抗人球蛋白试验Coomb

抗人球蛋白试验Coomb`s

1.原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后，则与红细胞上粘附的IgG相结合，使红细胞串并在一起而发生凝集，此即为直接抗人球蛋白试验（ＤＡＴ）。患者血清中存在游离的自身抗体，则可用Rno(D)阳性的Ｏ型红细胞加以吸附，再用已吸附有自身抗体的红细胞与AHGS 作用而发生凝集反应，此即为间接抗人球蛋白试验（ＩＡＴ）。

2.试剂：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美国产）。

3.操作：

3.1在80×60mm平板玻片，用油漆均分成12个小格。

3.2将各种抗人球和C3分别作倍比稀释（2；4；8-----）后；依次吸取10ul于格内，做好标记。

3.3每孔加入洗涤后5％被检RBC悬液10ul。

3.4混匀放密闭保湿盒内，37度保温30分钟；（每隔10秒混匀一次）于镜下作效价和分值测定。

4.结果：

（＋－）：2分反应液中有3－5个小凝块（4个RBC以上紧密聚集）。

（＋）：4分反应液中有6－10个小凝块游离RBC约3／4。

（＋＋）：6分反应液中有11－30个中等大小凝块游离RBC约1／2。

（＋＋＋）：8分反应液中有充满凝块游离RBC约1／4。

（＋＋＋＋）：10分反应液RBC呈结实而大的凝块游离RBC极少。

5.正常参考值：阴性。

6.注意事项：

6.1患者血标本必须新鲜，血球洗涤要干净不带有血浆蛋白，一般生理盐水理为血清量的４０００倍以上。

6.2每次试验应作阴阳对照。

6.3对研究温抗体型AIHA而言，应选择单抗特异类（抗IgG、IgC、3d、C3c等）的ＡＨＧＳ，不仅诊断所需，且可将温型抗体ＡＩＨＡ进一步分型。

6.4血液用ＥＤＴＡ抗凝为佳且应立即试验，以防标本放置过程中有非特异性的补体结合，致出现假阳性。

7.临床意义：

7.1温抗体型导致的AIHA,DAT,强阳性，IAT多为阴性，但亦可阳性。

7.2药物诱发的ＩHA，根据类型不同：多巴类ＤＡＴ与ＩＡＴ均为阳性；青霉素类ＤＡＴ阳性，ＩＡＴ阴性；奎宁类因其抗体多为IgM型，ＤＡＴ多为阴性；如改用抗人全血球蛋白则ＤＡＴ可为阳性。

7.3冷凝集素综合征：用抗人全血清的抗人球与３７度洗涤过的患者红细胞用试验，ＤＡＴ亦可阳性，如用单抗IgG或IgM的特异抗血清用试验，ＤＡＴ则为阴性。３７度作ＩＡＴ结果阴性，温度下降则ＩＡＴ阳性。

7.4ＰＮＨ：患者在溶血发作时，ＤＡＴ强阳性，发作后转阴性；ＩＡＴ常为阴性。

7.5新生儿同种免溶贫：本病是孕妇的血型抗体通过胎盘进入胎作的血液，对胎儿红细胞的抗原起破坏作用而致的溶血病。故母亲与胎儿的Rh血型、ＡＢＯ型或其它血型不合时均可发生。因Rh抗体引起溶血的病例，全抗或单抗IgG或IgM呈阳性，且持续数周，经换血与输后阴性转。因ＡＢＯ血型不合引起溶血的病例，ＤＡＴ多为阴性或弱阳性。

免疫比浊法检测免疫球蛋白

免疫比浊法检测免疫球蛋白 一、实验目的 利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品） 二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。 分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。 本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。 三、实验材料 免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管） 微量加样枪、ep管（1.5mL离心管） 酶标仪、水浴箱 四、实验步骤 1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。 2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。 3.混匀后37℃水浴5min。 4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。 5.混匀后37℃水浴10min。 6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。 五、实验结果与数据处理 2.标准曲线

直接抗人球蛋白试验操作规程

XXX医院 直接抗人球蛋白试验操作规程 1、目的保证试验结果的准确性,确保临床输血安全。 2、适用范围XXX医院输血科。 3、职责输血科具有专业技术的工作人员负责本院患者直接抗人球蛋白检测,但只对该单份标本负责。 4、相关文件 试剂采购、保存与使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存与报废管理程序 5、相关记录 仪器设备的采购、使用与维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水与消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接与报废记录 6、实验原理 抗球蛋白试验(Coombs试验)就是测定结合在红细胞上的抗体与/或补体的主要方法。直接Coombs试验就是检测体内已被抗体与/或补体致敏的红细胞。间接Coombs试验时通过血清与细胞的孵育,证实抗体与/或补体在体外的结合。 抗体分子与补体成分都就是球蛋白。用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。抗人球蛋白试剂可以与致敏在红细胞上的人球蛋白反应,通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集,呈现阳性反应。 7、仪器设备 玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 8、试剂 生理盐水、抗D(IgG)试剂(效价≧1:8),直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d),均为有合格证件的正品。 9、试剂保存与性能指标

9、1、保存:直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)应置于2~8℃冷藏保存,切勿反复冻融。储存条件下有效期为24个月。 9、2、性能指标:直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)为多特异性试剂。 外观:应澄清透明,无杂质; 灵敏度试验:分别与强抗体[抗D(IgG)],中等强度抗体(抗Jka)与弱抗体(抗Fya)致敏细胞反应,结果均为阳性。 效价:与IgG(抗D)致敏细胞凝集效价≧1:4;与C3致敏细胞凝集效价≧1:1。 特异性试验:阴性对照试验——与加入AB血浆的Rh(D)阳性细胞反应,结果为阴性;阳性对照试验——与抗D(IgG)致敏细胞反应,结果为阳性。 10、标本收集与处理 ①应使用EDTA抗凝标本,可反映体内红细胞被补体致敏的真实情况。 ②若怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试验阳性,其血液标本凝固应保持在37℃,直到血清被分离出来为止。 11、实验方法与步骤 ①用生理盐水制备受检者3%红细胞悬液备用。 ②将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的试管中,用生理盐水洗涤3次[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出]。 ③加入2滴抗IgG,C3d,以3400转/分钟(1000g)离心15秒。 ④将取出的试管持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止。 ⑤用肉眼或借助光学显微镜观察凝集情况,并按凝集程度进行初步判读结果并记录。 ⑥若初步判读结果为阴性,则在室温中放置5~10分钟,再离心一次,重新判读结果并记录。 ⑦阳性对照试验(IgG抗D致敏细胞): 将1滴阳性对照细胞加入干净的试管中;再加入2滴直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d);以3400转/分钟(1000g)离心15秒;将取出的试管持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止;再进行初步结果判读。 对初判为阴性结果的,再在试管中加入1滴阳性对照细胞,进行再离心、再悬浮与再判读结果。如果在制备阳性对照细胞悬液时,能充分去除所有未结合的球蛋白,则此步对照试验结果为阳性。(此步对照很关键,它就是检测细胞就是否洗涤充分的唯一方法。) ⑧阳性对照细胞(IgG抗D致敏细胞)制备:

23例直接抗人球蛋白试验阳性患者输血结果分析及血液成分选择_徐静

23例直接抗人球蛋白试验阳性患者输血结果分析及血液成分选择 徐静 （赣州市人民医院输血科，江西赣州341000） 摘要：目的：对使用微柱凝胶交叉配血中直接抗人球蛋白试验阳性结果进行分析，探讨解决疑难配血的处理方法，并选择合适的血液成分。方法：对使用微柱凝胶交叉配血中23例直接抗人球蛋白试验阳性患者的临床资料进行回顾分析。结果：23例直接抗人球蛋白试验阳性患者微柱凝胶交叉配血试验中2例为不规则抗体阳性、主次侧均为阳性，21例为不规则抗体阴性、主侧阴性次侧阳性。结论：不规则抗体阳性、主次侧均为阳性的为自身溶血性贫血患者，宜选择不规则抗体对应抗原阴性的滤白洗涤红细胞；不规则抗体阴性、主侧阴性次侧阳性的血液病及尿毒症患者宜选择滤白洗涤红细胞；药物导致的不规则抗体阴性、主侧阴性次侧阳性贫血患者可选择滤白悬浮红细胞。 关键词：直接抗人球蛋白试验；疑难配血；血液成分 中图分类号：R457．1+3文献标志码：A文章编号：1001－5779（2012）06－0875－02 在输血前微柱凝胶交叉配血试验中常发现不相容，究其原因是患者直接抗人球蛋白试验（DAT）阳性，给治疗带来困难。直接抗人球蛋白试验（DAT）是利用抗人球蛋白血清与体内已被不完全抗体或补体致敏的试验。这些患者血清中往往含有自身抗体，当这些患者需要输血治疗时，自身抗体或同种抗体给输血前的交叉配血和血液成分的选择造成了很大的困难。1资料与方法 1．1一般资料本院2012年3 9月23例DAT阳性患者，年龄21 73岁，其中男12例，女11例，其中血液病7例，肾脏疾病6例，自身溶血性贫血1例，骨髓移植1例，外科使用头孢类药物引起的疾病8例。 1．2材料 — 578 —

《抗人球蛋白检测试剂技术审查指导原则》

《抗人球蛋白检测试剂技术审查指导原则》 （征求意见稿） 本指导原则旨在指导注册申请人对抗人球蛋白检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对抗人球蛋白检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则不包含的研究内容，可自行补充。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其它方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、范围 抗人球蛋白检测试剂可进行直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试验，主要用于不规则抗体筛查、交叉配血、抗体致敏红细胞的检测等。 本指导原则适用于抗人球蛋白检测试剂，同时适用于不同的检测方法,如试管法、柱凝集法等，但不适用于血源筛查用抗人球蛋白检测试剂。 本指导原则仅包括对抗人球蛋白检测试剂注册申报资料中部分项目的要求，适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。其他未尽事宜，应当符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）（以下简称《办法》）等相关法规要求。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料的撰写应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（总局2014年第44号公告）（以下简称“44号公告”）的相关要求。内容主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品在国内外批准上市的情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从灵敏度、特异性、浓度/效价、重复性等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的异同。

间接抗人球蛋白试验标准操作规程

间接抗人球蛋白试验标准操作规程 (微柱卡式法) 一、目的 为规范抗人球蛋白（Coombs 试验）的技术操作，保证试验的结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。 二、使用范围 适用于输血科进行抗人球蛋白试验的操作。 三、职责 输血科技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。 四、原理 利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。 五、试剂及材料 (一)试剂：抗人球蛋白检测卡（西班牙 Diagnostic Grifols,S.A公司生产）、IgG 抗D、正常人AB血清 (二)设备：戴安娜专用离心机（型号：DG SPIN）、戴安娜专用孵育器（型号：DG THERM）、微量移液器、离心机、试管等 六、标本要求： (一)抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml,在3000r/min条件下离心5分钟备用。 (二)标本保存：血液样本必须密封，2-8℃保存7天。 七、操作步骤 (一)标本及其他试剂处理：

1、实验前将未开的抗人球蛋白检测卡放置于戴安娜专用离心机离心9分钟左右，取出待用 2、离心标本取血清备用（或准备已知抗体的血清） 3、配制1%已知抗原红细胞悬液（或1%受检红细胞悬液） 4、1%D阳性红细胞：任选3个O型D阳性红细胞混合，配成1%红细胞悬液 (二) 在抗人球蛋白检测卡上标明患者姓名、病房床号、阴性和阳性对照，撕掉卡上的封条 (三)按下表将各种反应物加入相应反应孔中。 间接抗人球蛋白试验操作步骤 反应物待测孔阳性对照孔阴性对照孔血清（已知或受检）25ul －－ 1%红细胞悬液（受检或已知）50ul －－ IgG抗D血清－25ul － 1%D阳性O型红细胞悬液－50ul 50ul AB型血清－－25ul (四) 将卡放入37℃孵育箱15分钟，移出放入离心机9分钟，取出观察结果。 八、结果判定： 阳性对照孔凝集，阴性对照孔不凝集，待测孔凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体（或受检红细胞上有相应抗原），待测孔不凝集为阴性。如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。 九、注意事项： 如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。

抗人球蛋白试验

抗人球蛋白试验，又称Coombs’试验，是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据。【参考值】正常人直接与间接试验均为阴性，Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。 【临床意义】 直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接试验是检查血清中游离的不完全抗体。直接Coombs’试验较间接试验对AIHA更有诊断价值。用特异性单价抗血清可将AIHA 分为三型：IgG／C3阳性，占67％；单独IgG性，占20％；单独C3性，占13％； 阳性结果 本试验阳性结果主要见于下列几种情况： 1.自身免疫性贫血，（IgG）型引起的溶血性贫血，本试验直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性。 2.药物诱发的免疫性溶血性贫血①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反应均为阳性。③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部分均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供应补体）则结果为阳性。 3.冷凝集素综合征直接反应阳性，间接反应阴性（试验需在37℃下进行）由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。 4.新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。 5.红细胞血型不合引起的输血反应，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性，Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾妊娠胎儿为Rh阳性者，间接反应阳性，如无上述接触，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变为阳性。 6.其它在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。 【要求】 用肝素或EDTA抗凝血做直接Coombs’试验，血清做间接Coombs’试验。 抗人球蛋白试验 项目意义: 抗人球蛋白试验(anti human globulin test) 又 称Coombs试验。 [临床意义] 1．正常人抗人球蛋白试验直接、间接试验均呈阴 性。 2．温抗体型自身免疫性溶血性贫血、新生儿同种 免疫溶血病常呈直接试验阳性反应。

抗人球蛋白试验Coomb

抗人球蛋白试验Coomb`s 1.原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后，则与红细胞上粘附的IgG相结合，使红细胞串并在一起而发生凝集，此即为直接抗人球蛋白试验（ＤＡＴ）。患者血清中存在游离的自身抗体，则可用Rno(D)阳性的Ｏ型红细胞加以吸附，再用已吸附有自身抗体的红细胞与AHGS 作用而发生凝集反应，此即为间接抗人球蛋白试验（ＩＡＴ）。 2.试剂：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美国产）。 3.操作： 3.1在80×60mm平板玻片，用油漆均分成12个小格。 3.2将各种抗人球和C3分别作倍比稀释（2；4；8-----）后；依次吸取10ul于格内，做好标记。 3.3每孔加入洗涤后5％被检RBC悬液10ul。 3.4混匀放密闭保湿盒内，37度保温30分钟；（每隔10秒混匀一次）于镜下作效价和分值测定。 4.结果： （＋－）：2分反应液中有3－5个小凝块（4个RBC以上紧密聚集）。 （＋）：4分反应液中有6－10个小凝块游离RBC约3／4。 （＋＋）：6分反应液中有11－30个中等大小凝块游离RBC约1／2。 （＋＋＋）：8分反应液中有充满凝块游离RBC约1／4。 （＋＋＋＋）：10分反应液RBC呈结实而大的凝块游离RBC极少。 5.正常参考值：阴性。 6.注意事项： 6.1患者血标本必须新鲜，血球洗涤要干净不带有血浆蛋白，一般生理盐水理为血清量的４０００倍以上。 6.2每次试验应作阴阳对照。 6.3对研究温抗体型AIHA而言，应选择单抗特异类（抗IgG、IgC、3d、C3c等）的ＡＨＧＳ，不仅诊断所需，且可将温型抗体ＡＩＨＡ进一步分型。 6.4血液用ＥＤＴＡ抗凝为佳且应立即试验，以防标本放置过程中有非特异性的补体结合，致出现假阳性。 7.临床意义： 7.1温抗体型导致的AIHA,DAT,强阳性，IAT多为阴性，但亦可阳性。 7.2药物诱发的ＩHA，根据类型不同：多巴类ＤＡＴ与ＩＡＴ均为阳性；青霉素类ＤＡＴ阳性，ＩＡＴ阴性；奎宁类因其抗体多为IgM型，ＤＡＴ多为阴性；如改用抗人全血球蛋白则ＤＡＴ可为阳性。 7.3冷凝集素综合征：用抗人全血清的抗人球与３７度洗涤过的患者红细胞用试验，ＤＡＴ亦可阳性，如用单抗IgG或IgM的特异抗血清用试验，ＤＡＴ则为阴性。３７度作ＩＡＴ结果阴性，温度下降则ＩＡＴ阳性。 7.4ＰＮＨ：患者在溶血发作时，ＤＡＴ强阳性，发作后转阴性；ＩＡＴ常为阴性。 7.5新生儿同种免溶贫：本病是孕妇的血型抗体通过胎盘进入胎作的血液，对胎儿红细胞的抗原起破坏作用而致的溶血病。故母亲与胎儿的Rh血型、ＡＢＯ型或其它血型不合时均可发生。因Rh抗体引起溶血的病例，全抗或单抗IgG或IgM呈阳性，且持续数周，经换血与输后阴性转。因ＡＢＯ血型不合引起溶血的病例，ＤＡＴ多为阴性或弱阳性。

【名称】抗人球蛋白试验

【名称】抗人球蛋白试验 【英文名】anti-human globulin test 【别名】Coombs试验 【概述】 抗人球蛋白试验又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法。将抗人球蛋白血清加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗人球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C、C)。 【原理】 凝集反应。 【试剂】 (1)直接抗人球蛋白试验： ①抗人球蛋白血清(广谱及单价)。 ②5%受检者红细胞。 ③5%IgG致敏红细胞。 (2)间接抗人球蛋白试验： ①抗人球蛋白血清(广谱及单价)。 ②受检血清(或已知抗体的血清)。 ③5%已知抗原的红细胞悬液(或5%受检红细胞悬液)。 ④不完全抗D血清。 ⑤AB型血清。 ⑥5%D阳性红细胞悬液。 【操作方法】 (1)直接抗人球蛋白试验： ①在标记好的10或12×60mm试管内加1滴5%受检者红细胞生理盐水悬液。再用生理盐水洗涤3～4次。末次洗涤后，将上清液全部倾出，尽量吸干，立即加入1～2滴最适广谱抗人球蛋白血清，混匀。

②以1000r/min离心15s，借助光镜检查。从试管底部松动红细胞，轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复轻轻地倾斜试管，直到呈现均匀的细胞或者凝集物为止。 ③若为阴性，再加1滴5%IgG致敏的红细胞，以1000r/min离心15s。如凝集，表明原先的阴性结果是正确的。如不凝集，则不是先前的洗涤不充分，就是抗人球蛋白试剂失效之故。这是一个很重要的对照。 ④直接抗人球蛋白试验判断为阳性者，应继续用单特异性的抗人球蛋白血清试验，以便确定红细胞是被IgG致敏，还是受补体致敏。单价特异性抗人球蛋白血清的使用方法与广谱抗人球蛋白血清相同。 (2)间接抗人球蛋白试验： ①在标记好的10(12)×70mm试管内加3滴患者血清，再加5%红细胞悬液1滴，另外将2滴不完全抗D血清加入阳性对照管中2滴AB型血清加入阴性对照中，分别加入5%阳性红细胞悬液1滴，混合后，放37℃水浴1h。 ②用生理盐水洗涤致敏后的红细胞3次，以3000r/min离心45s，倾去上清液，尽量吸干，随即加入1～2滴抗人球蛋白血清，混匀。 ③以1000r/min离心15s，借助光镜检在，从试管底部松动红细胞，轻轻地摇动，直到松动所有的细胞，然后反复轻轻倾斜试管，直到呈现均匀的细胞或凝集物为止。阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集。 ④受检管若为阴性，加1滴2%～5%IgG致敏的红细胞悬液，以1000r/min 离心15s后看结果，如凝集则结果是正确的，否则是不正确的。 ⑤间接抗人球蛋白试验阳性者，继续用单价特异性抗人球蛋白血清检测，方法与用广谱抗球蛋白血清一样。 【正常值】 直接法：阴性。 间接法：阴性。 【临床意义】 (1)自身免疫性溶血性贫血：温抗体型直接法阳性、间接法阴性。 (2)药物诱发的免疫性溶血性贫血： ①α-甲基多巴型：直接和间接法均阳性。 ②青霉素型：直接法阳性、间接法阴性。

间接抗人球蛋白试验(IAT)操作规程

间接抗人球蛋白试验（IAT）操作规程 SXYJ-GZ-0211 1目的检出和鉴定不完全抗体；红细胞血型抗原鉴定。 2适用范围血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验及其他特殊研究。3职责检测者负责按此程序进行间接抗人球蛋白试验操作。 4材料与设备抗人球蛋白试剂（-IgG/-C 3d、-IgG、-C 3 d）、 IgG抗D血清、AB型血清、3%D 阳性红细胞悬液、0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机；CH20BIMF200型电子显微镜；S648型电热恒温水温箱（37℃）等。 5操作方法 5.1待检标本的准备及要求 5.1.1待检标本准备两管血，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝； 5.1.2血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清； 5.1.3细胞：从待检的抗凝标本中吸出部分红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤四遍，配制 成3%红细胞盐水悬液； 5.1.4根据试验目的准备相应的抗血清（待检血清或已知抗体的血清）、3%已知抗原的红细 胞或受检红细胞悬液。 5.2盐水悬浮法 5.2.1取试管3支，标明受检管、阳性对照及阴性对照/自身对照； 5.2.2按下表将各反应物加入相应试管内，混匀，37℃孵育45～60min； 5.2.3用生理盐水洗涤3次（KA-2200型离心机Ⅲ档）。末次洗涤后，将上清液除尽，并用 滤纸将附着于管口的盐水吸去； 5.2.4每管加抗人球蛋白血清2滴混匀， 3400转离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），观 察反应结果。 5.3Liss悬浮法 5.3.1将被检者红细胞用生理盐水洗涤3次，用Liss配制3%红细胞悬液； 5.3.2按下表在试管中加入各反应物后，37℃孵育15min； 5.3.3以下同步骤5.2.3和5.2.4。 5.4PEG法 5.4.1按下表在试管中加入各反应物后，每管中加入PEG4滴，37℃孵育15min； 5.4.2以下同步骤5.2.3和5.2.4。

直接抗人球蛋白试验(DAT)操作规程

直接抗人球蛋白试验（DAT）操作规程 SXYJ-GZ-0210 1目的用于检测体内致敏的红细胞。 2适用范围研究药物致敏的红细胞、免疫性溶血性贫血的诊断、新生儿溶血病的诊断、输血反应等鉴定。 3职责检测者依据此程序进行直接抗人球蛋白试验操作。 4材料与设备抗人球蛋白试剂（-IgG/-C3d、-IgG、-C3d）、阴性对照细胞（试剂红细胞）； 一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机；CH20BIMF200型电子显微镜等。Biovue工作站（包括微柱凝胶卡、低离子增强液、孵育器、离心机）。 5操作方法 5.1试管法 5.1.1待检标本应为EDTA抗凝血，吸出部分红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤四遍，配制 成2%红细胞盐水悬液。 5.1.2取待检红细胞盐水悬液1滴，移入加有2滴抗人球蛋白血清的小试管内，混匀。5.1.3阴性对照抗人球蛋白血清2滴，加2％试剂红细胞悬液1滴，混匀。 5.1.4待检管以及阴性对照管同时以3400转/分，离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），轻 轻揺动，肉眼及显微镜下观察结果。 5.2微柱凝胶法方法参见微柱凝胶技术操作规程（SXYJ-GZ-0228）。 6结果判定原则如阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者为直接抗人球蛋白试验阳性，不凝集者为阴性。凝集强度可参见SXYJ-GZ-0202: 5.2.1.6对结果进行判断。 7注意事项 7.1标本采取后应立即进行试验，延迟或中途停止试验可使抗体从细胞上丢失。 7.2抗人球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带或后带现象而误为阴性 结果。 7.3也有将浓的抗人球蛋白血清在白瓷板上做倍量系列稀释，再各加受检者10％洗涤红细胞 悬液1滴，不断转动瓷板，肉眼观察凝集反应。凡出现凝集的最高稀释倍数的倒数即为直接抗人球蛋白试验效价。这种效价并不表示受检者红细胞被不完全抗体致敏的强度。 7.4受检红细胞一定要用盐水洗涤4次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性 结果。 7.5当实验结果有疑问时，可以对阴性结果进行核实：即在该试管中再加1滴IgG抗D致敏