微生物案例分析

微生物学案例分析

案例：

患者，女，36岁。

主述：头痛、呕吐、发热10天。

现病史：患者于20多天前因受冷感冒头疼，伴有寒战、高热(体温不详)，以后头痛加重，呈刺跳痛，尤其前额部明显。10天前开始出现喷射性呕吐，呕吐物为食物残渣，无血。当地医院诊断为“流感”，予以相应治疗(具体用药不详)，症状未见明显改善。2天前自觉双下肢麻木，乏力，急诊入安。

既往史：无特殊。

查体：体温40℃，脉率110/min，呼吸30/min。消瘦，嗜睡，神志恍惚，合作欠佳，双眼无水肿，瞳孔等大对称，对光反射存在。四肢可自主活动，浅反射及腹壁反射减弱【上部反射消失见于胸髓7-8节受损，中部反射消失见于胸髓9-10节病损，下部反射消失见于胸髓11-12节病损，单侧反射消失见于单侧锥体束病损，双侧反射消失见于昏迷，急性腹膜炎或腹壁过于松弛者。一侧腹壁反射消失见于同侧锥体束病变；某一部分腹壁反射消失反映相应脊髓节段的病变，昏迷、急腹症腹壁反射全部消失。】浅感觉存在，膝反射及跟腱反射未引出【双突触反射、单突触反射】，颈强直【颈项强直指由于支配颈部肌群的神经受到刺激后，引起的颈部肌肉发生痉挛性收缩和疼痛，颈部僵直，活动受限，被动屈曲颈部时有阻抗感，下颌不能贴近胸部。主要表现为烦躁不安和进行性加重的意识障碍，逐渐从神情萎靡、嗜睡发展至昏睡、昏迷、深度昏迷。颅内压增高可有头痛及喷射性呕吐，婴儿则出现前囟饱满和头围增大。脑膜刺激征以颈项强直最常见。】。克氏征、布氏征阳性【布鲁津士征、克尼格式征、颈强征统称为脑膜刺激征。 出现后表示有脑膜炎或蛛网膜下腔出血！】。

辅助检查：

1、血常规：WBC 9.2×109/L，N：0.5，L：0.14。【WBC：4～10 ×109/L；中性粒细胞N 0.5 ～0.7 淋巴细胞L 0.20 ～0.40 】

2、脑脊液：压力高，每分钟80滴↑，细胞数0.2×109/L↑【成人：(0-8)×106/L】，

淋巴为主。【细胞分类(DC)：红细胞：无或少量；淋巴及单核细胞：少量；间皮细胞：偶见；其他细胞：无。】生化检查：糖1.3mmol/L↓【葡萄糖定量：成人：2.8-4.5mmol/L】，蛋白2.16g/L↑，氯化物68mmol/L↓【成人：120-132mmol/L】。

3、X线检查：双肺上部各有一结节状阴影，边缘见模糊的云雾状阴影。

4、我院PPD检查：阳性。【一般阳性和中度阳性：①结核病现症患者。②已受结核菌感染但并不意味着发病或患病。③卡介苗接种所致变态反应。④3岁内未接种卡介苗者提示体内存在结核病灶, 应及时进行结核菌检查、影像学检查、血沉等检查以确定诊断和治疗。2．强阳性：（1）结核病患者。（2）感染结核菌未发病者。强阳性人群结核病的发病率高，在未找到病变时可作预防性治疗。】

5、我院MRI：右颞缺血性改变，颅底渗出性炎症改变

问题：

1. 该病例的病原可能是什么？依据？

2. 其感染的途径和机制？

浸润型肺结核：

多见外源性继发型肺结核，即反复结核菌感染后所引起。少数是体内潜伏的结核菌，在机体抵抗力下降时进行繁殖，而发为内源性结核，也有由原发病灶形成者。此型多见于成年人，病灶多在锁骨上下，呈片状或絮状，边界模糊，病灶可呈干酪样坏死灶，引发较重的毒性症状，而成干酪性（结核性）肺炎，坏死灶被纤维包裹后形成结核球。

肺结核的X线表现包括：纤维钙化的硬结病灶，表现为密度较高、边缘清晰的斑点、条索取或者结节；浸润性病灶，表现为密度较单，边缘模糊的云雾状阴影；干酪样病灶，表现为密度较高，浓淡不一，有环形边界透光区的空洞等。肺结核病灶通常在肺上部、单侧或双侧，促成时间较长，且有多种不同性质的病灶混合存在及肺内播散迹象。

脑膜刺激征

脑膜受激惹的体征，是脑膜病变时脊髓膜受到刺激并影响到脊神经根，当牵拉刺激时引起相应肌群反射性痉挛的一种病理反射。见于脑膜炎，蛛网膜下腔出血和颅内压增高等。

临床表现

1.头痛常剧烈，是最常见的症状，病程早期即可出现。一般为弥漫性，有时有枕部和额部特别显着。呕吐则多为喷射性。

2.颈强直：颈部肌肉强硬对被动运动有抵抗，如被动屈颈则有肌痉挛及疼痛。

3.克氏征：下肢髋、膝关节屈曲成直角，然后使小腿伸直，正常可伸直达135°以上，如遇抵抗，小于135°并觉疼时为阳性。

4.布氏征：患者仰卧，被动向前屈颈时，两下肢自动屈曲为阳性，为小脑脑膜刺激征。另外还有皮肤感觉过敏，对听觉和视觉刺激过敏等。

结核性脑膜炎（tuberoublormeningitis）

多见于儿童，发病多渐起，亦可相当急聚，临床症状除发热、畏寒、头痛等一般中毒症状，各项体征以颈肌强硬出现最早，有早期诊断意义。此时脑脊液已有改变：压力大多升高，澄清，无色，或微混浊，呈毛玻璃样，静置后往往有薄膜形成。细胞增多一般在0.05～0.5×109/L个，分类以淋巴细胞占优，糖及氯化物减少。（分别低于1.96mmol/L和119mmd/L）脑脊液中查到结核菌可确诊。也可用PCR-DNA-Tb检查确诊。

典型结脑的临床表现可分为三期

1.前驱期（早期）约1 ～2周，一般起病缓慢，在原有结核病基础上，出现性情改变，如烦躁、易怒、好哭，或精神倦怠、呆滞、嗜睡或睡眼不宁，两眼凝视，食欲不振、消瘦，并有低热，便秘或不明原因的反复呕吐。年长儿可自诉头痛，初可为间歇性，后持续性头痛。婴幼儿表现为皱眉、以手击头、啼哭等。

2.脑膜刺激期（中期）约1 ～2周主要为脑膜为及颅内压增高表现。低热，头痛加剧可呈持续性。呕吐频繁、常呈喷射状，可有感觉过敏，逐淅出现嗜睡、意识障碍。腹壁反射消失、腱反射亢进。若病情继续发展，则进入昏迷状态，可有惊厥发作。此期常出现颅神经受累病状，最常见为面神经、动眼神经及外展神经的瘫痪，多为单侧受累，表现为鼻唇沟消失、眼睑下垂、眼外斜、复视及瞳孔散大，眼底检查可见视神经炎，视乳突水肿，脉络膜可偶见结核节结。

3.晚期（昏迷期）约1 ～2周意识障碍加重反复惊厥，神志进入半昏迷、昏迷状态，瞳孔散大，对光反射消失、呼吸节律不整甚至出现潮式呼吸或呼吸暂停。常有代谢性酸中毒、脑性失铁钠综合征、低钾积压症等水、电解质代谢紊乱。最后体温可升至40℃以上，终因呼吸循环衰竭而死亡。

《医学免疫学与微生物学》实验报告

［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量 ［实验材 料］: 打孔器 (1) 将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适 当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又 不流失。 (2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。 (3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。 (4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于3 7 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球 蛋白或补体成分的含量。 在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂 中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。 沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大 小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。 实验二 ［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验） ［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠 ［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载 实验一 1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管 ［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径: 毫米 ［实验分析］

玻片等 ［试验步骤］: （1）取一片载玻片，标记出左右。 （2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。 （3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。 （4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。 （5）观察判定结果。 ［实验结果］:（凝集和非凝集的描述） 左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。 右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。 ［实验分析］:（结合实验原理） 孕妇尿液中的HCG含量显著增高。尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。 非孕妇尿液中HCG含量极少，不足以抑制抗HCG与HCG乳胶抗原发生间接凝集反应，所以出现乳胶颗粒的凝集，为乳胶间接凝集抑制阴性反应。

微生物检验技术试题

《微生物检验技术》期末考试试题(A 卷) 一、名词解释(每小题3分，共15分) 1、菌落 2、正常菌群 3、消毒 4、噬菌体 5、最小抑菌浓度（MIC ） 二、填空题（每空1分，共25分） 1．细菌的特殊结构 有 、 、 、 。 2.细菌生长繁殖的条件是 、 、 和气体。 3．病原菌的致病作用与 、 及 有密切关系。 4.诊断血清是用 免疫家兔等动物后取其 而制成的。一般置于 保存，使用时应避免 ， 降低效价。

5．K—B法中抑菌圈直径的大小与药物的最低抑菌浓度呈关系，即抑菌圈愈大，MIC值、细菌对药物的敏感程度。 6．、和可作为甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌的鉴别试验。 7．淋病奈瑟菌主要以方式传播，引起。 8.细菌对待测药物的敏感程度可分为、、 三级。 三、选择题(每小题1.5分，共30分)： 1、属于非细胞型微生物的是（） A、真菌 B、细菌 C、放线菌 D、病毒 E、螺旋体 2、革兰染色所用染液的顺序是（） A、稀释复红—碘液—95％乙醇—结晶紫 B、稀释复红—95％乙醇—碘液—结晶紫 C、结晶紫—碘液—95％乙醇—稀释复红 D、结晶紫—95％乙醇—碘液—稀释复红 E、稀释复红—结晶紫—碘液—95％乙醇 3、靛基质试验又称（） A、甲基红试验 B、尿素分解试验 C、硫化氢生成试验 D、吲哚试验 E、糖发酵试验 4、对人体无害的细菌代谢物是（）

A、热原质 B维生素 C、外毒素 D、内毒素 E、侵袭性酶 5、正常人体不存在细菌的部位是（） A、体表 B、口腔 C、大肠 D、尿道口 E、血液 6、实验室对接种针（环）、试管口的灭菌方法是（） A干烤法 B、流通蒸汽法 C、烧灼 D、焚烧 E、煮沸法 7、卡介苗是由何种变异而产生的（） A、形态变异 B、结构变异 C、毒力变异 D、耐药变异 E、酶活性变异 8、病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物，引起严 重的全身症状，称为（） A、毒血症 B、菌血症 C、败血症 D、脓毒血症 E、 病毒血症 9、哪种动物不是微生物学检验中常用的实验动物（） A、小白鼠 B、豚鼠 C、裸鼠 D、家兔 E、马 10、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点（） A、凝固酶试验阳性 B、产生溶血素 C、分解 甘露醇 D、产生耐热核酸酶 E、胆汁溶菌试验阳性 11、在普通琼脂平板上生长的化脓性细菌是（） A、金黄色葡萄球菌 B、乙型链球菌 C、肺炎

2018微生物检验技术师考点

2018微生物检验技术师考点

1.仪器的标识管理：红（停用）黄（准用）绿（合格）各自所表明的状态。 2.分光光度计检测细菌浓度用可见光分光光度计，测细菌波长用６００ｎｍ。检测蛋白用紫外分光光度计（波长用２８０ｎｍ），它也可测核酸浓度（波长２６０ｎｍ）。选定分光光度计测定颜色反应光的波长是４５０ｎｍ。石英比色皿用于紫外分光光度计，玻璃比色皿用于可见光分光光度计。 3．紫外透射仪该仪器使用条件是暗室和紫外线，主要用于在紫外线下看ＤＮＡ条带。 4．色谱气相色谱可做微生物分类和鉴定，用于微生物的化学成分分析。液相色谱仪也可做微生物化学成分分析。质谱仪也可做微生物化学成分分析。 5．测序仪蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序，ＤＮＡ测序仪是测核苷酸排列顺序。能做ＤＮＡ测序的物质是质粒、噬菌体、ＰＣＲ产物。 6．扩增仪ＰＣＲ是聚合酶链反应缩写，能做ＰＣＲ称ＤＮＡ扩增仪。它能以一定ＤＮＡ片段为模板，变换温度，扩增该片段。常用的“枪”是实验室常用的微量可调移液器。 7．酶标做ＥＬＩＳＡ的仪器称酶标仪，做ＥＵＳＡ反应，其中主要设备有塑料凹孔板、洗板机和酶标仪。

溴化乙锭有致癌作用，故在使用时应注意。丙烯酰胺具有神经毒，在用时注意个人防护。 12、琼脂糖凝胶电泳此电泳用于核酸分离与纯化，用水平电泳槽。分离ＤＮＡ片段最佳范围为２００ｂｐ～５０ｋｂ。 13、聚丙烯酰胺电泳该电泳通常用垂直电泳槽，分离ＤＮＡ片段是最佳范围是５～５００ｂｐ。 14.中华人民共和国国家标准GB 19489--2004《实验室生物安全通用要求》根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级：危害等级Ⅰ（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。 危害等级Ⅱ（中等个体危害，有限群体危害）能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。 危害等级Ⅲ（高个体危害，低群体危害）能引起人或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能用抗生素抗寄生虫药治疗的病原体。 危害等级Ⅳ（高个体危害，高群体危害）能引起人或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接、间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物之间传播的病原体。

环境微生物学练习题与答案

绪论 一、名词解释 1、微生物 微生物是所有形体微小，用肉眼无法看到，需借助显微镜才能看见的单细胞或个体结构简单的多细胞或无细胞结构的低等生物的统称。 “微生物”不是一个分类学上的概念，而是一切细小的、肉眼看不见的微小生物的总称。 2、原核微生物 原核生物：①细胞核发育不完善，只有DNA链高度折叠形成的一个核区，仅有核质，没有定形的细胞核，称为拟核或拟核。②没有特异的细胞器。③不进行有丝分裂。 二、选择题 1．微生物分类中基本的分类单位是（D ）。 A、科 B、属 C、目 D、种 2．各种微生物具有一些共同点，下列选项中描述错误的是（ C ） A．分布广，种类多 B．适应强，易变异C．体积小，表面积小 D．生长速，繁殖旺 5．所有微生物的共同特征是（ C ）。 A、单细胞 B、没有真正的细胞核 C、个体微小 D、细胞结构简单 6．在分类系统中，细菌和蓝细菌皆属于（ A ）。 A、原核生物 B、真核生物 C、多细胞 D、单细胞 三、填空题 1. 微生物的命名采用双名法，即由一个___属名____和一个___种名____构成；书写排列上，____属___名在前，___种___名在后。 四、简答题

1. 真核微生物与原核微生物的差异表现在哪些方面？它们各自包括哪些主要类群？ 原核生物：①细胞核发育不完善，只有DNA链高度折叠形成的一个核区，仅有核质，没有定形的细胞核，称为拟核或拟核。②没有特异的细胞器。③不进行有丝分裂。 真核生物：①细胞核发育完善，有核膜将细胞核和细胞质分开，核内有核仁和染色质。②有高度分化的细胞器，如线粒体、中心体、高尔基体、内质网、溶酶体和叶绿体等。③能进行有丝分裂。 原核微生物：细菌、古菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体 真核微生物：藻类、真菌（酵母菌、霉菌）、原生动物、微型后生动物 五、论述题 3. 结合微生物的特点，分析微生物在环境保护和环境治理中起着举足轻重的作用。 1、微生物在环境保护和治理中的作用： 保持生态平衡 污染物的降解 废水、废气、废渣的处理 污染水体、土壤的生物修复 2、研究内容包括： 微生物学基础知识 环境工程中的微生物原理 饮用水卫生细菌学 自然环境物质循环与转化 水体和土壤的自净作用 污染水体治理、污染土壤的修复等环境工程净化 3、环境工程微生物学的研究任务就是充分利用有益微生物资源为人类造福。防止、控制、消除微生物的有害活动，化害为利。

微生物实验报告模板

微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般

在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验

微生物检验技术基础知识模拟题12

微生物检验技术基础知识模拟题12 一、最佳选择题 1. SS琼脂培养基属于 A.厌氧培养基 B.营养培养基 C.鉴别培养基 D.选择培养基 E.特殊培养基 答案：D SS琼脂含有抑制剂胆盐、煌绿、硫代硫酸钠，对大肠埃希菌有较强的抑制作用，而对肠道致病菌则无明显抑制作用，是沙门菌属及志贺菌属的强选择培养基。 2. 从脑脊液中分离培养，能在血平板上生长的细菌最可能是 A.脑膜炎奈瑟菌 B.军团菌 C.变形杆菌 D.伤寒沙门菌 E.金黄色葡萄球菌 答案：A 脑膜炎奈瑟菌为流行性脑脊髓膜炎(流脑)的病原菌，引起化脓性脑脊髓膜炎，可从脑脊液中分离培养，而且培养条件要求较高，普通培养基上不生长，在含有血清或血液的培养基上方能生长。 3. 病毒长期保存最好的方法是 A.-20℃冰箱 B.-80℃冰箱 C.-70℃冰箱

答案：D 冷冻干燥法是保存病毒最好的方法，用此方法病毒可长期保存。 4. 痰标本涂片抗酸染色，如镜检找到抗酸杆菌，报告时符号“++”代表 A.多数视野能发现1～9个以上的抗酸杆菌 B.多数视野发现10个或10个以上的抗酸杆菌 C.全片发现1～2个抗酸杆菌 D.全片发现1～9个抗酸杆菌 E.全片未发现抗酸杆菌 答案：A 痰标本检查结核分枝杆菌，行涂片与抗酸染色，如镜检时多数视野能发现1～9个以上的抗酸杆菌，可报告“++”。 5. SPA是指 A.肺炎克雷伯杆菌A蛋白 B.金黄色葡萄球菌A蛋白 C.链球菌A蛋白 D.表皮葡萄球菌A蛋白 E.大肠埃希菌A蛋白 答案：B SPA是金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白，能与人及多种哺乳动物血清中的IgG类抗体的Fc段非特异结合，常用作协同凝集试验。 6. 结核分枝杆菌在液体培养基中培养时出现的现象是 A.混浊生长 B.沉淀生长

微生物检验重点知识

一、名词解释： 1、溶原性细菌：获得温和噬菌体核酸的细菌。 2、前噬菌体：温和噬菌体整合于细菌染色体（宿主基因组）中的核酸称为前噬菌体。 3、侵袭力：病原微生物能突破宿主的防御系统，在机体内定植、繁殖和扩散的能力。 4、正常菌群MIC（最低抑菌浓度）：在体外试验中，抗菌药物抑制培养基中某种细菌生长最低药物浓度，是药物 抗菌活性指标，提示药物的抑菌能力（μg/ml） 5、MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 6、迁徙生长现象：变形杆菌在固体培养基上呈扩散性生长，形成以菌种接种部位为中心的，厚薄交替同心圆型 的层层波状菌苔 7、菌丝：真菌在适宜的环境中，由孢子出芽形成芽管，逐渐延长呈丝状，称为菌丝。 8、二相性真菌：有些真菌在不同寄生环境和培养条件下可出现两种形态，称二相性真菌 9、病毒体：一个成熟有感染性的病毒颗粒称为病毒体 二、填空、判断、选择、问答部分 （一）革兰氏染色的三个原理，操作步骤与临床意义【选择题】 1、原理： （1）渗透学说：革兰阳性菌细胞壁结构较紧密，肽聚糖层厚，含脂质少，脱色时乙醇不易渗入，反而使细胞壁 脱水，通透性下降，胞内结晶紫与碘的复合物不易渗出。格兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层薄，含脂质多，易被乙醇溶解，是细胞壁通透性增加，胞内结晶紫与碘的复合物易被乙醇溶解溢出而被脱色。【主要学说——细 胞壁结构学说：G+菌和G-菌的细胞壁成分差异大，对脱色剂的反应不同】 （2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐可与结晶紫、碘牢固结合，而不易被乙醇脱色。革兰阴性菌内 所含核糖核酸镁盐少，故易被脱色。 （3）等电点学说：革兰阳性菌的等电点（pH2~3）比格兰阴性菌（pH4~5）低，在相同pH的条件下，革兰阳性菌 比格兰阴性菌所带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料结合较牢固，而不易脱色。 2、操作步骤：①细菌涂片、干燥，经火焰固定（菌膜>1cmX1cm）②结晶紫染色1min，水洗甩干③加碘液媒染 1min，水洗甩干④加95%乙醇脱色30s，水洗甩干⑤用稀释复红或沙黄复染30s，水洗吸干后镜检 3、临床意义：①鉴别细菌②选择治疗用药③与细菌致病性有关 （二）细菌的基本结构及功能、细菌的特殊结构及功能、细菌的变异机理【选择题】 细菌蛋白质的合成场所：核糖体（同时也是药物作用的部分） 细菌内毒素的化学成分：脂多糖 1、细菌的基本结构 基本结构：由外向内依次为细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等。 （1）细胞壁 a.主要功能：①维持细菌固有形态②抵抗低渗作用③物质交换作用 2、化学组成和结构 a.肽聚糖：是细菌细胞壁的主要成分，也是原核细胞所特有的成分 革兰阳性菌的肽聚糖（多）：聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥三部分构成的三维网架结构 革兰阴性菌的肽聚糖（少）：聚糖骨架、四肽侧链两部分构成的二维网架结构 b.磷壁酸：革兰阳性菌细胞壁特有。作用：调节、维护细菌细胞内离子平衡作用，是革兰阳性菌重要的表面抗原，与细菌致病性有关。 壁磷壁酸：由肽聚糖延伸；膜磷壁酸：由细胞膜延伸 c.外膜层：革兰阴性菌细胞壁特有。细胞壁肽聚糖外侧，由外向内依次为脂多糖、脂质双层、脂蛋白三部分①脂 多糖：格兰阴性菌内毒素，脂质A为主要毒性成分 第1/12页 （2）细胞膜：一层柔软而富有弹性的半渗透性双层脂质生物膜结构，脂质双层中镶嵌有多种蛋白质。中介体： 细胞膜内陷折叠而成的囊状结构。 （3）细胞质 有质粒（是染色体外遗传物质） 包括：F质粒（至育性质粒）R质粒（耐药性质粒）Vi质粒（毒力质粒） 2、细菌的特殊结构（鞭毛、荚膜、芽孢和菌毛） （1）鞭毛：附着在菌体上面胞壁外的细长呈波浪形弯曲的丝状物。 a.类型：周毛菌，单毛菌，双毛菌，丛毛菌。 b.作用和意义：①是细菌的运动器官②与细菌致病性有关③与细菌鉴定、分类及分型有关 （2）菌毛：是指菌体表面具有比鞭毛更细、短而直的丝状附属物。化学本质：蛋白质 a.普通菌毛：是细菌的黏附器官，与细菌致病性密切相关 b.性菌毛：F质粒控制，表面有性菌毛的称为雄性菌（F+），无性菌毛称为雌性菌（F-） （3）荚膜：某些细菌在细胞壁外包绕的一层黏液性物质。化学本质：多糖类，少数为多肽 通常在机体内和营养丰富的培养基中易形成荚膜 a.作用：①抗吞噬②抗杀伤③抗干燥④与致病性有关⑤细菌鉴别和分型的依据⑥免疫原性 （4）芽孢：是某些细菌在一定条件下细胞质、核质浓缩脱水而形成的一个折光性很强，具有多层膜状结构、通 透性很低的圆形或卵圆形的小体。 a.形成条件：缺乏营养物质，有害代谢产物的堆积

2018环境微生物学考研试题及答案

2018环境微生物学考研试题及答案一、名词解释 包含体： 细胞膜： 衣原体： 同宗配合： 酵母菌： 生态系统： 碳源： 拮抗： 菌种复壮： DNA的变性： DNA复制： 根际微生物： 物质流： 类菌体： 硝化细菌： 细菌活性污泥法： 生物反应器： 微生物细胞固定化： 堆肥化：

自生固氮作用： 二、是非题 原噬菌体是整合在宿主DNA上的DNA片段,它不能独立进行繁殖。( > 细菌的异常形态是细菌的固有特征。( > 真核微生物比原核微生物更能在高温下生长。( > 芽孢是芽孢细菌的繁殖器官。( > 光合细菌和蓝细菌都是产氧的光能营养型微生物。( > 用来固化细菌培养基的多糖是琼脂。( > 微生物生长的衰亡期，细胞死亡速率超过细胞分裂速率。( > 碱基腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶存在于RNA或DNA，但只RNA中有胸腺嘧啶。( > 真菌最适的生长条件是有点碱性的。( > 凡是影响微生物生长速率的营养成分均称为生长限制因子。( > 三、选择题 1.大部分微生物___。 (a>是原生动物(b>帮助改善生活质量 (c>生活在海洋的底层(d>发现于外层空间 2.噬菌体是一种感染____的病毒。 (a>酵母菌(b>霉菌 (c>放线菌和细菌(d>原生动物 3.G+菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是___

(a>支原体(b>L型细菌(c>原生质体(d>原生质球 4.下列微生物中，______属于革兰氏阴性菌 (a>大肠杆菌(b>金黄葡萄球菌(c>巨大芽孢杆菌(d>.肺炎双球菌 5.下列能产游动孢子的霉菌是____。 (a>腐霉(b>毛霉 (c>赤霉(d>青霉 6.硝酸细菌依靠____方式产能。 (a>发酵作用(b>有氧呼吸(c>无氧呼吸(d>光合磷酸化 7.酵母菌适宜的生长pH值为____ (a>5.0-6.0(b>3.0-4.0(c>8.0-9.0(d>7.0-7.5 8.进人三羧酸循环进一步代谢的化学底物是____。 (a>乙醇(b>丙酮酸(c>乙酰CoA(d>三磷酸腺苷 9.称为微好氧菌的那些细菌能___生长。 (a>在高浓度盐中(b>在低浓度氧中 (c>没有ATP或葡萄糖(d>只在有病毒时 10.深层穿刺接种细菌到试管固体培养基中____。 (a>提供厌氧菌生长条件(b>除去代谢废物的一个机会 (c>增加氧气(d>增加钾和钠离子的数目 11.微生物分批培养时，在延迟期_____ (a>微生物的代谢机能非常不活跃(b>菌体体积增大 (c>菌体体积不变(d>菌体体积减小 12.下面所有特征皆适用于胞嘧啶和胸腺嘧啶，除了___之外。

环境微生物学实验报告.doc

环境微生物学实验报告 一、实验目的 （1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验器皿与材料 （1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。 （2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 三、实验步骤 （1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm 处时停止旋转。 （3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。 四、思考题 （1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了

找到目的物并移动到中央。 （2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？ 答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。 五、生物图 实验二、微生物培养基的配制与灭菌 一、实验目的 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。 二、实验器皿与材料 （1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。 （2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。 三、实验原理 培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型

《食品微生物检测技术》A卷

农产品质量检测专业及绿色食品生产与经营专业2015级《食品微生物检测技术》课程期末考试卷 （A卷） 一、名词解释（总分10分，每题2分） 1．菌落 2．菌落总数 3．培养基 4．乳酸菌 5．大肠菌群 二、填空题（总分20分，每空1分） 1．与食品工业密切相关的乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属中的等。采用法，检测酸奶中的各种乳酸菌可以获得满意结果。 2．我国卫生部颁布的食品微生物指标主要有、和三项。 3．在菌体形态观察中，需进行制片后才能进行显微镜下观察，观察细菌时采用的制片方法是，观察真菌采取的制片方法是。 4．微生物生长需要的营养要素有、、、、生长因子和能源。 5．根据细菌的生长曲线，可将细菌的生长分为、、、 四个时期，作为研究材料应取的细菌最合适。 6．一般培养基的制备主要程序可分为：称量、、调节pH、过滤、、加塞包扎、 和无菌检查等步骤。 7．无菌室的熏蒸消毒，主要采用熏蒸消毒法，测定无菌室无菌程度一般采用法。 三、单项选择题（总分20分，每题1分，将答案写在下面） 1——5：6——10： 11——15：16——20： 1.紫外线的杀菌机理可能是（） A.紫外线的高热作用 B.紫外线的辐射作用 C.紫外线凝固细菌蛋白质 D.紫外线干扰细菌DNA复制与转录

2.革兰氏染色的关键操作步骤是（） A.结晶紫染色 B.碘液固定 C.酒精脱色 D.复染 3.热力灭菌法分干热和湿热灭菌两类，并在同一温度下湿热灭菌效力较干热要强这是因为（） A.可迅速提高温度 B.湿热有一定潜热、穿透力大，促进菌体蛋白凝固 C.迅速破坏细菌的酶系统 D.促进糖类分解 4.关于金黄色葡萄球菌的描述不正确的是（）。 A.球状菌 B.G+ C.在血平板上形成的菌落为黑色D能产生凝固酶 5.GB/T4789.2-2010菌落总数检验方法是（）。 A.平板涂抹法 B.显微镜检查法 C.平板菌落计数法 D.菌落计数器法 6.检测金黄色葡萄球菌所用的增菌液是（） A.7.5%氯化钠肉汤 B.普通肉汤 C.蛋白胨水 D.TTB 7.在测定菌落总数时，首先将食品样品作成（）倍递增稀释液。 A.1：5 B.1：10 C.1：15 D.1：20 8.奶粉检验取样前，操作人员应（） A.用95％的酒精棉球擦手 B.用75％的酒精棉球擦手和容器口周圈 C.用65％的酒精棉球擦容器口周围 D.用酒精灯烤容器口周围 9.某微生物在有氧和无氧时均可以生长并可以利用氧，它属于（）。 A.微好氧菌 B.好氧菌 C.厌氧菌 D.兼性厌氧菌 10.一般培养基高压蒸汽灭菌的条件是：（） A.121℃/15-30min B.115℃/15-30min C.130℃/15-30min D.65℃/15-30min 11.采用湿热高压蒸汽灭菌，（）是影响灭菌质量的关键。

微生物检验技术考试要点(整理-中级)

检验技术资格考试考点精要——微生物学检验（中级） 1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。病毒分类：目、科、亚科、属、种。属名--VRir us 结尾的单词,亚科名--VRir inae结尾的单词,科名--VRir idae结尾的单词。目名—VRir ales。2004年ICTV 公布病毒分为：73个科、11个亚种、289个属。 2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生长。 3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用单片纸碟法、试管稀释法（以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC），两值越低则表示越敏感。MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC越小。 各药敏纸片间距不少于24mm，距平板内缘不小于15mm。 药物敏感实验判定标准：抑菌圈直径（毫米）：20以上极敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。 多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。 4.常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、免疫荧光技术（IF）、对流免疫电泳（CIE）、免疫印迹技术。 5.病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。 PCR技术—是选择DNA或RNA体外扩增技术，用标本提取DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94℃（作用1min氢键断裂形成单链DNA）、退火40-60℃（迅速冷却30-60s引物与DNA模板结合，形成局部双链）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料，从引物5’→3’端延伸，合成与模板互补的DNA链。），扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是PCR特异性的决定因素，PCR反应中TaqDNA聚合酶、引物加量过多，可引起非靶序列扩增。 变性DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1）溶液粘度降低。2）溶液旋光性发生改变。3）增色效应。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为" 退火"，Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件。核酸实验中经常以迅速冷却至4℃以下方式保持DNA的变性(单链)状态。 基因芯片技术（DNA芯片、DNA微阵列）—主要过程：DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。 核酸杂交（基因探针杂交技术）--是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根据碱基配对原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率＞70%（≥69%）为高度同源性，同源性在60%以上是一个种，同源性在60%--70%是同一种内不同亚种，同源性在20%--60%同一属内不同菌种，同源性

(完整版)环境微生物学试题(精华版)

环境微生物学试题答题要点(精华版) 一、名词解释（每题1.5分，计30分） 噬菌体：是侵染细菌、放线菌、霉菌等微生物的病毒。 菌落：菌落是指在固体平板培养基上，微生物的单细胞经过生长繁殖，形成肉眼能看到的，具有一定形态特征的微生物群体。PHB：是细菌细胞中含有的叫聚羟基丁酸盐的贮藏物质。 初生菌丝体：担子菌的孢子直接萌发而成的菌丝体，一般不会繁殖成为子实体。 分生孢子：分生孢子是由菌丝分枝顶端细胞或者由菌丝分化成的分生孢子梗的顶端细胞分割缢缩而成的单个或者成簇的孢子。间歇灭菌法：是利用常压蒸气反复灭菌的方法。 生物氧化：物质在生物体内经过一系列连续的氧化还原反应逐步分解并释放能量的过程。 化学杀菌剂：能够抑制和杀死微生物的化学物质。 共生：两个微生物在一起时形成特殊的结构和功能，两者高度的协调和彼此得利。 启动子：是一个“开始”的信号，它含有与RNA聚合酶结合并启动转录的保守序列。 操纵子：负责合成特殊蛋白质的基因簇。 生态系统：是生物群落与其生存环境组成的整体系统。 活性污泥：污水处理过程中的具有活性的微生物絮凝体。 联合固氮：是指某些生活在植物根的表面至根皮层细胞间而不进入植物根细胞的微生物进行固氮作用的现象。 反硝化细菌：反硝化作用是指微生物还原硝酸产生气态氮的过程。 活性污泥法：以活性污泥为主体的污水生物处理技术。 生物反应器：是通过酶、微生物、动植物细胞等的固定化，进行物质转化的反应器。 根际微生物：生长在植物根系直接作用土壤范围内的微生物。 纯培养：是指在实验室条件下，从一个微生物细胞繁殖得到的后代。 细胞壁：细胞壁是包在细菌细胞表面、内侧紧贴细胞质膜的较为坚韧并略具弹性的结构。 二、是非题（每题1分，计10分） ?溶源性细菌在一定条件诱发下,可变为烈性噬菌体裂解寄主细胞。( + ) ?细菌形态通常有球状、杆状、螺丝状三类。自然界中杆状最常见，球状次之，螺旋菌最少。( - ) ?某些藻类如团藻属存在群体形态。( + ) ?光合磷酸化和氧化磷酸化一样都是通过电子传递系统产生ATP。( - ) ?在固体培养基中，琼脂的浓度一般为0.5—1.0%。( - ) ?称为嗜碱菌的那些细菌是能在pH 7.0以上的环境中生长的细菌。( + ) ?在真核微生物细胞的染色体中，DNA是与组蛋白结合形成染色体的。( + ) ?EMP、ED等糖酵解途径的共同特点是将葡萄糖降解到丙酮酸。( + ) ?精确定量某些成分而配制的培养基是所有成分的性质和数量已知的培养基，称为天然培养基。( - ) ?在实验室中细菌不能形成菌落。( - ) 三、选择题（每题1分，计20分） 1. 适合所有微生物的特殊特征是__c__。 (a)它们是多细胞的（b)细胞有明显的核 (c)只有用显微镜才能观察到（d）可进行光合作用 2. 病毒缺乏__b___。 (a)增值能力(b)独立代谢的酶体系 (c)核酸 (d)蛋白质 3. G－菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是___d__。 (a) 支原体(b) L型细菌(c) 原生质体(d) 原生质球 4. 酵母菌的细胞壁主要含___d__。 (a) 肽聚糖和甘露聚糖 (b) 葡聚糖和脂多糖 (c) 几丁质和纤维素 (d)葡聚糖和甘露聚糖 5. 下列能产子囊孢子的霉菌是__c__。 (a) 毛霉和根霉 (b) 青霉和曲霉

2018年《预防疾控微生物检验技术》重点题(十一)

2018年《预防疾控微生物检验技术》重点题(十一) 单选题-1/知识点：病毒及病毒检验综合题 对病毒抵抗力叙述错误的是 A.大多数病毒60℃30分钟可被灭活 B.大多数病毒在－70℃下可存活 C.紫外线能灭活病毒 D.甲醛能使病毒灭活，但保留抗原性 E.所有病毒对脂溶剂都敏感 单选题-2/知识点：试题 初步将志贺菌从肠道杆菌中鉴别出来的生化反应方法是 A.培养基中加亚碲酸钾 B.菊糖发酵试验 C.尿素分解试验 D.胆汁溶菌试验 E.双糖铁培养基接种试验 单选题-3/知识点：试题 不能判定为有污染菌的是 A.单个菌落经斜面培养，形成不均匀的菌苔 B.有的菌落不在接种线上 C.单个菌落经平板划线培养后，形成大小不一的菌落

D.脑脊液或血标本培养后有多种细菌(3种以上)生长 E.葡萄球菌液体培养后，产生菌膜 单选题-4/知识点：试题 以氧化无机物提供能量的营养类型是 A.光能自养型 B.化能自养型 C.光能异养型 D.化能异养型 E.以上都错 单选题-5/知识点：细菌及细菌检验综合题 关于细菌耐药机制，下述叙述错误的是 A.R质粒是携带耐药基因的质粒 B.染色体突变可导致耐药 C.转座子可携带耐药基因 D.耐药基因极少通过接合转移 E.质粒编码的耐药通常是多药耐药 单选题-6/知识点：模拟试题 为了保持人体微生态平衡，应合理使用抗生素，主要原则中错误的是 A.选择用药前，除危重患者外，原则上应先做细菌药敏试验 B.尽量使用小剂量

C.疗程尽量缩短 D.尽量使用广谱抗生素，彻底杀死病原菌 E.对肠道外感染，尽量非经口用药 单选题-7/知识点：流行病学 脊髓灰质炎活疫苗现场试验结果表明：接种疫苗组儿童脊髓灰质炎的发病率是16/10万，接受安慰剂组儿童的发病率是57／10万，因此该疫苗的效果指数是 A.72% B.0.28 C.72 D.3.6 E.41 单选题-8/知识点：试题 三级生物安全柜设计的生物安全等级为 A.1级生物安全实验室 B.2级生物安全实验室 C.3级生物安全实验室 D.4级生物安全实验室 E.5级生物安全实验室 单选题-9/知识点：试题

环境微生物学试题库

环境微生物学试题库（一） 一、单项选择题（在下列每小题的四个备选答案中选出一个正确的答案，并将其字母标号 填入题干的括号内，每题1分。） 1．（）不是细菌细胞质中含有的成分。 A、水 B、蛋白质 C、核酸 D、磷壁酸 2．下面霉菌孢子中（）不是无性孢子。 A、分生孢子 B、子囊孢子 C、孢囊孢子 D、节孢子 3．适合细菌生长的C/N比为（）。 A、5：1 B、25：1 C、40：1 D、80：1 4．蓝细菌属于（）型的微生物。 A、光能自养 B、光能异养 C、化能自养 D、化能异养 5．所有微生物的世代时间（）。 A、是不同的 B、在30分钟之内 C、为 3小时 D、为12小时 6．嗜碱微生物是指那些能够（）生长的微生物。 A、在冷的温度下 B、在高压下 C、在高温下 D、在高pH值下 7．微生物分类中基本的分类单位是（）。 A、科 B、属 C、目 D、种 8．鞭毛是细菌细胞的特殊结构，它（）。 A、起源于细菌的细胞壁 B、存在于不少的杆菌和球菌中 C、是细菌运动的器官 D、可能具有性器官的功能 9．干燥可以（）。 A、杀死微生物营养细胞，甚至其休眠体 B、为微生物提供能量。 C、保存微生物 D、作为一种简便的杀菌方法。10．生活用水通常用氯气或漂白粉消毒，原理是氯气或漂白粉（）。 A、氧化微生物细胞物质 B、增加水的渗透压以抑制微生物活动 C、能抑制微生物的呼吸作用 D、起到表面活性剂的作用，抑制细菌的繁殖 11．可见光（）。 A、无论有氧无氧条件下，都可杀死微生物 B、为部分微生物提供能量 C、保护微生物免受病毒感染 D、刺激所有大型真菌子实体的分化12．实验室常用的培养细菌的培养基是（）。 A、牛肉膏蛋白胨培养基 B、马铃薯培养基 C、高氏一号培养基 D、麦芽汁培养基 13．微生物细胞氧化葡萄糖获得的能量主要以（）形式被细胞利用。

环境工程微生物学操作实验报告 范例

培养基的配制和灭菌 细菌的纯种分离、培养 接种技术及菌落形态的观察 姓名：张世凡 学号：201330480123 课程名称：环境工程微生物实验

一、实验目的 1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。 2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。 3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。 4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。 5、学会几种接种技术。 6、平板菌落计数。 7、抗Cu菌的筛选。 8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。 9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。 二、实验原理 1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的 需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。 本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。 2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭 菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。接种时对接种针等采用灼烧灭菌。 3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散 成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不宜太多，只能在 0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。平 板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。 4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另 一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。 5、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理 特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情况，初步辨别是何种类型的微生物。

微生物检验技术有关的习题.

习题七 一、填空 1．我国卫生部颁布的食品微生物指标有、和三项。 2．凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为性。 二、选择 1.乳糖初发酵试验通常在（）检测中用到。 A 乳酸菌 B. 酵母菌 C. 细菌总数 D. 大肠杆菌 2.大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖（）为阳性 A产酸 B 产酸产气 C 产酸不产气D产气不产酸 E 以上都不产生 3.在饮用水中检出（），不能推定为粪便污染 A 埃希氏大肠杆菌 B 沙门氏菌C志贺菌D产气肠杆菌E弧菌属 4.在检验肠道细菌时应将培养物置（）培养。 A 28 ℃ B 25℃ C 36±1℃ D 45℃ 5.微生物的检验中，大肠菌群的测定单位用（）表示。 A g/ml (g) B g/100ml (g) C MPN/100ml (g) D cfu/ml (g) 6.大肠菌群的生物学特性是() A发酵乳糖、产酸、不产气 B不发酵乳糖、产酸、产气 C发酵乳糖、产酸、产气 D发酵乳糖、不产酸、不产气 7.大肠菌群的生物学特征是（） A革兰氏阳性、需氧和兼性厌氧 B革兰氏阴性、需氧和兼性厌氧 C革兰氏阳性、厌氧 D革兰氏阳性、需氧 8.大肠菌群在EMB平板上的菌落特征是（） A白色针尖状 B金黄色葡萄球菌 C黑色 D红色 9.MPN是指（） A 100g样品中大肠菌群确切数 B 1g样品中大肠菌群确切数 C 1g样品中大肠菌群近似数 D 100g样品中大肠菌群近似数 10.测定大肠菌群时，经EMB平板分离后要确定是否为大肠菌群，还要经过（） A 三糖铁试验 B V-P试验 C复发酵和革兰氏染色 D硫化氢试验 12.大肠菌群测定的一般步骤是（） A初发酵-分离-染色-复发酵 B初发酵-分离-复发酵-染色 C初发酵-复发酵-分离 D初发酵-复发酵 13.大肠菌群初发酵的培养条件是（） A 36℃，24h B 25℃，一周 C 36℃，48h D 36℃，4h 14.大肠菌群复发酵的培养条件是（） A 36℃，24h B 36℃，4h C 36℃，48h D 36℃，12h 15.下列有关大肠杆菌的描述中，错误的是( ) A革兰氏反应呈阴性 B菌体形态是短杆菌 C菌体排列为一个或二个 D会形成孢子 16.检测大肠菌群时，待检样品接种乳糖胆盐发酵管，经培养如不产气，则大肠菌群( )。A阳性 B阴性 C需进一步试验 D需接种伊红美兰平板 17.我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过（）个大肠杆菌 A1 B3 C5 D 7 E 8 18.大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖（）为阳性 A产酸B产酸产气C产酸不产气D产气不产酸E以上都不产生

2018微生物检验技术师考点

1.仪器的标识管理：红（停用）黄（准用）绿（合格）各自所表明的状态。 2.分光光度计检测细菌浓度用可见光分光光度计，测细菌波长用６００ｎｍ。检测蛋白用紫外分光光度计（波长用２８０ｎｍ），它也可测核酸浓度（波长２６０ｎｍ）。选定分光光度计测定颜色反应光的波长是４５０ｎｍ。石英比色皿用于紫外分光光度计，玻璃比色皿用于可见光分光光度计。 3．紫外透射仪该仪器使用条件是暗室和紫外线，主要用于在紫外线下看ＤＮＡ条带。 4．色谱气相色谱可做微生物分类和鉴定，用于微生物的化学成分分析。液相色谱仪也可做微生物化学成分分析。质谱仪也可做微生物化学成分分析。 5．测序仪蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序，ＤＮＡ测序仪是测核苷酸排列顺序。能做ＤＮＡ测序的物质是质粒、噬菌体、ＰＣＲ产物。 6．扩增仪ＰＣＲ是聚合酶链反应缩写，能做ＰＣＲ称ＤＮＡ扩增仪。它能以一定ＤＮＡ片段为模板，变换温度，扩增该片段。常用的“枪”是实验室常用的微量可调移液器。 7．酶标做ＥＬＩＳＡ的仪器称酶标仪，做ＥＵＳＡ反应，其中主要设备有塑料凹孔板、洗板机和酶标仪。 8.电泳类别醋酸纤维膜电泳可用于免疫球蛋白鉴定，琼脂免疫电泳用于蛋白分离和鉴定，对流免疫电泳可测抗原或抗体，火箭电

泳测抗原量，交叉定量免疫电泳测抗原量。ＩＦＥ是等电聚焦电泳。ＰＦＧＥ是脉冲电场凝胶电泳，ＰＡＧＥ是聚丙烯酰胺凝胶电泳。 9.ＰＡＧＥ用于蛋白和核酸分离，原理是凝胶介质形成立体多孔网状结构，具有分子筛和电泳作用。分离条带上边是大分子，下边是小分子物质。过硫酸铵在ＰＡＧＥ制备起催化聚合作用。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ是十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，它用于蛋白分离，在此电泳中，丙烯酰胺浓度越大，线性分离围越小；该物浓度越小，线性分离围越大，十二烷基硫酸钠作用是解离蛋白，用标准蛋白做标识测验电泳条带分子量。在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中常用蛋白染料是考马斯亮蓝，硝酸银也是其常用染料。该电泳中缓冲液重要成分为甘氨酸。 10、等电聚焦电泳其原理是以两性电解质制造凝胶有不同ｐＨ，使带不同电荷的多肽在电泳条件下于等电点停留。两性电解质是制备该电泳凝胶不同ｐＨ重要物质，用聚丙烯酰胺制备等电聚焦电泳凝胶。这种电泳主要用于蛋白质分离。 11、脉冲电泳脉冲电泳用于核酸分离，其优点是分离大片段核酸。用琼脂糖制备该电泳凝胶的介质。这种电泳的电场为正交的交变脉冲电场。脉冲电场凝胶电泳条带靠近负极为大片段ＤＮＡ，靠近正极为小片段ＤＮＡ。ＤＮＡ染色可用溴化乙锭，也可用硝酸银。因溴化乙锭有致癌作用，故在使用时应注意。丙烯酰胺具有神经毒，在用时注意个人防护。 12、琼脂糖凝胶电泳此电泳用于核酸分离与纯化，用水平电泳槽。分离ＤＮＡ片段最佳围为２００ｂｐ～５０ｋｂ。