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生物技术制药复习资料小结

1.生物技术是以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其成分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种

（或品系）进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系。

主要技术范畴有:基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程及生化工程。

基因工程是生物技术的核心和关键，是主导技术。细胞工程是生物技术的基础。酶工程是生物技术的条件。发酵工程是生物技术获得最终产品的手段。蛋白质工程是第二代基因工程，海洋生物技术是第三代生物技术。★

2.生物技术制药：采用现代生物技术可以认为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。

3.生物技术药物一般来说，采用DNA重组技术或其他生物技术研制的蛋白质或核酸类药物称为生物技术药物。

4.生物药物泛指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗疾病的药品。按其功能用途分为一是治疗药物，

二是预防药物，三是诊断药物。

5.微生物药物：在微生物生命活动过程中产生的具有生理活性的次级代谢产物及其衍生物。

6.单克隆抗体（McAb），由单一克隆B淋巴细胞杂交瘤产生的，识别抗原分子上某一特定抗原决定簇的抗体。制备过程：抗原的制备、动物的免疫，抗体产生细胞与骨髓瘤细

胞融合形成杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的选择性培养、筛选，能产生某一特异抗体的阳性克隆和克隆化以及采用体外培养或动物腹腔接种培养大量制备单克隆抗体，单抗的纯化。

2 多克隆抗体由于病原微生物是含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称~ 即针对多种抗原决定簇的抗体。

7.生物制品用细菌疫苗制成的功预防好、治疗和诊断特定传染病的药品。

8.发酵工程（fermentation engineering）又称微生物工程，是利用微生物制造工业原料与工业产品并提供服务的技术,是生物技术的基础工程。

9.生物技术的发展简史，分为三个不同的发展阶段：传统生物技术阶段、近代生物技术阶段、现代生物技术。

各自特征：传统生物技术的技术特征是酿造技术。生产过程比较简单，大多数属于兼气发酵或表面培养，生产设备要求也不高，产品的化学结构较为简单，属微生物的次级代谢产物。近代生物技术的技术特征是微生物发酵技术。产品类型多，生产技术要求高，生产设备规模宏大，技术发展速度快。现代生物技术：1988年PCR方法问世。2003年中国研制的重组腺病毒-p53注射液成为世界上第一个正式批准的基因治疗药物。1953年watson和crick共同提出了生命物质DNA的双螺旋结构。

现代生物药物四大类型：一是应用重组DNA技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物，如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等；三是来自动物、植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物。

10.生物技术药物的特性:①分子结构复杂。②具有种属特异性。③治疗针对性强、疗效高。④稳定性差。⑤基因稳定性。⑥免疫原性。⑦体内的半衰期短。⑧受体效应。⑨多效

性和网络性效应。⑩检验的特殊性。

11.★生物技术制药的特性：高技术、高投入、长周期、高风险、高收益。（四高一长）

1.基因工程技术（基因重组技术）就是将所要重组对象的目的基因插入载体、拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在

工程菌内进行复制和表达的技术。

2.制备基因工程药物的基本过程★：1 目的基因的克隆、2构建ＤＮＡ重组体、3构建工程菌、4目的基因的表达 5外源基因表达产物的分离纯化、6产品的检验。

基因工程药物的生产可分为上游和下游两个阶段:上游阶段主要是分离目的基因、构建工程菌（细胞）。下游阶段是从工程菌的大规模培养直到产品的分离纯化、质量控制等。

2 基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。

3 目的基因的获得途径：一反转录法，二RT-PCR法，三化学合成法，四筛选基因，五改造基因。

4为什么不能直接分离真核细胞中产生基因工程药物的基因？①真核生物染色体中单拷贝基因含量低，多拷贝基因含量也很少，因此从染色体上直接分离目的基因比较困难。②真核生物基因大多含有内含子，真核基因在原核中表达时，由于原核细胞缺乏mRNA转录后加工系统，因而不能产生成熟的mRNA.

5 宿主菌的选择宿主细胞应满足以下要求：具有高浓度、高产量、高产率；能利用易得廉价原料；不致病、不产生内毒素；发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；容

易进行代谢调控；容易进行重组DNA技术；产物容易提取纯化。宿主细胞两类，原核细胞（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌）；真核细胞（酵母。丝状真菌）。

6 大肠杆菌基因表达的特点a大肠杆菌表达时不存在信号肽，产品多为胞内产物，提取时需要细胞捣碎，提取困难 b分泌能力不足，真核蛋白质形成不溶性的包涵体，表达产物

必须在下游处理过程中，进过变性和复性恢复其生物活性 c对蛋白质产物不能糖基化 d翻译从甲硫氨酸的AUG密码子开始，目的蛋白的N端多个甲硫氨酸残基，会引起免疫反应 e大肠杆菌会产生内毒素，很难除去，还会产生蛋白酶破坏目的蛋白质

7如何减轻宿主细胞的代谢负荷 a宿主细胞大量生长时，抑制外源基因表达的。即细胞的生长和外源基因的表达分为两个阶段，使表达产物不会影响细胞的正常生长，当宿主细胞的正常生长，当宿主细胞的生物量达到饱和时，再进行基因产物的诱导合成 b将宿主细胞的生长和重组质粒的复制分开

8 如何检测质粒稳定性 /★质粒稳定性的分析方法如下：将工程菌培养液样品适当稀释，均匀涂布于不含抗性标记抗生素的平板培养基上，培养10—12小时，然后随机挑选100

个菌落接种到含抗性标记抗生素的平板培养基上，培养10—12小时，统计长出的菌落数。每一样品应取3次重复的结果，计算出比值，该比值反映了质粒的稳定性(ST)。★

9 表达载体必须具备的条件：①载体能够独立的复制。②应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选。③应具有很强的启动子，能为大肠杆菌

的RNA聚合酶所识别。④应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。⑤应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他的无关的外源基因，同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。⑥所产生的mRNA必须有翻译的起始信号，即起始密码AUG和SD序列，以便转录后能顺利翻译。★

10 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素:①外源基因的剂量。②外源基因的表达效率。③表达产物的稳定性。④细胞的代谢负荷。⑤工程菌的培养条件。★

11 影响外源基因表达效率的因素：①启动子的强弱，②核糖体结合位点的有效性，③SD序列和起始密码的间距，④密码子组成。

12提高表达产物在菌体内的稳定性：①组建融合基因，产生融合蛋白。②利用大肠杆菌的信号肽或某些真核多肽中自身的信号肽，把真核基因产物搬动到胞浆周质的空隙中。③采用位点特异性突变的方法，改变真核蛋白质中二硫键的位置，从而增加蛋白质的稳定性。④采用蛋白质缺陷型大肠杆菌，有可能减弱表达产物的降解。

13 为了减轻宿主细胞的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取下列措施①当宿主细胞大量生产时，抑制外源基因表达。②将宿主细胞的生长与重组质粒的复制分开。

14 真核基因在大肠杆菌中表达的形式：一以融合蛋白的形式表达药物基因。真核基因在大肠杆菌中表达的一种简便方法是使其表达为一种融合蛋白的一部分，这种融合蛋白的氨

基端是原核序列，羧基端是真核序列，这样的蛋白质是由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的，故称融合蛋白。表表达融合蛋白的优点是基因操作简便；蛋白质在菌体内比较稳定，不易被细菌酶类降解，容易实现高效表达。缺点是融合蛋白只能作抗原用，因为融合蛋白中含有一段原核多肽序列，可能影响真核蛋白的免疫原性，所以一般不

能作为人体注射用药。二以非融合蛋白的形式表达药物基因。三分泌型表达蛋白药物基因。分泌性表达具有以下特点：①一些可被细胞内蛋白酶所降解的蛋白质在外周质中是稳定的。②有些在细胞内表达时无活性的蛋白质分泌表达时则具有活性，因为这些蛋白质能按正确的方式折叠，蛋白质信号肽和编码序列之间被切割，因而分泌后的蛋白质产物不含氨基端起始密码AUG所编码的甲硫氨酸等。③产量不高，信号肽不被切割或不在特定位置上切割等。

15基因工程菌在传代过程中常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。基因工程菌的稳定性至少应维持在25代以上。

16 基因工程菌的质粒不稳定常见的是分裂不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象，它主要与两个因素有关：一是含质粒菌产生不含

质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌，质粒特性和培养条件有关；二是这两种菌比生长速率差异的大小。

17质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。

18培养基cell的生长需要一定的营养，用于维持cell生长的营养基称为~（不同的微生物对营养要求有很大差异，培养基的成分和配比合适与否对产生菌的生产发育、发酵单位的增长有相当大的影响，同时还影响提取工艺及产品质量）

19提高质粒稳定性的方法：①选择合适的宿主菌。宿主菌的比生长速率、基因重组系统的特性、染色体上是否有与质粒和外源基因同源序列等都会影响质粒的稳定性。②选择合适的载体。含低拷贝质粒的工程菌产生不含质粒的子代菌的频率较大，因而对这类工程菌增加质粒拷贝数能提高质粒的稳定性；含高拷贝质粒的工程菌产生不含质粒的子代菌的频率较低，但是由于大量外源质粒的存在使含质粒菌的比生长速率明显低于不含质粒菌，不含质粒菌一旦产生后，能较快地取代含质粒菌而成为优势菌，因而对这类菌进一步提高质粒拷贝数反而会增加含质粒菌的生长负势，对质粒的稳定性不利。对同一工程菌来说，通过控制不同的比生长速率可以改变质粒的拷贝数。③选择压力。在培养基中加选择性压力如抗生素等，是工程菌培养中提高质粒稳定性的常用方法。④分阶段控制培养。外源基因表达水平越高，重组质粒越不稳定，可以考虑将发酵过程分阶段控制，第一阶段使菌体生长至一定密度，第二阶段诱导外源基因的表达⑤控制培养条件。工程菌的培养条件对其质粒的稳定性和表达效率影响很大。可以通过改变培养环境如温度、溶氧、PH、限制性营养物质浓度和有害代谢产物浓度等来提高两种菌的比生长速率，从而改善质粒的稳定性。⑥固定化。基因重组大肠杆菌进行固定化后，质粒的稳定性及目的基因产物的产率都有了很大调高。★

20 基因工程药物的分离纯化：基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品，成品加工。

21 分离纯化主要依赖色谱分离方法。一离子交换层析。它是利用蛋白质等电点的差异，来实现不同蛋白之间的分离和纯化。离子交换层析的基本原理是通过带电的溶质分子与离

子交换剂中可以交换的离子进行交换，从而实现分离纯化。离子交换所用的分离介质是一类树脂骨架上固定有离子化基团的凝胶，由于不同蛋白质的等电点不同，因此在某一特定的PH时所带的电荷也不同，从而与这些基团的结合能力也不同，在不同浓度的反离子溶液中，被逐渐洗脱下来从而实现目标蛋白的分离纯化。二亲和层析。是利用固定化配基与目的蛋白质之间特异的生物亲和力进行吸附。这些相互作用包括酶与激活剂、抑制剂、底物之间的诱导契合，抗原与抗体之间的特异性结合，激素或配体与受体之间的相互作用，以及蛋白质与DNA，RNA,上某些特定区域之间的相互作用等。由于分子之间相互作用的特异性和专一性，用亲和层析技术进行分离，能使大多数目的蛋白在经过一次亲和柱之后就达到很高的纯度。三疏水层析。四凝胶过滤层析基本原理是根据生物大分子的大小来实现目的蛋白的分离纯化。在凝胶层析中所用的凝胶是一种惰性的不带电荷具有三维空间结构的多孔网状物质，凝胶的每一个颗粒的微细结构就如一个筛子，当样品随流动相经过凝胶柱时，较大的分子不能进入凝胶网孔内而受到排阻，将与流动相一起，首先被洗脱下来，而较小的分子进入部分凝胶网孔内，所以流出的速度相对较慢。这样，样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。凝胶的选择：一般来讲，选择凝胶首先要根据样品的情况确定一个合适的分离范围，根据分离范围来选择合适型号的凝胶。在实验室通常多用直径50～300um（溶胀后的直径）的颗粒。

22 目的基因载体的导入动物的方法有融合法、化学法、物理法、病毒法等，但最为常用磷酸钙沉淀法和电穿孔法。

4大量制备单抗的方法:一种是体外培养法，可获得10μg/mL的抗体，另一种是动物体内诱生法，可获得5-20μg/mL的抗体。抗体的特点高度特异性，均一性，有稳定来源，可大量生产。纯化a澄清与沉淀处理 b 分离I 凝胶过滤 II 阴离子交换层析 III 亲和层析

6三大类抗体诊断药物，即血清学鉴定抗体试剂，免疫标记技术抗体试剂，体内导向诊断药物抗体试剂。

7 McAb的缺陷①单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人抗鼠抗体，加速了排斥反应，在人体内半衰期只有5-6小时，难以维持有效药物作用靶组织时间。②完整的

抗体分子，即Ig的相对分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效地治疗浓度。

改造：①降低单克隆抗体的免疫原性，②降低单抗的相对分子质量。利用基因工程技术制备的基因工程抗体即可达到上述两个目的。

8.机体产生抗体的过程：抗体是指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞

合成和分泌的球蛋白。

12.细胞融合方法：取适量脾细胞（1*108）与骨髓瘤细胞（2-3*107）进行混合，在聚乙二醇PEG作用下诱导它们融合，时间2min以内，然后用培养液缓慢稀释。

13.噬菌体抗体库技术的基本方法：a 获取目的基因 b 抗体库技术的载体 c 淘筛 d表达与鉴定

14.噬菌体抗体库技术的特点 a 模拟天然全套抗体库 b 避开了人工免疫和杂交瘤技术 c 可获得高亲和力的人源化抗体

15.细细胞融合后转入HAT培养基：次黄嘌呤H,氨基蝶呤A,胸腺嘧啶T，A阻断DNA合成。

16.单克隆抗体的纯化过程：a澄清和沉淀处理：用饱和硫酸铵沉淀抗体（50%饱和硫酸铵能回收90%以上单克隆抗体）；b分离：凝胶过滤法，用于IgG和IgM类单克隆抗体的分

离纯化；阴离子交换层析：用于IgG的分离纯化；亲和层析：多用于蛋白A亲和层析，用于IgG类的纯化。

17.单链抗体的优缺点：单链抗体是由一段弹性连接肽把可变区重链与轻链相连而成，是具有抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。优点：a：分子小，仅为完整单克隆

抗体的1∕6;b:其为单链，易于进行分子改造；c：体内半衰期短，免疫原性低。缺点：a：稳定性较低；B:功能单一，仅与一种抗原特异性结合；c：亲和力低

18.优良菌种的选育方法：包括自然选育、诱变选育和杂交育种等经验育种方法，还包括控制杂交育种、原生体融合、基因工程等定向育种方法。

26发酵工程（fermentation engineering）又称微生物工程，是利用微生物制造工业原料与工业产品并提供服务的技术,是生物技术的基础工程。

发酵的基本过程：菌种——种子制备——发酵——发酵液预处理——提取精制。

发酵的方式：a分批发酵；b补料分批发酵；c连续发酵

发酵工业中的化学反应是通过微生物完整细胞的综合生物化学过程来实现的。A菌种：已有的优良生产菌种和选育的新菌种；B种子：是发酵工程开始的重要环节。

5 基因工程抗体的类型与特征：

现代生物技术的发展趋势：?基因操作技术日新月异，不断完善?新技术、新方法一经产生便迅速的通过商业渠道出售专项技术，并在市场上加以应用?基因工程药物和疫苗的研究和开发突飞猛进?新的生物治疗只记得产业化前景十分光明，21世纪整个医药工业将面临全面的更新改造?转基因植物和动物取得更大突破?现代生物技术在农业上的广泛应用，将给农业和畜牧业生产带来新的飞跃?阐明生物体基因组极其编码蛋白质的结构和功能是当今生命科学发展的一个主流方向?基因治疗取得巨大进展，有可能革新整个疾病的预防和治疗领域?蛋白质工程是基因工程的发展，它将分子生物学、结构生物学、计算机技术结合起来，形成一门高度结合的学科?信息技术的飞跃发展渗透到生命科学领域中，形成引人注目、用途广泛的生物信息学.我国现代生物技术的发展现状：我国基因工程药物主要集中在仿制上，同时现代生物技术是一项十分复杂的系统工程，其中的上游技术非常重要，是研究开发必不可少的，但是从实验室成果产业化、商品化的角度来看，下游技术就显得更为重要，我国生物技术下游技术，如工程菌大规模发酵最佳发参数的确立。新型生物反应器的研制等，我国上游技术与国际先机水平相比仅相差3到5年，但下游技术则至少落后15年以上。

利用基因工程技术生产药品的优点：①利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用建立有效的保障。②可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。③利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。④内源生理活性物质在作为药物使用时，存在不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程对其进行改造。⑤利用基因工程技术可以获得新型化合物，扩大药物筛选来源。

19.为了使杂交瘤细胞在腹腔内增殖良好，可于注入细胞的几周前预先将具有刺激性的有机溶剂降脂烷注入腹腔内，以破坏腹腔内膜，建立杂交瘤cell易于增值的环境。

20.在可变区V中，某些特定位置的氨基酸残基显示更大的变异性，构建了抗体分子和抗原分子发生特异性结合的关键部位，称为互补决定区（CDR）而C区决定了Ig分子的异

种抗原性。将鼠源性单克隆抗体的C区用人的Ig分子的C区置换，则对人的免疫原性消失，如果保留鼠源性单克隆抗体的CDR区的结构，抗体活性就不消失。CDR区以外的其他部分存在与否都影响其抗体活性。

生物技术制药期末复习提纲

生物技术制药期末复习提纲 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

生物技术制药复习提纲生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性基因工程菌的培养方式有哪几种分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养；从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。动物细胞培养基分为哪三类天然培养基合成培养基无血清培养基植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类。无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而 c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。酶固定法中的包埋法可分为哪两种网格型微囊型

发酵工业的生产水平取决于哪三个要素生产菌种、发酵工艺和发酵设备生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类治疗药物、预防药物、诊断药物基因工程药物制造的主要步骤如何目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验酶和细胞的固定化载体主要有哪三类吸附载体包埋载体交联载体单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种体内免疫法和体外免疫法生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源微生物发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种自然选育、诱变育种和原生质体融合 .

(完整版)生物技术制药考试题复习

一：选择题 1、酶的主要来源是( C) A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/ 植物细胞与组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指(A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素( EPO)基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：( E) A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用 B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定 C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒 B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：( D) A、Poly A B、Poly C C、Poly G D、Poly T E、发夹结构 7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达 C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达 D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能B、表达产物的产量 C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和(安全性鉴定)。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A. 糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇( PEG)诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高B、PEG的浓度高，促进融合率高C、PEG 的相对分子量小，促进融合率高D、PEG的最佳相对分子量为 4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质B、表达产物存在的部位是在菌体内 C、容易培养，产物提纯简单 D 、表达产物为天然产物 13、人类第一个基因工程药物是：(A) A、人胰岛素 B、重组链激酶 C、促红细胞生成素 D、乙型肝炎疫苗 14、下列不属于加工改造后的抗体是：(C) A、人-鼠嵌合抗体 B、单链抗体C 、鼠源性单克隆抗体D、单域抗体 15、动物细胞培养的条件中，不正确的是：(D)

生物技术制药复习资料

第二章生物药物概论一、生物药物生产原料选择的主要原则、生物药物的特性及种类。主要原则：有效成分含量高，原料新鲜；来源丰富，易得；原料产地较近；杂质含量少；原料成本低；易提取。特性：（1）药理学特性：治疗的针对性强；药理学活性高；毒副作用小，营养价值高；生理副作用常有发生。（2）生产、制备中的特殊性：原料中的有效物质含量低；稳定性差；易腐败；注射用药有特殊要求。（3）检验上的特殊性：要有理化检验指标，和生物活性检验指标。分类：按药物化学本质和化学特性分类：（1）氨基酸及基衍生物类（2）多肽和蛋白质类（3）酶和辅酶类（4）核酸及其降解物和衍生物类（5）糖类（6）脂类（7）细胞生长因子类（8）生物制品类（9）小动物制剂（10）动物器官或组织制剂。按原料来源分类：（1）人体组织（2）动物组织（3）植物组织（4）微生物（5）海洋生物来源的药物。按生理功能和用途分类：（1）治疗药物（2）预防药物（3）诊断药物（4）其他。二、生物药物提取分离制备方法的工艺过程。在对生物药物进行提取操作时，选择提取试剂需注意的问题。工艺流程：1、生物药物原料的选择、预处理与保存（保存方法：冷冻法，-40℃；②有机溶剂脱水法；③防腐剂保鲜，多用于液体）。 2、生物药物的提取：（1）生物组织与细胞破碎：磨切法，压力法，反复冻融法，超声波震荡破碎法，自溶法，酶溶法（2）选择合适的溶剂进行提取（考虑提取剂的用量、提取时间、提取次数，注意温度、变性剂等因素）。 3、生物药物的分离纯化：（1）蛋白质类药物的分离纯化：沉淀法，亲和层析法，疏水层析法（2）核酸类药物的分离纯化：提取法，发酵法（3）糖类：沉淀法，离子交换层析法（4）脂类：沉淀法，吸附层析法，离子交换层析法（5）氨基酸类：沉淀法，吸附法，离子交换法。试剂的选择：1、对所需要提取的活性成分溶出度较高，对杂质较低。2、不破坏活性成分。 3、利于后续预处理。 4、对环境影响较小，有利于回收和处理。 5、对设备要求不高。 6、成本较低。 7、最好对人体无害。第三章基因工程制药一、基因工程制药的主要工艺过程。获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌→产物的分离纯化→质量控制→产品检验包装二、什么是目的基因？有几种获取方法？用于构建基因工程菌的目的基因应该达到什么要求？目的基因既是人们所需要的特定基因，一般也是接受目的基因的细胞或个体原本没有的基因。获取方法：（1）直接从生物体中提取总DNA，构建基因文库，从中调用目的基因；（2）以mRNA为模板，反转录合成互补的DNA片段；（3）利用聚合酶链式反应（PCR）特异性地扩增所需要的目的基因片段（4）化学合成法；⑸逆转录（RT）-PCR法合成cDNA。基本要求:不含多余干扰成分，纯度高；片段大小适合重组操作；结构、序列正确，达到一定数量。

成人教育《生物制药学》期末考试复习题及参考答案

生物制药练习题A 一、名词解释： 1.生物技术： 2.疏水层析： 3.生物技术制药： 4.疏水层析： 5.生物反应器： 6.贴壁培养：二、判断题： 1．细胞工程操作主要对象是细胞。（） 2．细胞工程理论基础是细胞的全能性。（） 3．细胞核移植是指将一种细胞的细胞核转移到另一种去掉了细胞核的细胞质内，然后将不同来源的细胞核和细胞质融合组成新的细胞。（）三、填空题： 1．生物技术制药的特征包括：（1）；（2）；（3）；（4）；（5）。 2．基因工程药物主要包括: （1）；（2）；（3）；（4）。 3．细胞物理破碎包括：（1）；（2）；（3）；（4）。 4．酶在医药领域的应用：（1）；（2）；（3）

；（4）。四、简答题： 1. 现代生物药物包括哪几类？ 2．次级代谢产物的特征。 3．B淋巴细胞杂交瘤技术中常用哪种选择性培养基和细胞融合剂？4．提高质粒稳定性的方法。 5．基因工程产品纯化前的性质。五、问答题： 1．成纤维细胞型细胞的特点及来源。 2．正常细胞体外培养在原代培养期的特点并举例。 3. 免疫毒素可用于治疗哪些疾病？优点是什么？ 4. 发酵过程的溶氧变化。 5．固定化酶的优点。

生物制药练习题A答案一、名词解释： 1. 生物技术：生物技术是以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其组分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种（或品系）进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系。 2．疏水层析：是利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异，对蛋白质组分进行分离的层析方法。 3.生物技术制药：采用现代生物技术可以人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。 4.疏水层析：是利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异，对蛋白质组分进行分离的层析方法。 5．生物反应器：在体外模拟生物体的功能，设计出来用于生产或检测各种化学品的反应装置。或者说，生物反应器是利用酶或生物体（如微生物）所具有的生物功能，在体外进行生化反应的装置系统，是一种生物功能模拟机，如发酵罐、固定化酶或固定化细胞反应器等。 6．贴壁培养：

生物技术制药考试题复习

生物技术制药考试题复习 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】

一：选择题 1、酶的主要来源是（C） A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/植物细胞与组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指 (A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（E） A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用? B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定? C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒? B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：（D） A、Poly?A B、PolyC C、PolyG D、PolyT E、发夹结构 7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达? C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达? D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能 B、表达产物的产量C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易? 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A.糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高 B、PEG的浓度高，促进融合率高 C、PEG的相对分子量小，促进融合率高 D、PEG的最佳相对分子量为4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质 B、表达产物存在的部位是在菌体内

生物技术制药期末复习提纲-参考模板

生物技术制药复习提纲生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程？基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定？质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性基因工程菌的培养方式有哪几种？分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养；从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种？悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。动物细胞培养基分为哪三类？天然培养基合成培养基无血清培养基植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类？。无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。酶固定法中的包埋法可分为哪两种？网格型微囊型发酵工业的生产水平取决于哪三个要素？生产菌种、发酵工艺和发酵设备生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类？

治疗药物、预防药物、诊断药物基因工程药物制造的主要步骤如何？目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验酶和细胞的固定化载体主要有哪三类？吸附载体包埋载体交联载体单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种？体内免疫法和体外免疫法生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源？微生物发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种？自然选育、诱变育种和原生质体融合 . 在制备大量微生物菌体或其代谢产物时，可采用不同的发酵方式。微生物的发酵方式有哪几种？分批发酵、补料分批发酵、连续发酵目的基因的获得方法有哪几种？用反转录法获得目的基因，首先必须获得什么？cDNA法获得目的基因的优点是什么？将构建好载体导入动物细胞最常用的方法是什么？反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法目的基因的mRNA 获得的目的基因编码序列无内含子，目的基因的筛选较容易磷酸钙沉淀法电穿孔法

生物技术制药复习题

生物技术制药复习一、名词解释： 1、生物药物：是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 2、抗生素：由微生物产生，在低浓度下能杀灭和抑制病原体，但对宿主不会产生严重的副作用的物质，或使用化学方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。广义的抗生素还包括一些抗肿瘤药、杀虫剂和除草剂。 3、补料分批发酵：是指将种子接入发酵反应器进行培养，经过一段时间之后，间歇式地、或者连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的方法。 4、限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。 5、载体：将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具。 6、转化细胞系：正常细胞经过某个转化过程，失去正常细胞的特点而获得无限增殖能力的细胞系。 7、微载体培养：将细胞吸附于微载体表面，再在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面生长成单层的方法称为微载体培养法。 8、毛状根：受到发根农杆菌感染后形成的根组织，易于培养，改变了植物的次生代谢。毛状根生长快速和次级代谢产物含量高，特别适用于从木本植物和难于培养的植物中得到较高含量的次级代谢产物。 9、气升式反应器：没有搅拌，气体通过喷管进入剪切力更小，主要用于悬浮细胞的分批式培养，近年开发用于贴壁细胞的微载体培养，并进行半连续、连续和灌流式培养。 10. 酶固定化：指经物理或化学方法处理，使酶（细胞）限制或固定于特定空间位置，使之不但能连续发挥催化作用，而且反应后酶又可以反复利用的技术。 11. 抗体酶：又称催化抗体，是指通过一系列化学与生物技术方法制备出的具有催化活性的抗体，它除了具有相应免疫学特性，还类似于酶，能催化某种反应。 12. 微生物转化：是通过微生物细胞将复杂的底物进行结构修饰,也就是利用微生物谢过程中产生的某个或某一系列的酶对底物特定部位(基团)进行的一种或几种化学催化反应，使其转化成结构相似的更有价值的新化合物。 13. 多克隆抗体：给动物接种天然抗原所获得的免疫血清或抗血清，是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体。 14. 单克隆抗体：通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一

吉林大学《生物制药学》第三章动物细胞工程制药期末考试备考资料

第三章动物细胞工程制药一?生产用动物细胞目前用于生物制药的动物细胞有4类,即原代细胞?二倍体细胞系,融合的或重组的工程细胞系和转化细胞系? 1原代细胞原代细胞是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液?动物细胞生产生物药品的早期,一般用原代培养的细胞来生产疫苗,如鸡胚细胞?原代兔肾细胞?鼠肾细胞,淋巴细胞等,Ender最先用原代培养的猴肾组织细胞来生产脊髓灰质炎灭活疫苗?原代细胞增殖能力有限,需要大量动物才能增加产量,费钱费力,限制了它的应用? 2传代细胞系原代细胞经过传代筛选克隆,从多种细胞成分中挑选并纯化出某种具有一定征的细胞株称为CCL?许多CCL建立于50年代,用它们来生产疫苗不仅可以降低实验动物的量,并且因为所用的细胞性质均一,通过体外大规模培养技术生产的疫苗可以保证质量,避免了动物个体差异产生的疫苗质量不稳定问题?但C CL在生物学特性上与肿瘤细胞有许多相似之处,有时是从肿瘤细胞衍生而来,由于缺乏有效的科学手段来排除其潜在的致瘤性,因而数十年间未允许C CL用于生产?7 O 年代以后,大量研究工作证实了二倍体细胞的安全性,wI一38是第一个生产脊髓灰质炎灭活疫苗的二倍体细胞系?二倍体细胞系一般从动物胚胎组织中获取,有明显的贴壁和接触抑制特性,有正常细胞的核型,一般可传代培养5 0代?且无致瘤性,现在C C L已被广泛用于人用治疗性药物的生产,但仍不是理想的生产细胞系? 3工程细胞系工程细胞系是指采用基因工程技术或细胞融合技术对宿主细胞的遗传物质进行修饰改造或重组,获得具有稳定遗传的独特性状的细胞系?用于构建工程细胞的动物细胞有BHK一2l,CHO—dhfr?Namalwa?Vero?SP2/O,Sf一9等细胞系?sP2/0一Ag l4工程细胞系是通过融合的方法,从抗羊红细胞活性的BALB/c的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞P3x63A98融合杂交瘤sP2/NL—Ag 亚克隆中分离获得,可用于生产单克隆抗体幢l?目前用重组DNA技术改造的C H O细胞生产干扰素,白介素,E P O?单克隆抗体?诊断试剂以及其它各种蛋白质类药品已成为国际医药市场上的热销产品,但这些产品的生产规模普遍较小(大多为5~50升的小型培养罐)? 4转化细胞系通过某个转化过程形成的,常由于染色体断裂变成异倍体,失去正常细胞特点,而获得无限增殖能力?转化细胞系具有长期培养,倍增时间短,对培养条件和生长因子等要求较低的特点,适于大规模工业化生产?在生物制药中,可通过改造宿主细胞特性,如延长细胞周期.提高工程细胞原始表达水平等来提高药物的产量?李红艳等研究空间环境对CH0(dhfr)细胞生长特性的影响,结果表明空间诱变致生长减慢的细胞株有利于提高目的蛋白的产量,为筛选优化的生物工程制药细胞提供可能?目前cHo(dhfr)作为重要的基因表达受体细咆,已成功应用于表达促红细胞生成素(EPO)?重组乙型肝炎疫苗等生物制药领域? 二、动物细胞工程制药技术 1细胞融合

生物技术制药考试复习资料整理版

第一章、绪论 1. 生物技术制药：采用现代生物技术，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。 2. 生物技术药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。 3. 生物药物：指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法，利用生物体、生物组织、细胞、体液等制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 4. 现代生物药物四大类型：⑴应用重组DNA技术制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂； ⑵基因药物 ⑶来自动物、植物和微生物的天然药物； ⑷合成与部分合成的生物药物。 5. 生物药物功能用途分类：⑴治疗药物，⑵预防药物⑶诊断药物。 6. 生物技术制药的特征：⑴高技术⑵高投入⑶长周期⑷高风险⑸高收益 7. 生物技术在制药中的应用：⑴基因工程制药：①基因工程药物品种的开发、②基因工程疫苗、③基因工程抗体、④基因诊断与基因治疗、⑤应用基因工程技术建立新药的筛选模型、⑥应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物、⑦基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用、⑧利用转基因动、⑨植物生产蛋白质类药物 ⑵细胞工程制药：①单克隆抗体技术、②动物细胞培养 ⑶酶工程制药 ⑷发酵工程制药 8. 我国生物技术制药现状和发展前景（自己阐述观点）

第二章基因工程制药 1．基因工程生产哪些药：⑴免疫性蛋白，如各种抗原和单克隆抗体。⑵细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。⑶激素，如胰岛素、生长激素、心钠素⑷酶类，如尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。 2. 利用基因工程技术生产药品的优点在于： ⑴利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用建立有效的保障。 ⑵可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。 ⑶利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。 ⑷内源生理活性物质在作为药物使用时，存在不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程读起进行改造。 ⑸利用基因工程技术可以获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 3. 上游阶段：是研究开发比不可少的基础，主要是分离目的基因、构建工程菌（细胞）。上游阶段的工作主要咋实验室内完成。 4. 下游阶段：是从工程菌（细胞）的大规模培养直到产品的分离纯化、质量控制等。下游阶段是将实验室成果产业化、商品化。 5. 制备基因工程药物的基本过程：获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装 6. 宿主菌应该满足以下要求：⑴具有高浓度、高产量、高产率；⑵能利用易得廉价原料； ⑶不致病、不产生内毒素；⑷发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；⑸容易进行代谢调控；⑹容易进行重组DNA技术；⑺产物容易提取纯化 7. 宿主细胞分为两大类：⑴原核细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、芽孢杆菌、链霉菌等；⑵真核细胞：酵母、丝状真菌 8. 表达载体必须具备以下条件（特点）： ⑴载体能够独立地复制 ⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选。而且克隆位点应位于启动子序列后，以使克隆的外源基因得以表达。 ⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别。 ⑷应具有阻遏子，使启动子收到控制，只有当诱导时候才能进行转录。 ⑸应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。 ⑹所产生的mRNA必须具有反义的起始信号，即起始密码AUG和SD序列，以便转录后能顺利翻译。 ⒐密码子的偏爱性：在基因组中把使用频率高的同义密码子称为主密码子或偏爱密码子。此现象被称为密码子偏爱性 ⒑融合蛋白：由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的，称为融合蛋白。 ⒒酵母的复制序列的几种不同载体：⑴YEp类（酵母附加体质粒） ⑵YRp类（酵母复制型质粒） ⑶YCp类(酵母着丝粒质粒) ⑷Yip类（酵母整合型质粒） ⒓基因工程菌的不稳定性：基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。

生物技术制药考试题复习修订稿

生物技术制药考试题复习内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）

7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达? C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达? D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能 B、表达产物的产量C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易? 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A.糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高 B、PEG的浓度高，促进融合率高 C、PEG的相对分子量小，促进融合率高 D、PEG的最佳相对分子量为4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质 B、表达产物存在的部位是在菌体内 C、容易培养，产物提纯简单 D、表达产物为天然产物? 13、人类第一个基因工程药物是：(A)

生物技术制药期末复习提纲

生物技术制药期末复习提纲 Jenny was compiled in January 2021

生物技术制药复习提纲生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程？基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定？质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性基因工程菌的培养方式有哪几种？分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养；从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种？悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。动物细胞培养基分为哪三类？天然培养基合成培养基无血清培养基植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类。无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而 c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。酶固定法中的包埋法可分为哪两种？网格型微囊型发酵工业的生产水平取决于哪三个要素？生产菌种、发酵工艺和发酵设备生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类？治疗药物、预防药物、诊断药物

基因工程药物制造的主要步骤如何？目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验酶和细胞的固定化载体主要有哪三类吸附载体包埋载体交联载体单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种？体内免疫法和体外免疫法生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源？微生物发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种？自然选育、诱变育种和原生质体融合 . 在制备大量微生物菌体或其代谢产物时，可采用不同的发酵方式。微生物的发酵方式有哪几种？分批发酵、补料分批发酵、连续发酵目的基因的获得方法有哪几种用反转录法获得目的基因，首先必须获得什么cDNA法获得目的基因的优点是什么将构建好载体导入动物细胞最常用的方法是什么反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法目的基因的mRNA 获得的目的基因编码序列无内含子，目的基因的筛选较容易

(完整word版)生物技术制药习题答案夏焕章版

(完整word版)生物技术制药习题答案夏焕章版亲爱的读者：本文内容由我和我的同事精心收集整理后编辑发布到文库，发布之前我们对文中内容进行详细的校对，但难免会有错误的地方，如果有错误的地方请您评论区留言，我们予以纠正，如果本文档对您有帮助，请您下载收藏以便随时调用。下面是本文详细内容。最后最您生活愉快 ~O(∩_∩)O ~

第一章绪论填空题 1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。 2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。 3.现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物；三是来自动物植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物； 4.生物技术的发展按其技术特征来看，可分为三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。 5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；选择题 1.生物技术的核心和关键是（A ） A 细胞工程 B 蛋白质工程 C 酶工程 D 基因工程 2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围 A 基因工程技术 B 蛋白质工程技术 C 海洋生物技术D细胞工程技术 3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ） A 青霉素 B 淀粉酶 C 乙醇 D 氯化钠 4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征 A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期 B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期 C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期 D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期 5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作 A10% B5% C 1% D 7% 名词解释 1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。 2.生物技术药物一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。

2016-2017学年第二学期期末考试《生物制药学》大作业

2016-2017学年第二学期期末考试《生物制药学》大作业一、问答题:(每题10分,共100分) 1.成纤维细胞型细胞的特点及来源: 特点:细胞生长时胞体呈棱形或不规则的三角形,中央有圆形核,胞质向外伸出2~3个突起。细胞群常借该突起连接成网,生长时呈放射状、漩涡状或火焰状走行。来源:中胚层组织来源的细胞,如成纤维细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和成骨细胞等。 2.正常细胞体外培养在原代培养期的特点并举例: 特点:①原代培养细胞呈活跃的移动,细胞分裂不旺盛,并多呈二倍体核型;② 原代培养细胞与体内细胞在形态结构和功能活动上相似性大;③细胞群是异质的,即各细胞的遗传性状互不相同,细胞相互依存性强。例如:鸡胚细胞、原代免或鼠肾细胞、以及血液的淋巴细胞。 3. 免疫毒素可用于治疗哪些疾病?优点是什么? 可用于治疗肿瘤、自身免疫病,并能克服组织移植排斥反应,可单独给药也可以包裹在脂质体及其他微粒中给药。由于重组免疫毒素是在胞浆物质代谢中发挥作用,相对分子质量又小,渗透力强,故效果好。 4. 发酵过程的溶氧变化: 在发酵过程中,在已有设备和正常发酵条件下,每种产物发酵的溶氧浓度变化有自己的规律。发酵时生产菌大量繁殖,需氧量不断增加,此时的需氧量超过供氧量,

使溶氧浓度明显下降。从发酵液中的溶解氧浓度的变化,就可以了解微生物生长代谢是否正常,工艺控制是否合理,设备供氧能力是否充足等问题,帮助查找发酵不正常的原因和控制好发酵生产。 5.固定化酶的优点。 (1)酶的稳定性提高。 (2)反应后,酶与底物和产物易于分开,产物中无残留酶,易于纯化,产品质量高。 (3)反应条件易于控制,可实现转化反应的连续和自动控制。 (4)酶的利用效率高,单位酶催化的底物量增加,用酶量减少。 (5)比水溶性酶更适合于多酶反应。 6.生物技术的主要技术范畴。生物技术(biotechnology),是指人们以现代生命科学为基础,结合其他基础科学的科学原理,采用先进的科学技术手段,按照预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的。生物技术是人们利用微生物、动植物体对物质原料进行加工,以提供产品来为社会服务的技术。它主要包括发酵技术和现代生物技术。因此,生物技术是一门新兴的,综合性的学科。现代生物技术综合基因工程、分子生物学、生物化学、遗传学、细胞生物学、胚胎学、免疫学、有机化学、无机化学、物理化学、物理学、信息学及计算机科学等多学科技术,可用于研究生命活动的规律和提供产品为社会服务等。

生物技术制药课后思考题

第一章：绪论思考题 1.什么是生物技术？生物技术所包含的内容及定义。答：1）生物技术又称生物工程，指人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术。2）包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等。（具体定义见P1）。 2.生物技术药物的概念及分类。答：1）指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物，主要是重组蛋白或核酸类药物。2）a.按照用途：预防、诊断、治疗；b.按作用类型：细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物；c.按照生化特性：多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质。 3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性。答：1）理化性质（从药物多是蛋白质或核酸出发）：a.相对分子质量大；b.结构复杂； c.稳定性差；2）药理学作用：a.活性与作用机制明确；b.作用针对性强；c.毒性低； d.体内半衰期短； e.有种属特异性； f.可产生免疫原性；3）生产制备特性：a.药物分子在原料中含量低；b.原料中常存在降解目标产物的杂质；c.制备工艺条件温和；d.分离纯化困难；e.产品易受有害物质污染；4）质量控制特性：a.质量标准内容的特殊性；b.制造项下的特殊规定；c.检定项下的特殊规定。 4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务。答：1）指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法，来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。2）主要研究内容与任务：a.生物制药技术的研究、开发与应用；b.利用生物技术研究、开发和生产药物。第二章：基因工程制药思考题 1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程。答：1）利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药。2）目的基因的获得、表达载体的

生物技术制药考试题复习知识分享

生物技术制药考试题复习

一：选择题 1、酶的主要来源是（C） A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/植物细胞与组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指 (A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（E） A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用 B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定 C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒 B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：（D） A、Poly A B、Poly C C、Poly G D、Poly T E、发夹结构 7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达 C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达 D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能 B、表达产物的产量 C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A.糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高 B、PEG的浓度高，促进融合率高 C、PEG的相对分子量小，促进融合率高 D、PEG的最佳相对分子量为4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质 B、表达产物存在的部位是在菌体内 C、容易培养，产物提纯简单 D、表达产物为天然产物 13、人类第一个基因工程药物是：(A) A、人胰岛素 B、重组链激酶 C、促红细胞生成素 D、乙型肝炎疫苗 14、下列不属于加工改造后的抗体是：(C) A、人-鼠嵌合抗体 B、单链抗体 C、鼠源性单克隆抗体 D、单域抗体

生物技术制药课后习题

生物技术制药课后习题 ×× 1、生物技术制药分为哪些类型？生物技术制药分为四大类：（1）应用重组技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂。（2）基因药物，如基因治疗剂，基因疫苗，反义药物和核酶等（3）来自动物、植物和微生物的天然生物药物（4）合成与部分合成的生物药物 2、生物技术制药具有什么特征？（1）分子结构复杂（2）具有种属特异性（3）治疗针对性强，疗效高（4）稳定性差（5）基因稳定性（6）免疫原性（7）体内的半衰期短（8）受体效应（9）多效性（10）检验的特殊性 3、生物技术制药中有哪些应用？应用主要有：（1）基因工程制药：包括基因工程药物品种的开发，基因工程疫苗，基因工程抗体，基因诊断与基因治疗，应用基因工程技术建立新药的筛选模型，应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物，基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用，利用转基因动植物生产蛋白质类药物（2）细胞工程制药：包括单克隆抗体，动物细胞培养，植物细胞培养生产次生代谢产物（3）酶工程制药（4）发酵工程制药 4、基因工程药物制造的主要程序有哪些？基因工程药物制造的主要步骤有：目的基因的克隆，构造重组体，构造工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化产品的检验 5、影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？（1）外源基因的计量（2）外源基因的表达效率：

a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、序列和起始密码的间距 d、密码子组成（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢付荷（5）工程菌的培养条件 6、质粒不稳定分为哪两类，如何解决质粒不稳定性？质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象；质粒的结构不稳定是从质粒上丢失或碱基重排，缺失所致工程菌性能的改变。提高质粒稳定性的方法如下：（1）选择合适的宿主细菌（2）选择合适的载体（3）选择压力（4）分阶段控制培养（5）控制培养条件（6）固定化 7、影响基因工程菌发酵的因素有哪些？如何控制发酵的各种参数？影响因素：（1）培养基（2）接种量（3）温度（4）溶解氧（5）诱导时机的影响（6）诱导表达程序（7）值 8、什么是高密度发酵？影响高密度发酵的因素有哪些？可采取哪些方法来实现高密度发酵？高密度发酵：是指培养液中工程菌的菌体浓度在50以上，理论上的最高值可达200 影响因素：（1）培养基（2）溶氧浓度（3）（4）温度（5）代谢副产物实现高密度发酵的方法：（1）改进发酵条件：a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力（2）构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌：a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因（3）构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌 9、分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么? 方法有离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。（1）离子交换色谱：是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。

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