除

《辞海》

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除（1）去掉。

（2）修治。

（3）一种算术运算，即用一个数把另一个数分成若干等分。

（4）拜官授职。

（5）宫殿的台阶。

《汉语大词典》

除：

1、宫殿的台阶。《史记魏公子列传》：“赵王埽除自迎，执主人之礼。”《汉书王莽传下》：

“群臣扶掖莽，自前殿南下椒除。”颜师古注：“除，殿陛之道也。”清周昇《感兴》诗：宸谟期慎重，一死报丹除。”

2、泛指台阶。宋叶适《王氏读书堂》诗：“矧今治华室，山翠湧前除。”清纳兰性德《减

字木兰花》词之四：“没个音书，尽日东风上绿除。”

3、阶梯，楼梯。《文选班固〈西都赋〉》：“周卢千列，徼道绮错，辇路经营，修除飞阁。”

李善注引司马彪《上林赋》注：“除，楼陛也。”

4、门与屏之间的通道。《汉书苏轼传》：“前长君为奉车，从至雍棫阳宫，扶辇下除，触柱

折辕。”颜师古注：“除谓门屏之间。”

5、清除，去除。《书微子之命》：“抚民以宽，除其邪虐。”唐杜甫《忆昔》诗二：“洛阳

宫殿烧焚尽，宗朝新除狐兔穴。”

6、扫除，打扫。《左传昭公三年》：“自子之归也，小人粪除先人之敝卢。”唐陈鸿《东城

老父传》：“昌变姓名，依于佛舍，除地击钟，施力于佛。”

7、驱除；肃清。《左传昭公十三年》：“先除王宫，使观从从师于乾谿，而遂告之。”杨伯

峻注：“驱除灵王之亲信。”《史记吕太后本纪》“迺奉天子法驾，迎代王于邸。报曰：‘宫谨除。’代王即夕入未央宫。”

8、出去杂草并堆土以便筑坛的平地。《左传昭公十三年》：“令诸侯日中造于除。”杜预注：

“除地为壇，盟会处。”

9、修治；整治。《易萃》：“君子以除戎器，戒不虞。”孔颖达疏：“除者，治之。”《谷梁传

襄公二十四年》：“弛侯，廷道不除。”范甯注：“廷内道路不修治。”《汉书郊祀志上》：“（秦始皇）遂除车道，上自泰山阳。”

10、指从事修治道路的役夫。《左传襄公二十三年》：“冬十月，孟氏将辟，藉除于臧氏。”杨伯峻注：“除即昭十二年及十八年《傳》之除徒，开辟葬道之役夫。”

11、整洁。《老子》：“朝甚除，田甚芜，仓甚虚。”王弼注：“除，洁好也。”宋叶適《〈丁少

詹文集〉序》：“既而自温嶺、雁荡来者，累累言其庭宇甚除，疆畎甚修。”

12、免去，免除。《墨子号令》：“归敌者父母、妻子、同产皆车裂。先觉之，除。”孙诒让

间诂引苏时学曰：“言先觉察者，除其罪也。”《汉书元帝纪》：“《明史韩政传》：“（韩政）二十六年坐蓝党诛，爵除。”

13、。引申为避免。唐柳宗元《凌助教蓬屋题诗序》：“栋宇简易，僅除风雨。”旧注：“《诗》

‘风雨攸除’。除，去也。”

14、兽换毛。《淮南子天文训》：“日者，阳之主也。是故春夏则群兽除。”高诱注：“除，冬

毛微堕也。”

15、脱下；取下。《水浒传》第二四回：“

16、除去，不计算在内。

17、旧时守孝期满，去丧服，谓之“除”。

18、治病。《战国策秦策二》：“武王示之病，扁鹊请除之。”高诱注：“除，治也。”

19、。指病愈。《方言》第三：“南楚病愈者谓之差，或谓之除。”《广雅释诂》：“除，癒也。”

20、拜官，授职。

21、数学计算方法之一。均分某数为若干分。与“乘”相反。《汉书律历志下》“”推日月

元统，置太极上元以来，外所求年，盈元法除之，馀不盈统者，则天统甲子以来年数也。

《旧唐书历志一》：“乃以十二乘之，以时法六千五百三除之，所得为半辰之数。”22、古时建除家以为天文上的十二辰分别象征人事上的一种表示吉利的代号。《淮南子天文

训》：“寅为建，卯为除，辰为满，巳为平，主生。”刘文典补注：“此建除法也。《史记日者傳》有建除家……建除有二法，《越绝书》从岁数，《淮南子》及《汉书》从月数，后人惟用月也。”《辽史历象志下》：“日有晷景，月有明魄，斗有建除，星有昏旦。”参见“建除”。

除

《广韵》切，去御，澄。

1、给予；赐予。《诗小雅天保》：“”。毛传：除，开也。郑玄笺：马瑞辰通释：“何福不除，犹云何福不予。予，與也。”

2、今读，谓光阴过去。《诗唐风蟋蟀》：“”毛传：除去也。孔颖达疏：宋陆游《夜分复起读书》诗：宋王安石《元日》诗

除

《集韵》商居切，平鱼，书。

夏历四月的别称。《诗小雅小明》郑玄笺：“四月为除。”孔疏：《尔雅》除作余。李巡曰：；余，舒也。孙炎曰：南朝宋颜延之《秋胡诗》：“良时为此别，日月方向除。”一说通“涂”。为十二月的别称。见马瑞氏通释。参见“除月”。

《康熙词典》1962年12月中华书局书号：17018、59—41、100

《唐韵》直鱼切。《集韵》《韵會》陈如切。《正韵》長魚切，音儲。《说文》殿陛也。《班

固·西都赋》玉除彤庭。又《前汉·苏武传》扶辇下除。《注》除谓门屏之閒。又《玉篇》去也。《书·泰誓》除恶务本。《左传·隐元年》蔓草犹不可除。又《昭十七年》振除火灾。《周礼·春官》女巫掌岁时祓除釁浴。又《扬子·方言》病愈者或谓之除。又算法有乘除。《前汉·律历志》法除之。又治也。《易·萃卦》君子以除戎器，戒不虞。《注》除者，治也。《礼·曲礼》驰道不除。又《周礼·地官·山虞》若祭山林，则为主而修除。《注》治道路場壇。《左傳·昭十三年》令諸侯日中造於除。《註》除地爲壇，盟會處。又《玉篇》開也。《史記·呂后紀》請得除宮。《前漢·高五王傳》作淸宮。又拜官曰除。《史記·平準書》諸買武功爵，官首者試補吏，先除。《註》先除，用也。《前漢·田蚡傳》君除吏盡未，吾亦欲除吏。《註》凡言除者，除去故官，就新官。又《正字通》隋內官服半除，唐減爲半臂。言肩有袖，至臂臑而止，今呼齊肩。又易也。新舊歲之交謂之歲除。俗云除夕。《孟浩然詩》靑陽逼歲除。又除道，漢縣名。《前漢·地理志》北地郡除道縣。又《集韻》羊諸切，音餘。《詩·小雅》日月方除。《箋》四月爲除。《疏》爾雅，除作余。李巡曰：

四月萬物皆生枝葉，故曰余。余，舒也。除余字雖異，音實同也。又《集韻》《類篇》

商居切，音書。《集韻》或省作余。義同。又《廣韻》《集韻》遲倨切《韻會》遲據切《正韻》治據切，音箸。《詩·唐風》蟋蟀在堂，歲聿其莫。今我不樂，日月其除。《傳》除，去也。又《小雅》風雨攸除，鳥?攸去，君子攸芋。又《小雅》俾爾單厚，何福不除。俾爾

多益，以莫不庶。《傳》除，開也。又叶魚羈切，音宜。《越采葛婦歌》號絺素兮將獻之，越王悅兮，忘罪除。

《唐韵》直鱼切。《集韵》《韵会》陈如切。《正韵》长鱼切，音储。《说文》殿陛也。《班

固?西都赋》玉除彤庭。又《前汉?苏武传》扶辇下除。《注》除谓门屏之閒。又《玉篇》去也。《书?泰誓》除恶务本。《左传?隐元年》蔓草犹不可除。又《昭十七年》振除火灾。《周礼?春官》女巫掌岁时祓除衅浴。又《扬子?方言》病愈者或谓之除。又算法有乘除。《前汉?律历志》法除之。又治也。《易?萃卦》君子以除戎器，戒不虞。《注》除者，治也。《礼?曲礼》驰道不除。又《周礼?地官?山虞》若祭山林，则为主而修除。《注》治道路场坛。《左传?昭十三年》令诸侯日中造于除。《注》除地爲坛，盟会处。又《玉篇》开也。《史记?吕后纪》请得除宫。《前汉?高五王传》作淸宫。又拜官曰除。《史记?平准书》诸买武功爵，官首者试补吏，先除。《注》先除，用也。《前汉?田蚡传》君除吏尽未，吾亦欲除吏。《注》凡言除者，除去故官，就新官。又《正字通》隋内官服半除，唐减爲半臂。言肩有袖，至臂臑而止，今呼齐肩。又易也。新旧岁之交谓之岁除。俗云除夕。《孟浩然诗》靑阳逼岁除。又除道，汉县名。《前汉?地理志》北地郡除道县。又《集韵》羊诸切，音馀。《诗?小雅》日月方除。《笺》四月爲除。《疏》尔雅，除作余。李巡曰：四月万物皆生枝叶，故曰

余。余，舒也。除余字虽异，音实同也。又《集韵》《类篇》商居切，音书。《集韵》或

省作余。义同。又《广韵》《集韵》迟倨切《韵会》迟据切《正韵》治据切，音箸。《诗

?唐风》蟋蟀在堂，岁聿其莫。今我不乐，日月其除。《传》除，去也。又《小雅》风雨攸除，鸟?攸去，君子攸芋。又《小雅》俾尔单厚，何福不除。俾尔多益，以莫不庶。《传》除，开也。又叶鱼羁切，音宜。《越采葛妇歌》号絺素兮将献之，越王悦兮，忘罪除。

《辞源》

除：1、台阶。

2、指门与屏风之间。

3、坛。

4、去掉。

5、修治。

6、拜官授职。

7、算法的一种。

8、给予。

9、光阴过去。

《中华大字典》

除：1、殿陛也。陛，升高阶也。《说文》

2、楼阶也。

3、门屏之间也。

4、道也。

5、坛也。

6、去也。

7、驱逐也。

8、诛也。

9、芟也。芟：割（草）。除去：芟除。《现代汉语词典》

10、愈也。

11、修治也。

12、冬毛微堕也。堕：落，掉。毁坏。

13、廓清也。

14、开通也。

15、洁好也。

16、服缺也。

17、祓禳也。祓：古时一种除灾求福的一种祭祀。扫除。禳：禳解：禳灾。

18、洒埽也。洒：是分散地落下。分散地落下。埽：用树枝、芦苇、石头等困紧做成的圆柱形的东西用在保护堤岸防水冲刷的材料。用许多埽做成的临时性堤坝或护岸。

19、免租税也。

20、岁尽也。

21、算法也。

22、斗建十二值日之一也。

23、拜官也。

24、半除。衣名。

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《周易·第四十五卦萃泽地萃兑上坤下》

利见大人亨。聚以正也。用大牲吉。利有攸往。顺天命也。观其所聚。而天地万物之情可见矣。象曰。泽上於地。萃。君子以除戎器。戒不虞。

《尚书·泰誓下》

古人有言曰。抚我则后。虐我则讎。独夫受。洪惟作威。乃汝世讎。树德务滋。除恶务本。肆予小子。诞以尔众士。殄歼乃讎。

《尚书·微子之命》

皇天眷佑。诞受厥命。抚民以宽。除其邪虐。功加于时。德垂後裔。尔惟践修厥猷。

《毛诗国风》

硕鼠三章章八句

魏国七篇十八章百二十八句

唐

蟋蟀

蟋蟀在堂。岁聿其莫。今我不乐。日月其除。无已大康。职思其居。好乐无荒。良士瞿瞿。

《毛诗小雅》

伐木六章章六句

天保定尔。亦孔之固。俾尔单厚。何福不除。俾尔多益。以莫不庶。天保定尔。俾尔戬谷。罄无不宜。受天百禄。

我行其野三章章六句

约之阁阁。椓之橐橐。风雨攸除。鸟鼠攸去。君子攸芋。

无将大车三章章四句

昔我往矣。日月方除。曷云其还。岁聿云莫。念我独兮。我事孔庶。心之忧矣。惮我不暇。念彼共人。眷眷怀顾。岂不怀归。畏此谴怒。

《周礼·天官冢宰》

辨邦治。一曰治职。以平邦国。以均万民。以节财用。二曰教职。以安邦国。以宁万民。以怀宾客。三曰礼职。以和邦国。以谐万民。以事鬼神。四曰政职。以服邦国。以正万民。以聚百物。五曰刑职。以诘邦国。以纠万民。以除盗贼。六曰事职。以富邦国。以养万民。以生百物。以官府之六联。合邦治。

宫人掌王之六寝之脩。为其井匽。除其不蠲。去其恶臭。共王之沐浴。凡寝中之事。埽除。执烛。共炉炭。凡劳事。四方之舍事。亦如之。

女祝掌王后之内祭祀。凡内祷祠之事。掌以时招梗禬禳之事。以除疾殃。

《周礼·地官司徒》

聚万民。一曰散利。二曰薄征。三曰缓刑。四曰弛力。五曰舍禁。六曰去几。七曰眚礼。八曰杀哀。九曰蕃乐。十曰多昏。十有一曰索鬼神。十有二曰除盗贼。以保息六。养万民。

以次叙分地而经市。以陈肆辨物而平市。以政令禁物靡而均市。以商贾阜货而行布。以量度成贾而徵儥。以质剂结信而止讼。以贾民禁伪而除诈。以刑罚禁虣而去盗。以泉府同货而敛赊。

不禁。春秋之斩木不入禁。凡窃木者有刑罚。若祭山林。则为主而脩除。且跸。若大田猎。则莱山田之野。及弊田。植虞旗于中。致禽而珥焉。

《周礼·春官宗伯》

以祀山川。以造赠宾客。土圭以致四时日月。封国则以土地。珍圭以徵守。以恤

凶荒。牙璋以起军旅。以治兵守。璧羡以起度。驵圭璋璧琮琥璜之渠眉。疏璧琮以敛尸。谷圭以和难。以聘女。琬圭以治德。以结好。琰圭以易行。以除慝。大祭祀。大旅。凡宾客之事。共其玉器而奉之。大丧。共饭玉。含玉。赠玉。凡玉器出。则共奉之。

典祀掌外祀之兆守皆有域掌其政令。若以时祭祀。则帅其属而脩除。徵役于司隶而役之。及祭。帅其属而守其厉禁而跸之。

守祧掌守先王先公之庙祧。其遗衣服藏焉。若将祭祀。则各以其服授尸。其庙。则有司脩除之。其祧。则守祧黝垩之。既祭。则藏其隋。与其服。

丧祝掌大丧劝防之事。及辟。令启。及朝。御硕。乃奠。及祖。饰棺。乃载。遂御。及葬。御硕出宫。乃代。及圹。说载除饰。小丧亦如之。掌丧祭祝号。王吊则与巫前。掌胜国邑之社稷之祝号。以祭祀祷祠焉。凡卿大夫之丧。掌事而敛饰棺焉。

男巫掌望祀望衍。授号。旁招以茅。冬堂赠。无方无筭。春招弭。以除疾病。王吊。则与祝前。

女巫掌岁时祓除衅浴。旱暵则舞雩。若王后吊。则与祝前。凡邦之大灾。歌哭而请。

《周礼·夏官司马》

隶仆掌五寝之埽除粪洒之事。祭祀。脩寝。王行。洗乘石。掌跸宫中之事。大丧。复于小寝。大寝。

圉师掌教圉人养马。春除蓐。衅厩。始牧。夏庌马。冬献马。射则充椹质。茨墙则翦阖。

合方氏掌达天下之道路。通其财利。同其数器。壹其度量。除其怨恶。同其好善。

《周礼·秋官司寇》

凡国之大事。比脩除道路者。掌凡道禁。邦之大师。则令埽道路。且以几禁行作不时者。不物者。

蜡氏掌除骴。凡国之大祭祀。令州里除不蠲。禁刑者。任人及凶服者。以及郊野大师大宾客亦如之。若有死於道路者。则令埋而置楬焉。书其日月焉。县其衣服任器。于有地之官。以待其人。掌凡国之骴禁。

庶氏掌除毒蛊。以攻说禬之。嘉草攻之。凡敺蛊则令之比之。

翦氏掌除蠹物。以攻禜攻之。以莽草熏之。凡庶蛊之事。

赤犮氏掌除墙屋。以蜃炭攻之。以灰洒毒之。凡隙屋。除其狸虫。

壶涿氏掌除水虫。以炮土之鼓敺之。以焚石投之。若欲杀其神。则以牡橭午贯象齿而沈之。则其神死渊为陵。

时会以发四方之禁。殷同以施天下之政。时聘以结诸侯之好。殷覜以除邦国之慝。间问以谕诸侯之志。归脤以交诸侯之福。贺庆以赞诸侯之喜。致禬以补诸侯之灾。以九仪辨诸侯之命。等诸臣之爵。

蛋白质的盐析与透析

蛋白质的分离纯化 一、实验目的 1.了解蛋白质的分离纯化方法 2.掌握蛋白质的盐析及透析方法 二、实验原理 在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。 蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。透析常需较长时间，宜在低温下进行。 三、实验材料和试剂 10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液，双缩脲试剂 四、实验步骤 （一）蛋白质盐析 取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出； 取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。 （二）蛋白质的透析 注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。 经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。 再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。 每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。 实验报告记录透析完毕所需的时间。

盐析法

盐析法综述 摘要：沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。盐析法是其中的一种，盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 关键词:沉淀法；盐析；原理；方法评价；蛋白质盐析 沉淀法 沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。 有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。、非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。最常用的是铅盐法，可以用于除去杂质，也可用于沉淀有效成分。沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合,在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物,再将沉淀物进行干燥或锻烧,从而制得相应的粉体颗粒。一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。 对沉淀形式的要求 （1）沉淀的溶解度要小，以保证被测组分能沉淀完全。 （2）沉淀要纯净，不应带入沉淀剂和其他杂质。 （3）沉淀易于过滤和洗涤，以便于操作和提高沉淀的纯度。 （4）沉淀易于转化为称量形式。 盐析法 胶体的盐析 胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低，形成沉底析出的

盐析法沉淀蛋白质的原理

盐析法沉淀蛋白质的原理 1 中性盐沉淀（盐析法） 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。 盐析法应用最广的还是在蛋白质领域，已有八十多年的历史，其突出的优点是： ①成本低，不需要特别昂贵的设备。 ②操作简单、安全。 ③对许多生物活性物质具有稳定作用。 ⑴中性盐沉淀蛋白质的基本原理 蛋白质和酶均易溶于水，因为该分子的－COOH、－NH2和－OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1nm～100nm颗粒的亲水胶体，削弱了蛋白质分子之间的作用力，蛋白质分子表面极性基团越多，水化层越厚，蛋白质分子与溶剂分子之间的亲和力越大，因而溶解度也越大。亲水胶体在水中的稳定因素有两个：即电荷和水膜。因为中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。

⑵中性盐的选择 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点： 1) 溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。 2) 分离效果好：有的提取液加入适量硫酸铵 盐析，一步就可以除去75％的杂蛋白，纯 度提高了四倍。 3) 不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的 作用。有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的 （NH4）2SO4保存可达数年之久。 4) 价格便宜，废液不污染环境。 ⑶盐析的操作方法 最常用的是固体硫酸铵加入法。将其研成细粉，在搅拌下缓慢均匀少量多次地加入，接近计划饱和度时，加盐的速度更要慢一些，尽量避免局部硫酸铵浓度过大而造成不应有的蛋白质沉淀。盐析后要在冰浴中放置一段时间，待沉淀完全后再离心与过滤。 在低浓度硫酸铵中盐析可采用离心分离，高浓度硫酸铵常用过滤方法。

蛋白质的盐析

蛋白质的盐析 SANY GROUP system office room 【SANYUA16H-

蛋白质的盐析（验证型） 一、实验目的 了解在工业化生产过程中使用（NH4）2SO4的情况，及（NH4）2SO4使用时的注意事项。 二、实验原理 用高浓度中性盐使蛋白质从溶液中沉淀出来的方法称盐析。常用的中性盐有（NH4）2SO4、NaCl 等。高`浓度中性盐能使蛋白质沉淀是因为它具有脱水性，能脱去蛋白质胶粒水膜，又有中和蛋白质胶粒外双电层电荷的作用。不同蛋白质盐析时所需盐浓度不同，故调节盐浓度，可适当地将蛋白质分开。如球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中沉淀，清蛋白在饱和硫酸铵溶液中沉淀，用盐析法沉淀的蛋白质并未变性，用稀释的方法或透析的方法可使之复溶。 三、器材与试剂 1、发酵溶液 2、10%的三氯醋酸溶液 3、饱和（NH4）2SO4溶液 4、（NH4）2SO4粉末 四、实验步骤 （1）取发酵溶液5ml，加饱和（NH4）2SO4溶液1ml2ml3ml4ml5ml，混匀，静止数分钟，即有白色沉淀析出，应为何物？过滤至清，除去沉淀，滤液备用。取少量沉淀，加H2O看是否复溶？ （2）取滤液0.5ml，加10%的三氯醋酸数滴，有白色沉淀产生，应为何物？然后在721分光光度计OD600下进行透光率的检测，检测时必须在倒入比色皿以后10秒内读取（为什么？）。（在进行检测时应注意将721分光光度计调整到OD600；在测量前应把机器预热半小时左右。在检测时应注意有效的检测范围是T值15%以上到70%以下）。 （3）另外，取滤液2.5ml于小烧杯中，加（NH4）2SO4粉末，随加随搅拌，直至（NH4）2SO4不能溶解为止，有白色沉淀产生，应为何物？然后过滤至清，除去沉淀，过滤备用。 （4）将（1）-（3）做的滤液中加10%三氯醋酸数滴观察有无沉淀产生。找到没有沉淀的加饱和（NH4）2SO4溶液的点。然后在721分光光度计OD600下进行透光率的检测。并且作出曲线。 （5）对大量的发酵液进行处理，在滤液中加10%三氯醋酸数滴观察有无沉淀产生。 （6）盐析曲线的制作方法：如果要分离一种新的蛋白质和酶，没有文献数据可以借鉴，则应先确定沉淀该物质的硫酸铵饱和度。具体操作方法如下：取已定量测定蛋白质或酶的活性与浓度的待分离样品溶液，冷至0℃～5℃，调至该蛋白质稳定的pH值，分6～10次分别加入不同量的硫酸铵，第一次加硫酸铵至蛋白质溶液刚开始出现沉淀时，记下所加硫酸铵的量，这是盐析曲线的起点。继续加硫酸铵至溶液微微混浊时，静止一段时间，离心得到第一个沉淀级分，然后取上清再加至混浊，离心得到第二个级分，如此连续可得到6～10个级分，按照每次加入硫酸铵的量，查出相应的硫酸铵饱和度。将每一级分沉淀物分别溶解在一定体积的适宜的pH缓冲液中，测定其蛋白质含量和酶活力。以每个级分的蛋白质含量和酶活力对硫酸铵饱和度作图，即可得到盐析曲线。 五、盐析注意事项： 1.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。 2.盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因而在使用前，一般先磨碎，平铺放入烤箱内60℃烘干后再称量，这样更准确。 3.在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后来速度应该更注意缓慢，如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致酶失活。

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析 还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长…… 幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。 -------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一 我是超级蜘蛛精 看我有劲儿不？ 冲啊，我是美国队长 而我是一只冷静的科研小蜗牛 这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。 硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度

增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的

结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。 各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。 （1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液； 例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH 到7.0。 （2）沉淀蛋白 将样品离心，去除沉淀，保留上清液并测量体积；一边搅拌一边慢慢的加入硫酸

盐析法沉淀蛋白质的原理

“盐析沉淀蛋白质的原理实际上就是通过降低蛋白质的溶解度，从而使得蛋白质凝聚，最终从溶液中析出。蛋白质的沉淀其实就是将蛋白质分子聚集，使得它从溶液中析出的一种现象。” 各种蛋白纯化分离大集合！ 一、沉淀法 1、盐析 实验原理：中和蛋白质表面电荷并破坏水化膜。 蛋白质易溶于水，因为其分子的-COOH -NH2和-OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1~100 nm大小的亲水胶体，从而削弱了蛋白质分子之间的作用力。当大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO42- 和NH4+）有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之"失水"，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。 2、等电点沉淀法： 实验原理：利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相

互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。 注意点：不同的蛋白质，具有不同的等电点。同一种蛋白质在不同条件下，等电点不同。 3、有机溶剂沉淀法 实验原理：加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。 有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似，有机溶剂与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质脱除水化膜，而易于聚集形成沉淀。 影响因素：(一)有机溶剂的选择(二)温度的控制(三)pH值(四)离子强度 用此法析出的沉淀一般比盐析法易过滤或离心沉降，分离后的蛋白质沉淀应立即用水或者缓冲液溶解，以达到降低有机溶剂的浓度的目的。此法在血液制品的制备过程中较多使用。

盐析法沉淀蛋白质的原理

一、盐析法的定义： 盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 简单来说，盐析法就是指在有机大分子或一些有机高分子的溶液中加入无机盐如氯化钠,利用相似相溶原理,使有机物析出的过程.在制乙酸乙酯时用饱和碳酸钠溶液接收,更有利于乙酸乙酯的析出,制肥皂时加氯化钠,肥皂更易析出,在蛋白质溶液中加硫酸铵,使蛋白质析出,都是利用盐析的原理。 二、盐析法的原理： 盐析法的原理是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。 蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。 蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。

总之，盐析和变性都会让蛋白质沉淀，但是盐析的条件控制好就不会使蛋白质失去活性，除去溶液中的中性盐就可以重新溶解。蛋白质变性的那就失去了生物活性，三维结构被破坏，某些情况下可以通过复性再次恢复活性，但是目前能够复性的蛋白质是非常少的，条件要求也各不相同。关于盐析和变性的原理，一般情况下我们认为盐析剥夺了蛋白质的水化层并且破坏了它的表面电荷平衡，变性的情况就比较多了，总的来说是让蛋白质本身精巧的结构被破坏，从而让蛋白质失去活性。

盐析法除蛋白质

盐析法除蛋白质 盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水 中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 原理：蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 1 中性盐沉淀（盐析法） 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。 盐析法应用最广的还是在蛋白质领域，已有八十多年的历史，其突出的优点是： ①成本低，不需要特别昂贵的设备。λ ②操作简单、安全。λ ③对许多生物活性物质具有稳定作用。λ ⑴中性盐沉淀蛋白质的基本原理λ 蛋白质和酶均易溶于水，因为该分子的－COOH、－NH2和－OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1nm～100nm颗粒的亲水胶体，削弱了蛋白质分子之间的作用力，蛋白质分子表面极性基团越多，水化层越厚，蛋白质分子与溶剂分子之间的亲和力越大，因而溶解度也越大。亲水胶体在水中的稳定因素有两个：即电荷和水膜。因为中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。盐析示意图如下页“图4”所示。λ ⑵中性盐的选择λ 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点：λ 1) 溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。由下表可以看到，硫铵在0℃时的溶解度，远远高于其它盐类：λ 表2-1 几种盐在不同温度下的溶解度（克/100毫升水）λ 0℃20℃80℃100 ℃λ （NH4)2SO4 70.6 75.4 95.3 103 Na2SO4 4.9 18.9 43.3 42.2λ

实验四--蛋白质纯化---盐析沉淀法

实验四蛋白质纯化盐析沉淀法 【实验目的】 采用硫酸铵盐析法将日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白从大肠杆菌BL21（DE3）pGEX-NS53细胞裂解液中分离出来，使学生学习掌握制备细胞裂解液的技术和采用盐析法从中分离目的蛋白质的技术。 【实验原理】 用盐析法从成分复杂的蛋白质溶液（如细胞裂解液）中提取目的蛋白质是一种传统的目前仍被广泛使用的蛋白质分离纯化技术。此种技术的工作原理如下：蛋白质在稀盐溶液中，其溶解度会随盐浓度的升高而增加，此种现象被称作盐溶。但是当盐的浓度继续增高时，蛋白质的溶解度又以不同程度地下降并先后从溶液中析出，此种现象被称为盐析。上述现象是由于蛋白质分子中极性基团之间存在静电力。在低盐浓度下，蛋白质分子中极性基团之间的静电力受盐离子的影响而被消除，蛋白质在水中的极性基团的电荷被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出。盐析法就是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。 盐析的一般操作步骤是，选择一定浓度范围的盐溶液（如0-25%饱和度的硫酸铵）使部分杂质呈“盐析”状态从溶液中沉淀出来，经离心法去除。而目的蛋白质呈盐溶状态，存在于上清中。增加盐浓度（如25-60%饱和度的NH4SO4）使目的蛋白质呈盐析状态，而从溶液中分离出来。 在盐析时，蛋白质的溶解度与溶液中离子强度的关系，可用下式表示：S lg = -Ks×I S0 式中的S为蛋白质在离子强度为I的溶解度，S0蛋白质在纯水（离强度为0）中的溶解度；K S为盐析常数。离子强度I可用下式表示： I=1/2∑Z2 式中，M-溶液中各种离子克分子浓度 Z-各种离子所带的电荷数 在温度恒定时，S0对于某一种蛋白质在某一溶液中的溶解度是一个常数，lgS0也为一常数，以β代替，故式（1）可以改写为： lgS= Ks×I （3） β值主要与蛋白质的结构，盐离子的平均半径以及盐离子的电荷数有关，也受溶液中的氢离子浓度（PH值）和温度影响。一般来说，蛋白质在某一盐溶液中的盐析系数--K S越大，盐析效果越好。

盐析法沉淀蛋白质的原理

盐析法沉淀蛋白质的原理 蛋白质的分离纯化工作较为复杂，从细胞中提取的蛋白质或从含有蛋白质的溶液中经过沉淀、梯度离心、盐析等方法得到的蛋白质经常含有杂质。要去除这些杂质，同时又要保持蛋白质的生物学活性，如酶的催化活性，就需要根据不同的蛋白质制定出相应的策略，采用不同的方法。今天重点介绍下盐析法沉淀蛋白质。 盐析法原理 用水溶液中蛋白质分子由于表面生成水化层及蛋白质分子上某些基团离子化而使蛋白质分子表面带有电荷，增加了水化层的厚度而成为稳定的亲水胶体颗粒，水膜和电荷一旦被除去，蛋白质颗粒将由于失去电荷和脱水而发生沉淀。 向蛋白质溶液中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸镁、氯化钠等）后，蛋白质便从溶液中沉淀析出，这种沉淀作用称为蛋白质盐析。其过程是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。 用不同浓度的盐可将不同种类蛋白质从混合溶液中分别沉淀的过程，称为蛋白质的分级盐析。例如蛋清溶液中的球蛋白可被半饱和的硫酸铵溶液沉淀提取，饱和的硫酸铵溶液可使清蛋白沉淀析出。盐析法沉淀出的蛋白并没有失活，所以盐析法常被用于分离和提取各种蛋白质及酶制剂。 影响盐析的因素 （1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶解度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析。

（2）pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶解度最低。 （3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。 （4）蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最多的硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大（25度时饱和溶液为4.1M，即767克/升；0度时饱和溶解度为3.9M，即676克/升），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来；另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好，不易引起蛋白质变性。硫酸铵溶液的pH常在4.5-5.5之间，当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。

盐析法沉淀蛋白质的原理

（一）目的要求 了解蛋白质的沉淀作用，加深对影响蛋白质胶体分子稳定性因素的认识。 （二）实验原理 水溶液中蛋白质分子由于表面生成水化层及蛋白质分子上某些基团离子化而使蛋白质分子表面带有电荷，增加了水化层的厚度而成为稳定的亲水胶体颗粒，水膜和电荷一旦被除去，蛋白质颗粒将由于失去电荷和脱水而发生沉淀。 向蛋白质溶液中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸镁、氯化钠等）后，蛋白质便从溶液中沉淀析出，这种沉淀作用称为蛋白质盐析。其过程是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。 用不同浓度的盐可将不同种类蛋白质从混合溶液中分别沉淀的过程，称为蛋白质的分级盐析。例如蛋清溶液中的球蛋白可被半饱和的硫酸铵溶液沉淀提取，饱和的硫酸铵溶液可使清蛋白沉淀析出。因此，盐析法常被用于分离和提取各种蛋白质及酶制剂。 （三）试剂及材料

1、10%蛋清溶液选新鲜鸡蛋，轻轻在蛋壳上击破一小孔，取出蛋清，按新鲜鸡蛋清1份，九份0.9%NaCl 溶液的比例稀释配制蛋清液，混匀，用四层纱布过滤后备用。 2、饱和硫酸铵溶液称取76.6g硫酸铵溶于100mL 25℃蒸馏水中。 3、固体硫酸铵。 （四）操作方法 1、取两支试管，分别加入10%蛋清溶液5 mL，饱和硫酸铵5 mL，静置5min，观察有否沉淀物产生，沉淀物为何物？ 2、取其一试管，用点滴管弃去上清夜，加水至沉淀物，观察沉淀是否会再溶解，说明沉淀反应是否可逆。 3、用滤纸把另一试管的沉淀混合物过滤，向滤液中添加固体硫酸铵至溶液饱和，注意观察溶液有否蛋白质沉淀产生，此沉淀又为何物？ 注意：把溶液中硫酸铵固体沉淀与蛋白质沉淀区别开来。