实验七 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

实验七胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇实验八二乙酰一肟法测定血清尿素

课程名称：生物化学与分子生物学实验课年级：2005

专业、层次：临床、营养与食品、口腔本科授课教师：符伟玉职称：讲师学时：4学时

基本教材：自编《生物化学与分子生物学实验指导》

教学目的与要求：

1、掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。

2、学习用比色法测定血清尿素。

3、巩固有关胆固醇和尿素的知识。

4、进一步熟练UV2100型分光光度计的使用。

大体内容与时间安排：

1、氧化酶法测定总胆固醇的原理5min

2、氧化酶法测定总胆固醇的注意事项5min

3、二乙酰一肟法测定血清尿素的原理5min

3、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项5min

4、学生做实验140min

教学方法：讲授式+启发式

教学重点、难点：

重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理

2、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项

难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理

一、实验原理

（一）氧化酶法测定血清总胆固醇

血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。

第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA) 。

第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。

第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含

量成正比。

（二）二乙酰一肟法测定血清尿素

二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。

二、操作步骤

（一）氧化酶法测定血清总胆固醇

终点法检测TC，取试管3支按下表依次加样。

酶法测定TC操作步骤

加入物(μl) 空白管标准管测定管血清－－20

标准液或定值血清－20 －蒸馏水20 －－

酶试剂 1 000 1 000 1 000

混匀后，37℃保温10 min，每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。

（二）二乙酰一肟法测定血清尿素

取试管3支，按下表依次加样。

二乙酰一肟法操作步骤

加入物(ml) 空白管标准管测定管

血清－－0.02

尿素标准应用液－0.02 －

蒸馏水0.02 －－

二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5

酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。

三、注意事项

（一）氧化酶法测定血清总胆固醇

1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致；

2、比色应在30min内完成；

3、试管在操作前尽量保持干燥；

4、试剂中酶的质量影响测定结果；

5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。

（二）二乙酰一肟法测定血清尿素

1、试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度

褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。

2、尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。

3、注意洁净干燥，加量务必准确。

4、水浴时注意打开水浴箱盖，以免水汽入管。

5、酸性试剂中酸的含量较浓，要小心使用。

四、思考题

1. 血清胆固醇浓度升高或降低有何临床意义？

2. 血清尿素浓度升高或降低有何临床意义？

3. 血清非蛋白氮(NPN)与尿素的区别，它包括哪些？

小结

氧化酶法测定血清总胆固醇，此方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。在终点法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。

二乙酰一肟法测定血清尿素，试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。若改善加热条件，如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫，在网垫上加热显色，可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～102.1%。二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋白达10g/L 均无影响。

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【原理】 血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。 【试剂】 1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚 5mmol/L 2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。 酶法测定TC 操作步骤 项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl) － 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl) 1.50 1.50 1.50 混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 【计算】 血清TC (mmol/L)＝ 标准管吸光度 测定管吸光度 ×胆固醇标准液浓度

【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。 【临床意义】 1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 2．TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。 【注意事项】 1．试剂中酶的质量影响测定结果。 2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3．检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。 【评价】本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。 本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。 在终点法中血红蛋白高于2 g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1 g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。

血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义

血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义 以下是为大家整理的血清总胆固醇(Tch)测定及临床意义的相关范文，本文关键词为血清,胆固醇,Tch,测定,临床,意义,，您可以从右上方搜索框检索更多相关文章，如果您觉得有用，请继续关注我们并推荐给您的好友，您可以在综合文库中查看更多范文。 血清总胆固醇(Tch)测定及临床意义 【正常参考值】 人群血脂水平主要取决于生活因素，特别是饮食和营养，所以各

地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高Tc划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的Tc水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dL)升高：≥5.72mmol/L （≥220mg/dL） 美国胆固醇教育计划（ncep），成人治疗组提出的医学决定水平如下：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL)边缘升高：5.2～6.2mmol/L(200～239mg/dL)升高：≥6.21mmol/L（≥240mg/dL）【临床意义】 影响Tc水平的因素有：①年龄与性别：Tc水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使Tc增高。 ③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使Tc升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apob缺陷 症、多源性高Tc、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。

实验十四 血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)

实验十四血清胆固醇测定 （胆固醇氧化酶法） 胆固醇的测定方法很多；通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。化学试剂比色法中有直接法和间接法；前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。 【目的】 1．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。 2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。 【原理】 血清中总胆固醇（TC）包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（POD）催化氢与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下： CEH 胆固醇酯胆固醇 ＋ 脂肪酸 胆固醇 ＋ O2△4-胆甾烯酮 ＋ H O2 2 POD 2H2O2 ＋ 4-氨基安替比林 ＋ 酚红色醌亚胺【器材】 试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。 【试剂】 酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。 1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为： pH6.7磷酸盐缓冲液50mmol/L

胆固醇酯酶≥200U/L 胆固醇氧化酶≥100U/L 过氧化物酶≥3 000U/L 4-氨基安替比林0.3 mmol/L 苯酚 5 mmol/L 此外还含有胆酸钠和Triton X-100，胆酸钠是胆固醇酯酶的激活剂，表面活性剂Triton X-100能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯，有利于胆固醇酯的水解。 2．5.17 mmol/L（200mg /dl）胆固醇标准液 精确称取胆固醇200mg溶于无水乙醇，移入100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制)。 【操作】 取试管3支，编号，按下操作。 表3-15 酶法测定血清胆固醇操作步骤 加入物（ml）测定管标准管空白管 血清0.02－－胆固醇标准液－0.02－ 蒸馏水－－0.02 酶应用液 2.00 2.00 2.00 混匀后，37℃水浴保温15分钟，在500nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。 【计算】 血清胆固醇 (mmol/L) ＝ 测定管吸光度 标准管吸光度 × 5.17 【注意事项】 1. 黄疸血清过高的胆红素可还原—部分反应中的H2O2，降低显色反应，使结果偏低。但测定胆固醇，胆红素对酶法的干扰比化学法小。

实验七__胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

生物化学与分子生物学设计实验 （胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟 法测定血清尿素） 小组成员： 班级：麻醉11-2班 日期：2012年12月19 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法 测定血清尿素

实验目的 1、掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。 2、学习用比色法测定血清尿素。 3、巩固有关胆固醇和尿素的知识。 4、进一步熟练UV2100型分光光度计的 重点、难点： 重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理 2、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项 难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理 一、实验原理 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA) 。 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含 量成正比。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。 二、操作步骤 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇

终点法检测TC，取试管3支按下表依次加样。 酶法测定TC操作步骤 加入物(μl) 空白管标准管测定管血清－－20 标准液或定值血清－20 －蒸馏水20 －－ 酶试剂 1 000 1 000 1 000 混匀后，37℃保温10 min，每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 取试管3支，按下表依次加样。 二乙酰一肟法操作步骤 加入物(ml) 空白管标准管测定管 血清－－0.02 尿素标准应用液－0.02 － 蒸馏水0.02 －－ 二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。 三、注意事项 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2、比色应在30min内完成； 3、试管在操作前尽量保持干燥； 4、试剂中酶的质量影响测定结果；

血清胆固醇的定量测定

血清胆固醇的定量测定 摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。结论：该人的胆固醇含量正常。 关键词：胆固醇；磷硫铁法 胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管； 1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇 2 方法 2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。 2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。摇匀，室温静置10min。将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。 表1 试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ———— 胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml 磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml 2.3 计算人血清胆固醇=(OD 2/OD 1 )×0.08×(100/0.04)= (OD 2 /OD 1 )×200，其中， OD 2表示测定管的吸光度，OD 1 表示标准管的吸光度。 3 结果与讨论 3.1 计算结果 OD 2为0.096，OD 1 为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml. 3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。在实验操作中，配制试剂时要格外吸小心，看清标注以免搞错，胆固醇过高，会引起动脉粥样化，甚至引起冠心病，胆固醇过低，会使人抵抗力不足，容易引发感染性疾病。

血清总胆固醇的测定和血清蛋白分离实验

血清总胆固醇的测定 实验目的： 测量血清中总胆固醇的含量 实验原理： 胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的催化下生成游离胆固醇和脂肪酸。游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢再加4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺，醌亚胺在500nm 有特异吸收峰，吸收的强度与胆固醇含量成正比。反应如下： 胆固醇酯+H 2O 胆固醇酯酶 → 游离胆固醇+脂肪酸 游离胆固醇+O 2 胆固醇氧化酶→ 胆烷-4-烯-3-酮+H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶→ 醌亚胺染料+H 2O 实验操作： 取干净干燥的小试管3支，标号，按下表操作 混匀，置37℃水浴5-6分钟，以空白管校零，在500nm 波长下比色读取各管吸光度。 实验结果： As= 0.214 A T =0.143 标准管胆固醇含量mmol/L=5.00mmol/L 测定管胆固醇含量mmol/L=3.34mmol/L 分析讨论： 为保证实验结果准确，滴加液体时可以先滴加量少的液体，再滴加含量较大的 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验目的： 醋酸纤维薄膜电泳把血清蛋白分离，并测定血清蛋白种类 实验原理：

带电颗粒在电场作用下，向着与其所带电性相反的电极移动，称电泳。醋酸纤维薄膜电泳可把血清 蛋白分离为：清蛋白、α 1、α 2 、β、γ-球蛋白5条区带 实验操作： 1.点样：取在缓冲液中浸泡的醋酸纤维薄膜一条（ 2.5×8cm），轻轻夹于滤纸中，吸去多余的缓冲液，在薄膜的毛面上距一端约1.0cm～1.5cm处，用点样气沾上血清后迅速压一下，然后将毛面向下使两端紧贴在四层滤纸上，加盖，平衡2～3分钟，通电电泳。 2.电泳：恒压120V，0.6mA/cm，时间50～60分钟。 3.染色：电泳完毕后，关闭电源，将薄膜取出，直接浸入氨基黑染色液中染色，取出用漂洗液浸洗3～4次，至背景完全无色为止。 实验结果: 电泳后出现5条区带，从正极到负极，分别为清蛋白、α 1、α 2 、β、γ，点样线。 分析讨论： 在醋酸纤维薄膜上点血清时要在毛面上点样，点样时要快速且血清量不能过多或者过少。电泳时把点样端放在电泳负极处。染色时间不能过短否则会导致最后得到的结果不够明显。

总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)

总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法) 简介： 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。 Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。 c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。 ③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。 2、 分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪TC 测定操作: 编号 名称 TC1213100T Storage 试剂(A): COD-PAP 工作液 Good's buffer 2×50ml -20℃ 避光 胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂 试剂(B): TC 标准(5mmol/L) 1ml -20℃ 避光 试剂(C): ddH 2O 1ml RT 使用说明书 1份

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇

胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇（标准管法） 实验目的： 1.了解自动生化分析仪的工作原理 2.熟悉血清总胆固醇相关生化的检测项目及检测方法 3.掌握血清总胆固醇相关生化检测项目的临床意义。 实验原理： 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇:血清中的胆固醇由游离胆固醇及胆固醇酯构成，胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下水解为胆固醇，再与胆固醇氧化酶作用产生△4-胆甾烯酮及H202;后者在过氧化物酶的作用下，与苯酚及4-氨基安替比林作用生成红色化合物醌亚胺。测定该红色化合物在500nm波长的吸光度，可以计算出血清总胆固醇含量。 实验操作： 1.将准备好的酶工作液（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、苯酚、4-氨基安替比林）加 入空白管、浓度标准管、测定管各1.5ml，再向标准管加20μl胆固醇标准液（5.18mmol/L），再向测定管加入20μl血清。 2.将三支试管放入水浴锅中，37℃保温20分钟 3.调节分光光度计波长500nm,透光度T至100%，将空白管试液对光的吸收调节为0，再用空白管 调“零”点测定其他各管的吸光度。 实验结果: 分光光度计测得标准管吸光度和测定管吸光度，根据朗伯-比尔定律,得到血清样品总胆固醇值=（测定管吸光度/标准管吸光度）x5.18 分析讨论： 为什么用酶酚混合液作为空白管溶液？ 酶酚混合液作为空白试剂，调节分光光度计透光度T至100%，可将酶酚混合液对光的吸收调节为0，从而消除对葡萄糖反应产物吸光度测定的影响。 思考题：

1.血清甘油三酯升高有和临床意义？血脂代谢紊乱对机体有何危害？ 血清甘油三酯升高可能代表着各种疾病的发生：如原发性继发性高脂蛋白血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病、脂肪肝等。 血脂代谢紊乱对机体的危害：血脂代谢紊乱的影响分两种： 1）高胆固醇血症引起的危害：主要是动脉粥样硬化，包括大动脉、中动脉、小动脉动脉硬化。 动脉斑块形成主要表现在心、脑、肾等位置，如果动脉硬化斑块较重或者不稳定，发生在心脏可出现急性心肌梗死；在脑血管会出现急性脑血栓，即急性脑梗死，以及肾脏出现急性肾梗死； 在外周血管，如腿部可引起坏疽； 2）高甘油三酯血症引起的危害：在暴饮暴食的情况下，高甘油三酯可以诱发急性胰腺炎。严重者可导致急性坏死性胰腺炎。 2.血清胆固醇过高对人体有何危害？ 胆固醇过于太高会引起很多的疾病，很可能会出现冠状动脉粥样硬化性心脏病以及血管的粥样硬化，还会出现胆结石对肾脏有损害之类。胆固醇和低密度脂蛋白结合不牢固,穿透力大,侵及动脉内膜,并沉积在动脉壁上,引起动脉粥样硬化。使血管弹性降低,形成管腔狭窄, 造成心血管相关疾病。

总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)

总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法) 简介： 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C27H46O，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。用酶学方法测定总胆固醇(Total Cholesterol，TC)葡萄糖是生化检测中的常用方法，其特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。 Leagene总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。分光光度计在处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、生理盐水或PBS 2、离心管、小试管或96孔板 3、水浴锅或恒温箱 4、分光光度计或酶标仪 5、全自动或半自动生化分析仪编号 名称TC1217 100T Storage 试剂(A): Good's溶液Good's buffer 2×25ml-20℃避光显色剂 活性剂、稳定剂 试剂(B): COD-POD溶液胆固醇氧化酶、激酶 2×25ml -20℃避光4-氨基安替比林 CEH、POD 临用前，按A：B混合，即为COD-PAP工作液，4℃保存。 试剂(C): TC标准(5mmol/L) 1ml-20℃避光试剂(D): ddH2O 1ml RT 使用说明书1份

实验三血清总胆固醇的测定

实验三血清总胆固醇的测定 目的要求 了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。 实验原理 血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~ 250mg/mL。 胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。 本法不必离心，颜色产物也比较稳定。 试剂和器材 一、试剂 邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。 混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。 标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。 标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。 二、测试样品 0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。 三、器材 试管1.5×15cm（×11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：

加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。 二、样品测定 取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定： 加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。 注意事项 1.本法在20～37℃条件下显色。 2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。 思考题 1. 本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？ 2. 酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？

游离胆固醇测定试剂盒(胆固醇氧化酶法)产品技术要求迪迈

游离胆固醇测定试剂盒（胆固醇氧化酶法） 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中游离胆固醇的浓度。 1.1 包装规格 试剂：1×20mL 试剂：1×24mL 试剂：1×40mL 试剂：1×80mL 试剂：2×60mL 试剂：3×40mL 试剂：4×80mL 试剂：5×60mL 试剂：2×100mL 1.2 主要组成成分 MOPS缓冲液（pH7.0）：50 mmol/L 4氨基安替比林（4AAP）：0.35mmol/L 胆固醇氧化酶（CO）：0.3KU/L 过氧化物酶（POD）：3KU/L 苯酚：5mmol/L 2.1 外观 试剂为无色至浅红色澄清液体，无杂质、无絮状物。 2.2 净含量 试剂净含量不少于标称装量。 2.3 试剂空白吸光度 用纯化水作为样本加入试剂测试时，试剂空白吸光度应＜0.800。 2.4 分析灵敏度 FCHO含量为1.5mmol/L时，测定吸光度差值的绝对值（△A）≥0.0100。 2.5 线性区间 试剂线性在[0.2，10]mmol/L区间内； 2.5.1 线性相关系数（r）应＞0.990；

2.5.2 [0.2，2]mmol/L区间内，绝对偏差应在±0.2mmol/L；(2，10]mmol/L区间内，相对偏差应不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1重复性 重复测定高、中、低三个水平样本，结果的变异系数（CV）<10％。 2.6.2 批间差 测定中水平浓度样本，试剂盒的批间相对极差（R）<10％。 2.7 准确度 用国家标准物质（编号：GBW09203）进行测试，实测值与标示值的相对偏差在±15.0%内。 2.8 稳定性 2℃～8℃避光保存，有效期为18个月。试剂盒至有效期后2个月内，试剂性能应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

食物中胆固醇含量一览表

食物中胆固醇含量一览表 胆固醇的摄入量以每天小于300毫克为宜（相当于1个鸡蛋黄中含的胆固醇量）

十种食物帮你刮掉胆固醇 胆固醇是人体不可缺少的营养物质。它不仅作为身体的组成成分，还是合成许多重要物质的原料，但是长期大量摄入胆固醇不利于身体健康，会使血清胆固醇升高，增加患心血管疾病的危险，并诱发脂肪肝。据美国每日健康网报道，通过长期研究，美国洛玛琳达大学研究人员的一项最新研究成果显示，已经患高胆固醇血症的人要常吃以下10种食物： 苹果：因富含果胶、纤维素和维生素C，有非常好的降脂作用。如果每天吃两个苹果，坚持一个月，大多数人血液中的低密度脂蛋白胆固醇(对心血管有害)会降低，而对心血管有益的高密度脂蛋白胆固醇水平会升高。 胡萝卜：富含果胶酸钙，它与胆汁酸发生化学反应后从大便中排出。身体要产生胆汁酸势必会动用血液中的胆固醇，从而促使血液中胆固醇的水平降低。 玉米：含有丰富的钙、磷、硒和卵磷脂、维生素E等，具有降低血清胆固醇的作用。 牡蛎：富含锌及牛黄酸等，尤其是牛黄酸可促进胆固醇分解，有助于降低血脂水平。 杏仁：胆固醇水平正常或稍高的人，可以用杏仁取代其膳食中的低营养密度食品，达到降低血液胆固醇并保持心脏健康的目的。 海带：含丰富的牛黄酸，可降低血压及胆汁中的胆固醇；含食物纤维褐藻酸，也可以抑制胆固醇的吸收，促进排泄。 大蒜：能减少肝脏合成胆固醇。每天只需吃3瓣大蒜，便可有效降低有害的胆固醇，使有益胆固醇升高，使心脏病的发病率减少50%。 牛奶：含较多的钙质，能抑制体内胆固醇合成酶的活性，也可减少人体对胆固醇的吸收。 蜜橘：含有丰富的维生素C，多吃可以提高肝脏解毒能力，加速胆固醇转化，降低血清胆固醇和血脂的含量。 茶：含有咖啡碱与茶多酚，有提神、强心、利尿、消腻和降脂之功能。经常饮茶，可以防止人体内胆固醇的升高。 正确认识胆固醇 “谈胆固醇色变”，是很多人，特别是中老年朋友的真实心态。 其实，这是一种认识上的“误区”。对胆固醇的看法，无论是血清胆固醇，还是膳食胆固醇，均应持“一分为二”的态度，客观评价胆固醇的“功”与“过”。一、“一分为二”看血清胆固醇： 临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。目前，我国医学界将血清总胆固醇水平大致分为以下三个等级：

胆固醇氧化酶法

胆固醇氧化酶法（Cholesterol oxidase）

血清中测定方法包括化学方法和酶法，化学方法包括抽提法和直接测定法 酶法临床上常用的是胆固醇氧化酶法 LDL是一组不均一的富含胆固醇的脂蛋白颗粒，颗粒大小、电荷或apoB含量等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将LDL与其他脂蛋白分离开，然后测定LDL 组分中胆固醇含量。 由于化学沉淀法和免疫分离法测定LDL-C均需要进行样本预处理，其最大缺点是不能进行自动化分析，不适应大规模流行病学调查或临床大批量标本诸多项目同时检测。国外近两年相继研制开发出几种不同类型的均相测定法，标本不需沉淀处理，可用于自动生化分析仪自动测定。(1)选择性反应法［12～14］：基于用表面活性剂控制酶与相应脂蛋白的反应的新技术研制而成，多为液体双试剂。目前有两类检测系统：第一类系统的试剂1中的表面活性剂1可使血清样品中的HDL、CM和VLDL颗粒解离，Chol分子被开释出来，与胆固醇酶试剂反应，产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色，此时LDL颗粒还是完整的。加试剂2(含表面活性剂2和偶联剂DSBmT)，它可使LDL颗粒解离开释Chol，参与Trinder反应而显色，因其他脂蛋白的Chol分子已除往，光彩深浅与LDL-C量呈比例［12，13］。 HDL 目前临床常规实验室直接分离测定HDL-C的方法大致可分为3代。第1代为化学沉淀法,常用的沉淀剂为多阴离子,如磷钨酸(FTA)、DS、肝素(Hep)或非离子多聚体如聚乙二醇（PEG）与某些两价阳离子(如Mg2＋、Ca2＋、Mn2＋)适用。最早为美国国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法(HM法),后多采用DS50-Mg2＋矿法,欧洲则多采用磷钨酸镁沉淀法

总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.

总胆固醇测定试剂盒标准操作程序 1. 摘要 本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。 2. 适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。 3. 职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4. 检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。 5. 原理 O H ESPAS O H O H O O H 222222244+???→?+-+-?+????→?++???→?+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮 游离胆固醇脂肪酸 游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶 ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺 血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。 由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比 6. 仪器 AU5811自动生化分析仪 7. 试剂 7.1 试剂来源： 上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分： R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）； R2：胆固醇氧化酶、4-氨基安替比林； 校准品：胆固醇 7.3 试剂稳定性：

血清胆固醇含量的测定实验报告

实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告 实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。 实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。 胆固醇酯+ H 2O ???→?胆固醇酯酶 胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O 2?? ??→?胆固醇氧化酶 △4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS ???→?过氧化物酶 醌亚胺+ H 2O 实验步骤： 1、取2支试管分别加入的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。往每支试管加入的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。 2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）

3、准备好以上试管后，充分混合并在37。 的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。 实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02 .01 .0×50 高密度脂蛋白胆固醇=SH H 吸光度值吸光度值×50 代入数据得：总胆固醇=252 .0167 .0×02.01.0×50=（mg/dL ） 高密度脂蛋白胆固醇=430 .0605 .0×50=（mg/dL ）

小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(过氧化物酶法)产品技术要求jiuqiang

小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（过氧化物酶法） 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆中小而密低密度脂蛋白胆固醇的含量。 1.1 包装规格 包装规格见表1。 表1 包装规格 包装规格 试剂1：3×20mL、试剂2：1×20mL 试剂1：1×60mL、试剂2：1×20mL 试剂1：2×60mL、试剂2：2×20mL 试剂1：3×60mL、试剂2：3×20mL 试剂1：6×60mL、试剂2：2×60mL 试剂1：4×90mL、试剂2：2×60mL 试剂1：2×90mL、试剂2：1×60mL 试剂1：1×45mL、试剂2：1×15mL 试剂1：2×45mL、试剂2：2×15mL 试剂1：24×3.8mL、试剂2：12×2.6mL 试剂1：12×3.8mL、试剂2：6×2.6mL 试剂1：1×18mL、试剂2：1×6mL 试剂1：6×60mL、试剂2：2×45mL

试剂1：4×90mL、试剂2：2×45mL 试剂1：2×90mL、试剂2：1×45mL 试剂1：1×60mL、试剂2：1×15mL 试剂1：2×60mL、试剂2：2×15mL 试剂1：1×40mL、试剂2：1×10mL 试剂1：2×40mL、试剂2：2×10mL 试剂1：1×20mL、试剂2：1×5mL 试剂1：24×3.8mL、试剂2：6×3.8mL 试剂1：1×50mL、试剂2：1×10mL 试剂1：2×50mL、试剂2：2×10mL 试剂1：2×60mL、试剂2：2×12 mL 试剂1：1×25mL、试剂2：1×5 mL 试剂1:30×3.8mL、试剂2:6 ×3.8mL 校准品（冻干粉，1水平）：1×0.5mL；1×1mL；1 ×2mL； 质控品（冻干粉，水平1）：1×0.5mL；1×1mL；1 ×2mL；1×3mL； 质控品（冻干粉，水平2）：1×0.5mL；1×1mL；1 ×2mL；1×3mL；

血清总胆固醇(TC)测定操作规程

血清总胆固醇(TC)测定操作规程 A1．2 原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下： 胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H202 2H202+4－氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺 +4H2O A1．3 标本采集与处理 对于血脂分析，特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。

A1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h 内不作剧烈运动。 A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立

血清总胆固醇酶试剂法测定法

血清总胆固醇酶试剂法测定法 1.实验原理 胆固醇酯酶(CHE)、胆固醇氧化酶(CHO)、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。反应式如下： CHE 胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸 CHO 胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2 POD 2H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。 3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂威特曼总胆固醇试剂盒试剂1 试剂2 6.1.1 试剂准备试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪

8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。 12. 参考值范围（mmol/L） 合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L 高度危险范围：>6.2mmol/L 13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸

总胆固醇试剂盒使用说明书

自己从试剂说明书上打的，主要是为了了解酶比色法测定总胆固醇的原理。 总胆固醇试剂盒使用说明书 Cholestero Kit (CHO) 酶比色法 通用型（冻干粉） 用途： 本试机用于测定人血清中总胆固醇的浓度。 测定原理： 总胆固醇+??→?CEOD O H 24Δ-胆甾烯酮 + 22O H 胆固醇+2O ??→?GPO 磷酸二羟丙酮+22O H 222O H +4-氨基安替砒啉+4-氯酚??→?POD 醌亚胺+O H 24 试剂稳定性： 原装试剂在2~8℃避光保存，有效期36个月。 试剂复溶后在2~8℃保存稳定1月，在15~25℃保存稳定3天。 样品： 新鲜无溶血血清。 操作步骤： 波长：500nm (480~520nm) 反映温度：37℃ 比色杯光径：1cm 取一定量R2(参看R1瓶签)复溶 1瓶R1，溶解后即为工作液。 分别混合均匀，在37℃保温6分钟，以试剂空白管校零，度校准A 及样品A 。 计算：

总胆固醇浓度= 校准 样品A A ×校准浓度（mmol/L 或mg/dl ） 参考值： 中老年人合适水平＜5.17mmol/L(200mg/dl) 临界值3.17mmol/L~6。47mmol/L(200mg/dl~250mg/dl) 高胆固醇血症＞6.47mmol/L(250mg/dl) 各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考值。 线性上限：` 总胆固醇浓度可达12.93mmol/L(500mg/dl) 主要性能指标： 1. 试剂空白吸光度：在500nm(480~520nm)处，A ≤0.1。 2. 准确性：相对偏差不超过±5%。 3. 瓶间差：变异系数（CV%）≤3% 4. 批间差：随机抽取三批试剂盒的批间差≤4%。 5. 线性误差：在1.13mmol/L~11.29mmol/L 范围内不超过±10%。 注意事项： 1. 若样品胆固醇含量过高，可用生理盐水稀释样品，重新测定。结果乘以稀释倍数。 2. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氨钠，应避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 3. 本产品应在2~8℃条件下贮存。 4. 若试剂在全自动生化分析仪上使用，可参照本公司提供的相应型号仪器的参数，并在本 公司技术人员指导下使用。 禁忌症：暂未发现

血清总胆固醇(TCH)测定 及临床意义

血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义 【正常参考值】 人群血脂水平主要取决于生活因素，特别是饮食和营养，所以各地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高TC划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的TC水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为： 理想范围：＜5.2 mmol/L(＜200 mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69 mmol/L(201～219 mg/dL) 升高：≥5.72 mmol/L（≥220 mg/dL） 美国胆固醇教育计划（NCEP），成人治疗组提出的医学决定水平如下： 理想范围：＜5.2 mmol/L(＜200 mg/dL) 边缘升高：5.2～6.2 mmol/L(200～239 mg/dL) 升高：≥6.21 mmol/L（≥240 mg/dL） 【临床意义】 影响TC水平的因素有：①年龄与性别：TC水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使TC增高。③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apoB缺陷

症、多源性高TC、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。 减少：低总胆固醇也有原发和继发两种，前者常由遗传因素引起如家族性的无或低β脂蛋白血症，后者如甲状腺功能亢进、营养不良、慢性消耗性疾病、恶性贫血、溶血性贫血等。