各种标签Tag的核苷酸与氨基酸序列
V5-tag
5ˊGGT AAG CCT ATC CCT AAC CCT CTC CTC GGT CTC GAT TCT ACG 3ˊ
6 X His tag
CAT CAT CAC CAT CAC CAT
S-tag AAA GAA
ACC GCT GCT GCT AAA TTC GAA
CGC CAG CAC A TG GAC A GC
Flag-Tag GAT TAC AAG GAT GAC GAC GAT AAG
Myc-Tag GAG CAG AAA CTC ATC TCT GAA GAG GAT CTG
HA-Tag TAC CCA TAC GAC GTC CCA GAC TAC GCT
VSV-G: TATACAGACATAGAGATGAACCGACTTGGAAAG
Thrombin recognises the consensus sequence Leu-Val-Pro-Arg-Gly-Ser Sequence：CTG GTT CCG CGT GGA TCC
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。
美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为
大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。
除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：
His6：
His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某
一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：
1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；
2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯
化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；
3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；
5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；
6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag:
Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak 序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：
1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
3.FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
MBP:
MBP（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。
纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合，而其他融合蛋白则不受影响。缓冲条件为pH7.0到8.5，盐浓度可高达1M，但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。
检测：可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
GST:
GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。将它应用在原核表达的原因大致有两个，一个是因为它是一个高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用。GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。
纯化：该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进行纯化。GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。
如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。
检测：可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
HA
HA标签蛋白，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti－HA抗体检测和ELISA检测。
c-Myc
C-Myc标签蛋白，是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc tag已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
eGFP/eCFP/eYFP/mCherry
分别是增强型绿色荧光蛋白/增强型黄绿色荧光蛋白/增强型黄绿色荧光蛋白/单体红色荧光蛋白,具有不同的激发波长发射波长为，均由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。就eGFP而言，相对于GFP，其荧光强度更强、荧光性质更稳定。同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。mCherry 是从DsRed演化来的性能最好的一个单体红色荧光蛋白，可以和GFP系列荧光蛋白共用，实现多色标记体内、外实验表明，mCherry在N端和C端融合外源蛋白时，荧光蛋白活
性和被融合的目标蛋白功能相互没有明显影响。
这些荧光标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：
1.不用破碎组织细胞和不加任何底物，直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光，实时显示目的基因的表达情况，而且荧光性质稳定，被誉为活细胞探针。
2.其自发荧光，不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。
3.同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测，从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度
高而且重现性。
4.其低消耗、高灵敏度检测，十分适用于高通量的药物筛选。因此现eGFP 表达标签被广
泛地应用于基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
5.mCherry红色荧光蛋白在标记病毒颗粒，研究病毒和宿主细胞之间更有得天独厚的优势。如用mRFP或mCherry标记HIV病毒颗粒，研究H1V和宿主细胞问的相互作用以及HIV侵染宿主细胞的过程．用mRFP标记慢病毒颗粒，研究慢病毒在小鼠体内的复制过
程等。
荧光素酶
来源于生物体内的荧光素，常见的有萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶和Guassia荧光素酶。这些荧光素酶作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中，这种技术被称为报告基因检测法或萤光素酶检测法（Luciferase Assay）。跟普通融合蛋白标签不同，使用荧光素酶构建的报告基因可用作目的基因的定量分析。因此常用于研究启动子、miRNA 3'UTR克隆的功能与调控，因为它们对目的基因的调控可以是渐变的，而不是简单的开和关两种状态。优点：灵敏度高，检测幅度宽；不是哺乳动物细胞内源性基因；重复性好；与HTS兼容等。
萤火虫和海肾荧光素酶已经被广泛应用于协同报告并进行均一化研究。由于它们都是快速，容易和高灵敏的监测方法。而且萤火虫和海肾荧光素酶是理想的双基因报告系统，因为它们来源于不同的生物进化方向，蛋白结构和底物差异都很大，在实验中不会产生相互影响。
基于荧光素酶的特性，我司研发提供的Secrete-Pair? Dual Luminescence Assay Kit 可用于分析双报告系统中Gaussia荧光素酶（GLuc）和分泌型碱性磷酸酶(SEAP)活性。GLuc 和SEAP均为分泌型报告蛋白，无需裂解细胞即可便捷的从细胞培养液中取得样本，并对实验结果进行精准的实时分析。
Avi Tag
AviTag标签蛋白是一个15 个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的N端和C端。融合表达后，可被生物
素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。
Avi Tag标签系统具有以下几大优点:
1.无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化；
2.生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；
3.生物素AviTag只有15个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小。
SNAP-Tag
SNAP-Tag是新一代的蛋白标签技术，不仅专一性极高而且稳定，最大的优点是适用于多种环境下的蛋白质检测与纯化，如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGE gels)等。SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase）获得。无论体内还是体外，SNAP-Tag
都能与底物高特异性地共价结合，使蛋白标记上生物素或荧光基团（如荧光素和若丹明）。
SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。苯甲基鸟嘌呤在生化条件下稳定，并且没有其他蛋白会和这类物质作用，所以SNAP标签
反应是高特异的。
检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag融合蛋白的标记与检测。它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的SNAP-tag融合蛋白。
将纯化的或未纯化的SNAP-Tag融合蛋白与表面固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合，蛋白即
可特异与底物作用，形成共价键，融合蛋白间接被固定在了基质表面上，可以达到更方便快捷地研究蛋白功能或纯化蛋白的目的。
Halo Tag
HaloTag?标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物，可与多种合成的HaloTag?配基有效地共价结合。这个分子量为33KDa的单体蛋白能融合在重组蛋白的N端或C 端，并
在原核和真核系统中表达。
HaloTag?配基是小分子化学物，能够在体外或体内与HaloTag?蛋白共价结合。这些配基由两个关键组分组成：(1)一个通用的HaloTag?反应联结子，结合HaloTag?蛋白；(2)一个功能基团,例如荧光染料或亲和媒介。
能够共价和特异性结合多种合成的报告基团和亲和配基的特性，使得HaloTag?蛋白能够用
于检测和亲和结合或固相化固定目的蛋白。
SUMO
SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白（Small ubiquitin-likemodifier），是泛素(ubiquitin)类多肽链超家族的重要成员之一。在一级结构上，SUMO与泛素只有18%的同源性，然而两者的三级结构及其生物学功能却十分相似。研究发现SUMO可以作为重
组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。
此外SUMO还有一项重要的应用，就是可用于完整地切除标签蛋白，得到天然蛋白。因为SUMO蛋白水解酶（我公司可提供）能识别完整的SUMO标签蛋白序列，并能高效地把SUMO从融合蛋白上切割下来。切除SUMO后，经过亲和层析，去除标签蛋白部分，就得到和天然蛋白一样的重组蛋白。所以SUMO标签也常用于和其他标签一起应用，作为特异酶切水解位点。
氨基酸代谢和核苷酸代谢
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氨基酸与核酸代谢
氨基酸与核酸代谢 1. 概述三大类营养物质代谢的联系。 答：在生物体内，糖类、脂质和蛋白质这三类物质的代谢是同时进行的，它们之间既相互联系，又相互制约，形成一个协调统一的过程。 1.糖类、脂质和蛋白质之间可以转化关系 （1）糖类代谢与蛋白质代谢的关系 ①糖类代谢的中间产物可以转变成非必需氨基酸； ②蛋白质可以转化成糖类。 几乎所有组成蛋白质的天然氨基酸均可转变成糖类。 （2）糖类代谢与脂质代谢的关系 ①糖类转变成脂肪 ②脂肪转变成糖类 脂质分解产生的甘油和脂肪酸能够转变成糖类。 （3）蛋白质代谢与脂质代谢的关系 ①一般来说，动物体内不容易利用脂肪酸合成氨基酸。植物和微生物可由脂肪酸和氮源生成氨基酸。某些氨基酸通过不同途径可转变成甘油或脂肪酸 ②某些氨基酸通过不同途径可转变成甘油或脂肪酸。 2.糖类、脂质和蛋白质之间转化的条件 糖类、脂质和蛋白质之间的转化是有条件的。例如，只有在糖类供应充足的情况下，糖类才有可能大量转化成脂质。不仅如此，各种代谢物之间的转化程度也是有明显差异的。例如，糖类可以大量转化成脂肪，而脂肪却不能大量转化成糖类。只有当糖类代谢发生障碍时才由脂肪和蛋白质来供能,当糖类和脂肪摄入量都不足时,蛋白质的分解才会增加 3.糖类、脂质和蛋白质之间除了能转化外，还相互制约 三大营养物质在代谢上的共同点; （1）物质的来源：从根本上说均是食物。 （2）这些物质在细胞内虽然均进行着许多种的生物化学反应，但是可以归纳为进行合成和分解这两方面的反应，并且这两方面的反应在细胞内是同时进行，相互联系的。 （3）三大营养物质的代谢均必须在酶的催化作用下才能够完成。 （4）这些物质彻底氧化分解时，代谢终产物里均有CO2和水，均能放释能量。 三大营养物质在代谢上的不同点 （1）糖类是主要的供能物质，脂肪是主要的储能物质，蛋白质的主要功能是构成生物体和调节生命活动。 （2）蛋白质质代谢的最终产物里还有尿素。 人体内的物质代谢是一个完整的统一过程 我们从糖类、氨基酸能够转变成脂肪，脂肪、氨基酸能够转变成糖类，可以看出各种物质代谢之间是相互联系的。这种联系说明，人体内的物质代谢是一个完整的统一过程，它使细胞内的成分不断地进行新旧更替。 2. 如何看懂肝功化验单？ 临床上肝功能检查的主要项目包括：蛋白代谢检查、糖代谢检查、脂类检查、胆红素代谢检查、血清酶学检查等。 如何看血清酶学化验单 常见以下几种酶：谷丙转氨酶（英文简写为ALT或GPT)、谷草转氨酶(AST或GOT)、碱性
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生物化学:氨基酸、核苷酸代谢考卷说明：生物化学，执业医师考试在线测试试题。满分64分! 单项选择题(每题1分,共64题) 1. 下列氨基酸中不属于必需氨基酸的是答案解析 A 缬氨酸 B 苏氨酸 C 赖氨酸 D 蛋氨酸 E 谷氨酸 2. 蛋白质的消化酶主要来源于答案解析 A 胃 B 小肠 C 胆囊 D 胰腺 E 肝脏 3. 体内NH3的主要来源是答案解析 A 肠道吸收 B 肾脏产氨 C 氨基酸脱氨基 D 胺分解 E 碱基分解 4. 体内氨的主要去路答案解析
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氨基酸与核苷酸代谢
氨基酸与核苷酸代谢 （一）名词解释 1．蛋白酶（Proteinase） 2．肽酶（Peptidase） 3．氮平衡（Nitrogen balance） 4．转氨作用（Transamination） 联合脱氨基作用 8．尿素循环（Urea cycle） 9．生糖氨基酸（Glucogenic amino acid） 10．生酮氨基酸（Ketogenic amino acid） 11．核酸酶（Nuclease） 12．限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease） 13．一碳单位（One carbon unit） （二）英文缩写符号 1．GOT 2．GPT 3．APS 4．PAL 5．PRPP 6．SAM 7．GDH 8．IMP （三）填空 1．生物体内的蛋白质可被和共同作用降解成氨基酸。 2．多肽链经胰蛋白酶降解后，产生新肽段羧基端主要是和氨基酸残基。3．胰凝乳蛋白酶专一性水解多肽链由族氨基酸端形成的肽键。 4．氨基酸的降解反应包括、和作用。 5．转氨酶和脱羧酶的辅酶通常是。 6．谷氨酸经脱氨后产生和氨，前者进入进一步代谢。 7．尿素循环中产生的和两种氨基酸不是蛋白质氨基酸。 8．尿素分子中两个N原子，分别来自和。 9．芳香族氨基酸碳架主要来自糖酵解中间代谢物和磷酸戊糖途径的中间代谢物。 13．组氨酸合成的碳架来自糖代谢的中间物。 14．氨基酸脱下氨的主要去路有、和。 15．胞嘧啶和尿嘧啶经脱氨、还原和水解产生的终产物为。 16．参与嘌呤核苷酸合成的氨基酸有、和。 17．尿苷酸转变为胞苷酸是在水平上进行的。 18．脱氧核糖核苷酸的合成是由酶催化的，被还原的底物是。19．在嘌呤核苷酸的合成中,腺苷酸的C-6氨基来自；鸟苷酸的C-2氨基来自。 20．对某些碱基顺序有专一性的核酸内切酶称为。 21．多巴是经作用生成的。 22．生物体中活性蛋氨酸是，它是活泼的供应者。 23．转氨基作用是沟通和桥梁； 24．尿素循环中涉及的天然蛋白质氨基酸是； 25．氨的去路有、和降解；脱氨产生的生理作用是和。 26．氨基酸通过、和降解，脱羧后产生和，此过程需——作辅酶。 27．Tyr脱NH3,然后脱羧后生成。 28．Tyr羟化后生成，后者经脱羧生成。
氨基酸序列推导
氨基酸序列推导 1.请指出天冬氨酸分别在（1）pH 1.0, (2)pH 3.0 ,(3) pH 6.0 ,(4) pH 11.0 时占优势的净电荷形 式（分别用“+”“-”“0”表示）。 2.将含有Gly, Ala , Glu ,Lys ,Arg , His 的溶液点在滤纸条的中央，用 pH 6的缓冲液浸湿，放入 电场中，请问（1）哪些氨基酸移向正极？（2）哪些氨基酸移向负极？（3）哪些氨基酸停留在原处或接近原处？ 3.下述每组混合物分别在正丁醇-醋酸-水系统进行纸层析，指出每组中各组分的相对迁移率（假定水 相的pH 为4.5 ，用“ >”表示）：（1）.Val和Lys,(2).Phe 和Ser,(3).Ala、Val和 Leu, (4).Tyr、Ala 、Ser和 His 。 4.将含有Asp (pI=2.98),Gly (pI= 5.97),Thr (pI= 6.7),Lys (pI=9.74)的pH为3.0 的柠檬酸溶液， 加到预先用相同缓冲液平衡过的阳离子交换树脂柱上，随后用逐渐增加NaCl浓度的相同缓冲液洗脱，问这四种氨基酸的洗脱顺序？ 5.将Lys ,Arg ,Asp ,Glu ,Tyr ,Ala的混合溶液在高pH 时，加到阴离子交换树脂柱上，用连续递减 pH值的溶液洗脱，请预测这些氨基酸的洗脱顺序。 6.已知一个八肽的氨基酸组成为：Asp, Ser ,Gly ,Ala ,Met ,Phe 和Lys2 ，又作了一系列分析结果 如下：（1）FDNB反应后可得到DNP-Ala,(2)胰凝乳蛋白酶水解后，得到一个四肽，其组成为：Asp, Gly, Lys, Met，此四肽的FDNB反应后得到DNP-Gly。（3）胰蛋白酶水解该八肽后得到两个三肽和一个二肽，三肽的组成分别为：Lys , Ala ,Ser和Phe , Lys , Gly。二肽经CNBr处理后产生Asp。请写出该八肽的氨基酸顺序。 7.某肽经CNBr处理得到三个肽段，其顺序分别为：Asn-Trp-Gly-Met; Gly-Ala-Leu; Ala-Arg-Tyr-Asn-Met, 用胰凝乳蛋白酶水解此肽也得到三个片断，其中一个为四肽，用6N的盐酸水解此四肽只得到Asp2和Met,问此肽的氨基酸排列顺序？ 8.根据下列数据推导出氨基酸的顺序：（1）完全水解得到Phe, Pro, Glu , Lys2, Met 。（2）用FDNB 处理得到DNP-Phe。（3）CNBr处理得到一个两肽和一个四肽。（4）胰蛋白酶水解得到两个三肽。（5）羧肽酶A或羧肽酶B处理都不能得到阳性结果。 9.一个由Ala, Cys, Lys, Phe和Ser组成的五肽，用TIPC分析，得到PTH-Ser；用胰蛋白酶水解得到 一个N端为Cys的三肽和一个N端为Ser的二肽；用胰凝乳蛋白酶水解上述三肽生成Ala 和一个二肽，写出该五肽的顺序。 10.从以下资料推出五肽的氨基酸序列：（1）含有Phe , Pro , Glu , Lys2（2）Edman 试剂处理得到 PTH-Glu （3）用胰蛋白酶、羧肽酶A和羧肽酶B处理都不能得到阳性结果。 1.（1）pH 1.0, +1；(2)pH 3.0 , 0；(3) pH 6.0, -1 ； (4) pH 11.0，-2 2. Glu 移向正极；Gly, Ala接近原处；Lys ,Arg , His移向负极 3. Val > Lys, (2).Phe > Ser,(3) Leu > Val > Ala,(4).Tyr > Ala > Ser > His 4. Asp、 Gly 、Thr、 Lys 5. Arg ,Lys , Ala ，Tyr , Glu ,Asp , 6. Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys- Met-Asp 7. Ala-Arg-Tyr-Asn-Met-Asn-Trp-Gly-Met-Gly-Ala-Leu; 8. 任一答案： Phe-Met-Lys-Glu-Lys-Pro Phe-Met-Lys-Glu-Pro-Lys Phe-Glu-Lys-Met-Pro-Lys Phe-Glu-Lys-Met-Lys-Pro 9. Ser-Lys-Cys-Phe-Ala,
氨基酸代谢核苷酸代谢
组卷测试 一：填空题 1.哺乳动物产生1分子尿素需要消耗________________分子的A TP。 2.褪黑激素来源于________________氨基酸，而硫磺酸来源于________________氨基酸。 3.γ-谷氨酰循环的生理功能是________________。 4.核苷酸的合成包括________________和________________两条途径。 5.转氨酶的辅基是________________。 6.________________酶的缺乏可导致人患严重的复合性免疫缺陷症(SCID)，使用________________治疗可治愈此疾患。 7.痛风是因为体内________________产生过多造成的，使用________________作为黄嘌呤氧化酶的自杀性底物可以治疗痛风。 8.不能使用5-溴尿嘧啶核苷酸代替5-溴尿嘧啶治疗癌症是因为________________。 9.脑细胞中氨的主要代谢去向是________________。 10.从IMP合成GMP需要消耗________________，而从IMP合成AMP需要消耗________________作为能源物质。 11.Arg可以通过________________循环形成。 12.氨基酸共有的代谢途径有________________和________________。 13.人类对嘌呤代谢的终产物是________________。 14.羟基脲作为________________酶的抑制剂，可抑制脱氧核苷酸的生物合成。 15.脱氧核苷酸是由________________还原而来。 16.HGPRT是指________________，该酶的完全缺失可导致人患________________。 17.人类对氨基代谢的终产物是________________，鸟类对氨基代谢的终产物是________________，植物解除氨的毒害的方法是________________。 18.重亮氨酸作为________________类似物可抑制嘌呤核苷酸的从头合成。 19.通过________________的脱羧可产生β-丙氨酸。 20.细菌嘧啶核苷酸从头合成途径中的第一个酶是________________。该酶可被终产物 ________________抑制。 21.PAPS是指________________，它的生理功能是________________。 二：是非题 1.[ ]真核细胞内参与嘧啶核苷酸从头合成的酶都位于细胞质。 2.[ ]参与尿素循环的酶都位于线粒体内。 3.[ ]既然谷氨酸上的N原子可经过转氨基作用重新分布，那么谷氨酸应该可作为很好的营养品而弥补蛋白质缺乏。 4.[ ]嘧啶合成所需要的氨甲酰磷酸合成酶与尿素循环所需要的氨甲酰磷酸合成酶是同一个酶。 5.[ ]氨基酸脱羧酶通常也需要吡哆醛磷酸作为其辅基。 6.[ ]一般来说，在哺乳动物体内由蛋白质氧化分解产生的能量效率低于糖或脂肪的氧化分解。 7.[ ]嘌呤核苷酸的从头合成是先闭环，再在形成N糖苷键。 8.[ ]氨基酸经脱氨基作用以后留下的碳骨架进行氧化分解需要先形成能够进入TCA循环的中间物。 9.[ ]Arg是哺乳动物的一种非必需氨基酸，因为在它们的肝细胞之中，含有足够的合成Arg的酶。 10.[ ]动物产生尿素的主要器官是肾脏。 11.[ ]黄嘌呤氧化酶既可以使用黄嘌呤又可以使用次黄嘌呤作为底物。 12.[ ]L-氨基酸氧化酶是参与氨基酸脱氨基作用的主要酶。
生化核苷酸代谢和生物转化
本科-核苷酸代谢-非营养物质代谢1 一、单5选1(题下选项可能多个正确，只能选择其中最佳的一项) 1、参加肠道次级结合胆汁酸生成的氨基酸是 A:鸟氨酸 B:精氨酸 C:甘氨酸 D:蛋氨酸 E:瓜氨酸 考生答案：C 标准答案：C 满分：4 得分：4 2、体内脱氧核苷酸是由下列哪种物质直接还原而成的 A:核糖 B:核糖核苷 C:一磷酸核苷 D:二磷酸核苷 E:三磷酸核苷 考生答案：D 标准答案：D 满分：4 得分：4 3、关于生物转化作用，下列哪项是不正确的 A:具有多样性和连续性的特点 B:常受年龄、性别、诱导物等因素影响 C:有解毒与致毒的双重性 D:使非营养性物质极性降低，利于排泄 E:使非营养性物质极性增加，利于排泄 考生答案：D 标准答案：D 满分：4 得分：4 4、甲氨蝶呤（MTX）在临床上用于治疗白血病的依据是 A:嘌呤类似物 B:嘧啶类似物 C:叶酸类似物 D:二氢叶酸类似物
E:氨基酸类似物 考生答案：C 标准答案：C 满分：4 得分：4 5、嘧啶分解代谢的终产物正确的是 A:尿酸 B:尿苷 C:尿素 D:α-丙氨酸 E:氨和二氧化碳 考生答案：E 标准答案：E 满分：4 得分：4 6、胸腺嘧啶在体内合成时甲基来自 A:N10-甲酰四氢叶酸 B:胆碱 C:N5，N10-甲烯四氢叶酸 D:S-腺苷甲硫氨酸 E:肉碱 考生答案：C 标准答案：C 满分：4 得分：4 7、下列哪种物质是结合胆红素 A:胆红素—清蛋白 B:胆红素—Y蛋白 C:胆红素—Z蛋白 D:双葡糖醛酸胆红素 E:胆红素-结合珠蛋白 考生答案：D 标准答案：D 满分：4 得分：4 8、嘧啶环中两个氮原子是来自 A:谷氨酰胺和氮 B:谷氨酰胺和天冬酰胺 C:谷氨酰胺和氨甲基鳞酸 D:天冬酰胺和氨甲基磷酸
重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱
★论著★ 重组蛋白药物C末端不同长度氨基酸序列的质谱分析* 李萍，赵永强，薛燕，刘锋，刘炳玉，何昆，王红霞 （国家生物医学分析中心，北京100850） 摘要目的：基于本实验室已建立的溴化氰裂解蛋白质C末端方法结合优化后的质谱检测技术，对C末端长度分别为2 37个氨基酸，相对分子质量在200 5000的8个重组蛋白药物进行检测。方法：（1）针对重组蛋白药物的不同状态（SDS－PAGE、干粉或溶液）分别进行C末端胶内或溶液裂解；（2）质谱检测，正离子方式，雾化气为氮气，碰撞气体为氩气。源温80?，锥孔电压50V，MCP检测器电压为2.15kV。结果：8个重组蛋白药物的C末端全部成功检测出，且基本为基峰。结论：建立的重组蛋白药物C末端测序联用方法应用于实际药物的检测具有很高的实用价值和学术意义。 关键词：溴化氰裂解；ESI－MS/MS质谱技术；C末端测序 中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：0254－1793（2011）06－1003－05 Mass spectrometry analysis of recombinant protein drugs with C－terminal amino acid sequence of different lengths* LI Ping，ZHAO Yong－qiang，XUE Yan，LIU Feng，LIU Bing－yu，HE Kun，WANG Hong－xia （National Center of Biomedical Analysis，Beijing100850，China） Abstract Objective：Based on the method established by cyanogen bromide cleavage of proteins C－terminal com-bined with the optimized mass spectrometry in our laboratory，detection of C－terminal lengths of2to37amino acids，relative molecular mass200－5000of the8recombinant protein drugs．Methods：（1）For different states of recombinant protein drugs（SDS－PAGE，dry powder or solution）to C terminal cleavage in gel or solution，respec-tively．（2）Mass spectrometry detection，positive ion mode，atomization gas was nitrogen，collision gas was argon，source temperature80?，cone voltage50V，MCP detector voltage of2.15kV．Results：All of C－terminal of the8 recombinant protein drugs successfully detected as the base peak．Conclusions：The established C－terminal se-quencing method of the recombinant protein was applied to the actual drugs testing，have high practical value and academic significance． Key words：cyanogen bromide cleavage；ESI－MS/MS technique；C－terminal sequenceing 随着基因工程和重组蛋白药物工程的发展，越来越多的重组蛋白药物不断研发并走向市场。为保证重组蛋白药物的质量，对数据的严谨性和涵盖范围的要求不断提高，国家食品药品监督管理局规定：重组蛋白药物报批必须提供包括N端、C末端、二硫键、肽质量指纹谱等有关一级结构确证的数据［1］。根据国内外文献报道，目前重组蛋白药物C末端测序方法主要有羧肽酶法、溴化氢裂解+羧肽酶法、化学法和串联质谱法，每种方法都有其局限性。迄今为止，重组蛋白药物C末端测序方法还没有成熟的，能够广泛应用的方法［2，3］。这为重组药物的报批带来了很大的困扰，因此建立重组蛋白药物C末端测序方法并应用于实际药物的检测中具有很高的实用价值和学术意义。 基于本实验室已建立的溴化氰裂解蛋白质C 末端方法结合优化后的质谱检测技术，克服电喷雾串联质谱对相对分子质量＜400或＞3000的肽段不易检测到或测序效果不好的缺陷，对C末端长度分 — 3001 — 药物分析杂志Chin J Pharm Anal2011，31（6）*科技重大专项－重大新药创制（批准号：2009ZX09501－031）资助项目第一作者Tel：（010）66931434；E－mail：lp@proteomics．cn
第20章氨酸代谢与核苷酸代谢
第十一章氨基酸代谢与核苷酸代谢 一：填空题 1.氨基酸共有的代谢途径有________________和________________。 2.转氨酶的辅基是________________。 3.人类对氨基代谢的终产物是________________，鸟类对氨基代谢的终产物是________________，植物解除氨的毒害的方法是________________。 4.哺乳动物产生1分子尿素需要消耗________________分子的A TP。 5.脑细胞中氨的主要代谢去向是________________。 6.通过________________的脱羧可产生β-丙氨酸。 7.人类对嘌呤代谢的终产物是________________。 8.痛风是因为体内________________产生过多造成的，使用________________作为黄嘌呤氧化酶的自杀性底物可以治疗痛风。 9.________________酶的缺乏可导致人患严重的复合性免疫缺陷症(SCID)，使用________________治疗可治愈此疾患。 10.核苷酸的合成包括________________和________________两条途径。 11.脱氧核苷酸是由________________还原而来。 12.Arg可以通过________________循环形成。 13.重亮氨酸作为________________类似物可抑制嘌呤核苷酸的从头合成。 14.HGPRT是指________________，该酶的完全缺失可导致人患________________。 15.从IMP合成GMP需要消耗________________，而从IMP合成AMP需要消耗________________作为能源物质。 16.羟基脲作为________________酶的抑制剂，可抑制脱氧核苷酸的生物合成。 17.不能使用5-溴尿嘧啶核苷酸代替5-溴尿嘧啶治疗癌症是因为________________。 18.细菌嘧啶核苷酸从头合成途径中的第一个酶是________________。该酶可被终产物 ________________抑制。 19.褪黑激素来源于________________氨基酸，而硫磺酸来源于________________氨基酸。 20.PAPS是指________________，它的生理功能是________________。 21.γ-谷氨酰循环的生理功能是________________。 二：是非题 1.[ ]对于苯丙酮尿患者来说酪氨酸也是必需氨基酸。 2.[ ]氨基酸脱羧酶通常也需要吡哆醛磷酸作为其辅基。 3.[ ]动物产生尿素的主要器官是肾脏。 4.[ ]参与尿素循环的酶都位于线粒体内。 5.[ ]L-氨基酸氧化酶是参与氨基酸脱氨基作用的主要酶。 6.[ ]黄嘌呤氧化酶既可以使用黄嘌呤又可以使用次黄嘌呤作为底物。 7.[ ]嘌呤核苷酸的从头合成是先闭环，再在形成N糖苷键。 8.[ ]IMP是嘌呤核苷酸从头合成途径中的中间产物。 9.[ ]严格的生酮氨基酸都是必需氨基酸。 10.[ ]Lys的缺乏可以通过在食物中添加相应的α-酮酸加以纠正。 11.[ ]能刺激固氮酶的活性。 12.[ ]氨基酸经脱氨基作用以后留下的碳骨架进行氧化分解需要先形成能够进入TCA循环的中间物。 13.[ ]真核细胞内参与嘧啶核苷酸从头合成的酶都位于细胞质。
核苷酸代谢与遗传性疾病
核苷酸代谢与遗传性疾病 ●摘要： 核苷酸是遗传物质核酸的基本结构单位，它具有多种生物学功用，如作为核酸合成的原料;.构成能量物质，如A TP、GTP、CTP等;参与代谢和生理调节，如cAMP是体内重要第二信使物质，参与信号转导;.组成辅酶，如腺苷是多种辅酶的组成成分;组成活性中间代谢物，核苷酸是多种活性中间代谢物的载体如UDP葡萄糖，CDP-甘油二酯，SAM等。鉴于核苷酸有如此重要的生理意义，因此它在代谢过程中的异常情况往往造成严重的后果，近年来不断发现由于核苷酸代谢而造成的一系列遗传性疾病。本文将以核苷酸的基本代谢情况为基础，分别从嘌呤和嘧啶代谢异常的典型疾病出发探讨有关核苷酸代谢与遗传性疾病。 ●关键词： 核苷酸代谢嘌呤代谢遗传病嘧啶代谢遗传病 ●核苷酸 核苷酸是核酸的基本结构单位，分为脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。而核苷酸则由碱基、戊糖和磷酸三种成分连接而成。构成核苷酸的碱基有五种，分别属于嘌呤和嘧啶。戊糖作为核苷酸的另一重要成分，脱氧核糖核苷酸中的戊糖是β-D-2-脱氧核糖，核糖核苷酸中的戊糖是β-D-核糖。核苷酸在体内分布广泛，细胞中主要以5‘-核苷酸形式存在。核苷酸具有多种生物学功用：1.作为核酸合成的原料;2.构成能量物质，如A TP、GTP、CTP等;3.参与代谢和生理调节，如cAMP是体内重要第二信使物质，参与信号转导;4.组成辅酶，如腺苷是多种辅酶的组成成分;5.组成活性中间代谢物，核苷酸是多种活性中间代谢物的载体如UDP 葡萄糖，CDP-甘油二酯，SAM等。 ●核苷酸的代谢 核苷酸的合成代谢 一、嘌呤核糖核苷酸的合成 （一）从头合成途径 1.IMP的合成：其磷酸核糖部分由PRPP提供，由5-磷酸核糖与A TP在磷酸核糖焦磷酸激酶催化下生成。IMP的合成有10步，分两个阶段，先生成咪唑环，再生成次黄嘌呤。首先由谷氨酰胺的氨基取代焦磷酸，再连接甘氨酸、甲川基，甘氨酸的羰基生成氨基后环化，生成5-氨基咪唑核苷酸。然后羧化，得到天冬氨酸的氨基，甲酰化，最后脱水闭环，生成IMP。 2. AMP的合成：IMP与天冬氨酸生成腺苷酸琥珀酸，由腺苷酸琥珀酸合成酶催化，GTP提供能量。腺苷酸琥珀酸裂解酶催化分解生成AMP和延胡索酸。 3.GMP的合成：IMP先由次黄嘌呤核苷酸脱氢酶氧化生成黄嘌呤，再由谷氨酰胺提供氨基，生成GMP。 （二）补救途径： 1. 碱基与核糖-1-磷酸在特异的核苷磷酸化酶催化下生成核苷，再由其核苷磷酸激酶生成核苷酸。 2.嘌呤与PRPP在磷酸核糖转移酶催化下生成核苷酸。 （三）调控 从头合成途径受AMP和GMP的反馈抑制，第一步转酰胺酶受二者抑制，分枝后的第一步只受自身抑制。
蛋白质序列分析常用网站-2018.8
蛋白质序列分析 蛋白质序列的基本性质分析是蛋白质序列分析的基本方面，一般包括蛋白质的氨基酸组成，分子质量，等电点，亲水性，和疏水性、信号肽，跨膜区及结构功能域的分析等到。蛋白质的很多功能特征可直接由分析其序列而获得。例如，疏水性图谱可通知来预测跨膜螺旋。同时，也有很多短片段被细胞用来将目的蛋白质向特定细胞器进行转移的靶标(其中最典型的例子是在羧基端含有KDEL序列特征的蛋白质将被引向内质网。WEB中有很多此类资源用于帮助预测蛋白质的功能。 基本理化性质分析： 信号肽预测： 在生物内，蛋白质的合成场所与功能场所常被一层或多层细胞膜所隔开，这样就涉及到蛋白质的转运。合成的蛋白质只有准确地定向运行才能保证生命活动的正常进行。一般来说，蛋白质的定位的信息存在于该蛋白质自身结构中，并通过与膜上特殊的受体相互作用而得以表达。在起始密码子之后，有一段编码疏水性氨基酸序列的RNA片段，这个氨基酸序列就这个氨基酸序列就是信号肽序列。含有信号肽的蛋白质一般都是分泌到细胞外，可能作为重要的细胞因子起作用，从而具有潜在的应用价值。 糖基化位点预测： 跨膜区分析：TMORED 蛋白质序列含有跨膜区提示它可能作为膜受体起作用，也可能是定位于膜的锚定蛋白或者离子通道蛋白等，从而，含有跨膜区的蛋白质往往和细胞的功能状态密切相关。 蛋白酶的结构功能进行预测和分析： 同源建模分析： 二级结构及折叠类预测：Predictprotein 特殊结构或结构预测：COILS MacStripe 疏水性分析：ExPASy的ProtScale 基于序列同源性分析的蛋白质功能预测： 至少有80个氨基酸长度范围内具有25%以上序列一致性才提示可能的显着性意义。类似于核酸序列同源性分析，用户直接将待分析的蛋白质序列输入NCBI/BLAST()，选择程序BLASTP就可网上分析。 基于motif、结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测 蛋白质的磷酸化与糖基化对蛋白质的功能影响很大，所以对其的分析也是生物信息学的一个部分。同时，分子进化方面的研究表明，蛋白质的不同区域具有不同的进化速率，一些氨基酸必须在进化过程中足够保守以实现蛋白质的功能。
氨基酸的代谢
一、氨基酸代谢的概况 ?重点、难点 ?第一节蛋白质的营养作用 ?第二节蛋白质的消化,吸取 ?第三节氨基酸的一般代谢 ?第四节个别氨基酸代谢 食物蛋白质经过消化吸收后进人体内的氨基酸称为外源性氨基酸。机体各组织的蛋白质分解生成的及机体合成的氨基酸称为内源性氨基酸。在血液和组织中分布的氨基酸称为氨基酸代谢库(aminoacidmetabolic pool)。各组织中氨基酸的分布不均匀。氨基酸的主要功能是合成蛋白质，也参与合成多肽及其它含氮的生理活性物质。除维生素外，体内的各种含氮物质几乎都可由氨基酸转变而来。氨基酸在体内代谢的基本情况概括如图。大部分氨基酸的分解代谢在肝脏进行，氨的解毒过程也主要在肝脏进行。 图8-2 氨基酸代谢库 二、氨基酸的脱氨基作用 脱氨基作用是指氨基酸在酶的催化下脱去氨基生成α—酮酸的过程，是体内氨基酸分解代谢的主要途径。脱氨基作用主要有氧化脱氨基、转氨基、联合脱氨基、嘌呤核苷酸循环和非氧化脱氨基作用。 (一)氧化脱氨基作用
氧化脱氨基作用是指在酶的催化下氨基酸在氧化的同时脱去氨基的过程。组织中有几种催化氨基酸氧化脱氨的酶，其中以L-谷氨酸脱氢酶最重要。L-氨基酸氧化酶与D-氨基酸氧化酶虽能催化氨基酸氧化脱氨，但对人体内氨基酸脱氨的意义不大。 1.L-谷氨酸氧化脱氨基作用由 L谷氨酸脱氢酶(L-glutamatedehydrogenase)催化谷氨酸氧化脱氨。谷氨酸脱氢使辅酶NAD+还原为NADH+H+并生成α-酮戊二酸和氨。谷氨酸脱氢酶的辅酶为NAD+。 谷氨酸脱氢酶广泛分布于肝、肾、脑等多种细胞中。此酶活性高、特异性强，是一种不需氧的脱氢酶。谷氨酸脱氢酶催化的反应是可逆的。其逆反应为α-酮戊二酸的还原氨基化，在体内营养非必需氨基酸合成过程中起着十分重要的作用。 (二)转氨基作用 转氨基作用：在转氨酶(transaminase ansaminase)的催化下，某一氨基酸的a-氨基转移到另一种a-酮酸的酮基上，生成相应的氨基酸；原来的氨基酸则转变成a-酮酸。转氨酶催化的反应是可逆的。因此，转氨基作用既属于氨基酸的分解过程，也可用于合成体内某些营养非必需氨基酸。 图8-4 转氨基作用 除赖氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸外，体内大多数氨基酸可以参与转氨基作用。人体内有多种转氨酶分别催化特异氨基酸的转氨基反应，它们的活性高低不一。其中以谷丙转氨酶(glutamicpyruvic transaminase，GPT，又称ALT)和谷草转氨酶(glutamic oxaloacetictransaminase，GOT，又称AST)最为重要。它们催化下述反应。 转氨酶的分布很广，不同的组织器官中转氨酶活性高低不同，如心肌GOT最丰富，肝中则GPT最丰富。转氨酶为细胞内酶，血清中转氨酶活性极低。当病理改变引起细胞膜通透性增高、组织坏死或细胞破裂时，转氨酶大量释放，血清转氨酶活性明显增高。如急性肝炎病人血清GPT活性明显升高，心肌梗死病人血清GOT活性明显升高。这可用于相关疾病的临床诊断，也可作为观察疗效和预后的指标。 各种转氨酶的辅酶均为含维生素B6的磷酸吡哆醛或磷酸吡哆胺。它们在转氨基反应中起着氨基载体的作用。在转氨酶的催化下，α—氨基酸的氨基转移到磷酸吡哆醛分子上，生成磷酸吡哆胺和相应的α—酮酸；而磷酸吡哆胺又可将其氨基转移到另一α—酮酸分子上，生成磷酸吡哆醛和相应的α—氨基酸(图8—6)，可使转氨基反应可逆进行。
氨基酸与核苷酸代谢
氨基酸的代谢 1．什么是氮平衡、正氮平衡、负氮平衡？ 2．什么是联合脱氨基作用，为什么联合脱氨基作用是体内脱去氨基的主要方式？ 3．为什么转氨基作用常以a一酮戊二酸为氨基受体？ 4．各种物质甲基化时，甲基的直接供体是什么？为什么？ 5．氨基酸在体内能贮存吗？为什么？ 6．简述体内氨基酸的来源和去路。 7．氨是有毒物质，不能在血液中游离存在，它是如何进行转运的？ 8．氨基酸分解后产生的氨是如何排出体外的？ 9．氨基酸的碳架是如何进行氧化的？ 10．什么是必需氨基酸、非必需氨基酸和半必需氨基酸？ 11．氨基酸是以CO2和NH3+为前体从头进行合成的吗？如果不是，请解释。 12．当血液中氨浓度升高时，引起高氨血症，出现昏迷现象，请解释可能的原因。 13．临床治疗高氨血症，有时会给病人补充适量必需氨基酸相应的酮酸，请解释为什么？14．为什么说葡萄糖一丙氨酸循环是一种经济有效的氨转运方式？ 15．尿素循环和三羧酸循环是如何联系在一起的？ 16．在尿素合成途径中，第一步氨甲酰磷酸的合成是在线粒体中进行的，有何生理意义？17．2分子丙氨酸彻底氧化分解并以 CO2和尿素的形式排出，请写出并计算产生的 ATP分子数 核苷酸的代谢 1．核苷磷酸解酶催化的反应如下。 核糖—1'一磷酸十碱基=核苷+磷酸或 脱氧核糖一1'一磷酸十碱基=脱氧核苷十磷酸，这些反应的平衡常数大约为1。 1）同位素示踪法证明，胸腺嘧啶掺人到DNA分子中涉及到核苷磷酸解酶催化的反应，而脱氧腺苷或脱氧鸟苷的存在将促进胸腺嘧啶进人DNA分子中，为什么？ 2）在不能进行IMP从头合成的细胞中，次黄嘌呤核苷可用于合成IMP，但由于次黄嘌呤激酶的缺乏，只能经间接的补救合成途径，请写出其主要的反应步骤。 2．别嘌呤醇为什么可用于治疗“痛风症”？ 3．嘌呤和嘧啶核苷酸“补救合成途径”的特征是什么？ 4．脱氧核苷酸是如何合成的？ 5．为什么6'一巯基嘌呤、氨甲蝶呤和氨基蝶呤可抑制核苷酸的生物合成？ 6．许多多维制剂含有烟酰胺，大多数哺乳类动物细胞中含有一种酶可使烟酰胺直接转变为NAD+，从烟酰胺形成NAD+所需要的其他物质是什么？ 7．患有I型遗传性乳清酸尿症的婴儿体内缺乏乳清酸磷酸核糖转移酶和乳清酸核苷酸脱羧酶。因而发育迟缓，并伴有贫血及乳清酸尿；治疗多采用口服嘧啶类药物，问选用胞嘧啶、尿嘧啶还是尿嘧啶核苷酸？为什么？ 8．在癌症的化学治疗中常使用6一巯基嘌呤。研究发现，它在体内必须先转变为一种核苷酸后才能发挥作用。问： 1）6一巯基嘌呤为什么可转变为一种核苷酸？是何种核苷酸？ 2）该核苷酸如何抑制嘌呤核苷酸的从头合成途径？ 9．抗肿瘤药物羟基脲（HO－HN－CO－NH2）是Fe3+离子的螯合剂，可干扰DNA的合成，羟基脲的靶酶是什么？为什么它可抑制DNA的合成？ 10．嘌呤核苷酸的补救合成途径中，N一糖苷键形成所需的能量从何而来？
氨基酸的代谢
一、选择题 1.转氨酶的辅酶是（）。E A、NAD+ B、NADP+ C、FAD D、FMN E、磷酸吡哆醛 2. 氨的主要去路是（）。A A、合成尿素 B、合成谷氨酰胺 C、合成丙氨酸 D、合成核苷酸 E、合成非必需氨基酸 3. 1mol尿素的合成需消耗ATP摩尔数是（）。C A、2 B、3 C、4 D、5 E、6 4.有关鸟氨酸循环，下列说法哪一个是错的。（）A A 循环作用部位是肝脏线粒体 B、氨基甲酰磷酸合成所需的酶存在于肝脏线粒体 C、尿素由精氨酸水解而得 D、每合成1mol尿素需消耗4molATP E、循环中产生的瓜氨酸不参与天然蛋白质合成 5．参与尿素循环的氨基酸是（）。B A、蛋氨酸 B、鸟氨酸 C、脯氨酸 D、丝氨酸 E、丙氨酸 6. 一碳单位的载体是（）。B A、二氢叶酸 B、四氢叶酸 C、生物素 D、焦磷酸硫胺素 E、硫辛酸 7 . 在鸟氨酸循环中，尿素有下列哪种物质水解而得。（）C A、鸟氨酸 B、半胱氨酸 C、精氨酸 D、瓜氨酸 E、谷氨酸 8 . 参与转变作用的氨基酸是（）。D A、Tyr B、Trp C、Glu D、Cys E、Ser 9. 人类营养必需氨基酸指（）。A A、Val，Leu B、Trp，Pro C、Phe，Tyr D、Met，Cys E、Ser，Trp 10 .尿素循环与三羧酸循环是通过哪些中间产物的代谢连接起来的。（）C A、Asp B 、草酰乙酸C、Asp和延胡索酸D、瓜氨酸E、Asp和瓜氨酸 11 .尿素循环中，能自由通过线粒体膜的物质是（）。B A、氨基甲酰磷酸 B、鸟氨酸和瓜氨酸 C、精氨酸和延胡索酸 D、精氨酸和代琥珀酸 E、尿素和鸟氨酸 12 .联合脱氨作用所需的酶有（）。B A、转氨酶和D－氨基酸氧化酶 B、转氨酶和L-谷氨酸脱氢酶 C、转氨酶和腺苷酸脱氢酶 D、腺苷酸脱氢酶和L-谷氨酸脱氢酶 E、以上都是 13. 不能脱下游离氨的氨基酸脱氨方式是（）。B A、氧化脱氨基 B、转氨基 C、联合脱氨基 D、嘌呤核苷酸循环 E、以上都是 14. 能增加尿中酮体排出量的氨基酸是（）。A A、Leu B、Gly C、His D、Ser E、Ala 15. 即增加尿中葡萄糖也增加尿中酮体的排出量的氨基酸是（）。E A、Ile B、Trp C、Tyr D、Thr E、以上都是 16. 动物体内转氨酶的种类虽然很多，但就其辅酶来说仅有一种，即（）。E A、磷酸 B、辅酶A C、辅酶Ⅰ D、辅酶Ⅱ E、磷酸吡哆醛
第九、十章 氨基酸与核苷酸代谢
第九、十章氨基酸与核苷酸代谢 （一）名词解释 1．蛋白酶 2．肽酶 3．联合脱氨基作用 4．核苷酸的从头合成途径 5．核苷酸的补救合成途径 6．葡萄糖—丙氨酸循环 7．转氨基作用 8．尿素循环 9．生糖氨基酸 10．生酮氨基酸 11．核酸酶（核酸外切酶核酸内切酶限制性内切酶） 12．核苷酸的抗代谢物 13．氨甲蝶呤 14．一碳单位 15、肽链端解酶、羧基肽酶、氨基肽酶 （二）英文缩写符号 1．GOT 2．GPT 3．6-MP 4．5-FU 5．PRPP 6．SAM 7．GDH 8．IMP 9.XMP 10. （三）填空 1．生物体内的蛋白质可被（）和（）共同作用降解成氨基酸。 2．多肽链经胰蛋白酶降解后，产生新肽段羧基端主要是（）和（）氨基酸残基。 3．胰凝乳蛋白酶专一性水解多肽链由（）族氨基酸（）端形成的肽键。4．氨基酸的降解反应包括（）、（）和（）作用。 5．氨基酸转氨酶和脱羧酶的辅酶通常是（）。 6．谷氨酸经脱氨后产生（）和氨，前者进入（）进一步代谢。 7．尿素循环中产生的（）和（）两种氨基酸不是蛋白质氨基酸。 8．尿素分子中两个N原子，分别来自（）和（）。 9．芳香族氨基酸碳架主要来自糖酵解中间代谢物（）和磷酸戊糖途径的中间代谢物（）。 10．组氨酸合成的碳架来自糖代谢的中间物（）。 11．氨基酸脱下氨的主要去路有（）、（）和（）。 12．胞嘧啶和尿嘧啶经脱氨、还原和水解产生的终产物为（）。 13．参与嘌呤核苷酸合成的氨基酸有（）、（）和（）。 14．尿苷酸转变为胞苷酸是在（）水平上进行的。 15．脱氧核糖核苷酸的合成是由（）酶催化的，被还原的底物是（）。16．在嘌呤核苷酸的合成中,腺苷酸的C-6氨基来自（）；鸟苷酸的C-2氨基来自（）。 17．多巴是（）经（）作用生成的。 18．生物体中活性蛋氨酸是（），它是活泼（）的供应者。 19、核糖核酸的合成途径有和。 20、嘧啶环的N1、C6来自；和N3来自。 21.转氨酶类属于双成分酶，其共有的辅基为或；谷草转氨酶促反应中氨基供体为氨酸，而氨基的受体为该种酶促反应可表示为。 22.在线粒体内谷氨酸脱氢酶的辅酶多为；同时谷氨酸经L-
核苷酸和／或氨基酸序列表和序列表电子文件标准
核苷酸和／或氨基酸序列表和序列表电子文件标准 （2001年11月1日国家知识产权局令第15号公布） 1 总则 根据专利法实施细则第18条第4款的规定，包含一个或多个核苷酸或者氨基酸序列的发明专利申请，说明书中应当包括符合国家知识产权局专利局规定的序列表，并按照国家知识产权局专利局的规定提交含有该序列表的计算机可读形式的副本。 为了使提交的纸件形式的核苷酸和／或氨基酸序列表及计算机可读形式的含有该序列表的电子文件规范化，以利于申请人提交；也为了使序列表电子文件可以快捷地输入国家知识产权局专利局的计算机数据库，并与其它的序列检索数据库交换数据，以利于公众检索；同时也利于专利局审查员加快审查，更好地为申请人服务；特制定本标准。 2 适用范围 本标准适用于所有向国家知识产权局专利局提交的包含核苷酸和／或氨基酸序列的发明专利申请，具体地说，适用于该申请提交的纸件形式的核苷酸和／或氨基酸序列表，以及含有核苷酸和／或氨基酸序列表的计算机可读形式的序列表电子文件。 3 术语和定义 在本标准中，采用下面术语和定义： （1）序列表：是指以纸件形式提交的专利申请说明书的一部分，它公开了核苷酸和／或氨基酸序列的详细内容和其它有用信息。序列表中的序列是不少于10个核苷酸的非支链核苷酸序列，或者是不少于4个氨基酸的非支链氨基酸序列。所述的序列不包括支链序列；不包括具有少于4个特别定义的核苷酸或氨基酸的序列；也不包括含有列于附录1之表1—4以外的核苷酸或氨基酸的序列。 （2）序列表电子文件：是指包含核苷酸和／或氨基酸序列表的计算机可读形式的纯文本文件。 （3）核苷酸：只包括附录1之表1中列出的符号所表示的核苷酸。附录1之表2中列