食品应用生物技术实验指导
纤溶酶是大豆发酵过程中由微生物分泌的一种蛋白水解酶，在酶学分类上有些是丝氨酸蛋白酶，有些是金属蛋白酶，具有能直接降解血栓纤维蛋白，并不降解血浆纤维蛋白原，可口服，经消化道直接吸收，安全可靠，在人体内半衰期长，不易引起体内出血等优势，被认为是潜在的、安全的溶栓剂。
一、基本原理
能够产生纤溶酶的菌株在初筛平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈。
二、实验目的
学习用选择平板分离纤溶酶产生菌的方法，获得产纤溶酶菌株。
三、实验器材
1. 原料
豆豉或纳豆
2. 溶液和试剂
蛋白胨，牛肉膏，琼脂粉，氯化钠，酪蛋白，营养琼脂，葡萄糖等。
3. 仪器和用品
三角瓶，培养皿，吸管，试管，涂布棒，培养摇床，高压灭菌锅，天平、振荡混合器
四、操作步骤
1. 初筛培养基的配制（%）：大豆蛋白胨 1.0，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，酪蛋白
2.0，琼脂粉2.0
2. 菌种保存斜面的配制（%）：葡萄糖0.5，营养琼脂
3.5。分装成若干支试管，试管上带棉塞。（每人3支试管）
3. 培养基与器皿（1.5 mL离心管60个，无菌水100 mL）的灭菌
121℃，灭菌15 min
4. 菌液的制备
分别称取3 g原料于研钵中，加入10 mL无菌水研碎后，转移至无菌离心管中，迷你离心机离心后，将上清液转移至试管中，备用。
5. 菌液的梯度稀释与划线
移取上述菌液0.5 mL至4.5 mL无菌水中，制成10-1菌液，依次类推，制成10-2，10-3，10-4菌液，分别将10-3，10-4菌液涂布到初筛培养基上，每个梯度涂布2块平板，分别放入28℃、35℃培养20 h左右观察结果。用接种环从实验项目一的平板上选择一个能产水解圈的菌株在选择平板上划线分离。（每人划1~2个平板）
6. 产纤溶酶菌株的分离纯化
7. 产纤溶酶菌株的菌落形态观察及菌种保存
将上述划线后的平板放入37℃培养箱培养20 h后，将平板拍照，接种其中最为典型的菌株划线保存在试管斜面上；观察产纤溶酶菌株在选择平板上的菌落形态，并对其进行描述。
一、基本原理
1. 不同类型的纤溶酶都能在初筛平板上形成水解圈，细菌在平板上的生长条件和液体环境中生长的情况相差很大，因此在平板上产圈能力强的菌株不一定就是纤溶酶的高产菌株，因此要进行酶活测定复筛。
2. 蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷物蛋白等都有很好的水解作用。磷钨酸和磷钼酸混合试剂，即福林-酚试剂，碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钨兰和钨兰混合物）。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此，蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸的呈色反应，来间接测定蛋白酶的活力。
二、实验目的
学习采用福林试剂测定纤溶酶活力。
三、实验器材
1. 原料
产纤溶酶菌株
2. 溶液和试剂
蛋白胨，牛肉膏，琼脂粉，氯化钠，干酪素，三氯乙酸，NaOH，Na2CO3，Folin试剂，硼砂，酪氨酸，蒸馏水等。
3. 仪器和用品
三角瓶，培养皿，吸管，试管，涂布棒，高压灭菌锅，天平、振荡混合器
四、操作步骤
1. 选择平板的配制（%）：大豆蛋白胨 1.0，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，酪蛋白
2.0，琼脂粉2.0，121℃，灭菌15 min。（200 mL×2）预备实验1（杨华、王金新）
2. 扩大培养基的配制（%）：大豆蛋白胨 1.0，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，酪蛋白2.0，15×150的试管装6 mL，121℃，灭菌15 min。（150 mL，分装成25支试管，每6 ~ 7支一包）预备实验1（杨华、王金新）
3. 发酵培养基的配制（%）：大豆蛋白胨 1.0，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，酪蛋白2.0，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌15 min。（1200 mL，分装成24个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）预备实验1（杨华、王金新）
4. 菌液的制备
用接种环从试管斜面上挑取一环菌株，在选择平板上划线，37℃倒置培养20 h，挑选有明显水解圈的单菌落转接入试管扩大培养液中37℃震荡培养6 h，转接入装有50 mL发酵培养基的三角瓶中继续37℃震荡培养16 h，4℃，5000 rpm离心10 min，取上清液用于纤溶酶活力的测定。
5. pH7.2磷酸缓冲液的制备预备实验2（邓海、张娟）
取28mLA液、72 mL B液混合后，用蒸馏水稀释1倍，即为pH7.2磷酸缓冲液。
A液（0.2mol/L磷酸二氢钠溶液）称取31.2 g NaH2PO3.2H2O，用蒸馏水溶解后定容至1000 mL。
B液（0.2mol/L磷酸氢二钠溶液）称取71.6 g Na2HPO3.12H2O，用蒸馏水溶解后定容至1000 mL。
6. Folin试剂的配制预备实验2（邓海、张娟）
6.1 Folin试剂
在250 mL磨口回流瓶中，加入20 g钨酸钠，5 g钼酸钠及140 mL蒸馏水，再加10 mL85%磷酸，20 mL 浓盐酸，充分混合，接上回流冷凝管，以小火回流10 h。回流结束时，加入30g 硫酸锂，10 mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15 min，以便驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。转移至200mL容量瓶，用少量蒸馏水洗涤回流瓶，洗涤液一并转移至200mL容量瓶，定容至200 mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。
6.2 Folin试剂使用液
使用前，将Folin试剂与水按1:2稀释。
7. 0.4 mol/L碳酸钠溶液的配制预备实验3（瞿格格、喻顺华）
准确称取无水碳酸钠42.4 g，以蒸馏水溶解定溶至1000 mL。
8. 0.4 mol/L的三氯乙酸溶液的配制预备实验3（瞿格格、喻顺华）
准确称取65.4三氯乙酸，以蒸馏水溶解定溶至1000 mL。
9. 0.5 mol/L的NaOH的配制预备实验3（瞿格格、喻顺华）
准确称取2 g NaOH溶解并定至100 mL。
10. 20.00 mg/mL干酪素溶液预备实验3（瞿格格、喻顺华）
称取干酪素2.000 g，准确至0.001 g，用少量的0.5 mol/L的氢氧化钠溶液(若为酸性蛋白酶则用浓乳酸2 ~ 3滴)润湿，加入约80 mLpH7.2磷酸缓冲液，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100 mL容量瓶中，用适宜的缓冲液稀释至刻度，此溶液在冰箱内贮存。
11. 100 μg/mL酪氨酸标准溶液预备实验3（瞿格格、喻顺华）
准确称取预先于105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.1000 g，用1 mol/L的盐酸60 mL 溶解后定容至100 mL，即为1.00 mg/mL的酪氨酸溶液。吸取1.00 mg/mL酪氨酸标准溶液10.00 mL，用0.1 mol/L盐酸定容至100 mL，即得100.0 μg/mL L-酪氨酸标准溶液，此溶液在冰箱内贮存。
12. 酪氨酸标准曲线的制作
用100 μg/mL酪氨酸标准溶液配制0~100 μg/mL的标准溶液。
试管号0 1 2 3 4 5
取100 μg/mL 酪氨酸溶液（mL ）0 2 4 6 8 10
蒸馏水（mL ）10 8 6 4 2 0
酪氨酸实际浓度（μg/mL ）0 20 40 60 80 100 取上述不同浓度的酪氨酸1 mL与5 mL 0.4 mol/L Na2CO3、1 mL Folin试剂混合，40 ℃水浴显色30 min，680 nm测定吸收值并绘制标准曲线。
试管号0 1 2 3 4 5
取不同浓度的酪氨酸溶液（mL ） 1
0.4 mol/L Na2CO3（mL ） 5
Folin试剂 1
40 ℃水浴显色30 min
取出用分光光度计于波长680 nm比色，以不含酪氨酸的0管为空白调零，分别测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，酪氨酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。计算出当OD为1时的酪氨酸的量（μg），即为吸光常数K值，其K值应在95~100范围内。
13. 样品测定
13.1 先将干酪素溶液放入40±0.2℃恒温水浴中，预热5 min。
13.2 取4支试管，各加入1 mL酶液。
13.3 取一支作为空白管，加2 mL三氯乙酸，其他3管作为测试管各加入1 mL干酪素，摇匀，40℃保温10 min。
13.4 取出试管，3支测试管中各加入2 mL三氯乙酸，空白管中加1 mL干酪素。
13.5 静置10 min，使蛋白质完全沉淀，然后用滤纸过滤沉淀。
13.6 各取1 mL滤液，分别加0.4 mol/L的Na2CO3 5 mL、Folin试剂1 mL。在40℃显色30 min。680 nm 处测OD值。以空白管调零点。
五、结果计算
1. 酶活定义
1g固体酶粉（或1mL液体酶），在40℃（酸性pH=3.0、中性pH=7.5、碱性pH=10.5）条件下，1 min 水解干酪素产生1 μg酪氨酸为一个酶活力单位。
2. 计算酶的活性单位依据以下公式
蛋白酶的活力= A×K×4/10×n U/g(mL) A：样品平行试验的平均OD值
K：吸光常数
4：反应试剂的总体积
10：酶解反应时间
n：酶液稀释总倍数
项目三碳源对菌株产纤溶酶活力的影响
一、实验材料
1. 实验原料：高产豆豉纤溶酶菌株
2. 试剂：蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂粉、蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、干酪素、麦芽糖、甘露糖、果糖、甘露醇、玉米淀粉、大豆粉、四棱豆粉，三氯乙酸，NaOH，Na2CO3，Folin试剂，蒸馏水等。
3. 器皿：三角瓶，培养皿，吸管，试管，涂布棒，高压灭菌锅，天平、振荡混合器、具塞比色试管等。
4. 仪器设备：分光光度计、灭菌锅。
二、实验操作步骤
1. 培养基制备
（1）选择平板的配制（%）：蛋白胨 1.0，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，干酪素2.0，琼脂粉2.0，121℃，灭菌20 min。预备实验（刘炎平、申超凡）
（2）扩大培养基的配制（%）：葡萄糖1.0，蛋白胨 1.0，氯化钠0.5，15×150的试管装6 mL，121℃，灭菌20 min。预备实验1（刘炎平、申超凡）
（3）发酵培养基1的配制（%）：葡萄糖2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（4）发酵培养基2的配制（%）：蔗糖2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（5）发酵培养基3的配制（%）：可溶性淀粉2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（6）发酵培养基4的配制（%）：干酪素2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（7）发酵培养基5的配制（%）：玉米淀粉2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（8）发酵培养基6的配制（%）：麦芽糖2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（9）发酵培养基7的配制（%）：甘露醇2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（10）发酵培养基8的配制（%）：糊精2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（11）发酵培养基9的配制（%）：果糖2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
（12）发酵培养基10的配制（%）：四菱豆粉2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（13）发酵培养基11的配制（%）：大豆粉2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
2. Folin试剂的配制
2.1 Folin试剂
在250 mL磨口回流瓶中，加入20 g钨酸钠，5 g钼酸钠及140 mL蒸馏水，再加10 mL85%磷酸，20 mL 浓盐酸，充分混合，接上回流冷凝管，以小火回流10 h。回流结束时，加入30g 硫酸锂，10 mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15 min，以便驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。转移至200mL容量瓶，用少量蒸馏水洗涤回流瓶，洗涤液一并转移至200mL容量瓶，定容至200 mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。
2.2 Folin试剂使用液
使用前，将Folin试剂与水按1:2稀释。
3. 0.4 mol/L碳酸钠溶液的配制
准确称取无水碳酸钠42.4 g，以蒸馏水溶解定溶至1000 mL。
4. 0.4 mol/L的三氯乙酸溶液的配制
准确称取65.4三氯乙酸，以蒸馏水溶解定溶至1000 mL。
5. 0.5 mol/L的NaOH的配制
准确称取2 g NaOH溶解并定至100 mL。
6. pH
7.2磷酸缓冲液的制备
取28mLA液、72 mL B液混合后，用蒸馏水稀释1倍，即为pH7.2磷酸缓冲液。
A液（0.2mol/L磷酸二氢钠溶液）称取31.2 g NaH2PO3.2H2O，用蒸馏水溶解后定容至1000 mL。
B液（0.2mol/L磷酸氢二钠溶液）称取71.6 g Na2HPO3.12H2O，用蒸馏水溶解后定容至1000 mL。
7. 20.00 mg/mL干酪素溶液的制备预备实验（刘炎平、申超凡）
称取干酪素2.000 g，准确至0.001 g，用少量的0.5 mol/L的氢氧化钠溶液(若为酸性蛋白酶则用浓乳酸2 ~ 3滴)润湿，加入约80 mLpH7.2磷酸缓冲液，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100 mL容量瓶中，用适宜的缓冲液稀释至刻度，此溶液在冰箱内贮存。
8. 粗酶液的制备
用接种环从试管斜面上挑取一环菌株，在选择平板上划线，37℃倒置培养20 h，挑选有明显水解圈的单菌落转接入试管扩大培养液中37℃震荡培养6 h，按2%的比例分别转接入装有50 mL不同发酵培养基的三角瓶中（3瓶）继续37℃震荡培养20 h，4℃，5000 rpm离心10 min，收集上清液为粗酶液。
9. 酶活的测定
取粗酶液1mL，按照福林试剂法测定其纤溶酶活力，研究碳源对产酶的影响，通过酶活力确定最佳碳源。
项目四氮源对菌株产纤溶酶活力的影响
一、实验材料
1. 实验原料：高产豆豉纤溶酶菌株
2. 试剂：蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、干酪素、琼脂粉、葡萄糖、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏(粉)、牛肉膏(粉)、干酪素、硝酸钾、硝酸铵、脲素、硝酸钠，三氯乙酸，NaOH，Na2CO3，Folin试剂，蒸馏水等。
3. 器皿：三角瓶，培养皿，吸管，试管，涂布棒，高压灭菌锅，天平、振荡混合器、具塞比色试管等。
4. 仪器设备：分光光度计、灭菌锅。
二、实验操作步骤
1. 培养基制备
（1）选择平板的配制（%）：蛋白胨 1.0，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，干酪素2.0，琼脂粉2.0，121℃，灭菌20 min。预备实验（邹白玲、黄云虹）
（2）扩大培养基的配制（%）：葡萄糖1.0，蛋白胨 1.0，氯化钠0.5，15×150的试管装6 mL，121℃，灭菌20 min。预备实验1（邹白玲、黄云虹）
（3）发酵培养基1的配制（%）：最优碳源 2.0，蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（4）发酵培养基2的配制（%）：最优碳源 2.0，大豆蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（5）发酵培养基3的配制（%）：最优碳源 2.0，胰蛋白胨 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（6）发酵培养基4的配制（%）：最优碳源 2.0，酵母膏(粉) 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（7）发酵培养基5的配制（%）：最优碳源 2.0，牛肉膏(粉) 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（8）发酵培养基6的配制（%）：最优碳源 2.0，干酪素 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（9）发酵培养基7的配制（%）：最优碳源 2.0，硝酸钾 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（10）发酵培养基8的配制（%）：最优碳源 2.0，硝酸铵 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（11）发酵培养基9的配制（%）：最优碳源 2.0，脲素 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（12）发酵培养基10的配制（%）：最优碳源 2.0，硝酸钠 2.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）（13）发酵培养基11的配制（%）：最优碳源 2.0，大豆蛋白胨 1.0，牛肉膏1.0，氯化钠0.5，250 mL三角瓶的装瓶量为50 mL，121℃，灭菌20 min。（150 mL，分装成3个250 mL三角瓶，50 mL/三角瓶）
2. Folin试剂的配制
2.1 Folin试剂
在250 mL磨口回流瓶中，加入20 g钨酸钠，5 g钼酸钠及140 mL蒸馏水，再加10 mL85%磷酸，20 mL 浓盐酸，充分混合，接上回流冷凝管，以小火回流10 h。回流结束时，加入30g 硫酸锂，10 mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15 min，以便驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。转移至200mL容量瓶，用少量蒸馏水洗涤回流瓶，洗涤液一并转移至200mL容量瓶，定容至200 mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。
2.2 Folin试剂使用液
2015高级生物化学及实验技术试题答案
高级动物生化试题 问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA） 结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。
他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问
生物化学实验报告
生物化学实验报告 动物营养研究所 树润 2015.10.12 猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及活性测定一．实验目地 1.通过实验了解活性物质的分离提取。 2.了解超氧化物歧化酶的基本功能与应用。 二．实验原理 超氧化物歧化酶是一种酸性蛋白，是唯一以自由基为底物 的酶，具有清除自由基的功能酶，在酶分子上共价连接金属辅 基，因此它对热、PH、以及某些理化性质表现出异常的稳定性。 该酶首次从牛红细胞中分离得到，是一种蓝色含铜蛋白，之后， 研究发现该蛋白酶具有催化氧发生歧化反应的能力，因此将其 命名为超氧化物歧化酶1-2。超氧化物歧化酶是一种能专一地清 除超氧离子自由基（O2-）的金属酶，它具有抗衰老、抗辐射、 抗炎抗癌等作用，因而在医药（如关节炎、红斑狼疮等疾病的 治疗3）、化妆品(有防晒抗炎效果4)、食品工业（SOD灵芝菌5 等）等方面具有了广泛的应用前景。 超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体的一种金属酶, 可催化超氧阴离子自由基(O2-)与H+发生歧化反应, 生成H2O2和 O2。SOD催化下述反应：2H++2O2-→H2O2+O2。
超氧化物歧化酶按照它所含金属离子的不同，可分为 Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等三种。Cu-Zn-SOD为二聚体，呈 蓝绿色；Mn-SOD呈紫红色；Fe-SOD呈黄褐色。 SOD提取、纯化制备方法各异, 常用方法有经典的溶剂沉淀法、盐析法、超滤法和层析法等6-7。本实验采用有机溶剂沉淀法8以新鲜猪血为原料，从中提取SOD并进行纯化。酶活力测定可用以下方法：邻苯三酚自氧化法9、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法、亚硝酸法等。 该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，酶活性单 位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率 达50%的酶量定义为一个酶单位。 样品中蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250法测定。考马斯亮 蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合呈现蓝色。在一 定围，溶液在595nm波长下的光密度与蛋白质含量成正比，可 用比色法测定，测定围1-1000μg。 三．实验试剂与器材 1.实验试剂 ACD抗凝剂、0.9%Nacl、丙酮、95%乙醇、氯仿、考马斯 亮蓝G-250、50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液、10mmol/L EDTA钠盐 溶液、3mmol/L邻苯三酚溶液等 2.实验器材
生物化学实验内容
《生物化学实验》内容 课程类型：制药工程专业必修 实验总学时：32课时 开设实验项目数：8个 适用对象：2017制药工程1、2班 实验教师：段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。 二、实验内容
三、成绩 包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。 四、要求 （1）实验过程中同组人可以配合进行； （2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； （4）对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。
3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电 加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻 璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）； 不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。 3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。 4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若
生物趣味实验案例
初中生物趣味实验设计方案 馒头在口腔中是怎样变化的呢 摘要：本实验通过馒头在口腔中变化这一最简单的、人人都有过的体验入手，让学生提出问题，积极参与探究，在探究过程中获得体验，在体验中使知识得到内化。通过小组合作，提供学生自主学习的空间，让学生真正成为学习的主人，让师生之间成为密切合作的伙伴关系。在学生的主动探究过程中逐步培养他们的实践能力和创新能力。 关键词：馒头探究唾液 作者姓名：曾淑玲 作者单位：青州市弥河初中 联系电话：（0536）3810454
馒头在口腔中是怎样变化的呢 一、实验目的： 1、探究食物中的淀粉在口腔中发生了变化。 2、探究淀粉在口腔中发生变化与牙齿的咀嚼、舌头的搅拌以及唾液的分泌都有关。 3、培养学生实验设计、仔细观察、善于思考、与人合作的能力。 4、在探究实验过程中得到成功的体验，增强对学科的兴趣和自信心。 二、实验器材： 量筒、橡皮塞、滴管、小刀、脱脂棉、镊子、馒头、清水、碘液。 三、实验原理： 1、淀粉遇碘变蓝色。 2、淀粉在唾液淀粉酶的作用下分解为麦芽糖，遇碘不变蓝色。 四、实验步骤： 1、亲身体验，提出问题。每个学生取一块馒头细细品尝，然后提出问题：馒头为什么会变甜？ 2、学生思考分析馒头在口腔中的经历，教师引导提出假设：咀嚼时间越长，甜味越浓，馒头变甜的主要原因是牙齿的咀嚼作用；甜味只是通过舌才能品尝出来，馒头变甜的主要原因是舌的搅拌；馒头变甜说明它的成分发生了变化，馒头变甜的主要原因是唾液在发挥作用。 3、分成9个小组，对以上提出的假设分别进行实验。 4、取新鲜的馒头，切成大小相同的3块，将其中的两块分别用小刀细细的切碎、拌匀，另一块不做任何处理。 5、用清水漱口，将一块消毒的脱脂棉含在口中。约1分钟后，用干净的镊子取出脱脂棉，将其中的唾液挤压到小烧杯中。 6、取三支洁净的A、B、C试管，A试管中放入馒头碎屑+2ml唾液充分搅拌，B试管放入馒头碎屑+2ml清水充分搅拌，C试管放入馒头块+2ml唾液不搅拌。 7、把A、B、C三支试管分别塞上橡皮塞，放在内衣口袋中加热10分钟，在此过程中，让学生对所做的假设，进一步预测其结果，展开小组讨论。 8、10分钟后，取出三支试管，分别滴加2滴碘液并摇匀。仔细观察各试管
食品生物化学实验复习过程
食品生物化学实验
食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者 不许进入实验室。每大组实验人数28人，4人一小组。 2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程 中，掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操 作，如有损坏，照价赔偿。 4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿 摆放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时） 2. 蛋白质的功能性质（4学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时） 4. 或果胶的提取（4学时） 5. 酶的性质实验（4学时） 实验总课时：16学时
二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由
(完整版)食品生物技术导论复习题
一、名词解释 诱变育种：利用诱变剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再通过适当的筛选方法获得所需高产优质菌种的方法。 代谢控制发酵：是指利用生物的、物理的、化学的方法，人为的改变微生物的代谢途径，使之合成、积累、分泌我们所需要的产品的过程。 寡核苷酸介导诱变(oligonucleotide-directed mutagenesis): 指在DNA水平上改变氨基酸 的编码序列，也称定点诱变(site-specific mutage nesis); 补料分批培养:在分批培养过程中补入新鲜的料液，以克服营养不足而导致的发酵过早结束的缺点。临界溶氧浓度：指不影响呼吸所允许的最低溶氧浓度。 诱导酶：有些酶在通常的情况下不合成或很少合成，当加入诱导物后就会大量合成，这样的酶叫诱导酶 固定化酶：通过物理的或化学的方法，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚于一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶发挥催化作用的酶 非水酶学：通常酶发挥催化作用都是在水相中进行的，研究酶在有机相中的催化机理的学科即为非水酶学? 抗体酶：是一种具有催化作用的免疫球蛋白，属于化学人工酶 细胞培养:是指动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织. 愈伤组织：在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 接触抑制：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。细胞系：原代细胞经第一次传代后，形成的细胞群体，即具有增殖能力，类型均匀的培养细胞，一般为有限细胞系。 抗性互补筛选法：利用亲本细胞原生质体对抗生素、除草剂及其它有毒物质抗性差异选择杂种细胞。细胞拆合：是指以一定的实验技术从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外一定条件下将不同细胞来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细 胞器. 基因重组(gene recombination): 是指DNA片段在细胞内、细胞间，甚至在不同物种之间 进行交换，交换后的片段仍然具有复制和表达的功能。 克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 限制性内切酶：限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 CCCDNA色大多数的天然DNA质粒具有共价、封闭、环状的分子结构，即CCCDN A 回文结构：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。 基因探针：是一段与目的基因互补的核酸序列，可以是DNA，也可以是RNA，用它与待测样品DNA 或RNA进行核酸分子杂交，可以判断两者的同源程度. Dot印迹杂交：将待测DNA或RNA的细胞裂解物变性后直接点在硝酸纤维素膜上，不需要限制性酶进行酶切，既可与探针进行杂交反应. cDNA文库:是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的 集合。 二、填空题 1.1972年斯坦福大学的Berg等人完成了首次体外重组实验，并首次用限制性内切酶切割 SV40的DNA片断与噬菌体的DNA片断，经过连接，组成重组DNA分子，他是第一个 实现DNA重组的人。
微生物学实验指导
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、 大小的测定和计数 一、实验目的 １、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 ４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 １、显微镜 ２、微生物标本装片 ３、目、物镜测微尺 ４、血球计数板 ５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 ２、操作 在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --
-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载 玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载 物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经 过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显 微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm=平均格数×校正值 宽μｍ＝平均格数×校正值 大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板
数字化生物实验室在教学中的应用
生物学是一门实验学科，生物学实验是培养学生创新思维和实践操作能力的有效途径，是转变学生学习方式的有效手段。先进的实验教学设备，有利于实验教学的开展，有利于改进实验教学的模式，有利于提高实验教学的效率。数字化生物实验室作为一种先进的实验教学装备，实现了信息技术与生物学实验技术的有效整合，是生物学实验教学的有效工具。 一、数字化生物实验室的构成 数字化生物实验室是利用多媒体信息技术辅助生物实验教学的实验教学系统。我校的数字化实验室包括显微数码互动系统、数字传感器系统、虚拟实验系统三部分，其构成如图1所示。 二、数字化生物实验室在高中生物实验教学中的应用 （一）显微数码互动系统在高中生物实验教学中的应用 1.教学中的优势 显微数码互动系统在显微实验教学中具有以下主要优势。（1）易于示教：可以将教师显微镜或学生显微镜视野中典型的图像转播到投影屏幕上或学生的电脑屏幕上，方便示范和讲解。（2）便于指导：在教师的电脑屏幕上能监控每台学生显微镜视野中的图像，能够及时发现学生实验中的问题并给予指导。（3）互动性强：可以通过彩信（或语音问答系统）实现师生之间或生生之间的交流。 2.应用举例 【案例1】在“观察根尖分生组织细胞的有丝分裂”实验教学中，使用一般的显微设备教学时由于教师难演示、难实时监控、难及时指导以及学生间难交流等原因，实验成功率一般比较低，而且时间比较紧很难在45分钟内完成，使用显微数码互动系统则能够很好地解决以上问题，明显提高课堂效率，实验成功率大大提高。教学流程如图2所示。 【案例2】利用显微数码互动系统可将实验“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原”改进为“研究不同浓度的不同溶液对植物细胞吸水和失水的影响”，在实验中学生可自行设计配置不同物质（如KNO3、NaCl、蔗糖、乙二醇等）的不同浓度的溶液进行试验，利用摄像功能记录植物细胞在不同条件下吸水和失水的情况，利用测量功能测量液泡的大小，然后利用分析软件进行比较分析。这样的改进使得实验的探究性更强了，学生活动也增多了，学生对物质运输内涵的理解也会更深入。 （二）数字传感器系统在高中生物实验教学中的应用 1.教学中的优势 数字传感器系统在高中生物实验教学中的优势主要表现在：（1）可以使实验中的不可见现象成为可见，把难以测定的数据变得方便测定，使定性实验上升为定量实验；（2）能实时动态地采集实验数据，展现生命现象的动态过程；（3）用传感器测得的数据比较精确，且灵敏度高，能够检测捕捉微弱的变化；（4）实验数据通过相应软件处理，可以自动生成图表，简便、快捷、直观。 2.应用举例 【案例3】高中生物教材中《酶的催化效率》实验通常用观察和比较不同试管内气泡产生的数量和卫生香的复燃情况，得出酶具有高效性的结论，是一个定性的实验。利用压强传感器可以把这一实验改进成为定量实验，且实验结果以曲线的形式显示也更为直观。实验装置和实验结果如图3、图4所示。 说明试管上连接的是压强传感器，三支试管分别加入等量的20%新鲜猪肝研磨液、3.5%FeCl3溶液、蒸馏水，H2O2通过注射器同时加入试管。 说明曲线（1）（2）（3）分别表示新鲜猪肝研磨液、FeCl3 溶液、蒸馏水中加入H2O2 溶液后试管内部压强随时间（约0～75s）的变化。通过图线会发现盛有新鲜猪肝研磨液的试管
食品生物化学实验
食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者不 许进入实验室。每大组实验人数28人，4人一小组。 2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程中， 掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操作， 如有损坏，照价赔偿。 4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿摆 放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时） 2. 蛋白质的功能性质（4学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时） 4. 或果胶的提取（4学时） 5. 酶的性质实验（4学时） 实验总课时：16学时
二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由无色、橙色、淡红、紫色到蓝色。例如，直链淀粉的聚合度是200～980或相对分子质量范围是32 000～160 000时，包合物的颜色是蓝色。分支很多的支链淀粉，在支链上的直链平均聚合度20～28，这样形成的包合物是紫色的。糊精的聚合度更低，显棕红色、红色、淡红色等。下表就是淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色。 表 2-1 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 淀粉跟碘生成的包合物在pH=4时最稳定，所以它的显色反应在微酸性溶液里最明显。 2、淀粉的水解淀粉是一种重要的多糖，是一种相对分子量很大的天然高分子化合物。虽属糖类，但本身没有甜味，是一种白色粉末，不溶于冷水。在热水里淀粉颗粒会膨胀，有一部分淀粉溶解在水里，另一部分悬浮在水里，形成胶状淀粉糊。淀粉进入人体后，一部分淀粉收唾液所和淀粉酶的催化作用，发生水解反应，生成麦芽糖；余下的淀粉在小肠里胰脏分泌出的淀粉酶的作用下，继续进行水解，生成麦芽糖。麦芽糖在肠液中麦芽糖酶的催化下，水解为人体可吸收的葡萄糖，供人体组织的营养需要。反应过程为：（C6H12O5）m→(C6H10O5)n→C12H22O11→C6H12O6 淀粉糊精麦芽糖葡萄糖
生物化学实验报告
实验一糖类的性质实验 （一）糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 （一）α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL ％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。 观察记录各管颜色。 （二）间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作
利用信息技术促进生物实验教学有效性的研究
利用信息技术促进生物实验教学有效性的研究 佛山市顺德区北滘镇北滘中学（528311）李正平 一、研究背景 本课题是结合北滘中学生物教学课程改革而进行的实验教学研究，首先在学校内确定高二理科6个班级为实验教学班；高二的3个教师为实验教师，进行常规实验教学和利用信息技术在实验教学的整合教学对比研究。采用调查、实验、测试等方法，通过定量与定性结合的手段进行研究，力图找到科学提高生物实验教学有效性的方法。 二、研究方法 调查研究法、个案研究法、试验观察法、统计法、比较法。 三、研究对象： 广东省佛山市顺德区北滘中学高二理科班（1）～（6）班283名学生。 四、研究基础 我校有标准的生物实验室2间，预备室1间，实验室的配备完全符合国家的课程标准要求，同时每间教室都配备了多媒体背投和音箱设备。随着信息技术的发展，我校建立了数字化探究实验室，完备的实验室是中学生物实验教学数字化的基础。探究实验室能为学生提供了必要的探究工具，是课程改革非常重要的组成部分，也是进一步深化改改革，切实提高生物教学有效性的关键。有新课程标准理念的指引，有实验室“硬件”的支持，保证了中学实验教学从传统模式迈入数字化信息技术化，真正实现课程标准倡导的“培养学生科学素养，倡导探究性学习”。 探究实验室使实验过程的智能化，一体化，图象化，趣味化，学生在操作实验时更加简单易懂，有更多的时间分析实验过程和理解实验原理，大大提高了学生的独立思考能力。在生物实验过程中，学生自己设计实验步骤，进行实验，得出结论。体现学生主体性，增加学生的参与度，既有利于学生基本知识技能的形成，又有利于培养学生的科学方法和精神，是提高学习有效性的最佳途径。 五、研究过程 第一阶段：（1）组织多媒体教学内容及数字化实验室使用的培训，提高教师自主开发、设计多媒体课件、引导学生探究的能力。（2）组织网络知识和网
微生物学实验报告
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
生化大实验实验报告材料
生化大实验 实验报告 姓名： 学号： 专业： 班级： 实验班级： 单位： 指导老师：
实验1 多酚氧化酶（PPO）的分离提取 一、实验原理： 多酚氧化酶(PPO)能够通过分子氧氧化酚或多酚形成对应的醌，它是植物组织广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体，可参与植物生长、分化、种皮透性及植物抗性的调节，属于末端氧化酶的一种。 植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成为醌，使组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以受伤组织一般这种酶的活性就会提高。另外，多酚氧化酶也可以与细胞其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。 蛋白质在不同浓度的盐溶液中的的溶解度不同，通过向溶液中加入适量的固体硫酸铵来调节粗提液的盐浓度从而可以将PPO蛋白从体系中析出，且大分子蛋白质不能通过透析膜。 二、实验目的： 通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关的仪器设备的正确使用的方法，以及蛋白质的提取分离的系统技术。 三、材料与试剂： 1.材料：马铃薯（两小组共称200g） 2.试剂：0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮）配制是配x10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2） 3.设备：试管与试管架；烧杯、玻璃棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆机；pH计和pH试纸；高速冷冻离心机； 四、操作步骤： 1.两小组共称取200g土豆削皮后切成小块，加入300ml缓冲液A，两者按1:1(W/V)比例匀浆1min； 2.用两层纱布将所得的浆液过滤； 3.将匀浆滤液装入200ml的离心管10000rpm离心5min； 4.上清液两组平分，每组150ml，加36.45g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心5min； 5.取上清液定容至150ml，加入30.75g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心8min，倒掉上清液得粗酶沉淀,用并加入10ml 0.03M磷酸缓冲液B复溶沉淀3-5min； 6.将所得溶液倒入透析袋中，用0.02M的KCl溶液透析至无硫酸铵根离子。 五、结果和分析： 实验所得的初酶液颜色为浅黄色，颜色浅，主要是实验过程中特别是匀浆以前速度较快酚类被氧化的少，从而最大程度的保留了PPO的活性；经过一个夜晚的透析，得到了澄清的略带黄色的液体，这样就为进一步的柱层析提供了优良材料。 六、讨论与结论： 1. 本实验在匀浆阶段应尽量快速，防止酚类充分暴露在空气中被氧化； 2．实验材料马铃薯在削皮前一定要清洗干净； 3.加入硫酸铵固体时一定要小心缓慢，同时伴有玻璃般的搅拌，在溶解蛋白的过程中避免溶液局部盐离子浓度过大，使蛋白变性，并注意用量的计算，第二步加入的时候起点浓度是40%而不是0，否则会加入过量，影响实验的结果； 4.透析时，提前检查透析袋是否完整，避免透析时出现孔洞导致样品丢失。
《食品生物技术概论》电子教案(齐全版)
食品生物技术概论 实验指导 北京师范大学珠海分校 二零一一年九月
目录 实验一果酒的酿造及感官评价 实验二蛋糕的制作与品质鉴定 实验三果酱（苹果酱）的制作 实验四碳酸茶饮料的制作 实验五辣椒味口香糖的制作 实验六肉铺的加工 实验七低脂雪糕的制作 实验八纳豆的制作
实验一果酒的酿造及感官评价 一、实验目的 学习并掌握酸果酒的酿造的基本原理和方法。 二、实验原理 酵母分为天然酵母和人工培养酵母两种。天然酵母即野生酵母，常附着在果皮上。果汁在酵母菌作用下将中的葡萄糖发酵生成酒精并且产生二氧化碳。当前发酵结束后，对果酒进行过滤，控制温度，进行后发酵，可进一步提高酒的品质和口味。 为了保证酵母菌发酵纯正，防止或抑制其它杂菌的活动，必需对果汁进行二氧化硫处理。二氧化硫可以抑制大部份杂菌的活动，但不影响正常酵母的活动，它具有对果酒汁进行杀菌，澄清，抗氧化，溶解和增酸的作用。 三、材料和设备 瓷盘、500ml三角瓶（每组3）、1ml吸管、角勺、玻棒、台秤、糖度计、吸球、2层纱布、试纸（pH3.5）、天平、100ml烧杯、100ml量筒、水浴锅等 鲜葡萄、猕猴桃、果酒活性干酵母、蔗糖、亚硫酸 四、实验内容 1、选料：葡萄（选择充分成熟、色泽鲜艳、无病和无霉烂的果实为原料，去掉杂质并冲洗干净表面的泥土。） 2、破碎： 葡萄：去除梗，清水洗涤，凉干。挤破果实，每个处理1瓶，每瓶装0.5斤葡萄，测糖度，测pH值。 3、调糖；先测定果浆的含糖量，按生成1％酒精需要1.7％糖的比例进行调糖，添加能产生约10％酒精的蔗糖，搅拌溶解。 4、二氧化硫和果胶酶处理：二氧化硫的添加常在破碎时或果汁入罐发酵前一次加入，
微生物学实验
微生物学实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天 平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒 压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC 以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零 取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快， 滤膜要注意清洗保存。 六、思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是 无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么? 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材 1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角 烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。 2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基 四、实验内容
生化实验五大技术
生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意） 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:
可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球