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loading buffer的成分及作用

loading buffer

loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。6×loading buffer 一般配置:6×Loading buffer:30mM EDTA 36%(v/v) Glycerol (甘油)0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF (二甲苯青FF) 0.05%(w/v) Bromophenol BLUE (溴酚蓝)5×SDS-PA GE Loading Buffer配制方法组份浓度:250mM Tris-HCl(pH6.8)10%(W/V)SDS0.5%(W/V)BPB 50%(V/V)甘油5%(W/V)β-巯基乙醇配制量:5mL配制方法: 1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。1M Tris-HCl 1.25mL SDS0.5g BPB25mg甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右