生化分析干扰试验讲解学习
分析干扰试验
一．分析的干扰
分析的干扰广义上是指某一物质对某分析物的浓度或催化活力测定中任何一步骤的影响作用称为分析干扰。很难区分清楚2个相互很近的词义“干扰”(Interference)和“固有的特异性欠
缺”(Inherent lack of specificity)。分析物(Analyte)是标本中准备测定的组分。干扰物(Interferent)也是标本中的一个组分，它不是被分析物，但它改变最后的结果。干扰作用可看成是绝对的或相对的，绝对干扰作用是：一般病人标本中不含有某物质，一旦它的存在即会引起干扰。相对干扰作用：一般病人标本中含有某物质，其含量相当于混合样品中的平均浓度，不同病人样品中含该物质的浓度变化引起干扰作用的变化。从实用考虑：相对的内容在临床实验中更有意义。
例如：在标本中含有120g/L蛋白和正常标本含有70g/L相比较确定蛋白会引起干扰。这样，纯粹的干扰作用是50g/L而不是120g/L蛋白。在正常血清的基体中70g/L蛋白的作用是恒定的，相对于真正的分析物是系统的方法偏倚。常以空白测定和样品的预处理来消除这样的干扰所产生的恒定偏倚。用含有血清的校准品作校准及计算补偿因子也是用来消除这类系统偏倚。
干扰不涉及在分析前就使分析物浓度发生真实变化的作用，这些作用可以是：
·体内药物作用（如：因使用药物后的生理响应使激素浓度变化）。
·标本处理（由于蒸发、溶血或者血清和凝块过长的不分离使电解质、蛋白、水含量的改变）。·标本收集[例如：在静脉滴注时（内含分析物）取样]。
这些作用可能会影响实验结果的临床应用，但不能视作“分析干扰”。因为不管分析物原来如何，一个检测系统或分析方法应检测标本中所有的分析物。分析干扰所引起最终结果是人为的增加（阳性干扰）或减少（阴性干扰）。
二．干扰物质的来源：
在标本中的干扰物可分成内源性和外源性；
1．体内某些病理条件下产生的（例如：胆红素、脂肪、蛋白质、血红蛋白等）；
2．在病人治疗时摄入的（例如：药物、非肠道维生素、血浆增溶剂、抗凝剂等）；
3．自我摄入（营养补充、饥饿过度、酒精或药品中毒）；
4．由于标本被污染（抗凝剂、防腐剂、血清分离器、收集、容器、塞子等）；
三．干扰的机理：
由于某干扰物的存在以多种方式影响分析过程。
1．物理作用：
干扰物具有的物理性质，使它和分析物一样被检测和测定出来。如它的颜色、光散射（光吸收）、洗脱位置、电极响应等。
干扰物可能会改变标本的物理特性：如表面张力、粘度、浊度、离子强度等，干扰检测结果。2．化学作用
干扰物可能会影响酶活力，例如：阻止金属激活剂结合到活性中心上去，氧化必须的巯基等；干扰物也可破坏或阻止反应，例如：破坏试剂或抑止指示反应。
干扰物也可改变分析物的形式，例如：形成复合物或沉淀。
3．非特异性
干扰物可能和分析物以同样的方式参与反应，例如：苦味酸肌酐方法中酮酸干扰，重氮胆红素方法中吲哚酚硫酸盐的干扰。
在免疫化学方法中干扰物可能和抗体发生交叉反应。例如：茶碱方法中咖啡因的干扰。干扰物可能催化某一反应，反应结果中和了底物。例如：腺苷激酶可在CK反应中消耗底物ADP。4．水取代作用
非水物质（蛋白、脂质），由于取代了血浆中部分水体积，影响了一些分析物的测定。这些作用考虑或不考虑为干扰作用，取决于要求的结果是以总体积的浓度表示，还是以血浆水的浓度来表示。临床要求较之分析原理更重要，须确定是否考虑取代作用是一个干扰，例如：用火焰光度法或间接电位法作Na+测定时，高脂血症被考虑为是一种干扰。因为Na+在血浆水中的浓度在临床上有重要意义。
四. 临床重要性：
1．干扰对于总分析误差有时是一个主要因素，每个病人结果和真值间的偏离可能有三个原因：
1) 系统偏差；
2) 不精密度；
3) 干扰。
干扰实验评价主要估计偏倚和不精密度的作用，干扰试验通常受标本条件所限，对实验
室技术人员而言通常是溶血、黄疸和脂血。
2．干扰可视作系统的和随机的。
·对一个特别监测的病人而言，如干扰物总是以同一浓度存在的话，偏倚将是恒定的，
偏倚随干扰物浓度而改变。这种干扰是系统的。
·对于一给定病人人群，由于干扰物浓度各异，由干扰物所形成的偏倚将是随机的，而
且显著地作用于总随机误差，影响病人结果。
无论何种情况，由一个干扰物引起的未预料作用可导致对实验室结果解释的严重误差。3．实验室是克服这些问题的主要角色，可由：
1) 只使用对干扰物的敏感度不高和确定的方法。
2) 获取资料，确定是否有干扰物质存在于样品。
3) 告诉医生，由于有干扰存在，结果可能是不可靠的。
厂商可提供给实验室完整的有关干扰评价的结果文件，这是很好的资料来源。
五．实验步骤的综述：
有两种基本方法评价检测系统或分析方法对干扰的敏感性。但每一种都有内在局限性，建议应一起使用以相互补充。
1．第一种方法是：将阳性干扰物加入临床标本的混合液（干扰测定样品）中，和不加的同一混合液（干扰对照样品）组比较有无偏倚，称为“配对差异”试验。混合液的干扰物浓度应具临床决定性水平，根据分析物情况应做几个临床决定性水平浓度处的实验。一般最有效的方法是在较高浓度下对系列可能的干扰物作初步筛选。如果没有发现具临床显著意义，则该物质不是干扰物，没有必要进一步做实验。反之，具临床显著意义的，应进一步作评价以确定干扰物的浓度和干扰程度间的关系，这类实验称为“剂量响应”(Dose-response)系列。
2．第二种方法是：从被选择的病人标本组中寻找不准确的结果。选择原则：
·疾病（如：来自心脏病、肝病、或肾病病人的标本）；
·药物（如：使用过某种想了解的药物的病人标本）；
·其它不正常组份（如：具不正常胆红素、脂质、血红蛋白或蛋白的标本）。这个方法需要参考方法，即具低干扰性的良好特异性的方法，以确定在比较研究中的“真值”。
3．第一种人为加入方法的局限性：
1) 在临床标本中的真实干扰物可能不是原来的药物，而是代谢产物。
2) 实验标本基体并不代表典型的有问题的临床标本。
3) 加入的物质和临床标本中的干扰物不相同，如：蛋白结合、沉淀、或不均一性（异质性）。
4) 可能实验水平选择得太高或太低以至不真实。
4．第二种方法的局限性主要是对实验变异缺乏控制对照。
1）本方法并不能确定原因和作用的关系，它只能说明偏倚和估计的干扰物的某水平的相对关系。
2) 如果标本不新鲜，将会失去某些易变组份（如乙酰乙酸）。
3) 病人通常用多种药物，因此难于证实何种药物的干扰作用。
4) 按疾病和用药对病人分类，不是不可能，至少对许多实验而言是非常困难的。
5) 实验是一种机遇，成功取决于在检测的病人人群的标本中是否有此干扰存在。
6) 很少有公认的参考方法。有的参考方法难以在常规实验室中使用。另外，参考方法可能也同样的被干扰。
无论怎样，第二种方法对证实干扰物是有用的，不然很易被漏去。这也是唯一的方法可检出药物代谢物干扰作用，它也是可肯定在真实标本中有干扰的一个方法。
生物化学实验报告册
生物化学实验报告册 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入
水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。 实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。 实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。 1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。 2．实验报告的前三部分①实验原理、②实验材料、③实验步骤要求在实验课前预习后撰写，作为实验预习报告的内容。预习时也要考虑并设计好相应实验记录的表格。 3．每项内容的基本要求 实验原理：简明扼要地写出实验的原理，涉及化学反应时用化学反应方程式表示。 实验材料：应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪
分析前各因素对生化检验结果的影响
分析前各因素对生化检验结果的影响 汉川市第二人民医院许少明胡军华 生化检验目前已经成为临床医师诊断疾病、观察疗效、判断病情的发展和预后不可缺少的工具，但是影响生化检验结果的因素很多，也很复杂。随着近年来科学技术的不断发展，各医院检验科先后引进了各种类型的自动化生化分析仪，大大提高了临床生化分析的精密度，同时检测方法学的改进和校准品质量的提高，使得分析的准确度得到很大提高，但分析过程之外的影响因素常被临床医生和检验工作者所忽视。 常见的影响因素大致可分为生理因素、饮食因素、药物因素、标本采集的因素、标本处理的因素及标本状态因素等。本文对引起生化检验结果误差的各种分析前因素进行了阐述。 1.生理因素对生化检验结果的影响。影响检验结果的生理因素可分为可控因素和不可控因素两种类型。主要有年龄、性别、运动、情绪、体位改变、生活方式、妊娠、季节变化、海拔高度、生理性波动等，现分述如下： 年龄：正常生长期儿童由于骨骼生长使得成骨母细胞分泌碱性磷酸酶增加，因此生长期儿童的ALP的活性比健康成人要高3倍左右；新生儿肝脏缺乏葡萄糖酸转移酶，不能将未结合胆红素转化为水溶性的结合胆红素，因此血清总胆红素和间接胆红素水平比正常成人高；年龄还可以影响体内的血脂水平和肾功能，人体肌酐清除率每隔十年有所减少。这些实例都说明了年龄的变化会影响到某些生化检验的结果，因而在临床检验工作中应针对这些项目在不同的年龄段制定相应的参考范围。 性别：不同性别其体内的性腺激素水平不同，并且生育期女性的性腺激素水平还随其处在月经周期的不同阶段而有明显变化；此外和肌肉代谢有关的分析项目如Cre和肌酸激酶，其血清水平男性明显高于女性。因此对于这些有性别差异的项需要针对不同的性别制定相应的参考范围。 运动：强烈的肌肉运动可以明显加快体内的新陈代谢，暂时的变化的是血清游离脂肪酸迅速下降后继而上升，丙酮酸和乳酸亦接着升高；细胞酶的释放引起血清CK、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶的升高；磷酸肌酸分解增多，导致血清Cre、磷
生化实验指导
实验1 氨基酸纸层析 一、实验目的 通过对氨基酸的分离和鉴定，掌握纸层析的基本原理及操作方法。 二、实验原理 层析法又称色谱法。是一项重要的分离技术。利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组分以不同程度分配在两相中。 层析的种类： 根据原理分为： a 分配层(纸层析) b 吸附层析 c 亲和层析 d 离子交换层析 根据支持物分为： a 纸层析 b 柱层析 c 薄层层析 d 凝胶过滤层析 分配层析的原理： 各种物质在两种互不溶解的溶剂中的分配系数不同，从而达到分离的目的。 分配层析用于分离在水和有机溶剂中都可溶的混合物。 一种物质在两相中达到平衡时，在两相中的浓度之比是一个常数。 物质在流动相里的浓度 物质在固定相里的浓度 纸层析: 分配的过程：一部分溶质随有机相移动离开原点进入无溶质区，并进行重新分配，不断向前移动。随着有机相不断向前移动，溶质不断地在两相间进行可逆的分配。由于各种物质的分配系数不同，随展层溶剂移动的速率也不同，从而达到分离的目的。移动速度可用比移（Rf ）值表示： 色斑中心至上样原点中心的距离 K D = 图1 氨基酸纸层析示意图 R f =
溶剂前缘至上样原点中心的距离 载体：滤纸 固定相：滤纸吸附的水 流动相：水饱和酚 极性：谷氨酸＞丙氨酸＞脯氨酸 对于水－饱和酚的溶剂体系，氨基酸极性越小，KD 值越大，Ｒｆ值也越大，一定时间内随流动相迁移的距离远，反之迁移距离小。 三、实验材料 仪器 ⑴层析缸；⑵层析滤纸；⑶电吹风机；⑸喷雾器；⑹毛细管。 试剂 ⑴氨基酸标准液（6mg/mL）；⑵氨基酸混合液（6mg/mL) ⑶展层剂：水饱和苯酚溶液。 ⑷显色剂：0.3%茚三酮丙酮溶液 四、操作步骤 1、层析滤纸的准备 用铅笔在层析滤纸上距离一端2-3cm处划线并标记点样位置。 2、点样(少量多次) 用毛细管平口端蘸取少量样品溶液，点样于滤纸的相应位置，要求样品斑点直径不超过0.5cm，干燥后再点样，重复3次。 3、展层 将滤纸放入层析缸，使滤纸浸入液面以下，但不要使液面没过点样线。展层50-60分钟，取出，用铅笔绘出前沿线。 4、显色 滤纸吹干，用喷雾器把茚三酮溶液均匀细致地喷洒在滤纸有效面上，吹干。
生化实验报告模版
生物化学实验报告 姓名：郭玥 学号： 3120100021 专业年级： 2012级护理本科 组别：第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。 3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。 5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。 它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电 泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α 2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液氨基黑染色液 2 漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液 电泳仪、电泳槽 实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定） 实验步骤： （一）盐析+凝胶柱层析除盐：
生物化学实验4
食品生物化学实验要求 1. 学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者不许 进入实验室。每大组实验人数 28-29 人， 4 人一小组。 2. 实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程中， 掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3. 实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操作，如 有损坏，照价赔偿。 4. 卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿摆放 整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、 10 食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（ 4 学时） 2. 蛋白质的功能性质（ 4 学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（ 4 学时） 4. 或果胶的提取（ 4 学时） 5. 酶的性质实验（ 4 学时） 实验总课时： 16 学时 二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1 、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2 、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3 、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1 、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈 蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。
近年来用先进的分析技术（如X 射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α - 葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露 在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟 6 个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm 绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。例如，直链淀粉的聚合度是 200 ～ 980 或 相对分子质量范围是 32 000 ～ 160 000 时，包合物的颜色是蓝色。分支很多的支 链淀粉，在支链上的直链平均聚合度 20 ～ 28 ，这样形成的包合物是紫色的。糊 精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。 表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 葡萄糖单位的聚合度 3.8 7.4 12.9 18.3 20.2 29.3 34.7 以上 包合物的颜色无色淡红红棕红紫色蓝紫色蓝色 淀粉跟碘生成的包合物在 pH=4 时最稳定，所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2 、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖，是一种相对分子量很大的天然高分子化 合物。虽属糖类，但本身没有甜味，是一种白色粉末，不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀，有一部分淀粉溶解在水里，另一部分悬浮在水里，形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后，一部分淀粉收唾液所和淀粉酶的催化作用，发生水解反应，生成麦芽糖；余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下，继续进行水解，生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下，水解为人体可吸收的葡萄糖，供人体组织的营养需要。反应过程为：（ C 6 H 12 O 5 ）m → (C 6 H 10 O 5)n → C 12 H 22 O 11 → C 6 H 12 O 6 淀粉糊精麦芽糖葡萄糖 葡萄糖是淀粉最重要的下游产品之一，工业生产中常常使用玉米淀粉水解来加工结晶葡萄糖。 3 、淀粉的老化淀粉加入适量水，加热搅拌糊化成淀粉糊（α - 淀粉），冷却或 冷冻后，会变得不透明甚至凝结而沉淀，这种现象称为淀粉的老化。将淀粉拌水制
生化大实验实验报告
生化大实验 实验报告 姓名： 学号： 专业： 班级： 实验班级： 单位： 指导老师：
实验1 多酚氧化酶（PPO）的分离提取 一、实验原理： 多酚氧化酶(PPO)能够通过分子氧氧化酚或多酚形成对应的醌，它是植物组织广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体，可参与植物生长、分化、种皮透性及植物抗性的调节，属于末端氧化酶的一种。 植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成为醌，使组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以受伤组织一般这种酶的活性就会提高。另外，多酚氧化酶也可以与细胞其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。 蛋白质在不同浓度的盐溶液中的的溶解度不同，通过向溶液中加入适量的固体硫酸铵来调节粗提液的盐浓度从而可以将PPO蛋白从体系中析出，且大分子蛋白质不能通过透析膜。 二、实验目的： 通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关的仪器设备的正确使用的方法，以及蛋白质的提取分离的系统技术。 三、材料与试剂： 1.材料：马铃薯（两小组共称200g） 2.试剂：0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮）配制是配x10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵； 0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2） 3.设备：试管与试管架；烧杯、玻璃棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆机；pH计和pH试纸；高速冷冻离心机； 四、操作步骤： 1.两小组共称取200g土豆削皮后切成小块，加入300ml缓冲液A，两者按1:1(W/V)比例匀浆1min； 2.用两层纱布将所得的浆液过滤； 3.将匀浆滤液装入200ml的离心管10000rpm离心5min； 4.上清液两组平分，每组150ml，加36.45g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心5min； 5.取上清液定容至150ml，加入30.75g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心8min，倒掉上清液得粗酶沉淀,用并加入10ml 0.03M磷酸缓冲液B复溶沉淀3-5min； 6.将所得溶液倒入透析袋中，用0.02M的KCl溶液透析至无硫酸铵根离子。 五、结果和分析： 实验所得的初酶液颜色为浅黄色，颜色浅，主要是实验过程中特别是匀浆以前速度较快酚类被氧化的少，从而最大程度的保留了PPO的活性；经过一个夜晚的透析，得到了澄清的略带黄色的液体，这样就为进一步的柱层析提供了优良材料。 六、讨论与结论： 1. 本实验在匀浆阶段应尽量快速，防止酚类充分暴露在空气中被氧化； 2．实验材料马铃薯在削皮前一定要清洗干净；
论述临床常规生化检验结果的影响因素
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 论述临床常规生化检验结果的影响因素论述临床常规生化检验结果的影响因素邵魁巍哈尔滨市双城区人民医院邮编： 150100 摘要： 目的： 对临床常规生化检验结果的影响因素进行分析。 方法： 对 2019年 05 月到 2019 年 05 月在医院检验科进行常规升华检验的 10256 例检验结果进行分析，使用国外先进的生化定制多项3 水平质控品在检验之前、之中、之后对质控进行分析，并进行总结。 结果： 84 例在复核之后产生 10%以上的偏差，占据总体的 0.82%，检验之前的不良事件是出现检验结果偏差的关键因素，占总体偏差的78.57%，患者因素和标本处理不当占据总体偏差的39.39%与36.36%，原因不明溶血和标本采集方法不合理也是影响检验结果的因素。 在检验中仪器故障比例为46.67%，试剂过期或者失效占33.33%，定标品或者定标曲线过期占 20%。 检验完成后的影响因素是审核不及时、不细致。 结论： 在临床常规升华检验的过程中，无论哪个环节出现了问题，都有 1 / 6
可能会造成检验结构的不准确，尤其是患者因素、标本采集方法不合理和处理不正确这几种因素，相关护士一定要注意。 关键词： 临床；常规生化检验；结果；影响因素引言： 常规血液生化检查是医疗工作中非常重要的实验内容，其能够为临床患者的病情诊断和预后提供重要的参考信息。 所以，其检验结果的准确性与临床有着密切的联系，检验结果的准确性能够对医生在对患者诊断的过程中产生非常重要的影响。 检验结果不但是医生诊断的根据，其也是对医疗过程进行具体记录的关键资料。 虽然临床生化检验的方式和方法都在不断的提高着，但是其中还是存在着一些问题和不足会导致检验结果的不准确，因此，相关医护人员一定要对其进行不断的完善，进而提高医疗质量。 一、资料与方法（一）临床资料随机抽取生化常规检测 10256 例次，检测样本来源均为医院 2019 年 05 月到2019 年 05 月住院患者。 其中，男 6372 例，女 3884 例；患者年龄 19-88 岁，平均年龄 40.5 岁；心血管疾病患者 1772 例，内分泌疾病患者 2571 例，神经系统疾病患者 627 例，呼吸系统疾病患者 1447 例，消化系统疾病患者 1633 例，普通外科疾病患者 1035 例，骨科疾病患者 718 例，心胸外科患者 423 例。 剔除交叉病例。
生化制品技术实验指导
《生化制品技术》实验大纲 一、实验目的 本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。 二、适用专业及层次 适用于生物制药技术专业学生 三、实验内容和学时分配
实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 一、实验目的 1.掌握盐析法的原理和操作。 2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。 二、实验原理 乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。 三、实验器材 烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。 四、试剂和材料 脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。 五、操作步骤
1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白 （1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。 （2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。 （3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。准确称重。 2.等电点沉淀法制备乳蛋白素 （1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。 （2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。 （3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0（以pH试纸或pH计判定），此时大部分蛋白质均会溶解。 （4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。 （5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mlo/L 盐酸调整pH至3±0.1。 （6）将上述溶液以6000r/min离心10min，倒掉上层液。取出沉淀干燥，并称重。 六、结果与讨论 1.计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量（3.5g）相
生物化学实验报告
实验一糖类的性质实验 （一）糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 （一）α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL ％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。 观察记录各管颜色。 （二）间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作
生化制品技术实验指导教学内容
生化制品技术实验指 导
《生化制品技术》实验大纲 一、实验目的 本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。要求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作方法。 二、适用专业及层次 适用于生物制药技术专业学生 三、实验内容和学时分配
实验一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 一、实验目的 1.掌握盐析法的原理和操作。 2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。 二、实验原理 乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH 调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。在经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。 三、实验器材 烧杯（250ml和100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁力搅拌器、pH计、离心机、水浴锅。 四、试剂和材料 脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、pH试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。 五、操作步骤 1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白
（1）将50ml牛乳倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。 （2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min（或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入50ml40℃左右的乙酸缓冲液，直到pH达到4.8左右，将悬浮液冷却至室温，放置5min）。 （3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。准确称重。 2.等电点沉淀法制备乳蛋白素 （1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。 （2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。 （3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0（以pH试纸或pH计判定），此时大部分蛋白质均会溶解。 （4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。 （5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以 0.1mlo/L盐酸调整pH至3±0.1。 （6）将上述溶液以6000r/min离心10min，倒掉上层液。取出沉淀干燥，并称重。 六、结果与讨论 1.计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量，并与理论产量（3.5g）相比较。求出实际获得率（%）。
生化实验报告资料
生物化学实验报告 姓名：吴瑞 学号： 3120016004 专业年级： 2012级临床医学（妇幼保健) 组别：第四实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
一、实验室规则 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。
食品生物化学实验
食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者不 许进入实验室。每大组实验人数28人，4人一小组。 2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程中， 掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操作， 如有损坏，照价赔偿。 4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿摆 放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时） 2. 蛋白质的功能性质（4学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时） 4. 或果胶的提取（4学时） 5. 酶的性质实验（4学时） 实验总课时：16学时
二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。例如，直链淀粉的聚合度是200～980或相对分子质量范围是32 000～160 000时，包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉，在支链上的直链平均聚合度20～28，这样形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。 表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 淀粉跟碘生成的包合物在pH=4时最稳定，所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖，是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。虽属糖类，但本身没有甜味，是一种白色粉末，不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀，有一部分淀粉溶解在水里，另一部分悬浮在水里，形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后，一部分淀粉收唾液所和淀粉酶的催化作用，发生水解反应，生成麦芽糖；余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下，继续进行水解，生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下，水解为人体可吸收的葡萄糖，供人体组织的营养需要。反应过程为：（C6H12O5）m→(C6H10O5)n→C12H22O11→C6H12O6 淀粉糊精麦芽糖葡萄糖
常见生化检验结果影响因素分析
1、血钾：有时与钾总量不平衡，影响因素有：某种原因引起的细胞内外钾离子的移动；细胞外液的稀释与浓缩；体液酸碱平衡紊乱。（1）增高：轻微溶血即可增高、标本放置时间过长、应用肾上腺素、新霉素、四环素、安体舒通、去氧皮质酮、肝素、降糖灵、环磷酰胺、四环素等；（2）降低：应用高效、中效利尿药如双氢氯噻嗪、速尿、利尿酸、环噻嗪、醛固酮、强的松、去氧皮质酮、糖皮质激素、氢化考的松、胰岛素等。 2、尿钾：（1）增高：应用高效、中效利尿药如利尿酸钠、速尿、醋氮酰胺等；（2）降低：应用留钾利尿药如安体舒通、氨苯喋呤、开搏通等。 3、血钠：钠浓度是决定渗透压的主要因素，钠平衡紊乱常伴有水平衡紊乱。血钠浓度不能说明钠在体内的总量和钠在体内的分布情况。（1）增高：应用糖皮质激素、氢化可的松、皮质类固醇、醛固酮、黄体酮、雌激素、可的松、保泰松、可乐宁、甲炥烷、四环素、甲基多巴等；（2）降低：应用高效利尿药如利尿酸、氯丙嗪、速尿、渗透性利尿剂甘露醇等。 4、尿钠：（1）增高：应用各类利尿剂如双氢克尿噻、速尿等。（2）降低：应用肾上腺素、醛固酮等 5、血氯：一般与钠平衡增减。（1）增高：应用双氢克尿塞；（2）降低：应用其它高效、中效利尿剂如速尿、利尿酸、噻嗪类等。 6、血钙：测定血清总钙，包括离子钙与复合钙。酸中毒时，复合钙可向离子钙转化，而碱中毒时则相反，此时血清总钙量可不发生改变，但亦可出现抽搐现象。（1）增高：应用维生素D、双氢氯丙嗪、葡萄糖酸钙、雄性激素、雌激素、黄体酮、己烯雌酚、睾丸酮、中效利尿剂等；（2）降低：应用苯妥英钠、苯巴比妥、高效利尿剂、硫酸钠等 7、磷：测定血液中的无机磷。（1）增高：应用四环素、甲氧苯青霉素、雄激素、合成类固醇、维生素D等；（2）降低：进食后、应用胰岛素、肾上腺素、吩噻嗪、口服避孕药等、大量输注葡萄糖。 8、镁：包括镁离子、镁盐、蛋白结合镁。降低：应用大量维生素、皮质激素、高效、中效利尿剂等 9、铁：早上最高，晚8时至午夜最低，一天内可变化20%；（1）增高：标本溶血、应用右旋糖酐、口服避孕药、铁剂等；（2）降低：应用阿司匹林、消胆胺、糖皮质激素、促肾上腺素、肾上腺素等。 10、碳酸氢根：应结合血气分析结果分析。（1）增高：应用碳酸氢钠；（2）降低：抽血时产生气泡、标本放置时间过长、应用四环素、异烟肼、降糖灵、氯化铵等使血pH降低的药物。
细菌的生理生化反应实验报告
细菌的生理生化反应实验报告 【实验目的】 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。 【实验原理】 通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚， 吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下与 肌酸类物质反应，生成红色化合物为.反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发 酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种 微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。 【实验材料和用具】 1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。 2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗 糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂 3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、 杜氏小管。 【实验方法】 （一）V-P反应 1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、 普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。 置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。 （二）甲基红实验 于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验 1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变 形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。 置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录在培养基中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙 醚层浮于培养液的上面，此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。观察记录结果 （四）糖发酵试验 1.试管标记取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。 2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。 置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录 【实验结果与分析】 （一）V-P 大肠产气枯草变形对照 结果—+———
最新分析前各因素对生化检验结果的影响
分析前各因素对生化检验结果的影响
分析前各因素对生化检验结果的影响 作者：张再勤： 生化检验目前已经成为临床医师诊断疾病、观察疗效、判断病情的发展和预后不可缺少的工具，但是影响生化检验结果的因素很多，也很复杂。随着近年来科学技术的不断发展，各医院检验科先后引进了各种类型的自动化生化分析仪，大大提高了临床生化分析的精密度，同时检测方法学的改进和校准品质量的提高，使得分析的准确度得到很大提高[1]，但分析过程之外的影响因素常被临床医生和检验工作者所忽视。本文对引起生化检验结果误差的各种分析前因素进行了阐述。 关键词标本因素生化检验生理因素标本状态 1.生理因素对生化检验结果的影响 影响检验结果的生理因素可分为可控因素和不可控因素两种类型[2]。主要有年龄、性别、运动、情绪、体位改变、生活方式、妊娠、季节变化、海拔高度、生理性波动等，现分述如下： 1.1 年龄正常生长期儿童由于骨骼生长使得成骨母细胞分泌碱性磷酸酶（A LP）增加，因此生长期儿童的ALP的活性比健康成人要高3倍左右[3]；新生儿肝脏缺乏葡萄糖酸转移酶，不能将未结合胆红素转化为水溶性的结合胆红素，因此血清总胆红素（TBIL）和间接胆红素（IBIL）水平比正常成人高[4]；年龄还可以影响体内的血脂水平和肾功能，人体肌酐（Cr）清除率每隔十年
有所减少[5]。这些实例都说明了年龄的变化会影响到某些生化检验的结果，因而在临床检验工作中应针对这些项目在不同的年龄段制定相应的参考范围。 1.2 性别不同性别其体内的性腺激素水平不同，并且生育期女性的性腺激素水平还随其处在月经周期的不同阶段而有明显变化；此外和肌肉代谢有关的分析项目如Cr和肌酸激酶（CK），其血清水平男性明显高于女性[2]。因此对于这些有性别差异的项目，需要针对不同的性别制定相应的参考范围。 1.3 运动强烈的肌肉运动可以明显加快体内的新陈代谢，暂时的变化的是血清游离脂肪酸迅速下降后继而上升，丙酮酸和乳酸亦接着升高；细胞酶的释放引起血清CK、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）的升高；磷酸肌酸分解增多，导致血清Cr、磷的浓度升高，有时可升高25%甚至更多[6]。因此为减少运动对检验结果的影响，一般主张在清晨抽血，住院病人可在起床前抽血，匆忙起床到门诊的病人应至少休息15分钟后采血。 1.4 情绪情绪激动、紧张可影响神经—内分泌系统功能，使血清游离脂肪酸、乳酸、血糖（GLU）等升高。故采血前患者情绪应保持稳定，同时护理人员应向患者作适当解释，以消除患者不必要的疑虑和恐惧。 1.5 体位改变体位改变时血液循环与体液循环之间的平衡发生改变，导致血清内细胞成份和大分子物质浓度发生改变。例如由卧位变为立位时，血清内A LP、甘油三酯（TG）、白蛋白（ALB）等会增加5%以上[6, 7]。有报道站、坐、卧三种体位的不同组合变化对血脂多种成分都有影响，认为血脂采样当以
生化与分子生物学实验指导
生化与分子生物学实验指导-（)
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实验一 氨基酸纸层析法 一、实验目的 通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。 二、实验原理 纸层析法(ｐａp ｅｒ c ｈro ｍａt ｏgr ａphy ）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法,是用滤纸为支持物,所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成,滤纸纤维与水的亲和力强,与有机溶剂的亲和力弱,因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相,有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的,称上行法；由上向下移动的,称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点),进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。 溶质在滤纸上的移动速率用Rf 值表示： 在一定条件下某 种物质的Ｒf 值是常数。Ｒf 值 的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件(如温度、展层溶剂的组成）不变,Rf 值是常数,故可根据Ｒf 值作定性判断。 样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R ｆ值相同或相近,此时如只用一种溶剂展层,就不能将它们分开。为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度,再用另一溶剂展层,从而达到分离目的,这种方法称为双向纸层析法。氨基酸无色,可利用茚三酮显色反应,将氨基酸层析点显色作定性、定量用。所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生(亮)黄色物质。 三、药品器材 1器材 层析滤纸（新华1号)、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、刻度尺、铅笔。 R ｆ = 原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
生物化学实验课件讲解
实验一二硝基水杨酸比色法测定总糖含量 （4学时） 一、实验目的 （1）掌握二硝基水杨酸比色法测定总糖的原理。 （2）学习分光光度计的使用方法。 （3）掌握比色定糖法操作技术。 二、实验原理 在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。总糖可在强酸条件下水解，得到还原糖，从而间接求出样品中总糖的含量。 三、实验仪器 （1）刻度试管：25 mL； （2）烧杯：100 mL； （3）三角瓶：100 mL； （4）容量瓶：100 mL； （5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL； （6）恒温水浴； （7）沸水浴； （8）离心机（过滤法不用此设备），离心管或玻璃漏斗，电子天平，分光光度计。 四、实验试剂 （1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。 （2）3，5-二硝基水杨酸试剂：将6.3 g 3，5-二硝基水杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中备用。 （3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，用蒸馏水溶解至100mL。 （4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞溶于70%乙醇至250 mL。 （5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。 （6）小麦淀粉，食用面粉。 五、实验操作 1．制作葡萄糖标准曲线 取7支刻度试管，按下表操作。 管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-二硝基水杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃水浴中加热5 min，取出冷却至27~30 ℃后以蒸馏水定容至25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调至540 nm 波长，用零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。2．还原糖及总糖的待测液的制备