体的概念： *机体受到抗原刺激后，由浆细胞合成并分泌出一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白，被称为抗体。 -抗体主要存在于血清内； -抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗体。 -免疫球蛋白根据重链的结构及抗原特异性不同分为五种，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。 2、免疫组化实验中常用的抗体：单克隆抗体和多克隆抗体。 *单克隆抗体：是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，是应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备的。 -特异性强、抗体产量高。 *多克隆抗体：是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。 -特异性低，会产生抗体的交叉反应。