饱和硫酸铵检测方法

饱和硫酸铵检测方法

一、饱和硫酸铵溶液配制:

1、按630mL水加入500g硫酸铵的比例；

2、加热溶解，使其达到饱和；

3、冷却到室温（不同温度的溶解度不同，温度降低后有结晶析出）；

4、单层滤纸过滤，备用。

注意：不同的室温溶液的溶解度也会有差异，所以试剂存于温度较恒定的仪器室。

二、操作步骤:

1、500mL三角瓶粗量250~300mL样酒；

2、超声波除气5min以上；

3、用量筒量取200mL除气后的酒样，倒入浊度杯；

4、放20℃水浴静置10min~15min；

5、放入浊度计，读取初始浊度值；

6、加入转子，放磁力搅拌器上，准备滴定；

三、滴定过程：

1、30mL饱和硫酸铵溶液一次性滴入，搅拌30sec；

2、测浊度，浊度小于等于初始浊度时，继续以5mL/次，搅拌20sec；

3、测浊度，浊度大于初始浊度0.05EBC时，继续以2mL/次，搅拌20sec；

4、测浊度，浊度到达1.5EBC时，继续以0.5mL/次，搅拌20sec；

5、滴定终点，浊度值为2EBC；

6、读数，并记录整个过程消耗的饱和硫酸铵溶液的量即为饱和硫酸铵值。

标准混浊液

一、仪器

容量瓶，100、50ml

具塞三角瓶，100ml

移液管，5、25ml

二、试剂

1、1%硫酸肼溶液

称取1.000g分析纯硫酸肼，溶于无混浊的蒸馏水，移入100ml 容量瓶中定容，放置4小时，使其充分溶解。

2、10%六次甲基四胺溶液

称取10.000g分析纯六次甲基四胺，溶于无混浊的蒸馏水，移入100ml容量瓶中定容。

三、配制

1、制备浓富尔马进混浊液

吸取25ml1%硫酸肼溶液，缓慢加到盛有25ml10%六次甲基四胺溶液的三角瓶中，边加边摇动，然后盖塞。放置24小时后备用，该溶液在两个月内有效。

2、制备100EBC富尔马进单位混浊液

摇匀浓富尔马进混浊液混浊液，立刻吸取1体积，在容量瓶中用蒸馏水稀释成10体积（简称100EBC 单位混浊液）。该溶液一周内有效。

3.制备工作标准浑浊液：

吸取摇匀后的100EBC 单位混浊液0.00；0.25，0.50，0.75，

1.00，1.25，1.50ml分别于7支50ml 比色管中，用添加0.2%硅藻土新过滤的透明啤酒稀释到刻度，摇匀后，即制得0.0，0.5，1.0，1.5，

2.0，2.5，

3.0 EBC 单位混浊液。

不同温度下硫酸铵饱和度计算表

在0℃硫酸铵终浓度，% 饱和度 硫酸铵初浓度，％饱和度 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 每100ml 溶液加固体硫酸铵的克数 0 10.6 13.4 16.4 19.4 22.6 25.8 29.1 32.6 36.1 39.8 43.6 47.6 51.6 55.9 60.3 65.0 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16.6 19.7 22.9 26.2 29.6 33.1 36.8 40.5 44.4 48.4 52.6 57.0 61.5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13.9 16.9 20.0 23.3 26.6 30.1 33.7 37.4 41.2 45.2 49.3 53.6 58.1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11.1 14.1 17.2 20.4 23.7 27.1 30.6 34.3 38.1 42.0 46.0 50.3 54.7 59.2 20 0 2.7 5.5 8.3 11.3 14.3 17.5 20.7 24.1 27.6 31.2 34.9 38.7 42.7 46.9 51.2 55.7 25 0 2.7 5.6 8.4 11.5 14.6 17.9 21.1 24.5 28.0 31.7 35.5 39.5 43.6 47.8 52.2 30 0 2.8 5.6 8.6 11.7 14.8 18.1 21.4 24.9 28.5 32.3 36.2 40.2 44.5 48.8 35 0 2.8 5.7 8.7 11.8 15.1 18.4 21.8 25.4 29.1 32.9 36.9 41.0 45.3 40 0 2.9 5.8 8.9 12.0 15.3 18.7 22.2 25.8 29.6 33.5 37.6 41.8 45 0 2.9 5.9 9.0 12.3 15.6 19.0 22.6 26.3 30.2 34.2 38.3 50 0 3.0 6.0 9.2 12.5 15.9 19.4 23.0 26.8 30.8 34.8 55 0 3.0 6.1 9.3 12.7 16.1 19.7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16.4 20.1 23.1 27.9 65 0 3.1 6.3 9.7 13.2 16.8 20.5 24.4 70 0 3.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 0 3/2 6.6 10.1 13.7 17.4 80 0 3.3 6.7 10.3 13.9 85 0 3.4 6.8 10.5 90 0 3.4 7.0 95 0 3.5 100 0

(抗体的纯化)硫酸铵沉淀法

抗体的纯化( 硫酸铵沉淀法） 一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。 二，试剂及仪器 1 .组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ） 1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。 （三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加SAS 到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v) ； 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或过夜（4 °C ）； 3.3000 ′g 离心30 min （4 °C ），保留上清液；上清液再加SAS 到0.5:1(v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 4.上清液再加SAS 到0.5:1 (v/v) ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效 （二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1 ）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

硫酸铵浓度表

附表一 1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 在0℃硫酸铵终浓度，% 饱和度 硫酸铵初浓度，％饱和度 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 每100ml 溶液加固体硫酸铵的克数 0 10.6 13.4 16.4 19. 4 22.6 25. 8 29. 1 32.6 36. 1 39.8 43. 6 47.6 51. 6 55. 9 60.3 65. 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16. 6 19.7 22. 9 26. 2 29.6 33. 1 36.8 40. 5 44. 4 48. 4 52. 6 57.0 61. 5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13. 9 16.9 20. 23. 3 26.6 30. 1 33.7 37.4 41. 2 45. 2 49. 3 53.6 58. 1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11. 1 14.1 17.2 20. 4 23.7 27.1 30.6 34. 3 38. 1 42. 46. 50.3 54. 7 59.2 20 0 2.7 5.5 8.3 11.3 14. 3 17.5 20.7 24. 1 27.6 31. 2 34. 9 38.7 42. 7 46.9 51. 2 55.7 25 0 2.7 5.6 8.4 11. 5 14. 6 17.9 21. 1 24.5 28. 31. 7 35. 5 39. 5 43.6 47.8 52.2 30 0 2.8 5.6 8.6 11. 7 14.8 18. 1 21.4 24. 9 28. 5 32. 3 36. 2 40.2 44. 5 48.8 35 0 2.8 5.7 8.7 11.8 15. 1 18.4 21. 8 25. 4 29. 1 32. 9 36.9 41. 45.3 40 0 2.9 5.8 8.9 12. 15.3 18. 7 22. 2 25. 8 29. 6 33.5 37.6 41.8 45 0 2.9 5.9 9.0 12.3 15. 6 19. 22. 6 26. 3 30.2 34. 2 38.3 50 0 3.0 6.0 9.2 12. 5 15. 9 19. 4 23. 26.8 30. 8 34.8 55 0 3.0 6.1 9.3 12. 7 16. 1 19. 7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12. 9 16. 4 20.1 23. 1 27.9 65 0 3.1 6.3 9.7 13. 2 16.8 20. 5 24.4 70 0 3.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 0 3/2 6.6 10.1 13. 7 17.4 80 0 3.3 6.7 10. 3 13.9

硫酸铵分级沉淀原理及实验方案

一，基本原理 硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。 二，试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三，操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。 （一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ） 1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （ 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。（三）透析 1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。 四，应用提示 （一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。 1.边搅拌边慢慢加SAS 到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v) ；

盐析法

盐析法综述 摘要：沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。盐析法是其中的一种，盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 关键词:沉淀法；盐析；原理；方法评价；蛋白质盐析 沉淀法 沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，并转化为称量形式，最后称定其重量进行测定的方法。 有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。、非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用于核酸和酶的分离提纯。最常用的是铅盐法，可以用于除去杂质，也可用于沉淀有效成分。沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合,在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物,再将沉淀物进行干燥或锻烧,从而制得相应的粉体颗粒。一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。 对沉淀形式的要求 （1）沉淀的溶解度要小，以保证被测组分能沉淀完全。 （2）沉淀要纯净，不应带入沉淀剂和其他杂质。 （3）沉淀易于过滤和洗涤，以便于操作和提高沉淀的纯度。 （4）沉淀易于转化为称量形式。 盐析法 胶体的盐析 胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低，形成沉底析出的

硫酸铵沉淀

硫酸铵沉淀： 有生物活性的蛋白一般在做硫胺沉淀的时候要小心一点。最保险的做法是，把硫酸铵配成饱和溶液，把蛋白溶液置于冰浴上，再把饱和硫胺溶液一滴一滴的加到你的蛋白溶液中，最好边加边搅拌，避免局部硫胺浓度过高，但搅拌的时候注意不要搅出气泡。按照你的比例加完之后，最好放冰箱静置至少2h，充分沉淀后离心即可。 4M的硫酸铵pH值为，在这个酸度下可能会有一些蛋白质变性，要小心。硫酸铵会破坏蛋白质水化层，最好是缓和地加入。边加入边搅拌，如果在磁力搅拌器上搅拌，小漩涡中心有很多泡沫就表示蛋白质变性，使得溶液粘度增加，泡沫难破，那就很难保证你的蛋白质有没有变性了。 溶解度，在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的质量，叫做这种物质在这种溶剂中的溶解度。固体的溶解度是指在一定的温度下，某物质在100克里达到饱和状态时所的克数，用字母s表示，其单位是“g/100g水”。在未注明的情况下，通常溶解度指的是物质在水里的溶解度。 溶液饱和度(化学) 某种溶液的饱和度是指在100g该溶液中溶质在溶液中所占质量分数.一般情况下，一种溶液的饱和度在同一温度下不会变.要想使不饱和溶液饱和度增加可以选择增加溶质.在刚好有晶体析出的时候就是溶液刚好饱和的时候.溶液饱和度不会出现100%

加固体比较好，加得越慢越好。如果加快了，会造成局部浓度过大，造成意想不到的沉淀。 硫酸铵沉淀的时候应该要注意pH值的变化，就我的实验来说，一株产淀粉酶曲霉固态发酵之后用超纯水浸泡离心，得到含有酶的上清液的pH值为，但是淀粉酶能耐受，为了去除更多杂质蛋白质，我把硫酸铵浓度调节到2摩尔每升的同时会控制pH值为，4度过夜之后离心取上清液再调节到pH值，4度放置，离心，又去除一部分杂质蛋白质，上清液直接用的疏水层析系统来纯化。 一个纤维素酶的纯化我也用类似的方法，只不过第一步是用。 硫酸铵是酸式盐，2M时pH值约为5，4M时更低，用来沉淀蛋白质的时候情况就更复杂了，所以最好知道自己需要的蛋白质的耐受情况，不要搞死了。 透析之前要选用一个不影响自己想要的蛋白质的pH值，硫酸铵沉淀和透析都要保持一致，才能使损失减少。透析时候产生的沉淀不知道是不是你想要的蛋白质，不过下次做最好谨慎一点，做我说过的预备实验。 分段盐析的方法

盐析的操作方法

③盐析的操作方法：最常用的是固体硫酸铵加入法。欲从较大体积的粗提取液中沉淀蛋白质时，往往使用固体硫酸铵，加入之前要先将其研成细粉不能有块，要在搅拌下缓慢均匀少量多次地加入，尤其到接近计划饱和度时，加盐的速度更要慢一些，尽量避免局部硫酸铵浓度过大而造成不应有的蛋白质沉淀。盐析后要在冰浴中放置一段时间，待沉淀完全后再离心与过滤。在低浓度硫酸铵中盐析可采用离心分离，高浓度硫酸铵常用过滤方法，因为高浓度硫酸铵密度太大，要使蛋白质完全沉降下来需要较高的离心速度和 较长的离心时间。 各种饱和度需加入固体硫酸铵的量可由附录中查出。硫酸铵浓度的表示方法是以饱和溶液的百分数表示，称为百分饱和度，而不用实际的克数，这是由于当固体硫酸铵加到水溶液中去时，会出现相当大的非线性体积变化，计算浓度相当麻烦，为了克服这一困难，有人经过精心测量，确定出1L纯水提高到不同浓度所需加入硫酸铵的量，附录中的实验数据以饱和浓度的百分数表示，使用时十分方便。 ④盐析曲线的制作：如果要分离一种新的蛋白质和酶，没有文献数据可以借鉴，则应先确定沉淀该物质的硫酸铵饱和度。具体操作方法如下：取已定量测定蛋白质或酶的活性与浓度的待分离样品溶液，冷至0～5℃，调至该蛋白质稳定的pH值，分6～10次分别加入不同量的硫酸铵，第一次加硫酸铵至蛋白质溶液刚开始出现沉淀时，记下所加硫酸铵的量，这是盐析曲线的起点。继续加硫酸铵至溶液微微混浊时，静止一段时间，离心得到第一个沉淀级分，然后取上清再加至混浊，离心得到第二个级分，如此连续可得到6～10个级分，按照每次加入硫酸铵的量，查出相应的硫酸铵饱和度。将每一级分沉淀物分别溶解在一定体积的适宜的pH值缓冲液中，测定其蛋白质含量和酶活力。以每个级分的蛋白质含量和酶活力对硫酸铵饱和度作图，即可得到盐析曲线。 ⑤盐析的影响因素 (1)蛋白质的浓度：中性盐沉淀蛋白质时，溶液中蛋白质的实际浓度对分离的效果有较大的影响。通常高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度即可将其沉淀下来，但若蛋白质浓度过高，则易产生各种蛋白质的共沉淀作用，除杂蛋白的效果会明显下降。对低浓度的蛋白质，要使用更大的硫酸铵饱和度，但共沉淀作用小，分离纯化效果较好，但回收率会降低。通常认为比较适中的蛋白质浓度是2.5％～3.0％(质量分数)，相当于25～30mg／ml。 (2)pH值对盐析的影响：蛋白质所带净电荷越多，它的溶解度就越大。改变pH值可改变蛋白质的带电性质，因而就改变了蛋白质的溶解度。远离等电点处溶解度大，在等电点处溶解度小，因此用中性盐沉淀蛋白质时，pH值常选在该蛋白质的等电点附近。

关于盐析

①原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的，也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法。其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加到一定程度时，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。 ②盐的选择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L，即676g/L），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时，对蛋白氮的测定有干扰，缓冲能力比较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以上溶解度太低。其他的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。 硫酸铵浓溶液的pH在4.5～5.5之间，市售的硫酸铵常含有少量游离硫酸，pH值往往降至4.5以下，当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。 ③硫酸铵饱和度计算法及加入方式：在分段盐析时，加盐浓度一般以饱和度表示，饱和溶液的饱和度定为100%。用硫酸铵盐析时其溶液饱和度调整方法有3种。一是当蛋白质溶液体积不大，所需调整的浓度不高时，可加入饱和硫酸铵溶液；饱和硫酸铵配制方法可加入过量的硫酸铵，热至50～60℃保温数分钟，趁热滤去沉淀，再在0℃或25℃下平衡1～2天，有固体析出时即达100%饱和度。盐析所需饱和度可按下式计算： 式中V及V0分别代表所需饱和度硫酸铵溶液及原溶液的体积，S2及S1分别代表所需达到的和原溶液的饱和度。严格来说，混合不同体积的溶液时，总体积会发生变化使上式造成误差，但这由体积改变所造成的误差一般小于2%。故可忽略不计。另一种是所需达到饱和度较高而溶液的体积又不再过分增大时，可直接加入固体硫酸铵，其加入量可按下式计算： 式中X是将1升饱和度为S1的溶液提高到饱和度为S2时所需硫酸铵的重量（g），G及A为常数，与温度有关。G在0℃时为707，20℃时为0.29。为方便起见，在室温及℃时所需硫酸铵的饱和度可直接查表2-1、表2-2求出。 表2－1室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242 278 312 350 390 430 474 519 560 608 657 708 760 0.10 57 67 118 149 182 215 250 287 325 365 405 448 494 530 585 634 685 0.20 29 59 90 121 154 188 225 260 298 337 379 420 465 512 559 610 0.25 29 60 91 123 157 192 228 265 304 345 386 430 475 521 571 0.30 30 61 93 125 160 195 232 270 310 351 394 439 485 533

硫酸铵饱和度的常用表,聚丙烯酰胺凝胶的配制表

硫酸铵饱和度的常用表1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）

2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 3．不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据

聚丙烯酰胺凝胶的配制 表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 溶液成分 不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml） 5 10 15 20 25 30 40 50 6% 水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺溶液 1 2 3 4 5 6 8 10 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02 0.024 0.032 0.04 8% 水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.7 4 5.3 6.7 8 10.7 13.3 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.015 0.018 0.024 0.03 10% 水 1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.3 5 6.7 8.3 10 13.3 16.7 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 12% 水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺溶液 2 4 6 8 10 12 16 20 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.8 5 6.3 7.5 10 12.5 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸氨0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析 还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？ 蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀； 还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长…… 幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。 -------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一 我是超级蜘蛛精 看我有劲儿不？ 冲啊，我是美国队长 而我是一只冷静的科研小蜗牛 这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。 硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度

增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的

结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。 各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。 （1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液； 例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH 到7.0。 （2）沉淀蛋白 将样品离心，去除沉淀，保留上清液并测量体积；一边搅拌一边慢慢的加入硫酸

硫酸铵浓度表

1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 在0℃硫酸铵终浓度，% 饱和度 硫酸铵初浓度，％饱和度 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 每100ml 溶液加固体硫酸铵的克数 0 10.6 13.4 16.4 19. 4 22.6 25. 8 29. 1 32.6 36. 1 39. 8 43. 6 47.6 51.6 55. 9 60.3 65. 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16. 6 19.7 22. 9 26. 2 29.6 33. 1 36. 8 40. 5 44. 4 48.4 52. 6 57.0 61. 5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13. 9 16.9 20. 23. 3 26.6 30. 1 33.7 37.4 41. 2 45.2 49. 3 53.6 58. 1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11. 1 14.1 17.2 20. 4 23.7 27.1 30. 6 34. 3 38. 1 42.0 46. 50.3 54. 7 59.2 20 0 2.7 5.5 8.3 11.3 14. 3 17.5 20.7 24. 1 27.6 31. 2 34. 9 38.7 42. 7 46.9 51. 2 55.7 25 0 2.7 5.6 8.4 11. 5 14. 6 17.9 21. 1 24.5 28. 31. 7 35.5 39. 5 43.6 47.8 52.2 30 0 2.8 5.6 8.6 11. 7 14.8 18. 1 21. 4 24. 9 28. 5 32.3 36. 2 40.2 44. 5 48.8 35 0 2.8 5.7 8.7 11.8 15. 1 18. 4 21. 8 25. 4 29.1 32. 9 36.9 41. 45.3 40 0 2.9 5.8 8.9 12. 15. 3 18. 7 22. 2 25.8 29. 6 33.5 37.6 41.8 45 0 2.9 5.9 9.0 12. 3 15. 6 19. 22.6 26. 3 30.2 34. 2 38.3 50 0 3.0 6.0 9.2 12. 5 15. 9 19.4 23. 26.8 30. 8 34.8 55 0 3.0 6.1 9.3 12. 7 16.1 19. 7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16. 4 20.1 23. 1 27.9 65 0 3.1 6.3 9.7 13. 2 16.8 20. 5 24.4 70 0 3.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 0 3/2 6.6 10.1 13. 7 17.4 80 0 3.3 6.7 10. 3 13.9 85 0 3.4 6.8 10.5 90 0 3.4 7.0

盐析法沉淀蛋白质的原理

一、盐析法的定义： 盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 简单来说，盐析法就是指在有机大分子或一些有机高分子的溶液中加入无机盐如氯化钠,利用相似相溶原理,使有机物析出的过程.在制乙酸乙酯时用饱和碳酸钠溶液接收,更有利于乙酸乙酯的析出,制肥皂时加氯化钠,肥皂更易析出,在蛋白质溶液中加硫酸铵,使蛋白质析出,都是利用盐析的原理。 二、盐析法的原理： 盐析法的原理是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。 蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。 蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。

总之，盐析和变性都会让蛋白质沉淀，但是盐析的条件控制好就不会使蛋白质失去活性，除去溶液中的中性盐就可以重新溶解。蛋白质变性的那就失去了生物活性，三维结构被破坏，某些情况下可以通过复性再次恢复活性，但是目前能够复性的蛋白质是非常少的，条件要求也各不相同。关于盐析和变性的原理，一般情况下我们认为盐析剥夺了蛋白质的水化层并且破坏了它的表面电荷平衡，变性的情况就比较多了，总的来说是让蛋白质本身精巧的结构被破坏，从而让蛋白质失去活性。

硫酸铵饱和度常用表

117 附录五 硫酸铵饱和度的常用表　 １．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（２５℃）　 硫 酸 铵 终 浓 度 ， % 饱 和 度 10 20 25 30 33 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 90 100 每1升溶液加固体硫酸铵的克数 ① 0 56 114 144 176 196 209 243 277 313 351 390 430 472 516 561 662 767 10 57 86 118 137 150 183 216 251 288 326 365 406 449 494 592 694 20 29 59 78 91 123 155 189 225 262 300 340 382 424 520 619 25 30 49 61 93 125 158 193 230 267 307 348 390 485 583 30 19 30 62 94 127 162 198 235 273 314 356 449 546 33 12 43 74 107 142 177 214 252 292 333 426 522 35 31 63 94 129 164 200 238 278 319 411 506 40 31 63 97 132 168 205 245 285 375 469 45 32 65 99 134 171 210 250 339 431 50 33 66 101 137 176 214 302 392 55 33 67 103 141 179 264 353 60 34 69 105 143 227 314 65 34 70 107 190 275 70 35 72 153 237 75 36 115 198 80 77 157 硫 酸 铵 初 浓 度 ， % 饱 和 度 90 79 ○ 1在25℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。

盐析法除蛋白质

盐析法除蛋白质 盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水 中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 原理：蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 1 中性盐沉淀（盐析法） 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。 盐析法应用最广的还是在蛋白质领域，已有八十多年的历史，其突出的优点是： ①成本低，不需要特别昂贵的设备。λ ②操作简单、安全。λ ③对许多生物活性物质具有稳定作用。λ ⑴中性盐沉淀蛋白质的基本原理λ 蛋白质和酶均易溶于水，因为该分子的－COOH、－NH2和－OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1nm～100nm颗粒的亲水胶体，削弱了蛋白质分子之间的作用力，蛋白质分子表面极性基团越多，水化层越厚，蛋白质分子与溶剂分子之间的亲和力越大，因而溶解度也越大。亲水胶体在水中的稳定因素有两个：即电荷和水膜。因为中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。盐析示意图如下页“图4”所示。λ ⑵中性盐的选择λ 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点：λ 1) 溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。由下表可以看到，硫铵在0℃时的溶解度，远远高于其它盐类：λ 表2-1 几种盐在不同温度下的溶解度（克/100毫升水）λ 0℃20℃80℃100 ℃λ （NH4)2SO4 70.6 75.4 95.3 103 Na2SO4 4.9 18.9 43.3 42.2λ

硫酸铵

硫酸铵 求助编辑百科名片 硫酸铵粉末 无色结晶或白色颗粒。无气味。280℃以上分解。水中溶解度：0℃时，100℃时。不溶于乙醇和丙酮。L水溶液的pH为。相对密度。折光率。低毒，半数致死量（大鼠，经口）3000mG/kG。有刺激性。硫酸铵主要用作肥料，适用于各种土壤和作物。还可用于纺织、皮革、医药等方面。 中文名：硫酸铵 外文名： Ammonium sulfate 别名：硫铵 化学式：(NH4)2SO4 相对分子质量： 化学品类别： 无机物--硫酸盐--铵 盐 管制类型：不管制 储存：密封保存 目录 理化性质 物理性质 化学性质 作用与用途使用注意事项危险性概述急救措施

消防措施 泄漏应急处理 操作处置与储存 制备 生成方法 展开 理化性质 物理性质 化学性质 作用与用途 使用注意事项 危险性概述 急救措施 消防措施 泄漏应急处理 操作处置与储存 制备 生成方法 展开 编辑本段理化性质 物理性质 英文名称：Ammonium sulphate CAS号：7783-20-2

硫酸铵分子结构式 EINECS号 231-984-1 InChI=1/2H3N.阿斯顿-5(2,3)4/h2*1H3;(H2,1,2,3,4)[1] 分子式：(NH4)2·SO4 分子量： 分子结构：[2] 主要成分：纯品 外观与性状：纯品为无色斜方晶体，工业品为白色至淡黄色结晶体。 氮（N）含量：%min 水分： 游离酸： 熔点(℃)： 513℃±2℃ 沸点(℃)：无资料 折射率：n20/D 相对密度(水=1)： 相对蒸气密度(空气=1)： 饱和蒸气压(kPa)：无资料 燃烧热(kJ/mol)：无意义 临界温度(℃)：无资料 临界压力(MPa)：无资料 辛醇/水分配系数的对数值：无资料

硫酸铵饱和度的常用表,聚丙烯酰胺凝胶的配制表

硫酸鞍饱和度旳吊酰胺凝胶的配制表

硫酸鞍饱和度的常用表1.调整硫酸鞍溶液饱和度计算衷(0-C) 在O'C硫酸镀终浓度，％饱和度

2.调整硫酸镀溶液饱和度计算表（25C）

聚丙烯酰胺凝胶的配制 表1配制Tris?甘低酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 6% 26. 水 2.6 5.37.9 10.6 13.2 15.9 21.2 5 30%丙烯酰 胺溶液123 4 568 10 1.5 mol/L1 2. Tris (pH&8) 1.3 2.5 3.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸 氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 0.00 0.00 0.01 0.010.02 0.03 0.0 TEMED482 6 0.024 2 4 8% 23. 水 2.3 4.6 6.99.3 11.5 13.9 18.5 2 30%丙烯酰13.胺溶液 1.3 2.74 5.3 6.7810.7 3 1.5 mol/L1 2. Tris (pH&8) 1.3 2.5 3.8 5 6.37.510 5 10% SDS0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 10%过硫酸 氨0.050.1 0.150.2 0.250.30.4 0.5 0.00 0.00 0.00 0.01 0.01 0.01 0.02 0.0 TEMED369 2 58 4 3 10% 19. 1.9 4 5.9 7.9 9.9 11.915.9 8

硫酸铵沉淀法

IgG的分离与提纯：硫酸铵沉淀法 发布时间：2009-02-12 新闻来源： 以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性，不应含有非抗体的血清蛋白。因此，为了浓缩和提高抗体的效价，或为制备免疫球蛋白特异性抗体时，通常也需要分离和纯化免疫球蛋白。γ球蛋白（IgG）是血清免疫球蛋白的主要成分，约占全部免疫球蛋白的75%，因此，抗体的分离纯化主要是分离纯化IgG。 纯化IgG小量几十ml的话，用protein A或protein G就可以，疏水柱等也可以纯化；大量的话，上百ml，可以使用streamline protein A。之前根据载量估计一下需要的柱子体积。 实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱，比较简便可获较纯的抗体。下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。 一、材料与试剂配制 1、动物血清 2、硫酸铵饱和溶液 硫酸铵800g~850g H2O 1 000ml 加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH调pH至7.0（不调pH值也可以）。 注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即可。 3、0.01Mol/L pH7.4PB液 A液：0.10Mol/L NaH2PO4液 NaH2PO4·2H2O 15.60g 加H2O至1000.ml B液：0.10Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 35.80g

硫酸铵饱和溶液 计算

（四）抗原的分离与纯化 从细胞中提取出来的生物大分子是不纯净的，必须进一步分离纯化才能获得纯品。在生物大分子制备工作中，分离纯化是比较复杂和重要的一个环节。对于异类的物质，如提纯蛋白质和酶时混杂着核酸，提纯核酸时混杂着蛋白质或多糖，一般可用专一性酶水解、有机溶剂抽提、选择性分部沉淀等方法处理，小分子物质常在整个制备过程中多次液相与固相互相转化被分离或最后用透析方法除去。而对同类物质，如酶和杂蛋白，RNA和DNA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间的分离，情况则复杂得多，主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超速离心法、柱层析法等。其中盐析法、等电点法、结晶法用于蛋白、酶的提纯较多；有机溶剂抽提和沉淀用于核酸提纯较多；柱层析法、梯度离心法在蛋白质和核酸的提纯工作中应用均十分广泛。本节侧重对蛋白质、酶和核酸分离纯化中与溶解度有关的一些方法作一简要叙述。 1．蛋白质分离纯化的一些方法 （1）盐析法 ①原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的，也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法。其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加到一定程度时，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。 ②盐的选择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L，即676g/L），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时，对蛋白氮的测定有干扰，缓冲能力比较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以上溶解度太低。其他的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。 硫酸铵浓溶液的pH在4.5～5.5之间，市售的硫酸铵常含有少量游离硫酸，pH值往往降至4.5以下，当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。 ③硫酸铵饱和度计算法及加入方式：在分段盐析时，加盐浓度一般以饱和度表示，饱和溶液的饱和度定为100%。用硫酸铵盐析时其溶液饱和度调整方法有3种。一是当蛋白质溶液体积不大，所需调整的浓度不高时，可加入饱和硫酸铵溶