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DNACTAB法提取

CTAB法提取DNA

1. 1.5 mL EP管加入两颗钢珠,取幼嫩(新长出来淡黄色的)的番茄小叶片100 mg 置于上述EP管中(可以用嫩芽松散地塞满EP管,不能压实);

2. 加入700 μL提取buffer(2×CTAB+巯基乙醇,终浓度为2%巯基乙醇),磨样仪中55 Hz 100 s打碎;

3. 65℃水浴孵育30-60 min(时间越长越好,每5 min翻转摇一下);

4. 待冷却后加入等体积氯仿:异戊醇(24:1)混合物,然后轻轻颠倒翻转5min;

5. 12000 rpm离心10 min;

6. 取上清于新Ep管中(300-400 μL),加入2倍上清液体积的预冷(-20℃)过的无水乙醇轻轻翻转至出现絮状DNA析出(翻转5-8次即可,要轻柔);

7. 12000 rpm离心10 min;

8. 弃上清,加入70%无水乙醇900 μL洗涤2遍(每次洗涤时要吹起白色DNA 沉淀,翻转后12000 rpm离心5-10 min,弃上清时注意不要将沉淀倒掉,第二次洗涤弃上清后空管再离心一次,用枪头将管底的残液吸出,以便于晾干)。

9. 通风橱吹干2-3 h至管底看不到东西,加入50 μL无菌ddH2O+1 μL RNase 然后65℃水浴30min。(1ul测浓度,2ul跑胶);-20℃保存。

2×CTAB配方:(来自宋国立:改良CTAB法快速提取棉花DNA)

Tris.HCl 0.1 M

EDTA 0.02 M

NaCl 1.5 M

PVP40 2%(w/v)

CTAB 2%(w/v)

PH8.0

500 mL: Tris 6.057 g

EDTA/EDTA2Na.2H2O 2.92 g/3.72 g

NaCl 43.83 g

PVP40 10 g

CTAB 10 g

浓盐酸调PH至8.0,定容至500 mL

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