血清总胆固醇酶试剂法测定法
血清总胆固醇酶试剂法测定法
1.实验原理
胆固醇酯酶(CHE)、胆固醇氧化酶(CHO)、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。反应式如下：
CHE
胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸
CHO
胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2
POD
2H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚醌亚胺(显色) + 4H2O
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂威特曼总胆固醇试剂盒试剂1 试剂2
6.1.1 试剂准备试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。
12. 参考值范围（mmol/L）
合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L 高度危险范围：>6.2mmol/L 13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸
收[1]，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。
近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物[HMG CoA还原酶抑制剂])临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。
14. 操作性能
14.1 线性范围：0.08～19.4mmol/L。
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
样品1 2.79 0.046 1.65 样品1 2.69 0.031 1.15 样品2 6.10 0.037 0.61 样品2 5.46 0.066 1.21 样品3 6.57 0.041 0.62 样品3 6.34 0.059 0.93 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂
盒(x)，同时对78个样品进行CHOL检测，将检测结果作
方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.065mmol/L；
r =0.995。
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.08mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围：0.08～19.4mmol/L。
15. 超出范围结果处理：本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。
16. 病危报警值的处理：高度危险范围>6.2mmol/L。
17. 方法局限性
17.1 本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。
17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤2840μmol/L，胆红素浓度≤342μmol/L，血红蛋白浓度≤2.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献
1.Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids,
lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical
Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.809-61.
2.Recommendation of the Second Joint Task Force
of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503.
3.Artiss JD, Zak B. Measurement of cholesterol
concentration. In: Rifai N, Warnick GR , Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:99-114.
4.Deeg R, Ziegenhorn J. Kinetic enzymatic method
for automated determination of total cholesterol in serum. Clin Chem 1983;29:1798-802.
5.Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid disorder. In Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:25-48
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义
血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义 以下是为大家整理的血清总胆固醇(Tch)测定及临床意义的相关范文，本文关键词为血清,胆固醇,Tch,测定,临床,意义,，您可以从右上方搜索框检索更多相关文章，如果您觉得有用，请继续关注我们并推荐给您的好友，您可以在综合文库中查看更多范文。 血清总胆固醇(Tch)测定及临床意义 【正常参考值】 人群血脂水平主要取决于生活因素，特别是饮食和营养，所以各
地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高Tc划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的Tc水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dL)升高：≥5.72mmol/L （≥220mg/dL） 美国胆固醇教育计划（ncep），成人治疗组提出的医学决定水平如下：理想范围：＜5.2mmol/L(＜200mg/dL)边缘升高：5.2～6.2mmol/L(200～239mg/dL)升高：≥6.21mmol/L（≥240mg/dL）【临床意义】 影响Tc水平的因素有：①年龄与性别：Tc水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使Tc增高。 ③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使Tc升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apob缺陷 症、多源性高Tc、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。
化学试剂的纯度分类及标准.
化学试剂的纯度分类及标准 国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测 基准试剂（JZ，绿标签）：作为基准物质，标定标准溶液。 优级纯（GR，绿标签）（一级品）：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。 分析纯（AR，红标签）（二级品）：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。 化学纯（CP，蓝标签）（三级品）：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。 实验纯（LR，黄标签）：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。 教学试剂（）：可以满足学生教学目的，不至于造成化学反应现象偏差的一类试剂。 指定级（ZD），该类试剂是按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。 高纯试剂（EP）：包括超纯、特纯、高纯、光谱纯，配制标准溶液。此类试剂质量注重的是：在特定方法分析过程中可 能引起分析结果偏差，对成分分析或含量分析干扰的杂质含量，但对主含量不做很高要求。 色谱纯（GC）：气相色谱分析专用。质量指标注重干扰气相色谱峰的杂质。主成分含量高。 色谱纯（LC）：液相色谱分析标准物质。质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质。主成分含量高 指示剂（ID）：配制指示溶液用。质量指标为变色范围和变色敏感程度。可替代CP,也适用于有机合成用。 生化试剂（BR）：配制生物化学检验试液和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 生物染色剂（BS）：配制微生物标本染色液。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 光谱纯（SP）：用于光谱分析。分别适用于分光光度计标准品、原子吸收光谱标准品、原子发射光谱标准品 电子纯（MOS）：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【原理】 血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。 【试剂】 1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚 5mmol/L 2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。 酶法测定TC 操作步骤 项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl) － 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl) 1.50 1.50 1.50 混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 【计算】 血清TC (mmol/L)＝ 标准管吸光度 测定管吸光度 ×胆固醇标准液浓度
【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。 【临床意义】 1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 2．TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。 【注意事项】 1．试剂中酶的质量影响测定结果。 2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3．检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。 【评价】本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。 本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。 在终点法中血红蛋白高于2 g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1 g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
实验七__胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
生物化学与分子生物学设计实验 （胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟 法测定血清尿素） 小组成员： 班级：麻醉11-2班 日期：2012年12月19 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一肟法 测定血清尿素
实验目的 1、掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。 2、学习用比色法测定血清尿素。 3、巩固有关胆固醇和尿素的知识。 4、进一步熟练UV2100型分光光度计的 重点、难点： 重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理 2、二乙酰一肟法测定血清尿素的注意事项 难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理 一、实验原理 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。本实验是胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA) 。 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含 量成正比。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。 二、操作步骤 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇
终点法检测TC，取试管3支按下表依次加样。 酶法测定TC操作步骤 加入物(μl) 空白管标准管测定管血清－－20 标准液或定值血清－20 －蒸馏水20 －－ 酶试剂 1 000 1 000 1 000 混匀后，37℃保温10 min，每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。 （二）二乙酰一肟法测定血清尿素 取试管3支，按下表依次加样。 二乙酰一肟法操作步骤 加入物(ml) 空白管标准管测定管 血清－－0.02 尿素标准应用液－0.02 － 蒸馏水0.02 －－ 二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。 三、注意事项 （一）氧化酶法测定血清总胆固醇 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2、比色应在30min内完成； 3、试管在操作前尽量保持干燥； 4、试剂中酶的质量影响测定结果；
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定 摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。结论：该人的胆固醇含量正常。 关键词：胆固醇；磷硫铁法 胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管； 1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇 2 方法 2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。 2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。摇匀，室温静置10min。将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。 表1 试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ———— 胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml 磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml 2.3 计算人血清胆固醇=(OD 2/OD 1 )×0.08×(100/0.04)= (OD 2 /OD 1 )×200，其中， OD 2表示测定管的吸光度，OD 1 表示标准管的吸光度。 3 结果与讨论 3.1 计算结果 OD 2为0.096，OD 1 为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml. 3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。在实验操作中，配制试剂时要格外吸小心，看清标注以免搞错，胆固醇过高，会引起动脉粥样化，甚至引起冠心病，胆固醇过低，会使人抵抗力不足，容易引发感染性疾病。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法) 简介： 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。 Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。 c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。 ③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。 2、 分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪TC 测定操作: 编号 名称 TC1213100T Storage 试剂(A): COD-PAP 工作液 Good's buffer 2×50ml -20℃ 避光 胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂 试剂(B): TC 标准(5mmol/L) 1ml -20℃ 避光 试剂(C): ddH 2O 1ml RT 使用说明书 1份
实验三血清总胆固醇的测定
实验三血清总胆固醇的测定 目的要求 了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。 实验原理 血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~ 250mg/mL。 胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。 本法不必离心，颜色产物也比较稳定。 试剂和器材 一、试剂 邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。 混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。 标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。 标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。 二、测试样品 0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。 三、器材 试管1.5×15cm（×11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：
加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。 二、样品测定 取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定： 加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。 注意事项 1.本法在20～37℃条件下显色。 2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。 思考题 1. 本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？ 2. 酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
总胆固醇测定试剂注册技术审查指导原则
总胆固醇测定试剂注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对总胆固醇（Total cholesterol，TC）测定试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对总胆固醇测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 本指导原则所指的总胆固醇测定试剂是指利用CHOD-PAP法对人血清、血浆等样本中总胆固醇含量进行体外定量测定的试剂。 目前，总胆固醇测定已有完整的参考系统：其决定性方法为同位素稀释质谱法，参考方法为正己烷抽提L-B反应显色法（ALBK法）或色谱法，常规测定方法为酶法。酶法主要包括胆固醇氧化酶法和胆固醇脱氢酶法，其中胆固醇氧化酶-PAP法是目前应用最为广泛的常规测定方法。依据YY/T 1227-2014《临床化学体外诊断试剂（盒）命名》的要求，将
胆固醇氧化酶-PAP法规范表述为CHOD-PAP法。本指导原则适用于采用CHOD-PAP法测定的试剂，不适用于脱氢酶法和干化学法测定的试剂，但适用处可参照执行。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），总胆固醇测定试剂属于酯类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类编码为6840。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性说明、产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品上市情况等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。 1.产品预期用途 总胆固醇是指血液中各脂蛋白所含胆固醇之总和，分为酯化型胆固醇（又称胆固醇酯，CE）和游离型胆固醇（FC），其中CE占60%~70%，FC占30%~40%，健康个体之间两种类型的比例保持稳定。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸以及维生素D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，其浓度可作为脂代谢的指标。 定量测定人体样本中总胆固醇含量，临床主要用于心血管疾病的危险分析，高TC血症是冠心病的主要危险因素之一。病理状态下，高TC有原发与继发两类，原发的如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apoB缺陷症、多源性高TC、混合性高脂蛋白血症。继发的多见于
血清胆固醇含量的测定实验报告
实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告 实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。 实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。 胆固醇酯+ H 2O ???→?胆固醇酯酶 胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O 2?? ??→?胆固醇氧化酶 △4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS ???→?过氧化物酶 醌亚胺+ H 2O 实验步骤： 1、取2支试管分别加入的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。往每支试管加入的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。 2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）
3、准备好以上试管后，充分混合并在37。 的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。 实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02 .01 .0×50 高密度脂蛋白胆固醇=SH H 吸光度值吸光度值×50 代入数据得：总胆固醇=252 .0167 .0×02.01.0×50=（mg/dL ） 高密度脂蛋白胆固醇=430 .0605 .0×50=（mg/dL ）
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序 1. 摘要 本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。 2. 适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。 3. 职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4. 检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。 5. 原理 O H ESPAS O H O H O O H 222222244+???→?+-+-?+????→?++???→?+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮 游离胆固醇脂肪酸 游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶 ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺 血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。 由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比 6. 仪器 AU5811自动生化分析仪 7. 试剂 7.1 试剂来源： 上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分： R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）； R2：胆固醇氧化酶、4-氨基安替比林； 校准品：胆固醇 7.3 试剂稳定性：
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法) 简介： 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C27H46O，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。用酶学方法测定总胆固醇(Total Cholesterol，TC)葡萄糖是生化检测中的常用方法，其特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。 Leagene总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。分光光度计在处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、生理盐水或PBS 2、离心管、小试管或96孔板 3、水浴锅或恒温箱 4、分光光度计或酶标仪 5、全自动或半自动生化分析仪编号 名称TC1217 100T Storage 试剂(A): Good's溶液Good's buffer 2×25ml-20℃避光显色剂 活性剂、稳定剂 试剂(B): COD-POD溶液胆固醇氧化酶、激酶 2×25ml -20℃避光4-氨基安替比林 CEH、POD 临用前，按A：B混合，即为COD-PAP工作液，4℃保存。 试剂(C): TC标准(5mmol/L) 1ml-20℃避光试剂(D): ddH2O 1ml RT 使用说明书1份
总胆固醇试剂盒使用说明书
自己从试剂说明书上打的，主要是为了了解酶比色法测定总胆固醇的原理。 总胆固醇试剂盒使用说明书 Cholestero Kit (CHO) 酶比色法 通用型（冻干粉） 用途： 本试机用于测定人血清中总胆固醇的浓度。 测定原理： 总胆固醇+??→?CEOD O H 24Δ-胆甾烯酮 + 22O H 胆固醇+2O ??→?GPO 磷酸二羟丙酮+22O H 222O H +4-氨基安替砒啉+4-氯酚??→?POD 醌亚胺+O H 24 试剂稳定性： 原装试剂在2~8℃避光保存，有效期36个月。 试剂复溶后在2~8℃保存稳定1月，在15~25℃保存稳定3天。 样品： 新鲜无溶血血清。 操作步骤： 波长：500nm (480~520nm) 反映温度：37℃ 比色杯光径：1cm 取一定量R2(参看R1瓶签)复溶 1瓶R1，溶解后即为工作液。 分别混合均匀，在37℃保温6分钟，以试剂空白管校零，度校准A 及样品A 。 计算：
总胆固醇浓度= 校准 样品A A ×校准浓度（mmol/L 或mg/dl ） 参考值： 中老年人合适水平＜5.17mmol/L(200mg/dl) 临界值3.17mmol/L~6。47mmol/L(200mg/dl~250mg/dl) 高胆固醇血症＞6.47mmol/L(250mg/dl) 各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考值。 线性上限：` 总胆固醇浓度可达12.93mmol/L(500mg/dl) 主要性能指标： 1. 试剂空白吸光度：在500nm(480~520nm)处，A ≤0.1。 2. 准确性：相对偏差不超过±5%。 3. 瓶间差：变异系数（CV%）≤3% 4. 批间差：随机抽取三批试剂盒的批间差≤4%。 5. 线性误差：在1.13mmol/L~11.29mmol/L 范围内不超过±10%。 注意事项： 1. 若样品胆固醇含量过高，可用生理盐水稀释样品，重新测定。结果乘以稀释倍数。 2. 本产品仅用于体外诊断，内含叠氨钠，应避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 3. 本产品应在2~8℃条件下贮存。 4. 若试剂在全自动生化分析仪上使用，可参照本公司提供的相应型号仪器的参数，并在本 公司技术人员指导下使用。 禁忌症：暂未发现
血清总胆固醇(TC)测定操作规程
血清总胆固醇(TC)测定操作规程 A1．2 原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下： 胆固醇酯+H2O CEH 胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+02 CHOD △4-胆甾烯酮十H202 2H202+4－氨基安替比林+酚 POD 昆亚胺 +4H2O A1．3 标本采集与处理 对于血脂分析，特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。
A1．3．1 受检者(体检对象或病人)的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h 内不作剧烈运动。 A1．3．2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立
血清总胆固醇(TCH)测定 及临床意义
血清总胆固醇(TCH)测定及临床意义 【正常参考值】 人群血脂水平主要取决于生活因素，特别是饮食和营养，所以各地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高TC划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的TC水平（医学决定水平）作为划分界限。在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 我国《血脂异常防治建议》提出的标准为： 理想范围：＜5.2 mmol/L(＜200 mg/dL) 边缘升高：5.23～5.69 mmol/L(201～219 mg/dL) 升高：≥5.72 mmol/L（≥220 mg/dL） 美国胆固醇教育计划（NCEP），成人治疗组提出的医学决定水平如下： 理想范围：＜5.2 mmol/L(＜200 mg/dL) 边缘升高：5.2～6.2 mmol/L(200～239 mg/dL) 升高：≥6.21 mmol/L（≥240 mg/dL） 【临床意义】 影响TC水平的因素有：①年龄与性别：TC水平往往随年龄上升，但到70岁后有所下降。中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性。②长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，可使TC增高。③遗传因素。④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。 增高：高总胆固醇是冠心病的主要危险因素之一，有原发和继发两种，原发常由遗传因素引起如家族性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷）、家族性apoB缺陷
症、多源性高TC、混和性高脂蛋白血症等。继发的见于肾病综合征、甲状腺功能减退、糖尿病、胆总管阻塞、粘液性水肿、妊娠等。 减少：低总胆固醇也有原发和继发两种，前者常由遗传因素引起如家族性的无或低β脂蛋白血症，后者如甲状腺功能亢进、营养不良、慢性消耗性疾病、恶性贫血、溶血性贫血等。
GBT 602-2002 《化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备》
化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 1.丙酮1 mg/ml 称取1.000克丙酮，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 2.甲醇1 mg/ml 称取1.000克甲醇，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 3.甲醛1 mg/ml 称取m 克甲醛溶液，精确至0.001克，置于1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 甲醛溶液的称取质量m，数值以克表示，按式（2）计算： M=1.00/w （2） 式中：w----甲醛溶液的实测质量分数的数值，以“%”表示。 制备前应按GB/T 685--1993的方法测定乙醛（40%）的质量分数。 4.草酸盐0.1 mg/ml 称取0.143克草酸（H2C2O4·2H2O），溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 5.苯酚1 mg/ml 称取1.000克苯酚，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 6.葡萄糖1 mg/ml 称取1.000克葡萄糖（C6H12O6·H2O），溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。 7.缩二脲1 mg/ml
称取1.000克缩二脲，溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 8.羰基化合物1 mg/ml 称取10.43克丙酮（相当于5.000克CO）置于含有50毫升无羰基的甲醇的100毫升容量瓶中，用无羰基的甲醇稀释至刻度，充分混均。量取20毫升此溶液，置于1000毫升容量瓶中，用无羰基的甲醇稀释至刻度。临用前制备。 9.乙酸酐1 mg/ml 称取0.100克乙酸酐，置于100毫升容量瓶中，用无乙酸酐的乙酸（冰醋酸）稀释至刻度，临用前制备。 无乙酸酐的乙酸（冰醋酸）的制备：将乙酸（冰醋酸）回流30分钟，蒸馏制得。 10.乙酸盐10 mg/ml 称取23.050克乙酸钠（CH3COONa·3H2O），溶于水，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。 11.乙醛1 mg/ml 称取m 克乙醛（40%），精确至0.001克，置于1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。临用前制备。 乙醛（40%）的称取质量m，数值以克表示，按式一计算： M=1.00/w （1） 式中：w----乙醛（40%）的实测质量分数的数值，以“%”表示。 置备前应按本标准附录A1规定的方法测定乙醛（40%）的质量分数。 12.水杨酸0.1 mg/ml 称取0.100克水杨酸，加少量水和1毫升冰醋酸溶解，移入1000毫升容量瓶中，稀释至刻度。 13.糠醛1 mg/ml 称取1.000克新蒸馏的糠醛（C5H4O2），置于1000毫升容量瓶中，溶于水，稀释至刻度。临用前制备。
大鼠总胆固醇(TC)ELISA试剂盒说明书
大鼠总胆固醇（TC）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中总胆固醇（TC）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总胆固醇（TC）水平。用纯化的大鼠总胆固醇（TC）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总胆固醇（TC），再与HRP标记的总胆固醇（TC）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的总胆固醇（TC）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠总胆固醇（TC）浓度。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为6nmol/L ，4nmol/L，2nmol/L，1nmol/L，0.5nmol/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
血清总胆固醇酶试剂法测定法
血清总胆固醇酶试剂法测定法 1.实验原理 胆固醇酯酶(CHE)、胆固醇氧化酶(CHO)、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。反应式如下： CHE 胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸 CHO 胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2 POD 2H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。 3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂威特曼总胆固醇试剂盒试剂1 试剂2 6.1.1 试剂准备试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。 12. 参考值范围（mmol/L） 合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L 高度危险范围：>6.2mmol/L 13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸
总胆固醇(TC)检测试剂盒
仅供科研版本号：180601 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法) 【产品组成】 【保存条件】 4℃,避光,6个月 【产品概述】 胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C27H46O，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。用酶学方法测定总胆固醇(Total Cholesterol，TC)葡萄糖是生化检测中的常用方法，其特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为不脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林不酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。分光光度计在500~520nm处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 【使用方法】 1、样本处理： ①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗1~2次，1000g离心10min，弃上清，留取沉淀。 c、加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min，制备好的裂解液不可离心，待用。
化学试剂的纯度分类及标准
化学试剂的纯度分类及标准
化学试剂的纯度分类及标准 国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测 基准试剂（JZ，绿标签）：作为基准物质，标定标准溶液。 优级纯（GR，绿标签）（一级品）：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。 分析纯（AR，红标签）（二级品）：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。 化学纯（CP，蓝标签）（三级品）：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。 实验纯（LR，黄标签）：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。 教学试剂（）：可以满足学生教学目的，不至于造成化学反应现象偏差的一类试剂。 指定级（ZD），该类试剂是按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。 高纯试剂（EP）：包括超纯、特纯、高纯、光谱纯，配制标准溶液。此类试剂质量注重的是：在特定方法分析过程中可 能引起分析结果偏差，对成分分析或含量分析干扰的杂质含量，但对主含量不做很高要求。 色谱纯（GC）：气相色谱分析专用。质量指标注重干扰气相色谱峰的杂质。主成分含量高。 色谱纯（LC）：液相色谱分析标准物质。质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质。主成分含量高 指示剂（ID）：配制指示溶液用。质量指标为变色范围和变色敏感程度。可替代CP,也适用于有机合成用。 生化试剂（BR）：配制生物化学检验试液和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 生物染色剂（BS）：配制微生物标本染色液。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 光谱纯（SP）：用于光谱分析。分别适用于分光光度计标准品、原子吸收光谱标准品、原子发射光谱标准品 电子纯（MOS）：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。 当量试剂（3N、4N、5N）：主成分含量分别为99.9%、99.99%、99.999%以上。 电泳试剂：质量指标注重电性杂质含量控制。 此外，还有特种试剂，生产量极小，几乎是按需定产，此类试剂其数量和质量一般为用户所指定。 试剂 reagent 又称化学试剂或试药。主要是实现化学反应、分析化验、研究试验、教学实验、化学配方使用的纯净化学品。